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鲤鱼汤对阿霉素肾病大鼠CD2相关蛋白及肾病蛋白的影响
目的:观察阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)和肾病蛋白(nephrin)的表达及鲤鱼汤对其表达的影响,进而探讨鲤鱼汤治疗肾病综合征的作用机制.方法:70只Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组(N组)、模型组(M组)、福辛普利组(F组)、鲤鱼汤低剂量组(YD组)和鲤鱼汤高剂量组(YG组).M组、F组、YD组和YG组大鼠采用尾静脉注射阿霉素6.5mg/kg复制阿霉素肾病模型.第3周开始进行干预,YG组和YD组分别予以高、低剂量鲤鱼汤(2.25、1.13g/mL)灌胃7周；F组予以0.09mg/mL福辛普利灌胃；N组和M组予以等量自来水灌胃.采用免疫组化方法检测各组大鼠肾脏中CD2AP、nephrin的表达,并计算其阳性表达的平均光密度值(AOD).结果:与模型组相比,鲤鱼汤高剂量和鲤鱼汤低剂量组大鼠血清总蛋白水平、血清白蛋白水平等均有一定升高,尤其鲤鱼汤高剂量组差异均有统计学意义(P＜0.05)；各治疗组肾小球中CD2AP与nephrin的表达较N组均降低,但与M组比较,都有不同程度的增加(P＜0.05).结论:鲤鱼汤可不同程度地增强阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞CD2AP和nephrin的表达,改善阿霉素肾病大鼠肾小球的损伤,进而起到治疗作用.
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祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞Desmin及CD2AP蛋白的影响
目的 探讨祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞结蛋白(Desm in)和CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)的作用.方法 一次性尾静脉注射阿霉素制备肾病模型.3周后造模成功,随机分为空白对照组(A组,12只),模型对照组(B组,8只),祛风通络方小、中、大剂量组(C组、D、E每组8只)和阳性对照组(F组,8中).从第4周起,A组和B组给生理盐水,C～E组分别给祛风通络方1.0、2.1、4.2 g/mL,F组给泼尼松25 mg/kg.各组均灌胃给药,10 mL/kg,1次/天,连续28天.期间进行24 h尿蛋白定量、血清生化指标检测,实验结束时电镜观察超微结构、Real-time PCR法及Western blot法检测足细胞骨架蛋白Desmin mRNA、裂孔隔膜蛋白CD2AP mRNA及其蛋白表达.结果 (1)与B组比较,C、D、E、F组24 h尿蛋白定量明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)与B组比较,C、D、E组ALB均有所升高,差异有统计学意义(P ＜0.05);TC含量明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);F组TG反而有明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).(3)电镜观察发现,D、E、F组与B组比较,足细胞形态均有不同程度改善,特别是足突结构、足突数目改善明显,其D、E组改善更明显.(4)阿霉素肾病大鼠中Desmin mRNA、CD2AP mRNA及蛋白表达均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).干预后,与B组比较,C、D、E、F组Desmin mRNA和CD2AP mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).(5)与A组比较,B组Desmin、CD2AP蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).与B组比较,C、D、E、F组CD2AP蛋白表达明显降低,D、E、F组Desmin蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);各剂量组间比较,C、D、E组Desmin及CD2AP蛋白表达逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与F组比较,C、D组CD2AP蛋白表达明显高,E组CD2AP蛋白表达明显低,差异有统计学意义(P＜0.05);C、D、E组Desmin蛋白表达较高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 祛风通络方对阿霉素肾病大鼠的治疗作用伴随着改变足细胞骨架蛋白Desmin及裂孔隔膜蛋白CD2AP基因表达的改变而实现.
