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瞬时受体电位阳离子通道蛋白6与肾小球疾病的研究进展
蛋白尿是肾病的常见临床表现,发病机制和治疗方法一直备受关注.瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potentia cation channel 6,TRPC6)是一种裂孔膜(slit diaphragm,SD)蛋白,在蛋白尿性肾病中表达升高,表达量与足细胞损伤程度及蛋白尿之间有相关性,因此探讨TRPC6对了解蛋白尿形成机制具有重要作用;阻断TRPC6通道可能是治疗蛋白尿性肾病的有效方法.现就TRPC6在肾病中致病机制和TR-PC6阻断剂的研究进展作一综述.
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益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷损伤小鼠足细胞表达TRPC6的影响
目的:观察益气化瘀清热方及其拆方对嘌呤霉素氨基核苷(Puromycin aminonucleoside,PAN)损伤体外培养的小鼠足细胞表达TRPC6的影响,探讨不同类中药的作用强度.方法:应用PAN(50 μg/mL)刺激体外培养的小鼠足细胞,形成PAN足细胞损伤模型,造模成功后的足细胞随机分为益气组、化瘀组、清热组、复方组、对照组、模型组、空白组,采用RT-PCR和Western Blot法检测各组血清对小鼠足细胞表达TRPC6 mRNA及蛋白的影响.结果:①RT-PCR结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6mRNA表达差异显著(P＜0.05).含药血清作用24h后,化瘀组、清热组、复方组表达TRPC6mRNA明显低于对照组(P＜0.01)和益气组(P＜0.05),而3组之间无显著差异(P＞0.05),益气组与对照组也无显著差异(P＞0.05).含药血清作用48 h后,益气组、化瘀组、清热组及复方组表达TRPC6mRNA均显著低于对照组(P＜0.05),且4组之间无明显差别(P＞0.05).②Wersten印迹结果显示:空白组与PAN刺激24、48 h的模型组TRPC6蛋白表达差异显著(P＜0.05).含药血清作用24h后,益气组、化瘀组TRPC6蛋白表达低于对照组(P＜0.05),清热组、复方组与对照组相比无显著差异(P＞0.05),且4组间差异不明显(P＞0.05).各含药血清作用48 h后,益气组、清热组、复方组TRPC6蛋白表达低于对照组(P＜0.01),化瘀组与对照组相比无差别(P＞0.05);复方组、益气组、清热组3者在TRPC6蛋白表达上无差别(P＞0.05);化瘀组TRPC6表达水平高于复方组(P =0.008 ＜0.01),而与益气组、清热组相比无显著差异(P＞0.05).结论:益气化瘀清热方及其拆方均能抑制造模足细胞TRPC6mRNA和蛋白的表达,但不同药物作用于造模足细胞的时间不同,抑制TRPC6表达的作用强度不同.
关键词： 益气化瘀清热方 蛋白尿 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 -
钙神经蛋白及瞬时受体电位阳离子通道蛋白6对足细胞骨架的影响研究进展
原发性肾病综合征蛋白尿的形成是由于肾小球滤过屏障受损所致,足细胞作为滤过屏障的关键部分,目前已被认为是参与尿蛋白产生及病情进展的关键细胞,足细胞骨架的结构和功能完整是其发挥生理功能的前提条件.以肌动蛋白为中心的细胞骨架损伤是各种因素作用于足细胞引起足突融合的“共同的后道路”.该文对裂孔隔膜蛋白瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)、钙神经蛋白(calcineurin,CaN)及其相互作用关系对细胞骨架的影响进行综述.
关键词： 足细胞 细胞骨架 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 钙神经蛋白 -
瞬时受体电位阳离子通道蛋白6与肾脏疾病
瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)是一个非选择性阳离子通道,定位于足细胞膜,为6次跨膜蛋白.TRPC6与裂孔隔膜分子nephrin以及podocin间存在相互作用,其共同组成裂孔隔膜复合体,突变TRPC6干扰了该复合体的功能,导致足细胞不能维持正常的生物学功能.研究发现TRPC6基因突变与遗传性和非遗传性肾脏疾病发病密切相关,突变的TRPC6可能通过使足细胞动力学发生改变以及足细胞数量减少而引起肾脏疾病.阻断TRPC6通道可能是一种治疗蛋白尿性肾脏疾病的有效方法 ,将给肾病患者带来长期的临床效应.
