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雷公藤甲素对FSGS大鼠临床疗效及肾组织Synaptopodin表达的影响
目的:观察雷公藤甲素对局灶节段硬化性肾小球肾炎(FSGS)大鼠的治疗作用及对肾组织Synaptopodin表达的影响.方法:雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,雷公藤甲素低、中、高剂量组,每组10只.通过行5/6肾切除术建立FSGS大鼠模型.雷公藤甲素低、中、高剂量组从术后第8天开始定时灌胃治疗,给药10周.检测各组大鼠体质量,24h尿蛋白水平,血肌酐(Cr)、尿素(Ure)、白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(Tch).HE染色观察各组肾组织病理变化,免疫荧光法观察肾组织中Synaptopodin表达.结果:与模型组比较,第12周,雷公藤甲素中剂量组大鼠24h尿蛋白定量明显减少(P＜0.05);而从第6周开始,雷公藤甲素高剂量组大鼠24h尿蛋白定量明显减少(P＜0.01,P＜0.05).与雷公藤甲素低剂量组比较,第8、10周,雷公藤甲素高剂量组大鼠24h尿蛋白定量明显减少(P＜0.05).与正常组比较,模型组及雷公藤甲素低、中、高剂量组大鼠血Cr、Ure水平升高,ALB水平降低(P＜0.01).与模型组比较,雷公藤甲素中剂量组血Ure水平降低(P＜0.05);雷公藤甲素高剂量组大鼠血Cr、Ure水平降低(P＜0.01),ALB水平升高(P＜0.05).与雷公藤甲素低剂量组比较,雷公藤甲素高剂量组血Cr、Ure水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01),可见高剂量雷公藤甲素保护肾功能的效果明显优于低剂量.Synaptopodin在正常大鼠肾组织广泛表达,与正常组比较,模型组肾组织中表达明显减少(P＜0.01),治疗后,雷公藤甲素中、高剂量组表达较模型组明显增强(P＜0.05).结论:雷公藤甲素能减少FSGS大鼠尿蛋白,改善肾小球硬化、球囊黏连及系膜基质增生的情况,上调血清及肾组织中Synaptopodin的表达,延缓肾脏病变程度.
关键词： 雷公藤甲素 局灶节段性肾小球肾炎 Synaptopodin 肾组织 -
雷公藤多甙对糖尿病大鼠肾脏Desmin、Synaptopodin表达的影响
目的 探讨雷公藤多甙对糖尿病大鼠肾脏Desmin、Synaptopodin表达的影响.方法 30只雄性 SD 大鼠随机分为对照组(n=10)、糖尿病组(DM组,n=10)、治疗组(n=10)3 组.治疗组将雷公藤多甙片以 50mg·kg-1·d-1灌胃.于12周末检测 24h 尿蛋白量、血糖(Glu)、血肌酐(Scr)、血胱抑素C(Cys-C).HE 染色观察肾脏病理改变;免疫组化检测肾脏Desmin、Synaptopodin的表达情况.结果 3 组大鼠24h尿蛋白、Scr和Cys-C 差异有统计学意义.治疗组24h 尿蛋白、Scr和Cys-C均较糖尿病组低(P＜0.05),差异有统计学意义.与对照组比较,糖尿病组肾小球体积增大、系膜区基质明显增生、肾小球毛细血管袢受压、基底膜增厚,而治疗组较糖尿病组有所改善.免疫组化显示:3 组大鼠肾组织Desmin、Synaptopodin蛋白表达差异有统计学意义,糖尿病组Desmin表达较对照组高、Synaptopodin表达较对照组低(P＜0.05);治疗组Desmin表达较糖尿病组低、Synaptopodin表达较糖尿病组高(P＜0.05).结论雷公藤多甙可能通过下调糖尿病大鼠肾脏Desmin的表达、同时上调Synaptopodin表达,保护足细胞,减少尿蛋白,保护肾脏.