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CD2相关蛋白在肾脏细胞中的分布及其在足细胞中的作用
目的 观察CD2相关蛋白(cD2AP)在肾脏不同细胞系中的表达分布,及其与足细胞裂孔隔膜分子nephrin和细胞骨架蛋白F-actin之间的联系.方法 以DMEM培养基培养人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞系(HK-2),RPMI 1640培养基培养条件永生化小鼠足细胞系.以RT-PCR及Western blotting方法检测足细胞内CD2AP和nephrin的表达.间接免疫荧光结合激光共焦方法观察CD2AP在HMC、HK-2、未分化及已分化足细胞中的表达情况,及CD2AP与nephtin在足细胞中的共存.直接免疫荧光结合激光共焦方法观察F-actin在足细胞的表达及其与CD2AP的共存.结果 CD2AP均匀分布于HK-2及未分化足细胞的核周及胞浆,而不表达于HMC细胞.在足细胞分化过程中,CD2AP的分布发生了变化,出现向周边聚集的现象.CD2AP与足细胞裂孔隔膜分子nephrin及细胞骨架蛋白F-actin在足细胞中存在共定位关系.结论 CD2AP表达于上皮来源的肾脏固有细胞.CD2AP在足细胞中的分布特点,提示CD2AP可能参与足细胞的分化过程,并与裂孔隔膜分子功能及细胞骨架凋节有关.
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CD2相关蛋白启动子区域保守序列的功能分析
目的 在不同物种间通过保守序列分析和荧光素酶功能测定的方法寻找发现CD2相关蛋白(cD2AP)基因启动子重要的调节成分.方法 用BLAST分析软件进行序列比较和同源分析不同种系CD2AP启动子序列,构建人CD2AP启动子不同的缺失变异载体,转染来自不同种类的细胞,测定荧光素酶活性,并用全反式维甲酸处理,观测其对CD2AP启动子活性的影响.结果 在人、牛、猪的CD2AP推断的启动子区域进行同源比较发现推断的sp1(specific protein 1)和下游启动子成分高度进化保守,进行性缺失荧光素酶分析表明在人胚肾细胞株HEK-293、非洲绿猴肾细胞株Vero、仓鼠肾细胞株BHK-21中人CD2AP启动子活性有相似的形式,ATG上游500 bp有基本的启动子活性,再向上100 bp启动子活性增加10倍,两个推断的Sp1位点位于该100 bp区域内,全反式维甲酸可下调CD2AP启动子的活性.结论 我们初步发现推断的Sp1位点和下游启动子成分在CD2AP启动子调控中起重要作用.
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2型糖尿病患者尿液胞外囊泡中转化生长因子β1和CD2相关蛋白与糖尿病慢性肾脏疾病的相关性研究
目的：探讨尿液胞外囊泡（EVs）中转化生长因子β1（TGF‐β1）和CD2相关蛋白（CD2AP）能否作为糖尿病慢性肾脏疾病（CKD）的生物标记物。方法收集 T2DM 患者48例，其中，单纯 T2DM者18例，微量白蛋白尿者18例，大量白蛋白尿者12例。RT‐PCR检测EVs中 TGF‐β1和CD2AP的表达水平。结果 T2DM 组尿液 EVs中 TGF‐β1 mRNA 表达水平低于其他两组（P＜0.05）。CD2AP mRNA表达水平高于其他两组（P＜0.05）。TGF‐β1表达水平与UAER、Scr、及胱抑素C（Cys‐C）呈正相关（r＝0.491、0.351、0.468，P＜0.05）；CD2AP水平与 UAER及Cys‐C呈负相关（r＝－0.605、－0.385， P＜0.01）。结论尿液EVs中，TGF‐β1和CD2AP能反映CKD的进程，可作为其生物标记物。
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CD2AP、CXCL16、FcRn在特发性膜性肾病足细胞损伤中的研究进展
特发性膜性肾病(IMN)的发病机制尚未完全阐释清楚.目前研究认为,IMN的发病与足细胞密切相关,在其免疫发病机制中,足细胞既是靶细胞又是主动参与者.足细胞结构复杂且功能特殊,其表达的CD2相关蛋白、CXC趋化因子配体16、新生儿Fc受体参与了IMN足细胞免疫损伤的过程.探索及阐释其发生机制可为临床有效防治IMN提供理论依据.
