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WT-1和EGR-I基因在肾胚瘤中的表达
肾胚瘤是一种较常见的儿科实体肿瘤,该肿瘤的遗传学基础比较复杂,现已发现有多个染色体位点与其发生有关,其一是定位于染色体11p13的抑癌基因WT-1,据统计约5%~25%的肾胚瘤发生WT-1基因的改变,WT-1蛋白在细胞增殖、分化及凋亡等方面均有一定作用[1,2].通过比较WT-1锌指区的氨基酸序列和其它锌指蛋白的氨基酸序列发现,WT-1和EGR-I有着高度相似性,现认为WT-1可识别并结合于EGR-IDNA一致序列(GCGGGGGCG),WT-1蛋白能抑制促进细胞生长的EGR-I基因的表达;细胞内WT-1和EGR-I蛋白的浓度维持平衡对于细胞的正常生长、增殖是至关重要的[3,4].本文旨在通过对WT-1和EGR-I基因在肾胚瘤中的表达情况的统计分析,探讨其在肿瘤发生和预后方面的作用.
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噬菌体表面呈现技术及在抗寄生虫免疫中的应用
近10年来,噬菌体表面呈现技术(Phage Dislay Techniques,PDT)发展迅速,特别是在蛋白质结构研究、抗原表位分析、分子识别、细胞间信号传导、药物设计、疫苗研制、诊断试剂等方面应用广泛.Smith[1]博士于1985年首先报道小分子多肽可以在丝状噬菌体表面表达形成有活性的多肽片段.由于噬菌体易于扩增,可从含多种外源蛋白的噬菌体库中筛选出表达特异外源蛋白的噬菌体,且外源多肽或蛋白的氨基酸序列可通过测定插入噬菌体DNA序列来推测,故该技术受到许多学者的青睐.
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COX-2在肿瘤组织的表达及其化学预防靶点的意义
环氧合酶(Cyclooxygenase,COX)是催化前列腺素生物合成的限速酶,能将花生四稀酸(AA)转化为前列腺素G2和H2.COX有两种形式,即COX-1和COX-2,它们在氨基酸序列上有60%的同源性,具有相同的酶活性.然而,尽管它们催化相同的反应,但具有不同的生物学功能[1~3].COX-1是哺乳类动物的结构基因,被称为看家基因,它参与胃粘膜的保护作用,调节肾血流,控制血小板聚集.而COX-2mRNA及蛋白质在正常组织几乎检测不到,但可被炎症前和丝裂原包括细胞因子、内毒素、白细胞介素和佛波酯所诱导[4~8],近年来发现COX-2在不同的肿瘤组织有高表达.本文综述了COX-2在不同肿瘤组织表达及其作为肿瘤化学预防靶点的意义.
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CRH在发热中调节作用的研究进展
CRH是下丘脑分泌的由41个氨基酸组成的神经内分泌激素,广泛分布于神经系统及其它组织中.继Vale等(1981)首次测出其氨基酸序列后,人们认识到CRH具有广泛的生物学活性,尤其在体温调节方面CRH作为中枢介质在发热过程中发挥双重调节作用.一方面,CRH参与细胞因子(IL-1β、-6)性发热、应激性发热、以及其它致热性物质(5-TH、含血清素物质、PFPF及EGTA)的生热作用.另一方面,CRH也具有解热作用,可促进内源性解热肽ACTH及α-MSH的释放.阐明CRH在发热中的调节作用对进一步认识发热和寻找解热途径将提供新的思路.
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2009年中国流行的甲型流感病毒(H1N1)血凝素特征分析
目的 研究甲型流感病毒(H1N1)暴发流行以来中国各地甲型流感病毒血凝素(HA)的特征.方法 搜索甲型流感病毒(H1N1)暴发流行以来中国各地报道的血凝素(HA)的氨基酸序列,比较当年不同时期血凝素(HA)的氨基酸序列的变化,并比较2009年报道的血凝素(HA)的氨基酸序列和2008年、2007年报道的血凝素(HA)的氨基酸序列作比较,以分析和前2年血凝素(HA)氨基酸序列相比所发生的变化.结果 2009年中国各地甲型流感病毒(H1N1)的血凝素(HA)的氨基酸序列(人源)的同源性为99%~100%,但和2008年以及2007年的同源性非常低,分别为70%~77%和71%~90%.结论 2009年暴发流行的甲型流感病毒(H1N1)的血凝素氨基酸序列较往年发生了很大程度的变异,这可能是今年甲型流感病毒(H1N1)暴发流行的主要原因.
