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白藜芦醇对K562细胞中WT1表达的影响
目的:研究白藜芦醇在白血病细胞株K562中对WT1表达的影响.方法:采用MTT法测定不同浓度白藜芦醇对K562细胞的增殖抑制作用,并计算IC50;根据IC50结果设立药物组、阴性对照组和阳性对照组,采用以RT-PCR和Western Blot法检测WT1 mRNA和蛋白表达情况.结果:①白藜芦醇抑制K562细胞的增殖,72h的IC50为97μmol/L;②25μmol/L白藜芦醇可明显抑制K562细胞中WT1 mRNA和蛋白的表达.结论:白藜芦醇可显著下调K562细胞中WT1基因mRNA和蛋白的表达.
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益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠肾组织WT1影响的实验研究
目的:探讨益气养阴活血方对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织WT1表达的影响.方法:大鼠喂养1周后按随机数字表法分为空白组、模型组、中药组并建立DN大鼠模型.造模成功后空白组和模型组灌服生理盐水,中药组灌服益气养阴活血方颗粒剂,8周后生化检测24 h尿蛋白、血肌酐(Scr)、谷丙转氨酶(ALT)等;测量肾小球直径,称取左肾质量、计算肥大指数;PAS染色观察大鼠肾脏病理;免疫组化检测肾组织WT1表达.结果:益气养阴活血方能够上调实验大鼠肾组织WT1的表达,减少24 h尿蛋白、Scr及BUN水平,升高ALB,缩小肾小球直径,改善肾脏病理.结论:益气养阴活血方可能通过影响DN大鼠肾组织WT1的表达而改善上述生化指标,减轻肾脏病理损害,对肝功能未见明显损害.
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急性白血病患者WT1基因定量监测与预后的关系
目的:通过检测WT1基因在成人急性髓系白血病(非APL)中的表达,探讨其在中、高危急性髓系白血病治疗反应和预后的临床应用价值.方法:选取急性髓系白血病患者63例,其中不包含急性早幼粒细胞白血病患者;应用SYBR Green I定量RT-PCR方法检测63例初治急性髓系白血病患者中WT1基因的表达.结果:WT1基因在急性髓系白血病中高表达,在低危组中的表达明显低于中危组和高危组(P＜0.05).WT1基因在中危组与高危组中的表达无明显统计学差异;中、高危组病人经1疗程正规治疗后,缓解组的WT1基因表达量与未缓解组相比明显下降(P＜0.05).在中、高危组病人中,首次治疗未缓解的病人,给予再次诱导治疗达到缓解病人的WT1基因表达量明显低于未缓解组(P＜0.05).在中高危组病人中,WT1低表达的患者治疗后2年总体生存时间(0S)较未缓解病人明显延长(P＜0.05).结论:检测WT1基因的表达可有助于急性髓系白血病患者的低、中、高危分群,也有助于评价中、高危急性髓系白血病的治疗及预后情况.
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NF-кB活化及WT1、MDR1的表达在急性非淋巴细胞白血病中的临床意义
本研究通过观察初治与难治急性非淋巴细胞白血病中NF-κB活性及WT1、MDR1的表达水平,探讨三者在急性非淋巴细胞白血病疗效中的作用与相互关系,为寻找新的改善难治急性非淋巴细胞白血病疗效的方法提供理论依据.急性非淋巴性白血病患者45例,其中初治组20例(A组),难治组25例(分为B、C两组).以15例单纯缺铁性贫血患者作为对照组.采用凝胶电泳迁移分析(EMSA)法检测各组病人NF-κB的活化水平,用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测各组病人WT1及MDR1的表达水平.结果发现,在对照组未检测到NF-κB活化及WT1和MDR1表达;在初治组中NF-κB的活化水平、WT1和MDR1表达水平均明显低于难治组,而在难治B、C两组中三者无明显区别;各组病人细胞中NF-κB活化水平与WT1及MDR1的表达水平呈正相关.结论:NF-κB的活化,WT1、MDR1的高表达可能是急性非淋巴细胞白血病难治的原因之一,急性非淋巴细胞白血病中NF-κB的活化水平与WT1、MDR1的表达呈正相关.