关键词： 特发性膜性肾病 足细胞 CD2相关蛋白 CXC趋化因子配体16 新生儿Fc受体 -
CD2相关蛋白和肾质在多房囊性肾细胞癌中的表达
目的 探讨CD2相关蛋白(CD2AP)及肾质(nephrin)在成人多房囊性肾细胞癌中的表达及意义.方法 收集多房囊性肾细胞癌标本28例、肾透明细胞癌标本32例和单纯性肾囊肿标本13例,采用免疫组化方法 检测CD2AP在上述组织中的表达.从上述3组组织蜡块中每组各随机抽取5例共15例,重新切片,用CD2AP和肾质,做免疫组化染色对照实验.结果 在多房囊性肾细胞癌的肿瘤细胞中CD2AP表达较强,尤其在囊壁的内层上皮表达强度明显增加.CD2AP在肾透明细胞癌中有弱表达,在单纯性肾囊肿中没有表达.肾质和CD2AP在3种组织的对照实验结果 中染色强度和部位完全一致.结论 CD2AP在多房囊性肾细胞癌中的表达具有特异性,其表达与肾透明细胞癌和单纯性肾囊肿有显著差异,对于多房囊性肾细胞癌的鉴别诊断有重要意义.CD2AP和肾质在多房囊性肾细胞癌中分布一致的特点,以及上述两种蛋白的足细胞特异性对于多房囊性肾细胞癌的形成原因具有重要提示.
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CD2相关蛋白在囊性肾透明细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系研究
目的 探讨CD2相关蛋白(CD2AP)在囊性肾透明细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学SP法对囊性肾透明细胞癌组织31例和单纯性肾囊肿组织50例蜡块标本进行CD2AP检测.观察CD2AP在囊性肾透明细胞癌中的表达及其与临床病理特征的关系.结果 囊性肾透明细胞癌中CD2AP表达的阳性率为83.9%(26/31),单纯性肾囊肿中无CD2AP表达.2组比较差异有统计学意义(P<0.01).CD2AP在囊性肾透明细胞癌囊壁的内层上皮表达强度明显增加.CD2AP在不同性别、年龄、肿瘤发生部位及直径的囊性肾透明细胞癌患者中的表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 CD2AP在囊性肾透明细胞癌中的表达具有特异性,对于囊性肾透明细胞癌的鉴别诊断有重要意义.
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荆防败毒散对阿霉素肾病大鼠足细胞Nephrin、CD2相关蛋白及ILK通路的影响
目的 观察荆防败毒散对阿霉素诱导肾病大鼠肾组织足细胞Nephrin、CD2相关蛋白(CD2AP)、整合素连接激酶(ILK)蛋白及基因表达的影响.方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、苯那普利组、荆防败毒散组.除正常组外,其余各组采用大鼠尾静脉一次性注射阿霉素制备肾病模型,并进行相应干预.检测各组大鼠24 h尿蛋白水平及肾功能情况,检测肾组织中Nephrin、CD2AP及ILK蛋白及基因表达情况.结果 与正常组比较,模型组大鼠24h尿蛋白水平显著上升,肾功能指标增高,肾组织中Nephrin、CD2AP蛋白及基因表达明显降低,ILK蛋白及基因表达显著上调.与模型组比较,荆防败毒散组大鼠24h尿蛋白水平显著降低,肾功能指标下调,肾组织中Nephrin、CD2AP蛋白及基因表达明显上调,ILK蛋白及基因表达显著下调.结论 荆防败毒散可减少阿霉素肾病大鼠蛋白尿水平,其可能机制是下调ILK表达,从而上调足细胞裂孔隔膜蛋白Nephrin、CD2AP表达.
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CD2相关蛋白在足细胞分化中的作用
本文旨在研究肾脏足细胞的分化特点及CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)在足细胞分化过程中的作用.用RPMI 1640培养基在33.C许可条件下培养永生化小鼠足细胞系(未分化组),转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)后置于37.C非许可条件下培养(转染组),并将非许可条件下未转染组作为对照组.用MTT法检测足细胞的生长速度;用RT-PCR方法检测CD2AP、WTI、synaptopodin和nephrin mRNA表达;用Western blot检测CD2AP、wTl和nephrin蛋白表达;用免疫荧光结合激光共聚焦方法检测CD2AP、nephrin、F-actin和tubulin在分化及未分化足细胞中的分布及其共定位情况.结果显示,CD2AP、WTl和nephrin在分化及未分化足细胞中均可稳定表达,而synaptopodin仅表达于已分化足细胞,在未分化足细胞无表达.在足细胞分化过程中,CD2AP和nephrin的表达上调(P<0.05);CD2AP、tubulin和F-actin在细胞内的分布发生改变,CD2AP与nephrin及F-actin在未分化足细胞中存在共定位关系.转染特异性siRNA下调CD2AP表达,细胞生长速度明显减慢,synaptopodin mRNA表达下调(P<0.05),细胞分化迟滞.结果表明,足细胞分化过程中伴随细胞骨架的重新分布和细胞形态的改变;CD2AP可能作为足细胞裂孔隔膜分子与细胞骨架的连接蛋白,在足细胞分化过程中发挥重要作用.