关键词： 糖尿病肾病 雷公藤多甙 Desmin Synaptopodin -
足细胞内质网应激对钙调神经素表达的调控
目的 研究在早期糖尿病肾病微量蛋白尿状态下足细胞内质网应激(ERS)对钙调神经素(CaN)表达的调控情况.方法 以6、9、12周龄的C57BLKS/JLepr db/db雄性小鼠为研究对象,同龄C57 BLKS/J Lepr db/m小鼠为对照,观察小鼠24h尿白蛋白量的变化,激光共聚焦法检测早期糖尿病肾病小鼠CaN、synaptopodin表达的变化.以永生小鼠足细胞系为体外研究对象,棕榈酸盐引起ERS或联用熊去氧胆酸阻断ERS时,采用RT-PCR法、激光共聚焦法和免疫印迹法检测CaN的表达变化.结果 db/db早期糖尿病肾病小鼠模型中,足细胞CaN的表达随尿白蛋白量增加逐渐升高,synaptopodin的表达随蛋白量增加而降低.体外培养小鼠足细胞CaN的表达随棕榈酸盐刺激浓度增加而增加,ERS阻断时CaN表达减少.结论 足细胞ERS在伴有微量白蛋白时对CaN的表达有正向调控作用.
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糖尿病肾病肾组织足细胞损伤与葡萄糖调节蛋白78表达及蛋白尿间的相关性
目的 研究糖尿病肾病(DN)患者肾组织足细胞损伤和葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)及尿蛋白量之间的关系.方法 回顾性分析48例经肾活检确诊为DN患者的临床资料,根1尿蛋白量将患者分为＞3.5g/d组(n=31)和＜3.5 g/d组(n=17).对肾组织行威廉姆斯肿瘤蛋白-1(WT-1)免疫组织化学染色,冰冻肾组织行synaptopodin、GRP78免疫荧光双染色,在激光共聚焦显微镜下观察.结果 尿蛋白量＞3.5 g/d组的足细胞密度为0.10个/μm2,明显低于尿蛋白量＜3.5 g/d组的0.15个/μm2 (P=0.003),足细胞密度与尿蛋白量呈负显著相关(P=0.005).肾小球Synaptopodin及GRP78表达呈线样或颗粒状沿基底膜排列,尿蛋白量与synaptopodin(P=0.004)和GRP78 (P =0.001)表达具有显著负相关.结论 随着尿蛋白量增加,DN患者的足细胞损伤程度随之加重,伴有内质网应激适应性调节能力下降.
关键词： 足细胞 糖尿病肾病 Synaptopodin 葡萄糖调节蛋白78 -
益肾通络方对膜性肾病大鼠的肾保护作用及足细胞骨架相关蛋白的影响
目的 探讨益肾通络方对膜性肾病大鼠的肾脏保护作用及可能的机制.方法 健康雄性SD大鼠60只随机分为对照组10只和造模组50只,造模组采用尾iv阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法复制膜性肾病大鼠模型.造模成功后再随机分为模型组、盐酸贝那普利组和益肾通络方低、中、高剂量(6.61、13.22、26.44 g/kg)组,各组按照相应剂量ig给药,每天1次,连续给药4周.给药结束后检测大鼠24 h尿蛋白定量(UTP)、血清总胆固醇(TC)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平;免疫荧光检测各组大鼠肾组织IgG免疫复合物沉积情况,电镜下观察肾小球基底膜及足细胞形态结构;免疫组化及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组大鼠肾足细胞骨架相关蛋白ezrin、synaptopodin的表达.结果 与模型组比较,各治疗组大鼠UTP、TC水平均显著下降(P＜0.01),TP、ALB水平均显著上升(P＜0.01);益肾通络方中、高剂量组与盐酸贝那普利组疗效相当,效果优于益肾通络方低剂量组;各组大鼠BUN、Scr相比无明显差异.与对照组比较,模型组大鼠肾足细胞骨架相关蛋白ezrin、synaptopodin mRNA表达显著减少(P＜0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肾足细胞相关蛋白ezrin、synaptopodin mRNA表达均有不同程度增加(P＜0.01);益肾通络方中、高剂量组大鼠肾组织ezrin、synaptopodin mRNA表达量与盐酸贝那普利组相当,均高于益肾通络方低剂量组.结论 益肾通络方对膜性肾病大鼠具有治疗作用,其机制可能与防止足细胞骨架相关蛋白ezrin、synaptopodin降解、维持足细胞骨架及足突结构完整性相关.
