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益气祛风通络饮对阿霉素大鼠肾脏纤维化的拮抗作用和对肾组织细胞自噬的调节作用
目的 观察益气祛风通络饮对肾脏纤维化相关指标纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、层粘连蛋白(laminin,LN)和自噬相关蛋白LC3、Beclin-1表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠40只,其中以30只为造模组,采用单次尾静脉注射阿霉素造模,造模成功后随机分为模型组、替米沙坦组及益气祛风通络饮组,每组各10只,分别予生理盐水、替米沙坦混悬液及益气祛风通络饮水煎剂灌胃治疗;以10只为空白组,予生理盐水灌胃.实验结束后于光镜下行肾组织病理学观察,采用免疫组化法检测FN、LN、LC3和Beclin-1的表达及分布.结果 (1)与模型组比较,益气祛风通络饮组大鼠在第4~8周24 h尿蛋白定量均明显下降(P<0.05);与替米沙坦组比较,两组差异无统计学意义(P>0.05).(2)肾组织病理:与模型组比较,益气祛风通络饮组及替米沙坦组肾脏组织损伤均有不同程度的减轻.(3)肾组织中FN、LN的表达:与空白组比较,模型组肾组织中FN、LN表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,益气祛风通络饮组肾组织中FN、LN表达水平显著降低(P<0.05);益气祛风通络饮组与替米沙坦组比较,肾组织中FN、LN表达水平差异无统计学意义(P>0.05).(4)肾组织中LC3、Beclin-1的表达:与空白组比较,模型组肾组织中LC3、Beclin-1表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,益气祛风通络饮组肾组织中LC3、Beclin-1表达水平显著降低(P<0.05);益气祛风通络饮与替米沙坦组比较,肾组织中LC3、Beclin-1表达水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 益气祛风通络饮能够降低阿霉素大鼠蛋白尿,其对肾脏病理具有改善作用,可能是通过下调肾组织中FN、LN的表达水平和拮抗自噬相关蛋白Beclin-1、LC3的过度表达而实现.
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鲤鱼汤对阿霉素肾病大鼠CD2相关蛋白及肾病蛋白的影响
目的:观察阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)和肾病蛋白(nephrin)的表达及鲤鱼汤对其表达的影响,进而探讨鲤鱼汤治疗肾病综合征的作用机制.方法:70只Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组(N组)、模型组(M组)、福辛普利组(F组)、鲤鱼汤低剂量组(YD组)和鲤鱼汤高剂量组(YG组).M组、F组、YD组和YG组大鼠采用尾静脉注射阿霉素6.5mg/kg复制阿霉素肾病模型.第3周开始进行干预,YG组和YD组分别予以高、低剂量鲤鱼汤(2.25、1.13g/mL)灌胃7周；F组予以0.09mg/mL福辛普利灌胃；N组和M组予以等量自来水灌胃.采用免疫组化方法检测各组大鼠肾脏中CD2AP、nephrin的表达,并计算其阳性表达的平均光密度值(AOD).结果:与模型组相比,鲤鱼汤高剂量和鲤鱼汤低剂量组大鼠血清总蛋白水平、血清白蛋白水平等均有一定升高,尤其鲤鱼汤高剂量组差异均有统计学意义(P＜0.05)；各治疗组肾小球中CD2AP与nephrin的表达较N组均降低,但与M组比较,都有不同程度的增加(P＜0.05).结论:鲤鱼汤可不同程度地增强阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞CD2AP和nephrin的表达,改善阿霉素肾病大鼠肾小球的损伤,进而起到治疗作用.