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瘦素与动脉粥样硬化
1 瘦素概述瘦素是由肥胖基因(obese gene,ob gene)编码的蛋白质产物,人类ob基因位于7号染色体长臂(7q31.3),全长20kb,包括3个外显子和2个内含子.小鼠ob基因位于6号染色体,与人有84%的同源性,两者的氨基酸序列则有87%的同源性.瘦素受体(LR或ob-R)位于人类1号染色体p31,属于I类细胞因子受体家族,由胞外、跨膜、胞内3个结构域构成,按胞内长度及氨基酸序列不同可分为长型受体和短型受体两种.人类瘦素主要由脂肪细胞分泌,约16 ku,是一种多靶器官、功能广泛的蛋白激素,它与广泛分布瘦素受体相结合发挥其多样的生物效应,如:调节能量代谢、调节生长发育、调节血脂代谢、维持造血功能、调节胰岛细胞功能、产热等.
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人细小病毒B19感染与神经系统疾病
本文就人细小病毒B19(Human parvovirus B19,简称B19)的生物学特征、脑病患者B19基因组特点、B19相关神经系统疾病的发病机制、临床表现、诊断、防治等,综述如下。1 B19病毒的生物学特征 B19是动物病毒中体积小、结构简单的一种直径为23nm、无包膜、单链线状DNA病毒,含5.6kb碱基对。B19基因组编码两种衣壳蛋白即VP1(83ku)、VP2(58ku)和一个非结构蛋白NS1-1(77ku)。VP2氨基酸序列包含在VP1中,它们组成衣壳包裹在B19-DNA表面,构成B19的抗原性,参与机体的免疫反应;NS-1蛋白与B19毒力有关。B19的宿主范围为从红系爆式集落形成单位(BFU-E)到有核红细胞的红系细胞,其易感性随细胞分化而增加[1]。
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IL-10家族中的新白细胞介素
分子生物学技术的发展使从基因文库中筛选新分子的方法日臻完善,许多新的白细胞介素(Interleukin,IL)被相继发现.目前,IL系列细胞因子已至少有28个成员,其中IL-19~IL-26是用差减杂交等方法从不同细胞或组织的cDNA文库或基因文库中筛选出,再经组织分布、结构分析和功能实验等后确定的.尽管对这些白细胞介素的细胞介素的功能了解不多,且它们已知的功能与IL-10或IFN-γ的活性不同,但由于这些新白细胞介素的细胞介素在氨基酸序列和蛋白质空间构型方面与IL-10和IFN-γ有同源性,它们的受体也十分相似,人们仍将它们归类于Ⅱ型细胞因子家族或IL-10家族.
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抗独特型抗体研究进展
免疫系统是生物体体内执行免疫功能的组织系统,由免疫器官(组织)、免疫细胞和免疫分子组成。机体的免疫功能包括体液免疫和细胞免疫两大部分,两者相互独立又紧密配合,发挥免疫防御、免疫自稳和免疫监视等重要作用。抗体是发挥体液免疫功能的主要成分,是机体的免疫系统在抗原刺激下,由B淋巴细胞或记忆性B细胞增殖分化形成的浆细胞产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)分子。抗体分子的基本结构由四条肽链组成,两条相同的轻链( Light chain,L)和两条相同的重链(Heavy chain,H)。通过对来自不同B细胞克隆的抗体分子的氨基酸序列进行比较发现,其氨基端(N-端)的氨基酸组成及排列顺序随抗体的不同差异非常明显,称为可变区( Variable region ,V区),组成抗体的抗原结合部位;其余部分的氨基酸序列则相对变化很小,称为恒定区( Constant region ,C区)。
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肿瘤坏死因子转化酶(TACE)新研究进展
1 TNF-α裂解酶的发现TNF-α前体(TM-TNF-α)需要加工去除氨端76个氨基酸残基,才能成为游离型TNF-α(S-TNF-α),进入循环系统.80年代末,人们认为这一加工过程依赖于丝氨酸蛋白水解酶;到了90年代,人们知道参与TNF-α加工过程的酶是一种或几种基质金属蛋白酶,但是还不了解该酶的结构.1997年,Black等[1]发现了一种新的特异性催化TNF-α前体裂解的金属蛋白酶,命名为TNF-α转化酶(TACE),并测定了其氨基酸序列.同年,Moss等[2]克隆了TACE的基因.