关键词： CD2相关蛋白 足细胞 nephrin Synaptopodin WT1 -
CD2AP和α-actinin-4在大鼠阿霉素肾病模型中的表达
目的:观察CD2相关蛋白(CD2AP)和α-actinin-4这两种足细胞相关分子在大鼠阿霉素肾病模型中蛋白表达水平的变化,探讨它们与蛋白尿发生发展的相关性.方法:30只SD大鼠随机分为肾病模型组和正常对照组,建立阿霉素肾病模型,在2、4、6、8周,应用光镜、电镜观察肾组织的病理改变,BCA法检测24 h尿蛋白排泄量,半定量Western Blot的方法检测大鼠肾皮质中CD2AP和α-actinin-4的表达.结果:随着肾病模型组大鼠尿蛋白量逐渐增加,肾组织病理改变逐步加重,肾皮质CD2AP的表达量先明显增加,后逐渐降至对照组水平,2、4、6周分别为对照组的3.0、1.8、1.2倍,而α-actinin-4的表达量无明显变化.结论:阿霉素肾病模型大鼠肾皮质CD2AP和α-actinin-4这两种足细胞相关分子的蛋白表达规律不同,前者与蛋白尿的发生发展有一定程度的相关性,后者则与尿蛋白量的变化无关.
关键词： 阿霉素肾病 CD2相关蛋白 α-actinin-4 蛋白尿 -
CD2相关蛋白剪接异构体启动子区及其缺失体的构建和活性分析
目的:构建CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)剪接异构体启动子区及其缺失体,转染HEK293及HeLa细胞,评价其启动子活性.方法:取稳定生长的HeLa细胞,常规方法提取总RNA,逆转录为cDNA并以此为模板,PCR扩增CD2AP剪接异构体之一CD2AP002转录起始位点上游2 200 bp的启动子区域片段,亚克隆这些片段至pGL-3基本载体上的多个克隆位点,构建含CD2AP002启动子的重组质粒.CD2AP002质粒构建成功后,以此质粒为模板重复上述步骤构建一系列CD2AP002启动子5’侧翼区缺失体.重组质粒及其缺失体转染人胚肾HEK293细胞及人宫颈癌HeLa细胞,双荧光素酶报告基因检测各片段的活性.结果:酶切、核酸序列分析证实,成功构建含CD2AP002启动子的重组质粒及其缺失体.经双荧光素酶活性检测证实不同片段大小的5’侧翼区序列缺失体均具有与片段长度相应的活性.结论:成功构建出在HEK293及HeLa细胞中具有活性的重组质粒及其缺失体.
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全反式维甲酸通过Sp1/Sp3位点调节HEK-293细胞中CD2AP基因的表达
目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对人胚胎肾HEK-293细胞中CD2相关蛋白(CD2AP)基因表达的影响.方法 ATRA作用HEK-293细胞后,采用RT-PCR和Western blot分别检测CD2AP mRNA及其蛋白的表达.将构建的不同Sp1/Sp3位点的定点突变、巢式缺失突变的CD2AP启动子质粒转染HEK-293细胞,检测报告质粒的荧光素酶活性.结果 ATRA明显上调HEK-293细胞中CD2AP mRNA和蛋白水平(P＜0.05).缺失突变及点突变研究显示,Sp1/Sp3-A、C位点在介导ATRA上调CD2AP过程中发挥重要作用.结论 ATRA通过Sp1/Sp3结合位点诱导HEK-293细胞中CD2AP的表达；ATRA对CD2AP基因缺陷肾病患者可能有治疗作用.