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加味当归补血汤抗肾脏纤维化的实验研究
目的:探讨中草药在阿霉素肾病大鼠抗肾脏纤维化作用的实验研究.方法:雄性SD大鼠32只按随机数字表法分组.阿霉素肾病诱导模型方法分别使用贝那普利或加味当归补血汤(由黄芪、当归、川芎等组成,简称QGYS)在不同治疗组.监测血清白蛋白、血脂、24 h尿白蛋白和尿NAG酶的动态变化,以及肾脏体质量的比率测量和细胞外基质蛋白(ECM)在肾皮质的表达.实验结束时应用分子生物学方法分析转化生长因子β1 (TGF-β1),基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)在肾皮质的表达.结果:QGYS与模型组大鼠比较可以提高血清白蛋白、降低血脂和肾的体质量比.同时减少尿蛋白排泄的水平和NAG酶以及调控细胞外基质(ECM)在肾皮质的集聚,QGYS同时调控TIMP-1、TGF-β1和MMP-9基因在肾脏表达水平.结论:QGYS能有效减少阿霉素肾病大鼠肾脏纤维化的程度,其作用效果可能是通过调节TIMP-1、MMP-9和TGFβ-1在肾脏的表达发挥作用.
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黄蜀葵花对肾病综合征模型大鼠肾小管损伤保护作用的研究
为探讨中药黄蜀葵花对肾病综合征肾小管损伤的保护作用,将每只实验大鼠静脉注射阿霉素5 mg/kg,同时饲以黄蜀葵花,观察其对大鼠尿Ⅲ型胶原、N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2微球蛋白(β2-MG)总排泄量的影响.结果:阿霉素肾病模型大鼠尿Ⅲ型胶原、NAG、β2-MG水平均显著高于对照组(P＜0.01),而黄蜀葵花治疗组的上述3项指标与对照组相比无差异,且显著低于模型组(P＜0.01).结果提示:阿霉素肾病综合征模型大鼠存在肾小管间质损害,黄蜀葵花对其具有保护作用.
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槐杞黄颗粒对极大量蛋白尿阿霉素肾病大鼠免疫功能影响
目的：探讨槐杞黄颗粒单独应用或与泼尼松联用对阿霉素肾病大鼠细胞免疫及体液免疫功能的影响以及对蛋白尿的作用。方法雄性SD大鼠50只,随机平均分为5组(n=10)。4组经尾静脉注射盐酸多柔比星(6．5 mg/kg)制作肾病模型,另一组注射生理盐水为正常对照组。2周后造模成功,每日灌胃治疗6周。给药剂量如下：正常对照组(A组)及肾病生理盐水组( B组)给予生理盐水2 ml；肾病泼尼松组( C组)给予泼尼松液2 mg/kg；肾病槐杞黄组( D组)给予槐杞黄颗粒液2 g/kg；肾病槐杞黄泼尼松联用组( E组)给予槐杞黄液2 g/kg 及泼尼松液2 mg/kg。比较各组死亡率、体重变化趋势、24 h尿蛋白增长量,血清IgA、 IgG、 IgM,以及淋巴细胞亚群CD3+T细胞、 CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞、 CD45RA+B细胞、 CD161a+NK细胞比率的差异。结果所有大鼠均成功造模,24 h尿蛋白均值为(0．389±0．273) g/24 h。 C、 E组死亡率显著高于A、 B组(P<0．05), C、 D、 E 3组之间差异无统计学意义。正常对照组体重持续增长,其余4组给药2周前体重呈增长趋势,之后呈下降趋势,4组之间差异无统计学意义。4组肾病大鼠给药6周后24 h尿蛋白量均增长,增长量分别为(0．313±0．266)、(0．404±0．235)、(0．120±0．628)、(0．480±0．229) g/24 h,差异无统计学意义。5组之间CD3+T细胞、 CD3+CD4+T细胞、 CD3+CD8+ T细胞、 CD45RA+B细胞、 CD161a+NK细胞在全血中的比率差异均无统计学意义。 B组的IgA、 IgG及IgM显著高于A组； C组的IgA、 IgG及IgM均显著低于B组； D组IgA显著低于B组, IgG显著低于A、 B组, IgM显著高于A、 C组； E组IgA、 IgG显著高于A、 C、 D组, IgM显著高于A、 C组(P均<0．05)；各指标其他两组间比较差异均无统计学意义。结论极严重肾病大鼠体液免疫功能亢进,槐杞黄可发挥双向免疫调节作用,单用时可下调亢进的免疫功能,与泼尼松效果相近；与泼尼松联用时,可上调泼尼松对机体的免疫抑制作用,与泼尼松相拮抗。本研究未发现各种治疗对细胞免疫的影响及对尿蛋白增长量的作用。
