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钾通道对人支气管平滑肌细胞增殖与凋亡及其相关基因表达的影响
目的探讨电压依赖性延迟整流钾通道(KV)、钙激活钾通道(KCa )和ATP 敏感性钾通道(KATP)对人支气管平滑肌细胞(HBSMCs)增殖与凋亡及其相关基因表达的影响.方法支气管组织取材于5例肺癌切除术患者癌旁正常的肺组织,将培养的HBSMCs 分为4组:(1)对照组(用不含药物的无血清培养基处理);(2)4-氨基吡啶(4-AP)组(含4 mmol/L的4-AP);(3)四乙铵(TEA)组(含1 mmol/L的TEA);(4)格列本脲(Glib)组(含0.1 mmol/L的Glib).采用流式细胞术观察细胞的周期;应用荧光光度法检测细胞内钙;四甲基偶氮唑盐(MTT)微量比色分析法检测细胞的增殖;原位末端标记法( TUNEL)检测细胞的凋亡;免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡相关基因Fas和FasL的表达,以观察3种钾通道阻断剂对培养的HBSMCs增殖及凋亡的影响.结果(1)对照组HBSMCs吸光度(A)值为0.30±0.08,4-AP组为0.67±0.14,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组PCNA的阳性率为(23±5)%,4-AP组为(89±7)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组细胞内Ca2+浓度为(98±7)nmol/L,4-AP组为(255±17)nmol/L,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组S+G2M期细胞数为(12.6±4.8)%,4-AP组为(28.8±2.4)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).而TEA组和Glib组HBSMCs的A值均为0.30±0.07, 两组PCNA的表达率分别为(21±5)%、(20±4)%, 两组细胞内Ca2+浓度分别为(97±7)nmol/L、(99±6)nmol/L及两组细胞S+G2M期细胞数分别为(12.8±4.4)%、(11.0±4.4)%,上述各指标与对照组比较差异均无统计学意义(P均> 0.05). (2) 对照组HBSMCs凋亡率及其相关基因Fas和FasL的表达分别为(4.36±0.66)%、(2.92±0.25)%、(4.0±0.6)%,4-AP组分别为(0.84±0.13)%、(0.92±0.16)%、(1.4±0.6)%,与对照组比较差异有统计学意义(P均< 0.01).TEA组及Glib组的凋亡率为(4.47±0.93)%、(4.33±0.77)%,两组Fas和FasL的表达分别为(2.87±0.23)%、(4.2±0.8)%、(2.91±0.26)%、(4.2±0.9)%,与对照组比较差异均无统计学意义(P均> 0.05).结论抑制HBSMCs KV的活性可提高细胞内Ca2+浓度,促进细胞的增殖,抑制其凋亡;而KCa和KATP对HBSMCs的增殖及凋亡均无明显作用.
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钾通道在一氧化氮对支气管哮喘大鼠平滑肌张力调控中的作用
一氧化氮(NO)可松弛气道平滑肌(ASM),降低气道高反应性,但其作用机制尚不清楚.我们测定NO供体硝普钠(SNP)、钾通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)、四乙铵(TEA)对支气管哮喘大鼠支气管环张力的影响,探讨钾通道在NO对哮喘大鼠支气管平滑肌张力调控中的作用.
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钾通道阻断剂四乙铵对卵巢癌细胞增殖及凋亡的影响
目的 研究钾通道阻断剂四乙铵(TEA)对卵巢癌细胞(SKOV3)凋亡的影响.方法 将浓度为2×104/ml的卵巢癌细胞分别设对照组和不同浓度(1、5、10、20mmol/L)TEA组.将TEA作用于卵巢癌细胞,用MTT法检测细胞活性,采用Hoechest33258染色检测细胞凋亡,同时通过碘化丙啶(PI)染色,采用流式细胞仪检测细胞凋亡比率.结果 在TEA浓度为1、5、10、20mmol/L时,对SKOV3细胞增殖的抑制率分别为8.61%、18.86%、46.63%和65.22%,表明TEA对SKOV3细胞的增殖有抑制作用并呈现明显的剂量依赖性,当TEA浓度=5mmol/L时,对SKOV3细胞增殖的抑制效应明显;Hoechst33258染色结果显示,TEA能诱导SKOV3细胞凋亡;流式细胞仪检测结果表明,SKOV3细胞经TEA浓度为1、5、10、20mmol/L处理后48h,其细胞凋亡率分别为9.23%、21.57%、54.22%和71.06%,与对照组(2.08%)比较,差异有显著性(P＜0.01),提示TEA可诱导SKOV3细胞凋亡,且TEA促进SKOV3细胞凋亡作用具有一定的剂量依赖性.结论 钾通道对SKOV3细胞增殖具有重要调控作用,钾通道阻断剂TEA阻断钾通道后可促进细胞凋亡.
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钾通道阻滞剂对大鼠支气管平滑肌细胞增殖的影响
目的探讨电压依赖性延迟整流钾通道(KV)、Ca2+激活钾通道(KCa)和ATP敏感性钾通道(KATP)对大鼠支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖的影响. 方法应用免疫细胞化学、MTT微量比色分析法及流式细胞术,观察KV,KCa和KATP对培养中大鼠BSMC增殖的影响.结果 KV阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)显著促进大鼠BSMC增殖细胞核抗原的表达,提高BSMC吸光度值,使S+G2M期细胞数显著增多,并显著提高基础状态下BSMC内Ca2+浓度,而KCa阻断剂四乙铵(TEA)和KATP阻断剂格列本脲(Glib)均无此效应. 结论大鼠BSMC KV活性的抑制,可提高细胞内Ca2+浓度,促进细胞的增殖,而KCa和KATP对BSMC的增殖均无明显影响.