关键词： 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 肾脏疾病 蛋白尿 -
瞬时受体电位阳离子通道蛋白6过表达致足细胞足突形态改变的形态计量学分析
目的:定量研究足细胞过表达瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)引起足细胞足突形态变化的特征. 方法:建立足细胞过表达TRPC6的细胞模型,设立正常对照组(Con)、转染空载体组(GFP)和过表达TRPC6组(OverTRP),并分别给予TRPC6离子通道特异性激动剂OAG和阻断剂U73122处理足细胞;免疫荧光染色后采用激光扫描共聚焦显微镜摄片,图像分析仪进行分析,并应用形态计量学的方法,分别检测足细胞足突的表面积密度、突触长径和足突平均宽度,以研究TRPC6通道蛋白高表达所引起的小鼠足细胞足突的形态变化. 结果:共聚焦成像分析结果可见,足细胞过表达TRPC6后,足突表现出回缩的形态特点.形态计量学的结果进一步表明,过表达TRPC6的足细胞足突表面积密度减小(OverTRP:500.97±98.25 vs Con:915.5±130.83,P＜0.05)、突触长径缩短(OverTRP:58.32±5.41vs Con:91.41±9.13,P＜0.05)、平均宽度缩短(OverTRP:7.97±2.64vs Con:12.43±1.47,P＜0.05),与对照组比较统计学差异均有显著性(P＜0.05);其中过表达组突触长径与对照组比较差异为显著(P＜0.05). 结论:足细胞离子通道蛋白TRPC6的过表达,可诱导足细胞足突形态发生改变,表现为足突回缩,可能是参与蛋白尿发生的形态学基础,为今后对该通道蛋白功能与相关分子间作用的研究提供了实验形态依据.
关键词： 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 足细胞 形态计量学 -
活性维生素D3通过抑制TRPC6表达发挥糖尿病肾病的保护作用
目的:探讨活性维生素D3对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病(DN)大鼠的肾保护作用是否与抑制瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)有关.方法:30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、DN组及DN加活性维生素D3干预组(DN+ VD组)3组各10只.造模成功后6、12、18周检测大鼠体重、24 h尿蛋白量;造模成功后18周末处死大鼠,检测血样及肾组织指标变化.结果:DN+ VD组与DN组相比蛋白尿显著减少,肾脏病理损伤改善.DN组与NC组比较,Podocin、Nephrin蛋白表达量均明显降低(均P＜0.05),Desmin和TRPC6蛋白表达量均显著升高(均P＜0.05),活性维生素D3干预后上述改变明显改善,差异有统计学意义.相关性分析显示:TRPC6与Podocin(r=-0.808,P＜0.05)、Nephrin(r=-0.791,P＜0.05)呈负相关,而与24 h尿蛋白(r=0.886,P＜0.05)、Desmin(r=0.929,P＜0.05)呈正相关.结论:活性维生素D3显著抑制STZ诱导的糖尿病大鼠肾脏损伤,其作用机制与调节足细胞TRPC6的表达有关.
关键词： 活性维生素D3 糖尿病肾病 足细胞 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 大鼠 -
瞬时受体电位阳离子通道蛋白6在肾小球足细胞损伤中的作用
瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)是新近发现的肾小球足细胞分子,定位于足细胞裂孔隔膜,与nephrin、podocin和CD2AP存在共定位分布,共同参与信号转导,并维持足细胞正常的结构和功能.TRPC6基因突变可以导致常染色体显性家族性局灶节段性肾小球硬化,患者表现为大量蛋白尿和足细胞损伤,体外试验也表明其高表达可通过增加钙离子内流损伤足细胞,说明TRPC6与蛋白尿的发生、发展密切相关.现将阐明TRPC6在足细胞损伤中的作用,有望为肾脏病的诊断和治疗提供新的靶点.
关键词： 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 足细胞 蛋白尿 -
瞬时受体电位阳离子通道蛋白6在肾脏的表达
目的 探讨瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)在正常人、小鼠和大鼠肾组织及小鼠足细胞系(MPC5)的表达和分布,为研究TRPC6在肾脏的功能及其与足细胞分子间的关系奠定基础.方法 1.应用免疫组织化学方法观察TRPC6在正常人、小鼠和大鼠肾组织及MPC5分布.2.通过反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TRPC6在小鼠肾组织和MPC5表达.3.应用免疫蛋白印迹检测TRPC6在正常人、小鼠和MPC5表达.结果 1.TRPC6在正常人肾小球呈弱表达,在肾小管和肾血管表达较强,在小鼠和大鼠主要沿肾小球毛细血管袢和系膜区分布,肾间质也有少许表达.TRPC6在MPC5的荧光染色为阳性,在分化态细胞主要分布于胞膜表面.2.在小鼠肾组织及MPC5均检测到特异性TRPC6的PCR产物条带.3.在正常人、小鼠肾组织及MPC5均检测到特异性的相对分子质量为106的TRPC6蛋白条带.结论 TRPC6在正常人、小鼠和大鼠肾小球均有表达,在mRNA及蛋白水平均证实MPC5能表达TRPC6,为从离子通道的角度利用MPC5探讨蛋白尿发生的分子机制奠定基础.