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CD2相关蛋白mRNA在大鼠阿霉素肾病模型中的表达
目的观察CD2相关蛋白(CD2AP)mRNA在大鼠阿霉素肾病模型中的表达,探讨其在蛋白尿发生发展过程中的作用.方法建立大鼠阿霉素肾病模型,应用光镜、电镜观察不同时期(第2、4、6、8周末)肾组织的病理改变,并采用半定量RT-PCR的方法,检测大鼠肾皮质中CD2AP mRNA的表达.结果阿霉素注射后:(1)大鼠24 h尿蛋白量逐渐增加,第2、4、6、8周末分别为(144.5±16.4)、(250.0±45.5)、(440.1±62.1)和(626.5±94.2) mg/24h,均显著高于正常对照组(24.3±6.5) mg/24h(P＜0.001);(2)大鼠肾皮质CD2AP mRNA的表达在第4、6、8周末分别达到正常对照组的1.7倍、2.5倍和1.9倍.CD2AP mRNA的表达与尿蛋白量呈正相关(r=0.58,P＜0.01).结论阿霉素肾病模型大鼠肾皮质CD2AP mRNA的表达与大鼠蛋白尿的发生发展具有一定的相关性.
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霉酚酸酯对大鼠糖尿病肾病及CD2相关蛋白表达的影响
目的研究霉酚酸酯(MMF)对大鼠糖尿病肾病(DN)及CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响.方法纯种雄性SD大鼠24只,分正常对照(A)组、DN模型(B)组和MMF干预DN(C)组.饲养8周后行有关血尿生化指标和光镜组织学、透射电镜、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) CD2AP mRNA表达检测.结果 MMF明显减少DN大鼠24 h尿蛋白的排泄,预防血肌酐的升高.组织学显示C组大鼠肾小球面积明显减少,系膜增宽及细胞外基质积聚明显改善.电镜下B组大鼠足细胞足突增宽,部分融合,肾小球毛细血管袢基膜增厚,系膜区增宽,系膜基质增多,C组大鼠以上病变都明显减轻.CD2AP mRNA表达在B组显著高于A组和C组.结论 MMF具有治疗SD大鼠DN的作用,并且在转录水平逆转肾皮质CD2AP表达上调.
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地塞米松通过稳定磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B分子信号通路对嘌呤霉素诱导足细胞凋亡的抑制作用
目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)分子信号通路在地塞米松(DEX)抑制嘌呤霉素(PAN)引起足细胞凋亡中的作用.方法 体外培养小鼠肾小球足细胞系,并设立对照组、溶媒溶剂二甲基亚砜(DMSO)组、PAN组、DEX组及PI3K特异性抑制剂LY294002组.采用实时荧光定量PCR、间接免疫荧光染色检测CD2相关蛋白(CD2AP) mRNA表达水平及细胞内分布情况,激光共聚焦检测其与p85的共定位分布的情况;Western blot检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)和磷酸化GSK3β(p-GSK3β)的表达.结果 PAN组各时间点(8h、24 h、48 h)CD2AP mRNA (1.11±0.16、0.78±0.09、0.56±0.43)显著低于对照组(1.90±0.26、2.09±0.12、2.28 ±0.95),差异均有统计学意义(均P＜0.05),CD2AP蛋白呈均匀细丝状分布于胞质足突并在细胞核内转变为不连续粗颗粒状集中分布于核周,CD2AP与p85在细胞核膜、细胞质及细胞膜均匀的重叠转变为核内增多的强荧光信号的重叠;DEX组各时间点(8h、24h、48 h)CD2AP mRNA(1.53±0.14、2.15 ±0.27、2.13±0.15)显著高于PAN组,差异均有统计学意义(均P＜0.05),CD2AP蛋白在细胞膜、胞质的分布密度、分布范围大于PAN组,与p85其重叠荧光信号向核内积聚明显减轻;PAN刺激足细胞15 min后p-Akt蛋白表达水平低,p-GSK3β蛋白表达水平在30 min低,p-Akt及p-GSK3β蛋白表达水平呈PAN浓度依赖性下降(P＜0.05),不同浓度DEX干预后p-Akt及p-GSK3β蛋白表达水平均呈DEX浓度依赖性地恢复(P＜0.05),LY294002组p-Akt及p-GSK3β的表达则显著下降(P＜0.01).结论 DEX通过稳定CD2AP的表达水平和分布情况来保护足细胞,抑制足细胞凋亡;PI3 K/Akt分子信号通路稳定的表达水平是DEX保护足细胞的关键因素.