关键词： 益肾通络方 膜性肾病 足细胞骨架相关蛋白 Ezrin Synaptopodin -
CD2相关蛋白在足细胞分化中的作用
本文旨在研究肾脏足细胞的分化特点及CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)在足细胞分化过程中的作用.用RPMI 1640培养基在33.C许可条件下培养永生化小鼠足细胞系(未分化组),转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)后置于37.C非许可条件下培养(转染组),并将非许可条件下未转染组作为对照组.用MTT法检测足细胞的生长速度;用RT-PCR方法检测CD2AP、WTI、synaptopodin和nephrin mRNA表达;用Western blot检测CD2AP、wTl和nephrin蛋白表达;用免疫荧光结合激光共聚焦方法检测CD2AP、nephrin、F-actin和tubulin在分化及未分化足细胞中的分布及其共定位情况.结果显示,CD2AP、WTl和nephrin在分化及未分化足细胞中均可稳定表达,而synaptopodin仅表达于已分化足细胞,在未分化足细胞无表达.在足细胞分化过程中,CD2AP和nephrin的表达上调(P<0.05);CD2AP、tubulin和F-actin在细胞内的分布发生改变,CD2AP与nephrin及F-actin在未分化足细胞中存在共定位关系.转染特异性siRNA下调CD2AP表达,细胞生长速度明显减慢,synaptopodin mRNA表达下调(P<0.05),细胞分化迟滞.结果表明,足细胞分化过程中伴随细胞骨架的重新分布和细胞形态的改变;CD2AP可能作为足细胞裂孔隔膜分子与细胞骨架的连接蛋白,在足细胞分化过程中发挥重要作用.
关键词： CD2相关蛋白 足细胞 nephrin Synaptopodin WT1 -
Synaptopodin参与低分子肝素改善子痫前期大鼠蛋白尿的机制研究
目的：：探讨synaptopodin在低分子肝素( LMWH)治疗子痫前期( PE)大鼠模型中的分子作用机制。方法：将PE孕鼠随机分为3组：(1) L-NAME组：于妊娠第9天起连续腹腔内注射亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)至孕期结束；(2)L-LMWH组：注射L-NAME的同时,孕15天起连续腹腔内注射LMWH 200IU/(kg·d)至孕期结束；(3)H-LM-WH组：注射L-NAME的同时,孕15天起连续腹腔内注射LMWH 600 IU/( kg · d )至孕期结束。动态监测其血压、24 h尿蛋白总量及胎鼠体重变化。采用荧光定量PCR方法、免疫组化法和Western blot法检测肾脏组织中synaptopodin表达。结果：H-LMWH组中syn-aptopodin表达明显高于L-NAME组(P<0.05),L-LMWH组和L-NAME组比较则无无明显变化(P>0.05)。孕17和19天时,与L-NAME组比较,H-LMWH组和L-LMWH组孕鼠的蛋白尿和血压均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)；而胎鼠体重和胎鼠数无明显变化。结论：LMWH可能通过上调synaptopodin改善PE蛋白尿、降低血压。
关键词： 子痫前期 低分子肝素 Synaptopodin 大鼠模型 -
帕立骨化醇抑制血管紧张素活性减轻足细胞损伤
目的:观察维生素D受体激动药帕立骨化醇对尿毒症大鼠肾脏的保护作用.方法:雄性SD大鼠切除右肾并结扎左肾动脉前支诱导尿毒症模型.将20只尿毒症鼠随机分为尿毒症组(UC组)、UC+帕立骨化醇治疗组(UA组).另设正常SD大鼠为对照组(NC组).第10周检测大鼠血清Ca、P、1,25(OH)2D3、成纤维细胞生长因子23( FGF23)、甲状旁腺素(PTH)、血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)、血肌酐(Scr)、白蛋白(Alb)、24h尿蛋白(24 h UP).RT-PCR检测肾小球血管紧张素原(Ang)、血管紧张素转化酶(ACE)、nephrin、synaptopodin的表达.胞核WT-1阳性细胞计数测定每个肾小球足细胞数量.结果:UC组P、FGF23、PTH、AngⅡ、Scr、Alb、24 h UP较NC组显著升高(P＜0.01),Ca、1,25(OH)2D3、Alb降低(P＜0.05或0.01).UC组Ang、ACE mRNA的表达较NC组显著增加(P＜0.01)；nephrin、synaptopodin mRNA的表达较NC组显著降低(P＜0.01)；肾小球足细胞数目减少.帕立骨化醇改善尿毒症鼠的矿物质代谢,下调AngⅡ水平,减少尿蛋白的排泄；抑制肾小球Ang、ACE mRNA的表达,恢复nephrin、synaptopodin的表达,并维持肾小球足细胞数量.结论:帕立骨化醇可抑制尿毒症鼠肾小球血管紧张素活性,减轻足细胞损伤和脱落.