关键词： NF-κB WT1 MDR1 急性非淋巴细胞白血病 -
WT1抗原多表位与热休克蛋白70刺激表位融合基因疫苗的构建、表达及免疫原性研究
本研究用基因工程方法构建一种由WT1抗原多表位与结核分枝杆菌热休克蛋白70(mHSP70)刺激表位组成的融合基因疫苗并检测其表达和病疫原性.根据文献资料,筛选WT1抗原有良好免疫原性的3个受HLA0201与1个受HLA2402限制性的细胞毒性T细胞(CTL)表位及2个辅助性T细胞(Th)表位,加入通用外源性T细胞刺激表位Pan-DR-Th(PADRE)后,以不同的间隔序列相连,蛋白酶体切割软件优化多表位构成,合成1条由732 bp组成的多表位WT1基因片段,并插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中.通过PCR技术从结核分支杆菌基因组(mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mHSP70)中扩增包含mHSP70刺激表位的DNA片段,亚克隆至pcDNA3.1(+),测序正确后将含有多表位的WT1基因片段亚克隆入该载体上游,构建融合基因疫苗pcDNA3.1-WT1-mHSP70(407-426).用RT-PCR方法检测该基因在293T细胞表达,并免疫C57BL/6小鼠,酶联免疫吸附斑点法(ELISPOT)检测该疫苗的细胞免疫学反应.结果表明:通过蛋白酶体切割工具PAPROC及NETCHOP3.1预测,复合多表位基因工程疫苗各表位可被正确裂解,PCR和酶切鉴定结果表明,构建的重组真核表达质粒pcDNA3.1-WT1-mHSP70(407-426)含有正确编码的融合基因片段,并在真核细胞获得了正确表达.将该基因疫苗免疫小鼠后,可诱导特异性的CTL应答.结论:成功构建含有WT1多表位与热休克蛋白70刺激表位融合基因疫苗.
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多发性骨髓瘤组织中WT1和VEGF表达及与血管新生的关系
目的:探究多发性骨髓瘤骨髓组织中WT1和血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达及与血管新生的关系.方法:应用原位杂交及免疫组织化学SP染色技术检测62例多发性骨髓瘤患者及10例非恶性肿瘤和血液病对照患者骨髓组织中VEGF和WT1基因表达及微血管密度(MVD).结果:正常对照组微血管密度(MVD)为(45±6)/视野,多发性骨髓瘤组MVD为(84±26)/视野,差异有统计学意义(P ＜0.05);62例多发性骨髓瘤患者中VEGF的阳性率为51.6％ (32/62),VEGF阳性组MVD显著高于阴性组MVD(P ＜0.05);WT1的阳性率为30.6％(19/62),WT1阳性组MVD显著高于阴性组MVD(P ＜0.05).统计学分析显示,WT1的表达与VEGF的表达具有显著相关性(P＜0.05).结论:多发性骨髓瘤骨髓组织中WT1的高表达可以上调VEGF的表达,促进血管新生.
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骨髓增生异常综合征患者骨髓及外周血中WT1及PRAME基因的表达研究
本研究探讨WT1及PRAME基因在骨髓增生异常综合征患者骨髓和外周血中的表达情况以及与核型异常、病态造血、血红蛋白值之间的关系.收集2009年7月至2012年6月在我院初诊的240例贫血患者,其中MDS203例(RCUD 15例,RCMD 25例,RAEB1 61例,RAEB2 55例,MDS-U 23例,MDS-AML 24例),AA 18例,其他良性贫血15例,PNH 4例和14例健康供者的骨髓标本,并收集其中78例患者及14例健康供者的外周血,分别检测骨髓和外周血中WT1及PRAME基因的表达水平.结果表明,WT1及PRAME在MDS骨髓及外周血中的表达均高于正常组、AA组及良性贫血组(BM:WT1:P=0.000,0.000,0.000,PRAME:P=0.048,0.000,0.064;PB:WT1:P=0.012,0.000,0.011,PRAME:P=0.020,0.004,0.003),其中高危MDS患者WT1及PRAME的表达均高于低危组,AA及其他良性贫血组,且WT1及PRAME在骨髓和外周血中的表达水平呈现良好的相关性(WT1:r=0.6028,P=0.001;PRAME:r=0.7628,P=0.000),WT1或PRAME在骨髓与外周血中阳性率一致(P =0.167);另外,骨髓中WT1的表达水平与核型异常相关(P =0.049).结论:MDS患者骨髓及外周血WT1和PRAME的表达较正常人、AA及其他良性贫血患者升高,且随着病情进展,其表达增加;WT1和PRAME基因的表达上调是MDS很好的分子标记,联合运用WT1和PRAME基因表达水平检测能为MDS的临床诊断及预后判断和微小残留监测提供有用信息,且在骨髓取材不便的时候可用外周血代替监测.