关键词： 肾脏 足细胞 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 表达 分布 -
厄贝沙坦对高糖诱导的小鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6表达的影响
目的 研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(angiotensin II receptor blockers,ARB)厄贝沙坦对高糖诱导的条件永生化小鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel,TRPC6)表达的影响.方法 首先体外培养条件永生化小鼠足细胞,分为高渗对照组(甘露醇30 mmol/L+葡萄糖5 mmol/L),正常对照组(葡萄糖5mmol/L)、实验组(葡萄糖浓度分别为15 mmol/L、25 mmol/L和35 mmol/L),免疫细胞化学检测小鼠足细胞TRPC6分布,Western Blot 和RT-PCR分别检测小鼠足细胞TRPC6蛋白和mRNA的表达;其次使用高糖(25 mmol/L)在不同时间点(0 h,12h,24 h,48 h)作用于足细胞,Western Blot和RT-PCR分别检测小鼠足细胞TRPC6蛋白和mRNA的表达;后将细胞分为5组:正常对照组、高糖组、高糖+厄贝沙坦组(10-7 mol/L)、高糖+厄贝沙坦组(10-6 mol/L)、高糖+厄贝沙坦组(10-5mol/L),倒置显微镜下观察不同浓度厄贝沙坦对高糖诱导的足细胞形态学变化,Western Blot和RT-PCR分别检测小鼠足细胞TRPC6蛋白和mRNA的表达.结果 ①免疫细胞化学检测可见,随着葡萄糖浓度的增加,TRPC6主要集中表达于足细胞胞膜,沿足突分布更加明显;Western Blot和RT-PCR检测到TRPC6蛋白和mRNA表达量逐渐增加,以25 mmol/L变化明显.②高糖刺激足细胞后,与0h比较,随着刺激时间的延长,足细胞TRPC6蛋白和mRNA表达量明显增加(P＜0.05),在48 h达到高峰,呈一定的时间依赖性.③与正常对照组比较,高糖诱导的TRPC6表达明显增高(P＜0.05).与高糖组比较,高糖+厄贝沙坦组随厄贝沙坦浓度的增加,TRPC6蛋白和mRNA表达量明显下调(P＜0.05),呈浓度依赖性.结论 高糖可诱导足细胞TRPC6表达增加,厄贝沙坦对高糖诱导的足细胞损伤具有保护作用,其机制可能是通过下调足细胞TRPC6的表达来实现的.
关键词： 厄贝沙坦 足细胞 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 -
地塞米松拮抗脂多糖对TRPC6表达及足细胞损伤的影响
目的 观察脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导足细胞(podocyte,PC)瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6,TRPC6)表达及胞内Ca2+浓度的变化,探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)对TRPC6及Ca2+变化的影响.方法 体外分化培养的永生化小鼠PC随机分为:①对照组;②LPS组;③DEX组;④LPS+ DEX组.Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度,Annexin V-FITC/PI标记流式细胞测定PC的凋亡百分率,免疫荧光染色及半定量分析骨架蛋白F-肌动蛋白分布及数量,Westem blotting检测足细胞TRPC6、nephrin及desmin蛋白的表达.结果 ①对照组、DEX组、LPS组、LPS+ DEX组PC Ca2+荧光强度变化分别为15.6±6.1、17.8±6.5、116.2±15.4、57.2±13.6;凋亡百分率分别为(0.44±0.24)％、(0.45±0.18)％、(2.28±0.36)％、(1.78±0.33)％;F-肌动蛋白平均荧光强度分别为925±136、924±148、217±44.4、634±71.9; TRPC6蛋白的表达分别为0.33±0.09、0.36±0.08、0.81±0.13、0.61±0.12; nephrin表达为1.14±0.15、1.10±0.15、0.39±0.11、0.68±0.10;desmin表达为0.32±0.05、0.38±0.04、1.01±0.15、0.84±0.14.②与对照组及DEX组相比,LPS组足细胞Ca2+浓度增加,凋亡百分率增加,F-肌动蛋白减少,TRPC6、desmin表达增加,nephrin表达降低.③与LPS组相比,LPS+ DEX组足细胞Ca2+浓度及凋亡百分率降低,F-肌动蛋白增加,TRPC6、desmin表达下调,nephrin表达上调.结论 DEX拮抗LPS引起足细胞TRPC6高表达及细胞内Ca2+水平增加,对足细胞有保护作用.
