生理学报杂志
Acta Physiologica Sinica 생리학보
- 主管单位： 中国科学院
- 主办单位： 中国科学院上海生命科学研究院,中国生理学会
- 影响因子： 0.86
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 0371-0874
- 国内刊号： 31-1352/Q
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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激活δ阿片受体可抑制大鼠心室肌细胞L-型钙电流和瞬时外向钾电流
本研究采用全细胞膜片钳技术观察了SNCl62(一种选择性δ阿片受体激动剂)对人鼠心室肌细胞L型钙电流(L-type Ca2+current,ICa-L)和瞬时外向钾电流(transient outward K+current,Ito)的影响.结果显示,SNCl62明显抑制大鼠心室肌细胞,Ica+L和Ica+L,对Ica+L.和k的大抑制率分别为(46.13±4.12)%和(36.53±10.57)%.1x10-4mol/L SNCl62使,Ica+L的甲均电流密度从(8.98±0.40)pA/pF下降到(4.84±0.44)pA/pF(P<0.01,n=5),Ito的平均电流密度从(18.69±2.42)pA/pF降低到(11.73±1.67)pA/pF(P<0.01,n=5).单独应用naltrindole(一种选择性δ阿片受体拮抗剂)对大鼠心室肌细胞Ica+L和Ito无显著作用,但预先应用naltrindole可以消除SNCl62对Ica+L和Ito的抑制作用.结果表明,通过δ阿片受体,SNCl62(1x10-6～1x10-4mol/L)浓度依赖性地抑制人鼠心室肌细胞Ica+L和Ito这可能是激动δ阿片受体产生抗心律失常效应的重要机制.
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UTP经PLC-IP3信号通路调控猪冠状动脉平滑肌细胞自发性瞬时外向电流
本文采用全细胞穿孔膜片钳技术研究uTP对急性酶分离的猪冠状动脉平滑肌细胞(coronary artery smooth muscle cells,CASMCs)自发性瞬时外向电流(spontaneous transient outward currents,STOCs)的作用,探讨细胞内Ca2+释放在UTP产物三磷酸肌醇(inositol 1,4,5.trisphosphate,IP3)调控STOCs过程中的作用机制.结果显示:(1)UTP(40 gmol/L)可明显激活CASMCs的STOCs,使其幅度和频率分别增~0(57.54±5.34)%和(77.46±8.42)%(P<0.01,n=38).(2)磷脂酶C(phospholipase C,PLC)阻断剂U73122(5 gmol/L)可明显抑制STOCs的活性,使其幅度和频率分别降低(31.04±7.46)%和(41.65±16.59)%(P<0.05,,n=10);细胞外再加入UTP小能再次激活STOCs(n=7).(3)L型电压依赖性钙通道(L-type voltage-dependent Ca2+channels,L-VDCCs)阻断剂verapamil(20 gmol/L)和CdCl2(200 gmol/L)几乎不影响UTP对STOCs活性的调节(n=8).(4)1 gmol/L的bisindolylmaleimide I[Bisl,蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的特异性阻断剂]可明显激活STOCs,使其幅度和频率分别增加(65.44±24.66)%和(61.35±21.47)%(P<0.01,n=12),细胞外再加入UTP(40 gmol/L)可使STOCs的幅度及频率进一步明显增加(P<0.05,P<0.01,n=12),细胞外继续加入ryanodine(50 gmol/L)则可完全阻断STOCs.(5)UTP(40 gmol/L)预处理细胞后,IP受体(IP3 receptors,IP3Rs)阻断剂2-aminoethoxydiphenyl borate(2-APB,40 gmol/L)可使STOCs的幅度降低(24.08±3.97)%(P<0.05,n=8),对其频率的影响较小(n=8);而80 gmol/L的2-APB则可明显抑制STOCs的活性,使其幅度和频率分别降低(31.43±6.34)%和(40.59±19.01)%(P<0.05,P<0.01,n=6),细胞外继续加入高浓度的ryanodine(50 Bmol/L)可完全抑制STOCs(n=6).用2-APB(40 gmol/L)或ryanodine(50 gmol/L)预处理细胞后,UTP(40 gmol/L)不能再次激活STOCs.以上结果提示:UTP主要通过PLC-IPl信号通路激活急性酶分离的猪CASMCs的STOCs,IP3Rs和ryanodine受体(ryanodine receptors,RyRs)介导的细胞内Ca2+释放在此过程中发挥重要作用.
