低氧预处理对缺氧-复氧后体外培养大鼠海马神经元Fos、Jun表达和神经元凋亡的影响

目的观察低氧预处理对体外培养大鼠海马神经元缺氧-复氧后Fos、Jun表达和神经元凋亡的变化.方法取培养12d的两组(对照组和低氧预处理组)神经元,同时置于缺氧环境(0.90l/L N2,010l/L CO2)中培养4h后取出,置含0.10l/L CO2和空气的培养箱内复氧培养24和72h.于不同时间取出,观察神经元存活数,并分别用抗Fos和Jun抗血清进行免疫组织化学染色,观察Fos、Jun表达阳性和阴性神经元数目,计数Fos和Jun表达神经元所占百分率.并用原位末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧-复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响. 结果缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元中Fos、Jun表达阳性神经元百分率和凋亡神经元百分率均较缺氧前显著增加.经低氧预处理的海马神经元缺氧-复氧后Fos、Jun表达神经元和凋亡神经元百分率均较对照组明显减少.神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组. 结论低氧预处理可使培养中海马神经元对缺氧产生耐受,减少缺氧-复氧后神经元Fos和Jun表达,减少缺氧-复氧后神经元凋亡.

低氧诱导因子-1与低氧预处理诱导的脑缺血耐受

1990年,日本学者发现,短暂的、轻微的脑缺血可对1-7d后的再次严重的脑缺血产生部分保护作用,此现象被称为脑缺血耐受(cerebral ischemic tolerance,CIT)现象,而提前给予的短暂性缺血则称为缺血预处理.近年来的研究表明,不单是缺血预处理,其他多种预处理方式均可诱导脑缺血耐受.低氧预处理(hypoxia preconditioning,HP)作为一种干预措施,已被证实能使脑组织产生缺血耐受.

低氧预处理对缺血脑组织HSP70蛋白表达的影响

目的:研究低氧预处理对缺血脑组织热休克蛋白70(HSP 70)表达的影响,探讨低氧预处理的脑保护机制.方法:30只SD大鼠,体重在200～230克,随机分为3组:假手术组(n=10),脑缺血组(n=10),低氧预处理组(n=lO).分别观察3组动物的神经功能评分,按Bederson 6级5分制方法进行,用免疫组化法检测大鼠脑组织凋亡细胞和HSP 70蛋白表达.结果:假手术组的神经功能评分为(0.00±0.00)分,脑缺血组为(2.40±0.97)分,低氧预处理组为(1.40±0.84)分,低氧预处理组与缺血组神经功能评分有统计学差异;预处理组的病变侧海马凋亡细胞数明显少于缺血组而HSP70蛋白表达明显高于缺血组,两组相比较统计学差异有显著性.结论:低氧预处理能减轻缺血后的细胞凋亡,对脑缺血具有保护作用,其机制可能是增加HSP 70蛋白的表达来实现的.

间充质干细胞在缺血缺氧环境中的存活情况

生理条件下间充质干细胞(MSCs)内的氧浓度低于外界正常氧浓度,处于相对低氧状态；移植到体内的MSCs所处生存环境因损伤、缺血导致氧浓度更低,这种缺血缺氧环境对MSCs生存造成极大影响.缺血缺氧环境下,MSCs会启动自身抗凋亡机制维持细胞的存活率.此外,低氧预处理、药物应用、充足的葡萄糖供给、部分细胞因子的添加和基因工程技术的应用也可不同程度地促进缺血缺氧环境中MSCs的生存.

大鼠心肌细胞低氧预处理与低氧后处理效应的比较

1 材料与方法选择新生2～3天Wistar幼鼠45只,购自中国医科大学动物中心;0.08%胰蛋白酶(美国HYCLONE公司);高糖达尔伯克改良伊格尔培养(DMEM)干粉(美国HY-CLONE公司);FBS(天津TBD公司)、阿糖胞苷(上海华联制药有限公司).

间歇性低氧预处理对兔心肌梗死范围影响的实验研究

低氧与去铁敏对移植供肝作用的对比性研究

目的 对比研究低氧预处理及去铁敏预处理对移植供肝保护作用的特点,探索一种适合指导临床的供肝保护方法.方法 SD大鼠,随机分为假手术组(S组)、自体肝移植组(AT组)、去铁敏预处理组(DP组)与低氧预处理组(HP组).检测各组术后24 h血清中谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP)、肝组织形态学改变并检测肝组织中低氧诱导因子-1(HIF-1a)及丙二醛(MDA)的含量.结果 与S组相比AT组、DP组、HP组术后血清ALT、AST、ALP明显升高,DP组、HP组与AT组相比血清ALT、AST、ALP显著降低,肝形态异常变化减轻,肝组织中HIF-1a蛋白含量升高,MDA含量下降(P<0.05).结论 在肝移植术前行DP,可以起到与HP相似的供肝保护效果,但DP更适合指导临床.