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何氏养肾方干预阿霉素肾病大鼠的量效关系研究
目的:观察何氏养肾方对阿霉素肾病大鼠的药效.方法:选用成年雄性SD大鼠,采用一次性尾静脉注射阿霉素(剂量6.5 mg/kg)的方法建立肾病大鼠模型,随机分为7组(正常组、模型组、西药组、高剂量组、中剂量组、低剂量组、中西组),造模2周后灌胃给药,观察大鼠一般情况,连续干预30 d后取材,作24h尿蛋白量定量、尿白蛋白肌酐比值、血清肌酐、尿素氮值、血清胱抑素-C的检测,检查肾组织病理情况.结果:大鼠注射阿霉素后出现毛色发黄,脱毛,体重增长缓慢,眼、鼻出血和死亡等现象,2周后尿液检测显示尿蛋白强阳性;养肾方高剂量可调节阿霉素肾病大鼠尿量至正常,养肾方高、中、低剂量可增加模型大鼠的食量,与模型组比较差异显著;与模型组相比,对照组和高剂量组治疗后24h尿蛋白定量水平显著改善(P＜0.05);与模型组相比,对照组各剂量组血肌酐水平显著降低(P＜0.05或0.01),与对照组相比,高、中剂量组的血肌酐水平显著降低,其中高剂量组的降低作用极显著(P＜0.01),其他剂量组对血肌酐的降低作用与对照组相当,无显著差异(P＞0.05);治疗后,各治疗组均有不同程度改善,其中高剂量组肾组织病理改善明显;各治疗组均可有效降低肾脏胶原容积分数,尤以养肾方高剂量组和中西组较优.结论:何氏养肾方(特别是高剂量)对阿霉素肾病大鼠的临床症状及病理损害有一定的改善作用.
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肾康片对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用
目的:探讨肾康片对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用及其作用机制.方法:经静脉注射阿霉素造成阿霉素大鼠肾病模型.设立阿霉素肾病大鼠模型组,肾康片高剂量治疗组,肾康片低剂量治疗组,苯那普利治疗组及正常对照组.6周后观察肾康片对大鼠24 h尿蛋白定量、肾功能、血脂及肾脏病理影响,取肾皮质匀浆测超氧化物歧化酶、丙二醛,应用免疫组化的方法测定肾组织标本纤维连接蛋白、层黏连蛋白、Ⅳ型胶原、转化生长因子-β1、白介素-1的表达.结果:肾康片可减少阿霉素肾病大鼠的尿蛋白排出量,明显降低甘油三酯,减少纤维连接蛋白、层黏连蛋白、Ⅳ型胶原、转化生长因子-β1、白介素-1的表达,显著增加超氧化物歧化酶、减少丙二醛,作用与苯那普利相似.结论:肾康片能减轻阿霉素肾病大鼠的肾脏损害,对肾脏具有保护作用.
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肾安冲剂对阿霉素肾病大鼠T细胞亚群的影响
目的:观察肾安冲剂对阿霉素肾病大鼠T细胞亚群的影响,探讨肾安冲剂对阿霉素肾病大鼠保护作用机制.方法:采用阿霉素尾静脉注射制造肾病综合征大鼠模型.雄性SD大鼠72只,随机分为6组:正常对照组、模型组、肾安冲剂小剂量组、肾安冲剂中剂量组、肾安冲剂大剂量组和泼尼松组,每组12只.造模后开始给药,治疗8周后运用流式细胞仪检测大鼠全血T细胞亚群.结果:模型组阿霉素肾病大鼠CD4+、CD4+/CD8+比值明显低于正常组与各治疗组,各治疗组阿霉素肾病大鼠的CD4+、CD4+/CD8+比值均有不同程度的升高(P<0.05),且以肾安冲剂大剂量组对T细胞亚群的调节作用好(P<0.05).结论:肾安冲剂通过调节阿霉素肾病大鼠的免疫功能,发挥对阿霉素肾病大鼠的保护作用.