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低氧预处理通过上调钙网蛋白表达减轻大鼠心肌细胞氧化应激损伤
本文旨在探讨钙网蛋(calreticulin,CRT)是否参与低氧预处理(hypoxic preconditioning,HPC)对心肌细胞氧化应激损伤的保护及其信号转导过程.将原代培养的Sprague.Dawley乳鼠心肌细胞随机分为8组:氧化应激(H2O2)组、短暂低氧(HPC)组、HPC+H202组、SB203580(p38 MAPK特异性抑制剂)+HPC+H2O2组、干扰心肌细胞CRT表达的反义寡核苷酸(antiscnse oligodeoxynucleotides,AS)组、AS+H2O2组、AS+HPC+H202组和对照组,以细胞存活率、乳酸脱氢酶(1actate dehydrogenase,LDH)漏出及流式细胞术检测细胞损伤情况;采用RT-PCR和Western blot分别检测CRT表达和p38MAPK磷酸化水平.结果表明:(1)HPC可减轻氧化应激损伤,与H202组比较,HPC+H2O2组细胞存活率增高18.0%,细胞凋亡率和LDH漏出分别降低19.4%和53.0%(均P<0.05);HPC前以SB203580预孵育可消除HPC保护作用,与HPC+H202组相比,SB203580+HPC+H2O2组细胞凋亡率和LDH漏出分别增高13.1%和96.0%,存活率降低7.3%(均P<0.05);(2)氧化应激明显上调CRT表达(H202组较对照组高7.1倍,P<0.05);HPC也诱导CRT表达上调(HPC组较对照组高2.4倍,P<0.05),但上调程度较H2O2组低59%(P<0.05);即HPC可减轻氧化应激诱导的CRT过表达:(3)AS干扰CRT表达后,HPC保护作用降低,相关性分析显示HPC诱导的CRT适度表达与细胞存活率呈正相关(r=0.8023,P<0.05);(4)HPC前SB203580预孵育可抑制CRT表达上调(分别较HPC+H2O2组和HPC组低75%和53%,均P<0.05).上述结果提示,HPC可能通过p38 MAPK信号途径诱导CRT表达上调,减轻心肌细胞氧化应激损伤.
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血红蛋白携氧-释氧动力学研究
本文研究了鸡、家兔、鲤鱼、蟾蜍4种实验动物血红蛋白(hemoglobin,Hb)携氧-释氧动力学过程,初步建立Hb携氧-释氧动力学研究方法,并探讨Hb携氧-释氧动力学过程与动物生存环境之间的关系.结果显示:4种动物Hb携氧动力学曲线均呈"S"形曲线特征,与传统的Hb氧解离曲线(oxygen dissociation curve,ODC)相似;同时不同动物Hb携氧-释氧动力学曲线也有各自特点,如鸡Hb释氧时间长达(1 411±6)S;在Hb携氧.释氧曲线I阶段,鲤鱼上升斜率远大于家兔等.提示Hb携氧-释氧动力学曲线可反映不同动物Hb携氧效率的差异.与传统ODC参数P50相对应,由动力学曲线可得到Hb携氧动力学参数T50°T50是Hb达到50%氧饱和度所需时间,可直观反映Hb携氧效率的差异.4种实验动物Hb均有较稳定的T50,从大到小依次为:鸡、家兔、鲤鱼和蟾蜍.对Hb携氧动力学曲线与ODC综合分析,可得到Hb携氧效能参数E50,表示Hb达到50%氧饱和度所用时间与环境氧分压之间的关系,即E50(50% Sat,Xeo2,yr).E50有可能成为全面评价Hb携氧效能的综合指标.
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银杏苦内酯B抑制麻醉大鼠颈动脉窦压力感受性反射
本研究在30只麻醉雄性Sprague-Dawley大鼠隔离灌流颈动脉窦区观察了银杏苦内酯B(ginkgolide B)对颈动脉窦压力感受性反射的影响.结果显示:(1)银杏苦内酯B(0.1,1,10 pmol/L)隔离灌流序侧颈动脉窦区,使压力感受性机能曲线向右上方移位,曲线大斜率(peak slop,PS)减小,血压反射性下降(reflex decrease,RD)幅度减小(P<0.01),阂压(threshold pressure,TP)、平衡压(equilibrium pressure,EP)和饱和压(saturation pressure,SP)均升高(P<0.05,P<0.01).其中PS、RD、TP、EP和sP呈明显的剂量依赖性;(2)预先应用钙通道开放剂Bay K8644(500 nmol/L),可以完伞取消银杏苦内酯B的抑制作用.(3)预先应用钾通道阻断剂四乙铵(tetraethylammonium,TEA,1 mmol/L),银杏苦内酯B的上述作用也被完全取消.结果表明,银杏苦内酯B对大鼠颈动脉实压力感受性反射有抑制作用,此作用与银杏苦内酯B减少颈动脉窦压力感受器神经末梢钙离子内流和增加钾离子外流有关.