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Frasier综合征一例报道并文献复习
目的 探讨Frasier综合征(FS)患儿的临床病理特点,以加深对FS的认识.方法 分析1例典型FS患儿的临床病理特点,并对FS相关文献进行复习.结果 患儿,女,染色体核型46,XY,有正常女性外生殖器,超声检查示有子宫但未见子宫内膜和卵巢;1岁2个月发现蛋白尿及肾功能不全,起病4个月进展至终末肾(ESRD).肾脏病理为局灶节段性肾小球硬化(FSGS).Wilms tumor-1(WT1)检测到IVS9 1228+4C>T突变.结论 FS为WT1突变所致的一组临床综合征,主要表现为进展性肾病综合征和男性假两性畸形,病理类型为FSGS.因此,对于女性激素耐药肾病综合征患儿,肾脏病理为FSGS时,应行染色体检查及WT1突变检测,以排除FS.
关键词： Frasier综合征 肾小球硬化症 局灶节段性 假两性畸形 WT1 -
慢性粒细胞白血病患者WT1基因表达及其临床意义
目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓细胞中Wilms瘤抑癌基因(WT1)的表达水平及其临床意义.方法 建立实时定量RT-PCR方法,采用Light Cycler PCR仪检测了46例(109份骨髓细胞cDNA标本)CML患者和23例非白血病患者骨髓细胞中WT1及内参β胆色原脱氢酶(GAPDH)的表达水平,以WT1N=(WT1拷贝数/GAPDH拷贝数)×104计算WT1表达水平.结果 23份CML加速期与22份CML急变期患者骨髓细胞中WT1N的中位表达水平分别为103.71和129.44,明显高于64份CML慢性期和对照组(分别为3.44和1.47,P＜0.01),对照组与CML慢性期之间WT1基因表达差异无统计学意义;CML加速期与急变期之间WT1基因表达差异也无统计学意义(P＜0.05).WT1基因表达水平与BCR/ABL融合基因表达水平具有一定的相关性.对其中7例CML患者行异基因骨髓移植前后动态检测WT1上升可提示白血病复发.结论 CML患者加速急变期骨髓细胞中WT1基因表达升高,具有参考意义.
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多发性骨髓瘤中Wilms瘤基因(WT1)基因异常甲基化的研究
目的 研究WT1基因甲基化状态及其mRNA在多发性骨髓瘤患者血清中的表达情况.方法 选取2015年1月～2017年10月河北省中医院收治的MM患者骨髓标本60例,运用荧光实时定量反转录PCR检测其mRNA表达水平.结果 60例多发性骨髓瘤患者存在WT1基因启动子区甲基化,与对照组比较具差异有统计学意义(P<0.05).结论 WT1异常甲基化在MM的发病机制中具有一定作用,其可作为监测多发性骨髓瘤发病与治疗反应的指标之一.
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大鼠心包膜组织WT1阳性细胞的分离、培养和生物学特性(附视频)
目的 了解大鼠心包膜组织中分离和培养干细胞的可行性、细胞特性和分化成心肌细胞的能力,为心包膜组织干细胞用于心脏疾病细胞治疗提供理论依据.方法 取Wistar大鼠制备心肌梗死模型后取心包组织,胶原酶消化法分离心包膜组织干细胞,并进一步梯度离心纯化,培养并适时传代,测定其生长曲线;分别用流式细胞仪和免疫组织化学法检测分离细胞的免疫表型.用5-氮杂胞苷诱导心包膜组织干细胞向心肌细胞分化,分化后的细胞表型分别用免疫组织化学法和反转录PCR分析检测.结果 分离细胞成梭状,体外培养呈良好增长,组织形态与心脏干细胞相似.免疫表型呈CD29、CD44、CD90阳性,部分呈CD106阳性,而CD34和CD45阴性;95%为WT1阳性细胞,并有少量的c-kit、心脏肌钙蛋白T、GATA-4、KDR阳性细胞.在药物诱导7 d后,部分细胞聚集成细胞团,可见单个细胞开始自发性博动,可以观测到明显的肌小节结构,并同时有心源性转录因子和结构蛋白在转录水平表达.结论 心包膜组织干细胞具有间充质干细胞的基本特征,并具有多样免疫表型,其中以WT1阳性细胞为主;纯化的WT1阳性细胞具有定向分化心肌细胞的潜能,提示心包膜组织可以作为心脏疾病细胞治疗的供体来源之一.