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肾病Ⅱ号方对阿霉素肾病大鼠模型血清肿瘤坏死因子、内皮素、血脂水平的影响
[目的]通过观察肾病Ⅱ号方对阿霉素肾病(AN)大鼠的干预作用,及肿瘤坏死因子(TNF-α)内皮素(ET),血脂水平变化,试图阐明肾病Ⅱ号方干预治疗的可能机制.[方法]用阿霉素诱导大鼠建立类似人类微小病变肾病的模型,用强的松(C组),强的松+肾病Ⅱ号方(D组)治疗,并设对照组,检测各组治疗前后血清TNF-α、ET、血脂水平及肾脏病理形态学改变.[结果]AN大鼠在治疗前,尿蛋白显著升高,血白蛋白显著下降.TNF-α、ET血脂显著升高,肾脏病理明显加重,治疗结束后D组,TNF-α、ET血脂均较前显著下降(P＜0.01),而C组、ET、血脂水平下降不明显,C、D组尿蛋白显著降低(P＜0.01),血白蛋白明显升高(P＜0.01),C、D组肾脏病理损伤减轻.[结论]阿霉素肾病大鼠模型,其临床表现类似于中医肾虚血瘀证肾病Ⅱ号方可能通过降低尿蛋白及血脂水平,减轻对肾脏直接损害,抑制单核巨噬细胞浸润,减少巨噬细胞产生TNF-α,抑制内皮细胞活化,减少ET分泌,从而改善肾脏病理变化.
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阴虚水肿证大鼠模型的建立及猪苓汤的干预作用
目的:评价并探讨一种类似阴虚水肿证大鼠模型制作方法并观察猪苓汤的干预作用.方法:100只雄性SPF级Wistar大鼠分为空白组(不做处理)、对照组(尾静脉注射生理盐水)、阿霉素组(尾静脉注射阿霉素),2周后24小时尿蛋白定量≥100 mg提示阿霉素肾病模型复制成功,弃去对照组、造模失败及死亡大鼠,重新分为空白组、阿霉素模型组、阴虚水肿组(阿霉素模型基础上连续灌服左甲状腺素钠片悬液)、猪苓汤组(阴虚水肿组基础上连续灌服猪苓汤).观察各组大鼠不同时间点皮肤含水量、肛温、甲状腺功能等变化,以猪苓汤干预反证该模型是否成立.结果:与空白组比较,阿霉素组大鼠第2周阴囊水肿明显,第4周皮肤含水量高于空白组(P＜0.05);连续灌胃左甲状腺素钠片2周阴虚水肿组大鼠活动频繁,躁动不安,易激惹,饮水量多,鼠笼垫料潮湿,排泄物增多,脱毛,四肢及阴囊水肿明显,肛温、总三碘甲状腺原氨酸(total triiodothyronine,TT3)、血清总甲状腺素(total thyroxine,TT4)高于空白组、阿霉素组(P＜0.05);连续猪苓汤灌胃4周,猪苓汤组大鼠肛温低于阴虚水肿组(P＜0.05);连续猪苓汤灌胃8周,猪苓汤组尿量多于阿霉素组、阴虚水肿组(P＜0.05),连续猪苓汤灌胃8周,猪苓汤组与阴虚水肿组比较,TT3、TT4、TSH差异无统计学意义(P＞0.05).结论:一次性尾静脉注射阿霉素结合连续左甲状腺素钠片灌胃可一定程度模拟阴虚水肿状态;猪苓汤可改善阴虚水肿证大鼠躁动不安,降低阴虚水肿证大鼠肛温,增加尿量.