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真菌免疫调节蛋白的研究进展
真菌免疫调节蛋白(Fungal immunomodulatory protein,Fip)是近年来从一些高等担子菌(蘑菇类)子实体中提取的与植物凝集素和免疫球蛋白的结构和免疫功能相似的一类小分子蛋白质.自1989年Kino等[1]从赤灵芝子实体中分离提取出第一种真菌免疫调节蛋白(LZ-8)以来,目前已分别从赤灵芝,松杉灵芝,金针菇和草菇中的子实体中提取出4种真菌免疫调节蛋白[2-4],它们的氨基酸组分别具有60%~70%的同源性,并且具有相似的免疫生物学活性.根据这4种真菌免疫调节蛋白的氨基酸序列,克隆了这几种蛋白质的编码基因,并将编码基因转入到大肠杆菌或酵母菌中获得了重组免疫调节蛋白的表达[2].本文介绍了这4种真菌免疫调节蛋白的生物学特征、免疫调节活性和分子生物学研究的新进展.
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ACTH单克隆抗体的制备和鉴定
ACTH是垂体分泌的重要激素之一,测定血浆ACTH对下丘脑-垂体-肾上腺轴功能的评 价 具有重要意义。制备ACTH单克隆抗体,以期建立ACTH-IRMA方法。 ACTH或其片段与BSA经碳化二亚 胺偶联剂联接后制备免疫原,初次免疫为完全福氏佐剂乳化后在背部皮下多点注射,ACTH剂 量约40 μg,以后每隔4 w以不完全福氏佐剂乳化后在背部或腹腔交替注射4~6次,剂量减 半 。融合前3 d每天以无佐剂的ACTH联接物行腹腔注射,总剂量为60 μg。按常规方法进行细 胞融合,每周换液2至3次。阳性克隆的筛选:培养上清液抗体检测按常规RIA进行,计算结 合率,以结合率大于3倍的非特异结合率为阳性。阳性孔经有限稀释法亚克隆3~4次后获得 2株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株,5G2为ACTH1-28片段所得,D3为ACTH1-13片 段所得。扩增 细胞,一部分冻存,另一部分种于已致敏的BALB/c小鼠腹腔产生含抗体的腹水。收集的腹水 稀释后,以RIA法测定各稀释点抗体的结合率,计算5G2和D3腹水抗体在50%结合率时的终稀 释度分别可达1:5 000和1:2 000。以 1%琼脂双扩(梅花孔)法作抗体亚类鉴定,5G2和D3抗 体 均为IgG1类型,轻链为λ链。根据标准曲线参数,通过公式6y0/(1- y0)(2- y0)(4- y0)( 3ED50-ED25) 计算5G2和D3抗体的亲和常数分别为5.1×109和4.9 ×107 M-1。以ACT H不同片段作 交叉反应试验,进行特异性鉴定。5G2和D3抗体与ACTH1-10、ACTH1-17、 ACTH1-24的交叉反 应率分别为0.04%、8.70%、100.00%和0、35.30%、69.30%。据此推断5G2抗体识别ACTH 氨基酸序列 的17~28片段,D3抗体识别ACTH氨基酸序列的10~13片段。 以羊抗鼠IgG-Sephadex G75偶 联 物层析柱,进行腹水抗体的亲和纯化。按本室的方法将纯化的5G2和D3抗体分别包被马来酸酐 -苯乙烯共聚物塑料管,制备固化抗体管,以125I-ACTH做固相放免, 通过大结合率 确定5G2和D3抗体的饱和结合量分别为5 μg和20 μg,为建立固相IRMA奠定了基础。 ACTH是 垂体分泌的39肽分子,由于ACTH分子量小,在体内半衰期短;ACTH氨基酸序列只在第26至 33之间有3个氨基酸残基有种属差异,小鼠的免疫细胞不易识别,终导致小鼠不易产生抗 体。在本实验中只有18.3%的小鼠血清抗体阳性,而且抗体滴度不高。我们经过反复筛选获 得的2株抗体分别识别ACTH氨基酸序列的第17~28片段和第10~13片段,其亲和常数分别达 109和107 M-1, 用于液相放射免疫分析不足以达到理想的灵敏度,据文 献报道使用2个单 克隆抗体,建立IRMA方法,则灵敏度可显著提高。由于这2株单抗识别的位点不同,有望建 立ACTH-IRMA方法。