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E2F6在物理性低氧及化学性低氧诱导的凋亡中的表达特征
心肌细胞凋亡性死亡是低氧发生时的重要病理学特征,但低氧诱导的心肌细胞凋亡的调控机制尚未完全阐明.E2F6是E2F转录因子家族成员之一,我们新近的研究证实其具有抑制DNA损伤诱导的细胞凋亡作用.但是,E2F6是否参与了低氧诱导的心肌细胞凋亡的调控尚不清楚.在本研究中,我们初步探讨了E2F6在物理性低氧及化学性低氧模拟物诱导大鼠心肌细胞系H9c2细胞凋亡中的表达特征.结果表明:物理性低氧、化学性低氧模拟物去铁胺(desferrioxamine,DFO)和氯化钻(cobalt chloride,CoCl2)均能有效诱导H9c2细胞发生凋亡.在物理性低氧及CoCl2,诱导的H9c2细胞凋亡中,内源性E2F6 mRNA表达明显下调,但蛋白表达没有明显变化.而在DFO诱导的凋亡中,内源性E2F6 mRNA及蛋白表达均发生明显下调.这些结果提示,E2F6可能参与调控DFO模拟低氧诱导的H9c2细胞凋亡,而对物理性低氧及CoCl2,模拟低氧诱导的细胞凋亡敏感性较低.此外,DFO模拟低氧诱导的细胞凋亡机制可能与物理性低氧及CoCl2.模拟低氧诱导的细胞凋亡机制不同.
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CD2相关蛋白在足细胞分化中的作用
本文旨在研究肾脏足细胞的分化特点及CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)在足细胞分化过程中的作用.用RPMI 1640培养基在33.C许可条件下培养永生化小鼠足细胞系(未分化组),转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)后置于37.C非许可条件下培养(转染组),并将非许可条件下未转染组作为对照组.用MTT法检测足细胞的生长速度;用RT-PCR方法检测CD2AP、WTI、synaptopodin和nephrin mRNA表达;用Western blot检测CD2AP、wTl和nephrin蛋白表达;用免疫荧光结合激光共聚焦方法检测CD2AP、nephrin、F-actin和tubulin在分化及未分化足细胞中的分布及其共定位情况.结果显示,CD2AP、WTl和nephrin在分化及未分化足细胞中均可稳定表达,而synaptopodin仅表达于已分化足细胞,在未分化足细胞无表达.在足细胞分化过程中,CD2AP和nephrin的表达上调(P<0.05);CD2AP、tubulin和F-actin在细胞内的分布发生改变,CD2AP与nephrin及F-actin在未分化足细胞中存在共定位关系.转染特异性siRNA下调CD2AP表达,细胞生长速度明显减慢,synaptopodin mRNA表达下调(P<0.05),细胞分化迟滞.结果表明,足细胞分化过程中伴随细胞骨架的重新分布和细胞形态的改变;CD2AP可能作为足细胞裂孔隔膜分子与细胞骨架的连接蛋白,在足细胞分化过程中发挥重要作用.
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棕榈酸对模拟高原低氧大鼠离体脑线粒体解耦联蛋白活性及质子漏的影响
本文旨在通过观察棕榈酸对模拟高原低氧大鼠离体脑线粒体解耦联蛋白(uncoupling proteins,UCPs)活性的影响及脑线粒体质子漏与膜电位的改变,探讨UCPs在介导游离脂肪酸对低氧时线粒体氧化磷酸化功能改变中的作用.将SpragueDawley大鼠随机分为对照组、急性低氧组和慢性低氧组.低氧大鼠于低压舱内模拟海拔5 000 m高原23 h/d作低氧暴露,分别连续低氧3 d和30 d.用差速密度梯度离心法提取脑线粒体,[3H-GTP法测定UCPs含量与活性,TPMP+电极与Clark氧电极结合法测量线粒体质子漏,罗丹明123荧光法测定线粒体膜电位.结果显示,低氧使脑线粒体内UCPs含量与活性升高、质子漏增加、线粒体膜电位降低;同时,低氧暴露降低脑线粒体对棕榈酸的反应性,UCPs活性的改变率低于对照组,且线粒体UCPs含量、质子漏、膜电位变化率亦出现相同趋势.线粒体质子漏与反映UCPs活性的Kd值呈线性负相关(P<0.01 r=-0.906),与反映UCPs含量的Bmax呈线性正相关(P<0.01,r=0.856),与膜电位呈线性负相关(P<0.01,r=-0.880).以上结果提示,低氧导致的脑线粒体质子漏增加及膜电位降低与线粒体内UCPs活性升高有关,同时低氧暴露能降低脑线粒体对棕榈酸的反应性,提示在高原低氧环境下,游离脂肪酸升高在维持线粒体能量代谢中起着自身保护和调节机制.