关键词： 地塞米松 脂多糖 足细胞 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 钙离子 -
地塞米松对肾小球足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6表达和分布的影响
目的 以嘌呤霉素(PAN)损伤足细胞,以地塞米松(DEX)干预,观察不同时间点瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)表达和分布的变化,探讨在足细胞损伤过程中,DEX对TRPC6表达与分布的影响及与足细胞损伤的关系.方法 体外培养足细胞,设立对照组、PAN刺激组和DEX干预组.对照组用含0.02％二甲亚砜(DMSO)的RPMI 1640培养液培养,PAN刺激组加入PAN(50 μg/ml),DEX干预组同时加入PAN(50 μg/ml)和溶解于0.02％ DMSO的DEX(1 μmol/L),处理8h、24 h、48 h后观察细胞形态并拍摄,采用图像处理软件分析各组细胞形态及胞体面积的差别.采用流式细胞仪检测足细胞凋亡率,采用实时荧光定量PCR、Western印迹和间接免疫荧光染色检测各时间点TRPC6的mRNA、蛋白表达及分布变化.结果 经PAN刺激后细胞体显著缩小(P＜0.05),足突回缩、消失,细胞间失去相互连接,刺激后48 h足细胞凋亡率显著升高(P＜0.05).PAN刺激组在刺激24 h和48 h后TRPC6 mRNA及蛋白表达量显著上升(P＜0.05),TRPC6在足细胞上的分布亦出现异常.DEX干预后细胞胞体显著大于PAN刺激组(P＜0.05),可维持正常的足突形态;干预48 h后足细胞凋亡率显著低于PAN刺激组,TRPC6 mRNA及蛋白的表达、分布均趋于正常水平.结论 DEX通过稳定重要的足细胞分子TRPC6的表达及分布来抑制足细胞损伤,从而发挥保护足细胞和抗蛋白尿的作用.
关键词： 足细胞 地塞米松 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 -
受体相关蛋白不同区段对Heymann肾炎大鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、synaptopodin及podocalyxin表达和分布的影响
目的 观察受体相关蛋白(RAP)不同区段对被动型Heymann肾炎(PHN)大鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)、synaptopodin、podocalyxin表达和分布的影响.方法 给雄性SD大鼠分别注射兔抗RAP全长(RAP-FL组)、氨基端(RAP-N组)和羧基端(RAP-C组)抗血清,建立相应3种PHN模型,对照组注射等量正常兔血清.分别于造模前和造模1周末检测24 h尿蛋白量、血清白蛋白和肌酐;造模1周末取大鼠肾皮质行光镜病理及间接免疫荧光激光共聚焦显微镜观察足细胞TRPC6、synaptopodin、podocalyxin的表达和分布.结果 造模1周末各模型组24 h尿蛋白量显著高于自身造模前和对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01),血清白蛋白和肌酐无明显改变.光镜下各模型组均见肾小球基底膜节段性不均匀增厚,系膜细胞和系膜基质无明显增生.间接免疫荧光激光共聚焦显微镜观察显示,对照组足细胞TRPC6、synaptopodin、podocalyxin沿肾小球基底膜呈均匀、连续线样分布;各模型组TRPC6沿肾小球基底膜呈团块状不均匀分布,荧光强度较对照组有不同程度增强,RAP-FL组较RAP-N组和RAP-C组更为明显,差异有统计学意义(P<0.05),RAP-N组和RAP-C组间差异无统计学意义(P>0.05);各模型组synaptopodin和podocalyxin沿肾小球基底膜呈点状、短线状不连续分布,部分节段表达缺失,荧光强度较对照组均有不同程度的减弱,差异均有统计学意义(均P<0.05);各模型组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 RAP全长及其羧基端与氨基端均存在病理性抗原决定簇,在PHN模型中可上调TRPC6表达,但下调synaptopodin和podocalyxin表达,并改变它们的分布模式,与PHN蛋白尿的发生有关,但在PHN发病中的病理作用仍有待进一步研究.