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36例儿童局灶节段性肾小球硬化的病因分析
目的 探讨儿童局灶节段性肾小球硬化(FSGS)的病因.方法 选择1979年1月至2011年12月于复旦大学附属儿科医院肾脏风湿科进行肾脏活检的36例FSGS患儿的临床资料为研究对象,对其临床特点进行回顾性分析,并经光学显微镜对其病理学结果进行分型.对坚持随访且病因不明的FSGS患儿进行常见FSGS致病基因 NPHS2全部外显子组和 WT1外显子8,9测序,并采用Snapshot技术对 NPHS1,CD2AP,PLCε1,APOL1,TRPC6,INF2,MYH9和 MYO1E 8个相对少见致病基因的42个突变位点进行检测(本研究遵循的程序符合本院人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,并与患儿监护人签署临床研究知情同意书).结果 36例FSGS患儿中,病因明确患儿为10例(27.8%),其中病因系低出生体重儿(LBWI)和微小病变肾病(MCD)患儿各为2例(5.6%),丙型肝炎、膀胱输尿管返流(VUR)、Galloway-Mowat综合征(GMS)、Denys-Drash 综合征(DDS)、IgA肾病和家族性FSGS患儿各为1例(2.8%);病因不明患儿为26例(72.2%).对坚持随访且病因不明的6例FSGS患儿和1例DDS患儿(共7例)进行相关基因和其突变位点分析发现,发生 WTI突变患儿为2例(5.6%,包括1例DDS患儿),均为杂合性ARG394TRP突变.结论 FSGS病因较为复杂,LBWI是FSGS重要病因之一,应引起重视.病因不明患儿仍占FSGS患儿主体,部分病因不明FSGS患儿可能系相关致病基因突变引起,临床应利用遗传分子技术对该类患儿进行相关致病基因分析.
关键词： 局灶节段性肾小球硬化 病因 儿童 WT1 低出生体重儿 -
FLT3,NPM1,WT1,c-KIT基因突变在儿童急性髓细胞白血病的分布及临床意义
目的 探讨儿童急性髓细胞白血病(AML)中FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)、核仁磷酸蛋白(NPM1)、Wilms瘤基因(WT1)及c-KIT基因突变发生的频次,并分析其临床意义.方法 利用PCR方法检测2005年1月-2011年11月首都医科大学附属北京儿童医院收治的儿童A ML患者的FLT3、NPM1、WT1及c-KIT基因突变情况,分析这些突变与临床特征、细胞遗传学改变之间的关系及对预后的影响.结果 256例患儿中FLT3、NPM1、WT1及c-KIT基因突变检出率分别为12.5％、30.1％、4.7％及12.1％.FLT'3及WT1阳性的非M3型AML患儿第一疗程完全缓解率(CR)降低(P=0.027,P=0.014).单纯FLT3-ITD阳性的非M3型AML患儿无复发生存时间(RFS)及无事件生存时间(EFS)低,单纯NPM1阳性或无基因突变的患儿RFS及EFS高(P ＜0.001).结论 FLT'3、NPM1、WT1及c-KIT基因突变在儿童AML患者中的分布及临床意义有其独特性,加强对这四种基因突变的研究与认识利于儿童AML准确分层治疗,从而提高长期生存率.
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激素耐药性肾病伴泌尿生殖器异常患儿的临床特点及WT1基因分析
目的 分析激素耐药性肾病伴泌尿生殖器异常患儿的临床特点、WT1基因及足细胞分子表达,提高对WT1基因突变在该类疾病的重要致病作用的认识.方法 收集3例激素耐药性肾病伴有或怀疑有泌尿生殖器异常的患儿.采用PCR及RT-PCR的方法分析WT1基因及+KTS(赖氨酸-苏氨酸-丝氨酸)/-KTS比例;采用间接免疫荧光及免疫组化的方法进行足细胞分子(nephrin,pedocin,α-actinin4,WT1及CD2AP)表达.结果 3例患儿发病年龄分别为6个月、1岁及10岁;2例为男性伴泌尿外生殖器异常,1例为男性假两性畸形;临床均表现激素耐药肾病,2例肾脏病理为局灶节段性肾小球硬化.2例检测到删突变,即WT1 IVS 9+5 G＞A和WT1外显子9 1186 G＞A杂合突变.足细胞分子在WT1突变肾组织表达发生改变;1例无WT1表达,1例WT1在足细胞细胞核内的分布与正常对照不同.结论 对于激素耐药性肾病的女性患者或伴有泌尿生殖器异常的男性患者应行染色体核型和WT1基因分析.WT1突变除可能引起+KTS/-KTS比例异常,还伴有足细胞分子表达异常,从而导致蛋白尿的形成和(或)发展.