关键词： 足细胞 CD2相关蛋白 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B 地塞米松 -
靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞中CD2相关蛋白表达的影响及意义
目的 研究小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响及意义.方法 利用构建靶向抑制Par-4基因的SiRNA真核表达载体转染hBMSCs.采用实时荧光定量PCR检测Par-4基因的mRNA水平.采用谷氨酸诱导hBMSCs凋亡.采用流式细胞术检测hBMSCs凋亡百分率.Western blot检测hBMSCs CD2AP蛋白表达量.应用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 1.Par-4-SiRNA可下调hBMSCs Par-4-mRNA水平,抑制率为88%(P＜0.01).而非抑制的对照序列未见抑制作用(P＞0.05).2.流式细胞术检测结果 显示,与正常对照组比较,谷氨酸加常规hBMSCs组凋亡百分率为(59.12±5.43)%(P＜0.01).而在Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组中,谷氨酸对hBMSCs的凋亡诱导作用被显著抑制,凋亡百分率显著下调为(39.49±5.01)%(P＜0.01).3.Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组,谷氨酸对hBMSCs中CD2AP的下调作用被显著抑制,CD2AP蛋白的表达量显著上升(P＜0.01).结论 靶向抑制Par-4基因的表达能够拮抗谷氨酸诱导的hBMSCs凋亡及CD2AP表达的下调.
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miR-30a与肾脏病理生理
微小核糖核苷酸(microRNA)在机体的生长发育、疾病的发生发展过程中发挥重要的调节作用.多种microRNA在维持肾脏正常功能及肾脏疾病病理中发挥功能,其中miR-30a在肾脏的发育与肾脏疾病进展中具有广泛的调节作用.现对miR-30a在肾脏病理中的作用做简要综述.
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嘌呤霉素诱导足细胞凋亡与CD2相关蛋白和磷脂酰肌醇3-激酶p85异常表达的意义
目的 观察嘌呤霉素(PAN)对足细胞凋亡率、足细胞分子CD2相关蛋白(CD2AP)和磷脂酰肌醇3-激酶(PI3 K) p85表达的影响,探讨CD2AP异常表达在足细胞凋亡中的意义.方法 体外培养小鼠肾小球足细胞系,设立对照组及PAN刺激组,处理后8h、24 h和48 h观察细胞形态并摄像,采用流式细胞仪检测足细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测CD2AP mRNA的表达,Western blot法检测CD2AP和PI3K p85蛋白的表达,间接免疫荧光标记在共聚焦显微镜下观察CD2AP与PI3K p85的共定位分布.结果 PAN刺激后足细胞胞体缩小,出现足突回缩至逐渐消失,失去细胞间连接;与对照组比较,PAN组足细胞24 h和48 h凋亡率[(7.52±1.35)％、(17.09±2.53)％比(4.32±0.81)％、(6.81 ±1.34)％]均明显升高,差异均有统计学意义(=4.98、8.79,P均＜0.05);PAN刺激组CD2AP mRNA表达各时间点均较对照组明显降低(0.34 ±0.12、0.46±0.21、0.47 ±0.10比0.62±0.23、0.97±0.14、0.96±0.23),差异均有统计学意义(t=2.64、4.95、4.79,P均＜0.05);24 h和48 h CD2AP(0.36±0.12、0.27±0.15比0.64±0.23、0.51±0.20)与PI3K p85(0.61 ±0.20、0.48±0.20比0.97±0.31、0.84±0.35)蛋白表达均显著降低,差异均有统计学意义(=2.64、2.35、2.31、2.40,P均＜0.05);CD2AP在足细胞的分布由均匀细丝状分布于胞质足突及核内转为不连续粗颗粒状集中分布于核周,CD2AP与PI3K p85的共定位关系也明显异常.结论 PAN诱导足细胞凋亡过程中CD2AP和PI3Kp85表达及分布异常,说明CD2AP可能通过PI3K通路在足细胞的凋亡中起重要作用.
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CD2相关蛋白在肾脏学科的新视角
CD2相关蛋白(CD2AP)是一个重要的足细胞相关蛋白,它与其它足细胞相关分子的关系成网络状联系,并且在不同的人类肾脏病中有不同表现, CD2AP还参与了复杂的足细胞信号转导通路,对足细胞生存和分化都至关重要.