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二氮嗪对长时程低温保存大鼠心脏Fas/FasL蛋白表达的影响
本文旨在研究线粒体ATP敏感性钾(mitochondrial ATP-sensitive potassium channel,mitoKATP)通道开放剂二氮嗪(diazoxide,DE)对离体长时程低温保存的大鼠心脏促凋亡蛋白Fas和FasL表达的影响.利用Langendorff离体大鼠心脏灌注法,观察心脏在4 oC含或不含(对照组)DE的Celsior保存液保存8 h后,复灌期心脏作功量(rate-pressure product,RPP)变化情况,采用原位末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)染色法检测心肌细胞凋亡和免疫组织化学方法检测Fas和FasL蛋白表达情况.结果显示,在Celsior保存液中加入DE(30 pmol/L),复灌期RPP的恢复率在多个复灌时间点上优于对照组;同时可降低长时程低温保存心脏心肌细胞凋亡指数,减少Fas和FasL蛋白的表达.DE的上述作用可被mitoKAxr通道特异性阻断剂5.羟基葵酸盐(5-hydroxydecanoate,5-HD)所取消.以上结果提示,DE可能通过激活mitoKATP通道来减少Fas和FasL蛋白表达,从而减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤后的心肌细胞凋亡.
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转化生长因子β1和Snaill参与糖尿病大鼠肾小管上皮细胞向间充质细胞转变
本文旨在观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和锌指转录因子Snaill在糖尿病(diabetesmellitus,DM)大鼠.肾组织中的表达,并初步探讨它们与肾小管上皮细胞向间充质细胞转变的关系.链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发大鼠DM,按病程分为2、4、8、12、16、20、24周、16周胰岛素治疗(16wA)、20周胰岛素治疗(20wA)和24周胰岛索治疗(24wA)组(n=6).其中胰岛素治疗组动物从第13周起用胰岛素控制血糖至正常水平,每一时点均设鼠龄匹配的正常对照组.测定各组血糖、24 h尿蛋白、血肌酐(serum creatinine,Scr)、肾脏指数.PAS染色光镜观察肾脏病理学改变.免疫组织化学检测肾脏SnMll、TGF-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏素和纤连蛋白(fibronectin,FN)的表达;Western blot检测肾皮质SnailI、TGF-β1和E-钙黏素蛋白表达.RT-PeR检测肾皮质Snaill和E-钙黏素mRNA表达.结果显示:(1)DM各组大鼠的血糖、24 h尿蛋白、Scr、肾脏指数均较正常对照组明显升高(P<0.05,P<0.01),胰岛素治疗组大鼠上述指标均较DM组显著降低(P<0.01).(2)TGF-β1和Snmll免疫组织化学阳性染色见于DM各组大鼠肾小管,正常对照组未见阳性表达,胰岛素治疗组大鼠弱阳性表达,并随治疗时间延长而减少.从16周开始在DM大鼠肾小管上皮细胞可见α-SMA蛋白阳性表达,胰岛素治疗组大鼠未见α-SMA蛋白表达;DM组大鼠E-钙黏素蛋白阳性染色明显少于正常对照组.(3)DM组大鼠肾皮质TGF-β和Snaill蛋白以及Snaill mRNA表达较正常对照组显著增高(P<0.01),胰岛素治疗组大鼠则显著低于DM组(P<0.01);DM组E.钙黏素mRNA和蛋白表达与TGF-β1和Snaill呈相反变化.结果提示,TGF-βl和Snaill可能参与DM大鼠肾小管上皮细胞向问充质细胞转变,胰岛素治疗可抑制两者表达并阻断肾小管上皮细胞向间充质细胞转变.