低氧预处理对缺血性卒中脑保护作用的机制

机体对环境的适应是机体生存的必要条件.机体缺血、缺氧对细胞的损伤程度取决于促进和抑制细胞坏死和(或)凋亡这两个过程的平衡.

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-6免疫反应的影响

目的观察低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-6免疫反应的影响.方法取培养12 d的两组(对照组和低氧预处理组)培养神经元,同时置于缺氧环境(0.9 L/LN2、0.1 L/L CO2)中培养2、4、8和12h.分别观察它们的形态变化和神经元存活数,并用抗rhIL-6单克隆抗体进行免疫组化染色,观察缺氧对大鼠海马培养神经元IL-6免疫反应的影响.结果低氧预处理可增强海马神经元对rhIL-6的免疫反应,经低氧预处理的海马神经元缺氧后神经元存活数和对rhIL-6的免疫反应均明显高于对照组.结论低氧预处理可使体外培养的海马神经元对缺氧产生耐受,其中rhIL-6的免疫反应增加可能是海马神经元对缺氧的一种适应性变化,提示IL-6可能参与脑缺氧耐受性的形成,并在海马神经元缺氧损伤的调控中起重要作用.

高原脑血管病的研究热点及前景

高原（海拔1000 m以上）占地球陆地面积的28.1%，我国是世界上高原面积大的国家，青藏高原海拔高，号称地球“第三极”，影响着10多个国家和20多亿人口[1]。其独特的自然环境对人类健康的影响越来越受到国际医学界的瞩目。高原脑血管病作为严重威胁高原人群健康的疾病之一，对其特殊病因、发病机制的深入研究，有助于解决缺氧性疾病的核心问题和关键环节，对疾病的防治有着重要的指导意义[2]。

低氧预处理对脑缺血时沙鼠脑红蛋白表达的影响

脑红蛋白(neuroglobin,NGB)是新发现的一种携氧球蛋白[1],主要存在于人和脊椎动物脑内,在脑组织缺氧时表达增加,起储氧作用.我们观察低氧预处理对沙鼠脑红蛋白表达的影响.

低氧预处理降低大鼠癫痫易感性及其脑保护作用的机制初探

目的：初步探讨间断低氧预处理（ intermittent hypoxia preconditioning ， IHP ）对氯化锂－匹鲁卡品（lithium－pilocarpine，Li－pilo）致痫大鼠痫性发作的影响及其脑保护作用机制。方法96只清洁级SD大鼠，随机均分为对照组，癫痫组和4个间断低氧预处理＋癫痫组。癫痫组及4个间断低氧预处理＋癫痫组（分别在5 d IHP预处理后1，3，7，14日注射）大鼠通过腹腔注射氯化锂－匹鲁卡品建立癫痫模型。随后进行240 min的发作行为学，全身性发作潜伏期及百分比量化分析并通过水迷宫实验测试大鼠认知功能。接着利用TUNEL标记和免疫印迹方法进行大鼠海马神经元凋亡及相关蛋白（BCL－2，Bax和cleaved－caspase－3）的检测。结果氯化锂－匹鲁卡品注射后50～150 min之间，癫痫发作的改良Racine 评分达到峰值。间断低氧预处理后3日诱发癫痫组大鼠其平均改良Racine评分明显低于其余各组，该组全身性发作潜伏期及百分比与癫痫组相比差异亦有统计学意义（ P＜0．05）。相比癫痫组和其余3个间断低氧预处理＋癫痫组大鼠，间断低氧预处理后3日诱发癫痫组大鼠逃避潜伏期（ escape latency）较短，神经元凋亡计数较低，而目标象限停留时间百分比较高（ P＜0．05）。间断低氧预处理后3日诱发癫痫组的水迷宫以及凋亡检测参数与对照组相比较无明显差异（P＞0．05）。结论 IHP预处理通过抑制异常凋亡降低大鼠癫痫易感性，并具有脑保护作用。