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受体相关蛋白不同区段对Heymann肾炎大鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、synaptopodin及podocalyxin表达和分布的影响
目的 观察受体相关蛋白(RAP)不同区段对被动型Heymann肾炎(PHN)大鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)、synaptopodin、podocalyxin表达和分布的影响.方法 给雄性SD大鼠分别注射兔抗RAP全长(RAP-FL组)、氨基端(RAP-N组)和羧基端(RAP-C组)抗血清,建立相应3种PHN模型,对照组注射等量正常兔血清.分别于造模前和造模1周末检测24 h尿蛋白量、血清白蛋白和肌酐;造模1周末取大鼠肾皮质行光镜病理及间接免疫荧光激光共聚焦显微镜观察足细胞TRPC6、synaptopodin、podocalyxin的表达和分布.结果 造模1周末各模型组24 h尿蛋白量显著高于自身造模前和对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01),血清白蛋白和肌酐无明显改变.光镜下各模型组均见肾小球基底膜节段性不均匀增厚,系膜细胞和系膜基质无明显增生.间接免疫荧光激光共聚焦显微镜观察显示,对照组足细胞TRPC6、synaptopodin、podocalyxin沿肾小球基底膜呈均匀、连续线样分布;各模型组TRPC6沿肾小球基底膜呈团块状不均匀分布,荧光强度较对照组有不同程度增强,RAP-FL组较RAP-N组和RAP-C组更为明显,差异有统计学意义(P<0.05),RAP-N组和RAP-C组间差异无统计学意义(P>0.05);各模型组synaptopodin和podocalyxin沿肾小球基底膜呈点状、短线状不连续分布,部分节段表达缺失,荧光强度较对照组均有不同程度的减弱,差异均有统计学意义(均P<0.05);各模型组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 RAP全长及其羧基端与氨基端均存在病理性抗原决定簇,在PHN模型中可上调TRPC6表达,但下调synaptopodin和podocalyxin表达,并改变它们的分布模式,与PHN蛋白尿的发生有关,但在PHN发病中的病理作用仍有待进一步研究.
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IgA肾病患者肾组织内synaptopodin的表达对肾功能评价的临床意义
目的 观察synaptopodin在IgA肾病患者肾组织中的表达,并探讨其在肾功能评价中的意义.方法 分析202例IgA肾病患者的肾活检组织标本,按Lee分级系统分为Ⅰ～Ⅴ5级,采用99mTc-DTPA清除率测定肾小球滤过率.对选取的样本经抗人synaptopodin单克隆抗体间接免疫荧光染色.用免疫荧光显微镜观察及图像分析软件定量分析肾组织中synaptopodin的表达情况,测量平均光密度值,然后进行统计学分析.结果 5级IgA肾病患者肾组织中synaptopodin所表达的平均光密度值组间差异有统计学意义(P<0.01),病理组织中synaptopodin所表达的平均光密度值与肾小球滤过率呈正相关(r=0.962,P<0.01).结论 与传统的评估指标比较,synaptopodin在Ⅰ～Ⅴ级IgA肾病肾脏病理组织中的表达逐渐减少,其表达与肾小球滤过率呈正相关.synaptopodin在肾组织中的表达可评价肾功能的变化.