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藿香正气水对猪远端气道完整上皮HCO3-分泌的作用
本文应用短路电流技术检测了cAMP激动剂forskolin/IBMX和中成药藿香正气水(Huoxiang.zhengqi liquid,HZL)对猪远端气道完整上皮HCO3-分泌的作用.新鲜分离的气道上皮组织可测得(94.9±8.2)μtA/cm2的跨上皮基础电流,其中的16.6%和62.7%可分别被amiloride(上皮钠离子通道阻断剂,100 Ixmol/L)和NPPB(囊性纤维化跨膜电导调节体CI-通道阻断剂,100μmol/L)所阻断.用葡萄糖酸根替代浴液中的CI-,跨上皮基础电流降低为(54.0±6.7)laA/cm2,当进一步替代掉浴液中HCO3-时,此电流可被去除,提示在末受刺激条件下存存HCO3-分泌.forskolin/IBMX可刺激HCO3-依赖的电流增加(7.3±0.5)μA/cm2.值得注意的是,HZL也能引起HCO3-电流增加(7.4±1.9)μA/cm2,而这种刺激作用不受forskolin/IBMX预处理的影响,提示一种不依赖于cAMP的信号通路.以上结果提示,无论是否受刺激,猪远端气道上皮都分泌HC03.HZL对远端气道上皮HC03-分泌的刺激作用,提示其有希望成为一种新的、有治疗意义的远端气道HCO3-分泌刺激剂.
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脂代谢相关基因在apoE基因缺失幼龄小鼠肝脏中的表达
本文旨在分析脂代谢相关基因在载脂蛋白E(apolipoprotein E,apoE)基因缺失(apoE-/-)幼龄小鼠肝脏中的表达特征及其与血脂紊乱和动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)早期病变的关系.利用半定量RT-PCR和荧光实时定量RT-PCR技术,分析14 d龄、1、2和3月龄apoE-/-小鼠及同龄野生型(wild type,WT)小鼠肝脏脂代谢相关基因的表达,并进行血生化指标及主动脉病理形态学榆测.apo-/-小鼠肝脏中apoAI、apoAIV表达在14d龄时即发生显著变化(P<0.05);在1月龄时apoB10G表达较同龄WT小鼠明显上调(P＜0.05);apoA V表达则在2月龄时较同龄WT小鼠上调(P＜0.05),此时可观察到apoE-/-小鼠主动脉内膜出现AS早期病变;Faf/CD36和Angptl 3表达在3月龄时较同龄WT小鼠上调(P＜0.05);实验中检测的其它基因的mRNA表达与同龄WT小鼠相比无显著性差异.apoE-/-小鼠血清总胆同醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇含量均高于同龄WT小鼠,并随年龄增长而升高.apoE-/-小鼠和同龄WT小鼠血清中apoB100蛋白浓度在14 d龄到3月龄问变化趋势与其在肝脏中mRNA表达及血清中低密度脂蛋白胆崮醇含量变化趋势基本一致.上述部分脂代谢相关基因表达在幼龄小鼠即发生改变,与血脂紊乱以及主动脉AS病变发生发展过程呈正相关,说明其可能在幼龄小鼠脂质代谢紊乱发生过程中起重要作用,从而引起动脉内皮细胞功能改变乃至AS早期病变的发生.
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蛋白激酶Cα在小鼠孤雌及四倍体胚胎早期发育过程中的分布和作用
为了观察蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα在昆明白小鼠受精卵、孤雌激活和四倍体胚胎早期发育阶段的亚细胞定位和致密化进程中的表达变化,本实验利用免疫荧光化学染色与激光共聚焦显微镜观察相结合的方法,对受精卵、孤雌激活和四倍体胚胎早期发育阶段PKCα的表达进行了定位观察,并利用Western blot对三组胚胎致密化进程中PKCα的表达进行定量分析.结果显示,PKCα在上述三组胚胎发育的2-细胞期至囊胚期均有表达,虽然不同胚胎PKCα的分布在同一发育阶段存在差异,却表现出在各胚胎期主要分布于卵裂球核染色质内,以及在胚胎致密化开始,PKCα在卵裂球连接处发生重新分布的共同特点.此外,三组胚胎PKCα在致密化进程中的表达呈升高趋势,即致密化后的表达高于敛密化前.结果表明,PKCct对胚胎致密化的调节具有重要作用,其在8-细胞/4-细胞期的重新分布是胚胎进入桑椹胚期的必然事件,是胚胎致密化的前提,同时伴随蛋白表达增多.此外,PKCα在囊胚期发生了植入前的第二次重新分布.PKCα在三组胚胎各发育阶段表达情况各不相同,它对小鼠胚胎发育的影响体现在整个早期发育阶段.PKCα在小鼠受精卵早期发育阶段的两次重新分布可能与在致密化开始时启动的细胞黏附事件存在某种必然联系.