ATP敏感性钾通道可能参与对经预处理的离体豚鼠心肌细胞的保护作用

目的　对离体豚鼠心肌细胞予以短时间的低氧建立细胞预处理模型，并以此判定ATP敏感性钾通道是否参与此缺氧（模拟缺血）的预处理。方法　从成年豚鼠的心室分离出单个心肌细胞，进行实验的灌流槽容许这些细胞暴露于低氧灌流液从而处于低氧分压状态。在低氧预处理过程中，细胞先在正常溶液中平衡10分钟然后暴露于低氧灌流液中5分钟，随后给予10分钟的复氧。对这些经预处理的细胞给予低氧20-180分钟并再复氧。用斑片钳技术进行全细胞和单通道记录研究其离子流变化。结果　5分钟的低氧预处理可对细胞低氧复氧所引起的损伤提供显著的保护作用。经15分钟以上的延迟后，低氧诱导出非时间依赖性的钾外流，此外向性电流可被5 μmol/L的格列本脲所阻断。在除极化至10 mV时，此电流从78±15 pA增至1581±153 pA(P<0.01,n=18)。然而，产生ATP敏感性钾通道电流的延迟时间在经预处理的细胞中大为缩短，并增高更快。在10 mV时超过4 nA。在单通道记录中，从第一个通道开放到大开放的时距在预处理细胞中大为缩短。 结论　分离的豚鼠心肌细胞可用短时间的低氧作预处理。此低氧预处理可改变ATP敏感性钾通道，使之在再次低氧时更快开放。

低氧预处理对大鼠晕船程度及脑区与血清铁含量的影响

目的探讨低氧预处理对大鼠晕船程度及对脑区与血清中铁含量的影响.方法大鼠分为3组:空白对照组(Ⅰ)、单纯晕船组(Ⅱ)、低氧+晕船组(Ⅲ).Ⅲ组先接受模拟低氧处理4 h·d-1,共5 d.而后Ⅱ、Ⅲ组接受晕船刺激2 h·d-1,共5 d.记录高龄土摄入量,实验结束取大鼠大脑皮质、小脑、脑干、下丘脑及血清,原子吸收法测定样本铁含量.结果Ⅱ、Ⅲ组高龄土摄入量[(0.927±0.219)g、(1.707±0.534)g]均高于Ⅰ组[(0.302±0.241)g(P<0.01)],且Ⅲ组高于Ⅱ组(P<0.01);Ⅱ、Ⅲ组大脑皮质、小脑、脑干及血清中铁含量均低于Ⅰ组(P<0.01),且Ⅲ组均低于Ⅱ组(P<0.01);Ⅱ、Ⅲ组下丘脑中铁含量接近Ⅰ组;高龄土摄入量与大脑皮质、小脑、脑干与血清中铁含量均呈负相关(r为-0.601～-0.541)(P<0.05),而与下丘脑中铁含量相关性无统计学意义.结论低氧预处理加重晕船程度,机制可能与晕船后多脑区中铁含量进一步降低有关,脑铁代谢在晕船过程中可能发挥重要作用.

低氧预处理提高下丘脑细胞缺氧耐受性与Na+、K+电流的关系

目的:研究低氧预处理提高下丘脑细胞缺氧耐受性与Na+、K+电流的关系.方法:采用培养的大鼠下丘脑神经元,用膜片钳全细胞记录技术,观察低氧预处理对其钠电流(INa)、钾电流(IK)的影响.结果:①低氧预处理未明显改变INa,但增加了IK幅值;②急性缺氧导致对照组细胞INa、IK明显受抑制,而经过低氧预处理的细胞INa、IK受抑制程度显著低于对照组.结论:低氧预处理提高下丘脑细胞的耐缺氧能力与低氧预处理后K+通道的大量开放有关.

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和IL-1β表达的影响

目的:观察低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和白细胞介素- 1β(IL-1β)表达的影响.方法:取培养12 d的两组(对照组和低氧预处理组)培养神经元,同时置于缺氧环境(0.9L/LN2,0.1L/LCO2)中培养2、4、8和12 h. 分别观察它们的形态变化和神经元存活数,并用抗rhIL-1β单克隆抗体进行免疫组织化学染色,观察缺氧对大鼠海马培养神经元IL-1β表达的影响.结果:经低氧预处理的海马神经元缺氧后IL-1β表达较对照组减弱,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组.结论:低氧预处理可使海马培养神经元对缺氧产生耐受 ,其中IL-1β表达降低可能是海马神经元对缺氧的一种适应性变化.