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206例多发性骨髓瘤M蛋白分型及意义
M蛋白(monoclonal protein)是由单克隆B淋巴细胞或浆细胞大量增殖产生的具有相同氨基酸序列和蛋白质结构的免疫球蛋白分子或其片段,临床上因其多见于多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)、巨球蛋白血症(macroglobulinemia)及恶性淋巴瘤(malignant lymphoma),都是以M开头的疾病,故称为"M蛋白".
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乙肝病毒前S1抗原和e抗原联合检测同HBV复制关系的探讨
乙型肝炎病毒(HBV)前S1蛋白(PreS1)由S基因的前S1区编码,PreS1含有数个能影响HBsAg分泌的调节序列,其特定氨基酸序列可参与HBV感染靶细胞的过程[1].而机体对PreS1免疫应答可为清除肝细胞内HBV及阻止病毒侵入肝细胞提供重要的防御作用.本文以近年来发展起来的荧光定量PCR法(FQ-PCR)定量测定HBV DNA,以此作为病毒复制和传染的直接依据,来探讨HBV感染者PreS1作为病毒复制标志物的意义.
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星形胶质细胞Cx43及缝隙连接通讯与缺血性脑卒中关系的研究进展
星形胶质细胞是脑组织中数量多的细胞,存在大量的缝隙连接蛋白(connexin,Cx),在哺乳动物中以Cx43为主.近年来国内外大量研究对星形胶质细胞Cx43及其半通道、缝隙连接(gap junction,GJ)在缺血性脑卒中的作用意见不一,本文将探讨目前这方面的研究情况.1 Cx43、半通道及缝隙连接的基本结构与生理特性目前已发现Cx达21种,脑内存在13种.根据其来源、在核苷酸和氨基酸序列上的相似程度,可分为α群:Cx33、Cx37、Cx40、Cx43、Cx45、Cx46、Cx50、Cx57和β群:Cx26、Cx30、Cx31、Cx32,以及由神经元表达的γ群--Cx36.
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百泌达致低血糖1例报告
百泌达注射液(Exenatidelnjection)通用名艾塞那肽1,与人胰高血糖素样肽1(GLP-1)氨基酸序列的同源性为53%,可发挥拟GLP-1作用.该药安全有效,导致低血糖的不良反应极其少见,本院收治了1例百泌达致低血糖患者,现将有关资料报道如下.
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鸡BF基因第2、3外显子序列及其多态性分析
目的 分析鸡BF基因第2、3外显子序列及其多态性.方法 从6羽霞烟鸡外周血淋巴白细胞(peripheral blood leukocytes,PBLs)中提取细胞DNA,以其为模板,经PCR法扩增BF基因的第2外显子、第2内含子和第3外显子,克隆至pGM-T载体上,构建重组质粒pGM-T-BF,并进行PCR、酶切和测序鉴定.利用生物信息学DNAStar软件将霞烟鸡与红原鸡第2、3外显子核苷酸及氨基酸序列进行多序列比对.结果 经PCR、酶切及测序证明重组质粒pGM-T-BF构建正确.2种鸡BF基因序列的同源性可达88.6% ~ 100%,第2、3外显子存在多态性变异位点91个,占总长度的17.04%,其中简约性信息位点66个,单变异位点25个;在编码相应的178个氨基酸残基中,多态变异位点49个,占总氨基酸残基数的27.53%,其中简约性信息位点37个,分单变异位点12个.结论 鸡BF基因第2、3外显子呈高度多态性,且其多态性更多表现在氨基酸水平上.