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PTEN在早孕小鼠子宫内膜的表达及其对胚泡着床的影响
本研究旨存检测肿瘤抑制基因PTEN(phosphatase andtensinhomologdeletedonchromosometen)在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律,探讨PTEN在小鼠胚胎着床过程中的作用.采用实时荧光定量聚合酶联反应(real.time fluorescent quantitative PCR.FQ.PCR)和免疫组织化学方法分别检测未孕及孕1、3、4、5、7 d小鼠子宫内膜PTEN mRNA和蛋白的表达;子宫角注射PTEN反义寡核苷酸观察胚泡着床数.FQ-PCR结果显示,妊娠小鼠子宫内膜组织PTENmRNA的表达高于未妊娠小鼠,且随着妊娠天数的增加表达逐渐增强,到妊娠第5天达高.免疫组织化学分析显示,PTEN蛋白在子宫内膜的表达规律与mRNA结果一致.子宫角注射PTEN反义寡核苷酸后胚泡着床数明显减少.结果提示,PTEN在妊娠早期子宫内膜持续表达,可能参与了胚泡着床.
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实验性结肠炎对脊髓传入神经元中降钙素基因相关肽和香草酸受体1表达的调节
本文旨在探讨肠道局部炎症对脊髓肠道感觉传入神经通路的近期及远期效应,应用三硝基苯磺酸(trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)建立大鼠结肠炎动物模型,用DiI(3)逆行神经标记法识别支配肠道炎症部位的脊髓背根神经节(dorsalrootganglia,DRG)神经元,通过肉眼观察、平均组织损伤评分及髓过氧化物酶活性测定等方法评价肠道组织的炎症反应状态,用免疫组织化学法测定香草酸受体l(vanilloid receptor 1,VRl)和降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在支配结肠炎症部位的DRG神经元中的表达,比较炎症不同阶段(给予TNBS后7、21、42 d)CGRP和VRI阳性神经元的数目.结果显示,炎症急性期(即给予TNBS后7 d)结肠黏膜肉眼可见明显损伤,同时相应DRG中表达CGRP及VRl的神经元增加近2倍[(95.38±9.45)%VS(42.86±5.02)%,(89.23±8.21)%VS(32.54±4.58)%].给予TNBS后21、42 d,肠道炎症反应已完全消退,但表达CGRP及VRl的DRG神经元数目仍明显高于对照组[(86.25±8.21)%,(68.28±7.12)%VS(42.86±5.02)%;(67.22±6.52)%,(56.25±4.86)%VS(32.54±4.58)%].结果提示,肠道局部炎症可以上调支配肠道的脊髓传入神经元中CGRP和VRl的表达,这种异常表达可以持续至肠道炎症反应消退后的一定时间.
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功能性ghrelin受体在内脏迷走和脊髓传入神经通路中的表达
本文在mRNA和蛋白水平观察了功能性ghrelin受体(growth hormone secretagogue receptor type la,GHS-Rla)在大鼠内脏迷走及脊髓传入神经通路中的表达.结果显示:(1)GHS-Rla免疫反应阳性神经元及GHS-Rla mRNA分布于背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)及结状神经节(nodose ganglion,NG).(2)应用免疫双标技术观察到DRG和NG中都有一些GHS-Rla免疫反应阳性神经元,同时降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)染色呈阳性,显示GHS-Rla和CGRP共存于同一神经元,表明内脏传入神经元存在许多亚核群.(3)应用荧光金(fluorogold)标记的神经逆行追踪技术对从胃投射到DRG和NG的神经元进行免疫组织化学染色,观察到一些表达CGRP的GHS-Rla免疫反应阳性神经元也被荧光金染色.上述实验结果证实了GHS-Rla在迷走神经和脊髓传入神经元中的表达,提示ghrelin参与了胃.脑轴的调节.
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apoE/LDLR双基因缺失幼龄小鼠主动脉中动脉粥样硬化相关基因的表达
利用RT-PCR以及实时定量RT-PCR检测11个动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)相关基因在1、2和3月龄的载脂蛋白E(apolipoproteinE,aopE)/低密度脂蛋白受体(low-density lipoprotein receptor,LDLR)双基因缺失(apoE-/-/LDLR-/-)小鼠主动脉中的表达变化,同时应用血生化指标和病理形态学观察AS早期病变特点,探讨apoE和LDLR基因联合缺失引发的血脂代谢紊乱和血管炎症损伤的关系以及AS的炎症反应机制.结果显示,apoE-/-/LDLR-/-小鼠IL-18、TLR2、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1、GM-CSF、CD36和ET-1表达在1月龄时较同龄野生型(wild type,WT)小鼠显著上调(P<0.05,P<0.01),PDGF-α和TNF-α表达在2月龄时较同龄WT小鼠显著上调,除ET-1表达在2月龄时以及了LR2、VCAM-1和ICAM-1表达在3月龄时降至WT小鼠水平以外,其余各基因表达随年龄增长继续升高(P<0.05,P<0.01),其中MCP-1表达在2月龄时达到峰值.NF-kB在各年龄段apoE-/-/LDLR-/-小鼠中的表达与同龄WT小鼠相比均无显著差异.各年龄段apoE-/-/LDLR-/-/小鼠血清了C、TG、LDL、HDL、TNF-α、IL-1β和ox-LDL含量均显著高于同龄WT小鼠(P<0.05,P<0.01),并随年龄增长逐渐升高.apoE-/-/LDLR-/-小鼠1月龄时主动脉内膜出现少量的散在的脂质沉积,随着年龄增长病变区域增多,脂质沉积增厚.上述结果提示:apoE和LDLR双基因缺失形成的高脂血症可能通过刺激主动脉中炎症基因时序表达,起始并扩大病变部位的炎症反应,共同促进AS的发生发展.
