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人兽共患病病毒基因芯片检测敏感性的测定
目的 测定人兽共患病病毒基因芯片检测的敏感性,为建立高通量的人兽共患病病毒检测基因芯片提供依据. 方法 以黄病毒属的日本脑炎病毒(JBEV)作为检测敏感性的模型,以随机PCR扩增法扩增病毒基因组,然后将扩增产物标记荧光染料后与基因芯片进行杂交,以两种方式测定芯片的敏感性,即低检出核酸量和低检出病毒TCID50,量.后,与特异PCR敏感性比较,评估本芯片的检测敏感性. 结果 人兽共患病病毒基因芯片至少可以检测出300ng的随机PCR产物核酸量.对病毒的检测敏感性可以达到10倍稀释的TCID50病毒量(即每200μl含有105TCID50的病毒量),与特异PCR检测敏感性相当. 结论 人兽共患病病毒芯片技术达到了较高的检测敏感性;建立高通量的人兽共患病病毒检测基因芯片技术具有可行性与实用性.
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原癌基因c-erbB2和c-myb经丝裂原活化蛋白激酶和成熟促进因子途径调节卵母细胞的成熟
本研究探讨了原癌基因c-erbB:和c-myb对小鼠卵母细胞成熟的影响及其在调控卵母细胞成熟中与丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和成熟促进因子(mamration promoting factor,MPF)的上下游关系.c-erbB2反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)和c.myb ASODN均呈剂量依赖方式抑制卵母细胞的生发泡破裂(germinalvesicle breakdown,GVBD)率和第一极体(first polar body,PBl)排放率,并显著延迟其成熟时间.小鼠卵母细胞显微注射重组人c-erbB2蛋白和c-myb蛋白后,培养6 h其GVBD率分别比对照组上升了23.1%(P<0.05)和32.2%(P<0.05),.培养12 h其PBl排放率分别比对照组上升了17.3%(P<0.05)和23.5%(P<0.05).RT-PCR结果显示,小鼠卵母细胞中存在c-erbB2mRNA和c-myb mRNA表达;c-erbB2ASODN能明显抑制卵母细胞中c-erbB2mRNA和c-myb mRNA的表达,c-myb ASODN能明显抑制卵母细胞中c-myb mRNA的表达,对c-erbB2 mRNA无明显影响;MAPK抑制剂PD98059以及MPF抑制剂roscovitine在抑制卵母细胞成熟的同时,均能阻断显微注射重组人c-erbB:蛋白和重组人c-myb蛋白对卵母细胞成熟的促进作用,但对卵母细胞中c-erbB2mRNA和c-myb mRNA表达无明显影响.Western blot结果显示,c-erbB2ASODN、c-mybASODN、PD98059、roscovitine均使卵母细胞中MAPK磷酸化水平和cyclinB 1含量下降.结果提示,原癌基因c-erbB2、c-myb在卵母细胞成熟中起重要作用,可能是调控卵母细胞成熟中关键蛋白激酶如MAPK、MPF的上游激活物.
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宁波市甲3型流感的流行与基因演变连续7年监测分析
目的 了解甲3型流感病毒的抗原变异与流感流行的关系.方法 用狗肾传代细胞(MDCK)分离流感病毒,逆转录.聚含酶链反应(RT-PCR)扩增血凝素基因产物,纯化后进行核苷酸序列测定.结果 2002～2008年,宁波市流感流行有春季和夏秋季两个季节性高峰,而病毒抗原性突变大多发生在夏秋季这一季节.2002～2005年在血凝素基凶HAI片断的变异较快,且第225～228位之间的氨基酸每年都有突变:而2005～2008年间这一区域却相当稳定.结论 同一亚型的流感病毒在此春季刚流行后紧接着夏秋季再次引起流行这可能与病毒的变异多数发生在每年的下半年有一定联系.甲3型流感2002～2005年的流行强度较2005～2008年强,可能与前者的血凝素基因HA1片断第225～228位每年都发生改变而后者却相当稳定有关.
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铜绿假单胞菌耐药基因的检测与分析
目的 研究铜绿假单胞菌连续分离株的多种耐药基因的分布状况和耐药机制.方法 采用PCR方法检测1株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶编码基冈、菌膜蛋白oprD2基因、Tn21/Tn501型转座子编码基因merA、Ⅰ类整合子编码基因qacE△1-SU11、16S RNA甲基化酶及氨基糖苷类修饰酶基因、氯霉素耐药相关基因calB、cmlA,四环素耐药相关基因tetA、tetB以及小多药外排泵基因smr-2.采用PCR直接全自动荧光法进行阳性基因测序.结果 该株铜绿假单胞菌未检出TEM基因和OXA-10基因,检出OXA-2基因.且伴有OprD2缺失;转座子遗传标记MerA阳性,Ⅰ类整合子遗传标记qacE△1-su11阳性;耐氨基糖苷类基因aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ib、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ阳性.未检出氯霉素耐药相关基因catB、cmlA和四环素耐药相关基因tetA、tetB以及小多药外排泵基因smr-2.OXA-2阳性产物进行基因测序,将测得序列翻译成氨基酸序列与美国核酸库已登录的OXA氨基酸序列比较,与OXA-21型为接近,但仍存在二个氨基酸序列差别.结论 我院多药耐药铜绿假单胞菌存在多种耐药基因,介导了细菌的多药耐药.
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反复自然流产夫妇HLA-Cw等位基因多态性分析
目的:探讨免疫遗传因素在反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)发病中的作用.方法:采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,分析80对RSA患者夫妇和75对正常夫妇HLA-Cw等位基因的多态性.结果:病例和对照组间Cw01-08各个等位基因阳性率均无统计学差异,但RSA组中夫妇双方均检测到Cw第Ⅱ组等位基因(Cw分子α重链上第80位为赖氨酸)者显著少于对照组,而RSA组夫妇双方均未检测到Cw第Ⅱ组等位基因者显著多于对照组,差异有统计学意义(P=0.013).结论:RSA分子α重链上第80位为赖氨酸的HLA-Cw等位基因缺失可能与旱期反复自然流产的发病有关.