关键词： IgA肾病 Synaptopodin 肾小球滤过率 平均光密度值 -
晚期糖基化终产物对足细胞synaptopodin和迁移性的影响
目的 观察晚期糖基化终产物(advanced glycation end-products,AGEs)对足细胞synaptopodin的影响和在足细胞迁移性中的作用,探讨其作用机制.方法 不同浓度AGEs(0、20、40、80 μg/mL)干预足细胞24h,免疫印迹检测足细胞synaptopodin的表达,激光共聚焦显微镜观察足细胞肌动蛋白F-actin和synaptopodin的分布,Transwell细胞迁移实验检测足细胞的迁移性,氯沙坦(100 μmol/L)预处理足细胞后,观察synaptopodin和F-actin的改变.结果 AGEs 80 μg/mL可降低足细胞synaptopodin的表达[(50±11)％ vs 100％,P＜0.05],并使肌动蛋白骨架F-actin发生重构,足细胞的迁移性增高[(47±6) vs (13±3),P＜0.05],氯沙坦可减轻AGEs介导的synaptopodin的下调[(80±12)％vs(50±11)％,P＜0.05]和F-actin的重构,降低足细胞的迁移性[(25 ±4) vs (47 ±6),P＜0.05].结论 AGEs可能通过激活足细胞内的肾素-血管紧张素系统的机制,下调synaptopodin表达,介导骨架蛋白的重构,增加迁移性.
关键词： 晚期糖基化终产物 足细胞 Synaptopodin 迁移性 -
IgA肾病患者肾组织内synaptopodin的表达及意义
目的 观察synaptopodin在IgA肾病患者肾组织中的表达,并探讨其在肾组织分布特征、进行相关分析,推测病情预后.方法 分析202例IgA肾病患者的肾活检组织标本,按Lee分级系统分为5级及参照Katafuchi积分方法,依据病变程度进行积分.对选取的样本经抗人synaptopodin单克隆抗体间接免疫荧光染色.用免疫荧光显微镜观察及图像分析软件进行定量分析肾组织中synaptopodin的表达情况,测量平均光密度值,然后进行统计学分析.结果 对5组的IgA肾病患者肾组织中synaptopodin所表达的平均光密度值进行比较,差异有统计学意义(P<0.01),病理组织中synaptopodin所表达的平均光密度值与Katafuchi积分存在负相关关系(r=-0.922,P<0.01).结论 synaptopodin可做为判断肾纤维化程度及预后的重要指标之一.
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雷公藤甲素对高糖刺激足细胞synaptopodin和desmin表达影响
目的 通过观察高糖刺激对小鼠足细胞synaptopodin和desmin表达影响及雷公藤甲素(TP)对其干预作用,探讨TP减少糖尿病肾病尿蛋白的分子机制.方法 以体外培养小鼠永生化足细胞为研究对象,将其分为正常糖组、高糖刺激组、甘露醇对照组、低剂量TP干预组和高剂量TP干预组5组,分别加含有5.5 mmol/L的D-葡萄糖、含有30.0 mmol/L的D-葡萄糖、含有5.5 mmol/L的D-葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇、含有30.0 mmol/L的D-葡萄糖+3 μg/L的TP、含有30.0 mmol/L的D-葡萄糖+10 μg/L的TP培养液培养48 h.应用荧光定量PCR法和Western Blot方法检测各组足细胞synaptopodin、desmin mRNA和蛋白的表达.结果 与正常糖组相比,高糖刺激组足细胞synaptopodin mRNA和蛋白的表达增加,desmin mRNA和蛋白的表达减少;低剂量TP干预和高剂量TP干预组synaptopodin mRNA和蛋白表达水平均较高糖刺激组升高,而desmin mRNA和蛋白表达水平较高糖刺激组降低,且呈一定的剂量-效应关系,差异有显著性(F=25.919～551.012,P＜0.05).结论 TP可以改善高糖诱导的足细胞synaptopodin和desmin表达异常,这可能是TP减少糖尿病肾病尿蛋白的机制之一.
关键词： 足细胞 雷公藤内酯 糖尿病肾病 Synaptopodin Desmin