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解除模拟失重后清醒大鼠血压信号的谱分析
本文旨在观察模拟失重28 d大鼠解除尾部悬吊前、后(2 h内),清醒自由活动状态下动脉收缩压(systolic bloodpressure,SBP)、舒张压(diastolic blood pressure,DBP)和心率(heart rate,HR)的变化.采用自回归模型法对不同时间点的收缩压变异性(SBP variability,SBPV)和心率变异性(HR variability,HRV)进行自谱与互谱分析,并比较自回归法与周期图法的自谱分析结果:由传递函数分析得到反映压力感受器-心率反射敏感性(baroreceptor-heart rate reflex sensitivity,BRS)变化的有关数据.结果显示,用自回归模型法对清醒大鼠血压信号进行短时程谱分析可得到较为平滑、谱峰清楚的谱估计曲线.28 d模拟失重大鼠解除尾部悬吊前、后,SBP、DBP和HR及其主要谱指标,以及高、低频段传递函数的平均增益均无显著性变化,不同时间点的谱指标也无显著差别;但模拟失重组的SBP、DBP和HR却显著高于对照组.上述结果提示,中期模拟失重大鼠恢复正常体位后,其清醒状态的BPV与HR均处于升高状态,但其短时程BPV与HRV谱及BRS均无显著变化,与近报道的航天员HRV与BRS无显著改变一致.
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11,12.环氧二十碳三烯酸预处理与后处理对缺血/再灌注大鼠心肌的保护作用
采用Langendorff离体灌流装置,通过停灌40 min/复灌30 min复制大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,IR)损伤模型,观察11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-epoxyeicosatrienoic acid,11,12-EET)预处理和后处理对心肌线粒体功能以及心功能的影响,探讨11,12-EET顸处理和后处理对IR大鼠心肌的作用及其机制.将30只Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、IR组、EET预处理组(Pre-EET)、EET后处理组(Post-EET),每组6只.除对照组外,其它各组全心缺血40 min,再灌注30 min.监测左心室内压差(ALVP)和左心室内压升降的大变化率(±dp/dtmax)等心功能指标,测定灌流液中乳酸脱氢酶(1actate dehydrogenase,LDH)的活性.灌流结束后,测定心肌线粒体琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)、Ca"ATPase、Na+-+K+-ATPase活性以及心肌超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量.结果显示:(1)与IR组相比,Pre-EET组及Post.EET组Na+-K+-ATPase和SDH活性均增强,Ca2+-ATPase活性均减弱,有显著性差异(P<0.05);而Pre-EET与Post-EET组间没有显著性差异.(2)与IR组相比,Pre-EET组及Post-EET组心功能明显改善,LDH漏出显著减少,心肌SOD活性明显增强,MDA含量明显降低,有显著性差异(P<0.05);而Pre-EET与Post-EET组间没有显著性差异.结果表明,11,12-EET预处理及后处理均可通过上调心肌线粒体Na+-K+-ATPase、SDH活性以及下调Ca2+-ATPase活性改善线粒体功能和心肌能量代谢,拮抗心肌IR损伤;11,12-EET预处理及后处理还可通过提高心肌SOD活性、降低MDA含量改善IR心肌的氧化应激.