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TRPC6高表达对血管紧张素Ⅱ诱导的小鼠足细胞凋亡的影响
目的 观察瞬间受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)高表达对血管紧张素Ⅱ(AnglI)诱导的小鼠足细胞凋亡的影响并探讨其作用机制.方法 用脂质体将针对小鼠TRPC6的基闪真核表达载体pEGFP.N1.mTRPC6转染体外培养的永生化小鼠足细胞系.24 h后用荧光显微镜观察增强绿色荧光蛋白(EGFP)的表达.Western印迹法检测转染后TRPC6蛋白表达的变化.将足细胞分组,应用不同浓度AngⅡ处理足细胞,Fluo-3AM结合激光共聚焦显微镜检测各组足细胞胞质内钙离子的浓度.RT-PCR及Westem印迹法检测Bax、Bcl-2 mRNA及蛋白的水平.流式细胞仪及Hoeehst染色法榆测足细胞凋亡.结果 pEGFP-NI-mTRPC6转染足细胞后,约35%细胞出现绿色荧光;足细胞TRPC6蛋白表达明显上调(P<0.01).TRPC6高表达町以明显促进AngII诱导的足细胞钙离子内流(P<0.01),在蛋白及基因水平均上调Bax的表达而下调Bcl.2的表达(P<0.01,P<0.05).在低剂量Ang Ⅱ(10-10mol/L)作用下.足细胞凋亡率为(2.50±0.72)%,转染TRPC6以后凋亡率为(4.33±0.45)%,差异有统计学意义(P<0.05).在高剂量Ang Ⅱ(10-6mol/L)作用下,足细胞凋亡率为(15.46±1.40)%.转染TRPC6以后凋亡率为(18.33±0.87)%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 TRPC6在AngⅡ诱导的足细胞凋亡中发挥重要作用.TRPC6可能通过增加钙离子内流,进而启动其下游的捌亡调节成分参与凋亡过程.
关键词： 血管紧张素Ⅱ 细胞凋亡 钙 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 足细胞 -
VEGF及TRPC6的表达与糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的相关机制
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)与瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)有无相关性及其相互作用的可能机制.方法 随机取正常SD大鼠8只作为正常对照组,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)65 mg/kg建立糖尿病肾病大鼠模型40只,并随机分为5组,每组8只.正常对照组及糖尿病肾病组不干预,其余4组分别给予SU541610 mg/kg、5 mg/kg(2次/周)以及LY2940022 mg/kg、1 mg/kg(1次/d)腹腔注射干预8周.检测大鼠血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白生化指标变化情况,观察糖尿病肾病大鼠肾脏组织的病理改变,同时采用Realtime PCR及Western blot观察VEGF、Nephrin、TRPC6 mRNA表达及蛋白质的变化.结果 与正常对照组相比,糖尿病肾病组大鼠空腹血糖、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白升高,Nephrin的表达下降,VEGF及TRPC6的表达升高(P<0.05).SU5416干预后24 h尿蛋白及尿素氮下降,Nephrin表达升高,VEGF表达无明显变化,TRPC6表达下降(P<0.05).LY294002干预后24 h尿蛋白下降,Nephrin及VEGF表达无明显变化,TRPC6表达下降(P<0.05).结论 VEGF对TRPC6的调控作用可能是通过PI3K/Akt通路实现的.抑制VEGFR-2和/或者阻断PI3K/Akt信号通路可阻断VEGF对TRPC6的这种调控作用.
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甲基-β-环糊精抑制AngII诱导肾小球系膜细胞增殖及TRPC6表达
目的:探讨MβCD(甲基-β-环糊精)对AngⅡ诱导肾小球系膜细胞(GMC)TRPC6的表达及小窝(caveolae)在GMC增殖中的作用.方法:实验分为:空白对照组(Con组)、AngⅡ组、MβCD预处理组(MβCD组).根据预实验选定AngⅡ10-7 mol/l作用GMC 24 h作为AngⅡ组.MβCD组用10mM MβCD预处理GMC 1 h后,用10-7 mol/lAngⅡ刺激24 h.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测GMC增殖,WesternBlot检测TRPC6蛋白,实时荧光定量PCR检测TRPC6 mRNA表达,免疫荧光检测TRPC6的分布.结果:AngⅡ组较Con组明显促进GMC增殖(P < 0.05),MβCD组明显抑制AngⅡ对GMC的增殖作用,抑制率为48.96%(P < 0.01).AngⅡ组TRPC6mRNA及蛋白水平均较Con组升高(P < 0.01,P < 0.05),而MβCD组TRPC6mRNA及蛋白水平均较AngⅡ组降低(P < 0.01).GMC OD值与TRPC6蛋白表达水平呈正相关( R = 0.907,P < 0.01).结论:AngⅡ诱导GMC增殖需要完整的小窝结构,TRPC6与GMC增殖密切相关.
关键词： 小窝 瞬时受体电位阳离子通道蛋白6 血管紧张素Ⅱ 肾小球系膜细胞