低氧预处理对低氧／复氧心肌能量代谢的作用

目的：研究低氧预处理(HPC)对心肌的保护作用。方法：借助 31　P-NMR图谱技术，在模拟Langendorff离体灌流大鼠心脏的正常生理条件下 ，跟踪心肌高能磷酸化合物含量的动态变化。结果：在30 min低氧期，PCr、ATP 相对含量及PCr／Pi值逐渐减小，但HPC组减小的速度比对照组慢；而在复氧期， HPC组能 提高心肌高能磷酸化合物含量的恢复程度，特别在复氧初期， HPC组PCr、 ATP相对含量及P Cr／Pi值立即有了恢复；在本实验中，HPC对pHi的改善不显著。结论： HPC能降 低后续长时间低氧及复氧阶段的心肌能量代谢，对心肌的低氧／复氧损伤具有保护作用。

低氧预处理对大鼠海马神经元缺氧耐受性和Jun基因表达的影响

目的: 观察低氧预处理对缺氧/复氧后大鼠海马神经元Jun表达的影响. 方法:取培养12d 的两组(对照组和低氧预处理组)神经元, 同时置于缺氧环境(0.90L/LN2+0.10L/LCO2)中培养4 h 后取出,置含0.10L/LCO2 和空气的培养箱内复氧培养24 h和72 h,于不同时间取出,观察神经元存活数,并用抗Jun抗血清进行免疫组织化学染色,观察Jun表达阳性和阴性神经元数目,计算Jun表达神经元所占百分率.结果:经低氧预处理的海马神经元缺氧-复氧后Jun表达阳性神经元百分率较对照组明显减少,神经元存活数明显高于对照组.结论:低氧预处理可使海马培养神经元对缺氧产生耐受,减少缺氧-复氧后神经元Jun的表达.提高神经元存活数.

重复性低氧对小鼠脑组织MMP-2及 MMP-9含量与活性的影响

目的:探讨重复性低氧对小鼠脑组织内MMP-2和MMP-9的蛋白表达量及活性的变化.方法:将BALA/C小鼠随机分成常氧对照组(H0)、急性低氧1、2、3、4次组(H1～H4)共5组.应用SDS-PAGE、Western-blot等生化技术,并结合Gel Doc凝胶成像系统,半定量检测5组小鼠大脑皮层和海马组织内MMP-2及MMP-9的蛋白表达量及其活性的变化.结果:①随着低氧次数的增加,小鼠海马组织内MMP-2的蛋白表达量呈现先增后降的趋势,其中H4组MMP-2蛋白表达量的降低显著(P＜0.05,n=6),而小鼠大脑皮层组织内MMP-2的蛋白表达量变化不明显.此外,在海马和大脑皮层组织内均未检测到MMP-2的活性组分;②海马组织内MMP-9的蛋白表达量随重复性低氧次数的增加,其含量也呈现先增后降的趋势,且H1组MMP-9表达量的增高和H4组MMP-9表达量的降低均具有显著意义(P＜0.05).同样,海马组织内MMP-9活性组分的变化与其蛋白表达量变化趋势一致,与H0组相比,H1组MMP-9活性组分增高和H4组的降低均显著(P＜0.05).大脑皮层组织内MMP-9表达量及其活性组分在脑低氧预处理过程中均无显著性变化.结论:MMP-2和MMP-9可能在脑低氧预处理过程中具有一定的作用,且提示其蛋白表达量及活性在大脑皮层和海马组织内的差异变化可能与大脑皮层和海马组织对低氧的选择易损性不同有关.

低氧预处理对新生大鼠脑低氧缺血时海马区Bcl-2和Bax表达的影响

目的:观察低氧预处理对新生大鼠脑低氧缺血时海马区Bcl-2和Bax表达的影响,探讨低氧预处理对新生大鼠脑低氧缺血损伤的保护机制.方法:7日龄新生SD大鼠随机分为正常时照组、假手术组、低氧缺血组(HIBD组)和低氧预处理组(HPC+HIBD组).采用免疫组织化学方法,检测各组脑组织海马区Bcl-2和Bax表达的变化.结果:与正常对照组、假手术组相比,HIBD组和HPC+HIBD组海马区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达明显增多;与HIBD组相比,HPC+HIBD组海马区Bcl-2蛋白表达明显增多,Bax蛋白表达明显减少.结论:低氧预处理后Bcl-2表达上调,Bax表达下调,可能是其保护随后脑低氧缺血损伤的机制之一.