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原癌基因c-erbB2和c-myb经丝裂原活化蛋白激酶和成熟促进因子途径调节卵母细胞的成熟
本研究探讨了原癌基因c-erbB:和c-myb对小鼠卵母细胞成熟的影响及其在调控卵母细胞成熟中与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和成熟促进因子(mamration promoting factor,MPF)的上下游关系.c-erbB2反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)和c.myb ASODN均呈剂量依赖方式抑制卵母细胞的生发泡破裂(germinalvesicle breakdown,GVBD)率和第一极体(first polar body,PBl)排放率,并显著延迟其成熟时间.小鼠卵母细胞显微注射重组人c-erbB2蛋白和c-myb蛋白后,培养6 h其GVBD率分别比对照组上升了23.1%(P<0.05)和32.2%(P<0.05),.培养12 h其PBl排放率分别比对照组上升了17.3%(P<0.05)和23.5%(P<0.05).RT-PCR结果显示,小鼠卵母细胞中存在c-erbB2mRNA和c-myb mRNA表达;c-erbB2ASODN能明显抑制卵母细胞中c-erbB2mRNA和c-myb mRNA的表达,c-myb ASODN能明显抑制卵母细胞中c-myb mRNA的表达,对c-erbB2 mRNA无明显影响;MAPK抑制剂PD98059以及MPF抑制剂roscovitine在抑制卵母细胞成熟的同时,均能阻断显微注射重组人c-erbB:蛋白和重组人c-myb蛋白对卵母细胞成熟的促进作用,但对卵母细胞中c-erbB2mRNA和c-myb mRNA表达无明显影响.Western blot结果显示,c-erbB2ASODN、c-mybASODN、PD98059、roscovitine均使卵母细胞中MAPK磷酸化水平和cyclinB 1含量下降.结果提示,原癌基因c-erbB2、c-myb在卵母细胞成熟中起重要作用,可能是调控卵母细胞成熟中关键蛋白激酶如MAPK、MPF的上游激活物.
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体外受精和孤雌活化过程中小鼠胚胎细胞骨架的动态变化
为研究微管在体外受精与孤雌活化过程中的动态变化,本实验比较了体外受精胚胎、SrCl2激活的孤雌胚胎和体内受精的原核期胚胎在体外发育的情况,采用免疫荧光化学与激光共聚焦显微术检测卵母细胞孤雌活化过程中及体外受精后微管及核的动态变化,以分析微管在减数分裂过程中的作用及其对早期发育的影响.结果显示,体内受精胚胎的发育率显著高于体外受精和孤雌激活胚胎体外发育率(P<0.05),而体外受精与孤雌激活胚胎在各阶段发育率差异均不显著.在体外受精中,精子入卵,激活卵母细胞,减数分裂恢复,纺锤丝牵拉赤道板卜致密排列的母源染色体向纺锤体两侧迁移;后期将染色体拉向两极;末期时,微管分布于两组已去凝集的母源染色体之间,卵母细胞排出第二极体(the second polarbody,Pb2),解聚的母源染色体形成雌原核.同时,在受精后5～8 h精子染色质发生去浓缩与再浓缩,形成雄原核.在原核形成的同时,胞质星体在雌、雄原核的周围重组形成长的微管,负责雌、雄原核的迁移靠近.孤雌活化过程中,卵母细胞恢复减数分裂,姐妹染色单体分离,被拉向两极,经细胞松弛素B处理后,活化4～6 h,卵周隙中未见Pb2,而在胞质中出现两个混合的单倍体原核,之间由微管相连接,负责两个单倍体原核的迁移靠近.与体外受精相比较,孤雌活化时卵母细胞更容易被激活,减数分裂期间微管的发育早且更完善.
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小鼠脂联素受体-1的生物信息学分析及其抗体制备
本文旨在根据小鼠脂联素受体-1(adiponectin receptor-1,AdipoR-1)的分子结构,制备抗AdipoR-1的多克隆抗体,为AdipoR-1的进一步研究创造条件.利用生物信息学分析预测小鼠AdipoR-1的理化特性、跨膜结构和抗原表位,结合AdipoR-1和AdipoR-2氨基酸序列相似性比对结果,设计出一段由16个氨基酸组成的多肽,用此肽段免疫大鼠得到多克隆抗体,利用ELISA、Western blot等方法坚定其特异性和滴度,并将该抗体用于J下常及高月胆固醇血症小鼠肌肉组织AdipoR-1的表达检测.结果表明,此抗体效价较高、特异性强.以上结果提示,生物信息学分析能较好地预测小鼠AdipoR-1的抗原表位,并成功制备高特异性的多克隆抗体.
| 年 | 期数 |
| 2018 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2017 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2016 | 01 02 03 04 05 |
| 2015 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2014 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2013 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2012 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2011 | 02 03 05 06 |
| 2010 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2009 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2008 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2007 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2006 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2005 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2004 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2003 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2002 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2001 | 01 02 03 04 05 06 |
| 2000 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1999 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1998 | 01 02 03 04 05 06 |
| 1997 | 01 02 03 04 05 06 |