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寨卡病毒亚洲型与非洲型基因同源性及重组分析
目的 分析寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)亚洲型与非洲型基因组核苷酸序列同源性及结构蛋白C、前膜蛋白(pre-membrane,prM)核苷酸和氨基酸序列差异,并探讨了ZIKV亚洲型和非洲型位点突变可能产生的后果.方法 在GenBank中登录的ZIKV亚洲型和非洲型序列中,分别选择5个不同的全长基因组序列,并获得其相应的氨基酸序列,采用BIOEDIT软件进行比对,分析相似度,统计不同型别间结构蛋白C、prM的核苷酸突变和氨基酸替代位点,并采用SimPlot软件分析两个型别间的同源重组.结果 ZIKV亚洲型与非洲型的核苷酸相似性在88.00% ~ 89.00%之间;不同型别的结构蛋白C和prM碱基的突变比较显示,C基因共有19个碱基突变,prM基因共有48个碱基突变;氨基酸翻译比对显示,这67个碱基突变均为有效突变.两个型别结构蛋白C和prM编码的289个氨基酸中,占组成比例多的均为亮氨酸(L),同源重组分析亚洲型与非洲型一致性较高,无重组信号.结论 通过对ZIKV亚洲型与非洲型的结构蛋白C、prM核苷酸序列、氨基酸的比较分析及同源重组分析,为研究ZIKV不同基因型间的生物学和致病性差异提供参考.
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液质联用法分析重组抗肿瘤抗病毒蛋白的一级结构
目的 通过液质联用法分析重组抗肿瘤抗病毒蛋白(乐复能)的一级结构.方法 采用高效液相-电喷雾四级杆飞行时间质谱技术(High performance liquid chromatography-electrospray ionization-quadrupole-time of flight-mass spectrometry,HPLC-ESI-Q-TOF-MS)绘制乐复能经胰蛋白酶酶切后的液质肽图,并定位二硫键;采用电喷雾四级杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS)测定乐复能的精确相对分子质量.结果 乐复能液质肽图的22个理论酶切肽段中,有6个肽段(T2、T5、T12、T15、T19、T22)共7个氨基酸未被检测到,氨基酸覆盖率为96%;通过分析胰蛋白酶酶切液质肽图,发现1种二硫键连接方式:Cys1 -Cys29、Cys99-Cys139;质谱测定相对分子质量为19 311.63,与理论相对分子质量(19 311.27)的相对误差为0.000 02%.结论 建立了乐复能的液质肽图分析方法,为该类制品的质量控制及其参考品的研制提供了参考.
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FGF8一FGF家族的新成员
成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor FGF)家族是能够紧密结合肝素,并在核酸序列上具有一定同源性的一组蛋白,在各种不同的生理、病理过程中起着重要的作用.包括:胚胎发育、细胞生长、形态发生、组织修复、血管发生、肿瘤生长和浸润等.FGF家族目前共有19个成员,其中FGF18是FGF家族新发现的的一个.1998年,Mickey等人先用全长的小鼠FGF--18作为探针筛选人心脏λTripEx cDNA文库,获得了几个阳性的克隆,这几个噬菌体克隆的cDNA的插入片段插入到pTripEx质粒载体中,然后进行序列测定和分析,结果发现一种新的FGF因子,遂命名为FGF18.人FGF-18cDNA序列的结果被收入在Genbank中,编号为AFO75292.人FGF-18 cDNA序列全长621个核苷酸,N端的前26个氨基酸为信号肽,有2个糖基化位点,有2个半胱氨酸(不包括信号肽部分),迄今为止还不知这2个半胱氨酸是否参与二硫键的形成.将人FGF-18氨基酸序列与人FGF-17、人FGF-8、小鼠FGF-18进行比较发现,人FGF18与小鼠FGF18的氨甘酸序列有99%相同;与人FGF-8有60%相同;与人FGF-17有58%相同;在某种程度上,人FGF18与其他FGF家庭的成员也有一定的同源性.