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肾炎康对阿霉素肾病大鼠结缔组织生长因子和纤维连结蛋白表达的影响
目的 观察肾炎康袋泡剂对阿霉素肾病大鼠的治疗作用,并研究其作用机制.方法 随机选取10只大鼠为空白对照组,剩余大鼠采用一次性尾静脉注射阿霉素的方法 建立阿霉素肾病模型,并随机分为肾病模型组、肾炎康组、泼尼松组,每组10只,肾病模型组予以生理盐水连续灌胃给药8周,肾炎康组和泼尼松组分别予以肾炎康袋泡剂煎液和泼尼松连续灌胃给药8周.收集末次给药后24 h尿液检测尿蛋白水平;取动脉血检测肾功能指标(血清肌酐、尿素和尿酸);取肾脏组织进行病理学染色并计算肾小球硬化指数;采用免疫组织化学染色法检测肾组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和纤维连结蛋白(fibronectin,FN)蛋白表达水平;采用qPCR法检测肾组织中CTGF和FN的mRNA相对表达水平.结果 肾炎康干预治疗能够显著降低阿霉素肾病大鼠的血清中肌酐、尿素、尿酸水平和尿蛋白水平(P＜0.05);肾炎康能够显著改善阿霉素肾病大鼠肾脏的病理结构,抑制肾纤维化水平(P＜0.05),并显著降低肾病大鼠肾小球硬化指数(P＜0.05).此外,肾炎康能够显著抑制肾病大鼠肾脏组织中CTGF、FN蛋白和mRNA表达水平(P＜0.05).对于阿霉素肾病大鼠,肾炎康整体改善效果弱于泼尼松,但治疗效果仍然明显.结论 肾炎康袋泡剂对阿霉素肾病大鼠有确切的治疗和改善作用,其作用可能是通过调控CTGF和FN表达进而抑制阿霉素肾病大鼠肾纤维化来实现的.
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LY294002抑制PI3K/Akt信号通路阻断地塞米松降尿蛋白的作用
目的 通过活体阿霉素(ADR)大鼠肾病模型探讨受地塞米松及LY294002影响的PI3K/Akt信号通路以及下游分子Bad的表达、尿蛋白变化相关性及其意义.方法 应用随机数表法将SD大鼠分为正常对照组(NC组),阿霉素肾病组(ADR组),阿霉素+地塞米松治疗组(DEX组),阿霉素+地塞米松+LY294002干预组(LY294002组).分别于第7、14、28天进行24 h尿蛋白定量检测;Western Blot检测肾皮质p-Akt、Akt和Bad蛋白表达水平,Q-PCR检测肾皮质Bad mRNA表达水平.结果 ADR组蛋白尿持续增加,p-AKT/AKT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad-mRNA表达增加,较正常NC组有统计学差异(P＜0.05);DEX组尿蛋白明显减少,p-AKT/AKT比值升高和Bad蛋白表达下调、Bad mRNA表达减少,与NC组无统计学差异(P＞0.05);LY294002组的尿蛋白无减少,p-AKT/AkT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad mRNA表达增加,与DEX组有显著性统计学差异(P＜0.05).结论 地塞米松通过激活PI3K/Akt信号通路,下调其下游分子Bad的表达,减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白;LY294002干预后可抑制该信号通路,阻断地塞米松减少尿蛋白的作用.这些结果表明PI3K/Akt信号通路是激素减少尿蛋白的信号传导机制之一.
关键词： LY294002 PI3K/Akt信号通路 阿霉素肾病大鼠 蛋白尿 地塞米松 -
肾病Ⅱ号方干预阿霉素肾病大鼠模型的实验研究
目的通过观察肾病Ⅱ号方组对阿霉素肾病(AN)大鼠的干预作用,及肿瘤坏死因子(TNF-α)水平变化,试图阐明肾病Ⅱ号方干预治疗的可能机制.方法选择阿霉素肾病大鼠模型,用强的松(C组)或强的松+肾病Ⅱ号方(D组)治疗,并设对照组,检测各组治疗后血清TNF-α水平及肾脏病理学改变.结果 AN大鼠在治疗前尿蛋白显著升高,肾脏病理明显加重,治疗结束后C、D组尿蛋白显著降低(P＜0.01),D组TNF-α显著下降(P＜0.01),C、D组肾脏病理损伤减轻.结论肾病Ⅱ号方可能通过降低尿蛋白水平,减轻对肾脏直接损害,抑制单核巨噬细胞浸润,减少巨噬细胞产生TNF-α,从而改善肾脏病理变化.