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端粒酶逆转录酶在白血病骨髓与外周血中的表达及其与WT1的相关性研究
目的:探讨端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptases, hTERT)和WT1 mRNA在白血病中的表达情况,并分析两者的相关性.方法:使用免疫细胞化学方法检测急、慢性白血病患者骨髓或外周血标本中hTERT的表达,RT-PCR方法测定WT1 mRNA含量.结果:hTERT在60例急性白血病及7例慢粒加速/急变期(CML-ap/bc)患者阳性率分别为81.7%(49/60)和85.7%(6/7),明显高于慢粒慢性期(CML-cp)及正常对照组,P值分别为0.002和0.000. WT1 mRNA在急性白血病中呈高表达,阳性率为80.6%.WT1 mRNA水平与hTERT阳性细胞百分数间呈轻度负相关,但差异无统计学意义,r=-0.331,P=0.092.hTERT阳性组CR低于阴性组,差异无统计学意义(24% vs 66.7%, P=0.067).WT1 mRNA与hTERT均阳性者CR更低,仅11.1%(1/9).结论: hTERT和WT1 mRNA在急性白血病中表达均升高,但两者间未见显著性相关.hTERT与WT1 mRNA的联合检测可更好的判断白血病患者的预后.
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后肾腺瘤二例临床病理分析
目的 探讨后肾腺瘤的临床病理学特征、免疫表型、诊断及鉴别诊断、治疗及预后等.方法 回顾性分析2例后肾腺瘤患者的临床病理资料,用全自动免疫组织化学仪检测EMA、Vimentin、CK7、AE1/AE3、CD57、CD10、WT1、Ki-67,进行随访,并复习相关文献.结果 2例患者中,男性、女性各1例.光学显微镜下肿瘤细胞小而一致,呈腺泡状排列,似胚胎细胞,间质不明显,疏松水肿.其中1例间质可见透明变性疤痕及灶性骨化.2例AE1/AE3、Vimentin、EMA、CK7均阳性,1例WT1阳性,Ki-67增殖指数均＜5％.结论 后肾腺瘤是非常罕见的肾脏上皮性肿瘤,具有独特的组织学形态,免疫组织化学标志可辅助其诊断.
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RNA干扰在白血病基因治疗中的研究进展
RNA干扰(RNAi)是双链RNA特异抑制靶基因表达的转录后基因沉默方式,以白血病特异性融合基因和白血病广谱表达的WT1基因为靶标的siRNA治疗是白血病基因治疗的有效方式之一.然而,RNAi应用于临床仍面临许多问题有待解决.
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WT1蛋白在上皮性卵巢癌组织中的表达意义研究
目的:检测上皮性卵巢癌组织中WT1蛋白的表达,探讨其临床病理学意义及在上皮性卵巢癌发生、发展中的作用.方法:采用免疫组化SP法检测正常卵巢组织20例及卵巢良性上皮性肿瘤20例及上皮性卵巢癌20例,上皮性卵巢癌40例标本中WT1蛋白的表达情况.结果:上皮性卵巢癌组织中WT1阳性表达率为57.5%,显著高于正常卵巢组织及卵巢良性上皮性肿瘤(P<0.01);卵巢交界性上皮性肿瘤组织中WT1阳性表达率为45.0%,也显著高于正常卵巢组织及卵巢良性上皮性肿瘤(P<0.01);在上皮性卵巢癌中,浆液性囊腺癌WT1蛋白的阳性表达率(90.9%),显著高于其他亚型(P<0.01).结论:WT1可能成为卵巢上皮性肿瘤恶性转化和上皮性卵巢癌鉴别诊断的客观辅助指标,并为其诊断及预后判断提供重要参考.
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益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠肾组织WT1影响的研究
目的 建立DM大鼠模型,待其发展为DN,采用自拟方剂益气养阴活血方对其进行干预,并通过观察实验大鼠各项生化指标、肾组织病理学及肾组织中WT1的表达,研究益气养阴活血方对DN的治疗作用及其有效机制.方法 选用清洁级雄性SD大鼠60只,随机分组,除空白组外各组给予链脲佐菌素单次腹腔注射,成膜后不同组给予不同药物处理.6周后观察各组大鼠的一般情况,肥大指数,相关生化指标,PAS染色光镜下观察肾脏病理变化,免疫组化检测肾组织中WT1的表达.结果 空白组大鼠的一般情况、肥大指数、各项生化指标及肾组织中WT1的表达情况均有较大差异,各造模组之间也有一定差异.结论 益气养阴活血方可以减少尿蛋白,改善脂代谢紊乱,可以抑制DN大鼠的肾小球毛细血管基底膜的增厚、系膜基质增生及足细胞的病变,延缓肾脏病理的进展,可以影响肾组织中WT1的表达.