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Kv2.1钾通道在神经元缺氧损伤中的潜在药理学作用
目的 观察钾通道阻断剂四乙铵(TEA)对缺氧缺血损伤整体、离体模型的保护作用,阐明Kv2.1电压依赖性钾通道在缺氧缺血细胞损伤中发挥的作用.方法 应用大鼠暂时性大脑中动脉阻塞(tMCAO)脑缺血模型验证TEA对脑缺血损伤的保护作用.采用膜片钳技术观察氧糖剥夺(OGD)对稳定转染Kv2.1钾通道的人胚胎肾293(HEK293)细胞膜电位以及TEA对OGDKv2.1-HEK293细胞钾电流的影响.MTT法观察OGD对Kv2.1-HEK293的损伤及TEA的保护作用.结果 TEA(5μg·kg-1)侧脑室注射可以显著减小tMCAO大鼠的脑梗死体积;应用转基因细胞的研究证实Kv2.1-HEK293对OGD损伤的敏感性明显提高;OGD可以降低Kv2.1-HEK293细胞膜电位;TEA(10 mmol·L-1)能显著抑制OGD Kv2.1-HEK293钾电流,同时使其所受的细胞损伤降低.结论 钾通道阻断剂TEA对整体和离体缺氧缺血损伤模型均发挥细胞保护作用,这种保护作用与对Kv2.1的阻断密切相关;提示Kv2.1可能是抗脑缺血药物开发的潜在靶点.
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钾通道阻滞剂对缺血/再灌注室性心律失常的影响
钾离子通道是广泛存在于心肌中的为复杂的一大类离子通道.其在心肌静息电位的产生、复极化形成以及自律性的调节上起重要作用.本实验使用钾通道阻滞剂四乙铵(tetraethylammonium,TEA)和优降糖(glibenclamide),观察钙敏感性钾通道(Ca-sensitive patassium channel,KCa)及ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive patassium channel,KATP)抑制在急性心肌缺血-再灌注损伤室性心律失常中的作用.
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三氧化二砷和四乙铵对人肺腺癌细胞株AGZY-83-a增殖和凋亡影响的研究
目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)和四乙铵(tetraethylammonium,TEA)对人肺腺癌细胞AGZY-83-a增殖和凋亡的影响,探讨As_2O_3诱导人肺腺癌细胞株凋亡的机制.方法 体外细胞培养人肺腺癌AGZY-83-a细胞株,采用MTT法检测As_2O_3和TEA对细胞增殖的影响.透射电镜(TEM)、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况.比色法检测细胞内Caspase-3活性改变.结果 As_2O_3和TEA对AGZY-83-a细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01).As_2O_3组对AGZY-83-a细胞增殖抑制率低于TEA+As_2O_3组(P<0.05).As_2O_3和TEA使AGZY-83-a细胞凋亡率,Caspase-3增加,单用As_2O_3组的细胞凋亡率、Caspase-3活性分别高于TEA+As_2O_3组(P<0.05).结论 应用TEA部分抑制了As_2O_3诱导AGZY-83-a细胞凋亡;As_2O_3诱导AGZY-83-a细胞凋亡可能和As_2O_3对细胞膜不同的钾离子通道作用有关系.
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钾通道阻滞剂对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的研究电压依赖性延迟整流钾通道阻断剂4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)、钙离子激活钾通道阻断剂四乙铵(tetraethylammonia,TEA)对人肺腺癌细胞(AGZY-83-a)的影响,并探讨人肺腺癌细胞株凋亡的机制.方法体外细胞培养法培养人肺腺癌细胞株,采用MTT法检测不同浓度4-AP、TEA对细胞增殖的影响.透射电镜、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况.比色法检测细胞内Caspase-3活性改变.结果不同浓度的4-AP、TEA作用于细胞48h后,与对照组相比各组吸光度值(A490)均明显降低(n=10,P＜0.001),并且呈浓度依赖关系.4-AP、TEA组的IC50为3.59mmol/L和3.97mmol/L.4-AP及高浓度的TEA使人肺腺癌细胞株细胞凋亡率增加.经4-AP、TEA处理48h的AGZY-83-a细胞内Caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(n=6,P＜0.001).结论钾通道阻滞剂4-AP、TEA对AGZY-83-a细胞增殖有明显的抑制作用,抑制率与药物浓度正相关.诱导人AGZY-83-a细胞凋亡,4-AP和TEA诱导AGZY-83-a细胞凋亡的过程中细胞内Caspase-3活性增加.
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银杏苦内酯B抑制麻醉大鼠颈动脉窦压力感受性反射
本研究在30只麻醉雄性Sprague-Dawley大鼠隔离灌流颈动脉窦区观察了银杏苦内酯B(ginkgolide B)对颈动脉窦压力感受性反射的影响.结果显示:(1)银杏苦内酯B(0.1,1,10 pmol/L)隔离灌流序侧颈动脉窦区,使压力感受性机能曲线向右上方移位,曲线大斜率(peak slop,PS)减小,血压反射性下降(reflex decrease,RD)幅度减小(P<0.01),阂压(threshold pressure,TP)、平衡压(equilibrium pressure,EP)和饱和压(saturation pressure,SP)均升高(P<0.05,P<0.01).其中PS、RD、TP、EP和sP呈明显的剂量依赖性;(2)预先应用钙通道开放剂Bay K8644(500 nmol/L),可以完伞取消银杏苦内酯B的抑制作用.(3)预先应用钾通道阻断剂四乙铵(tetraethylammonium,TEA,1 mmol/L),银杏苦内酯B的上述作用也被完全取消.结果表明,银杏苦内酯B对大鼠颈动脉实压力感受性反射有抑制作用,此作用与银杏苦内酯B减少颈动脉窦压力感受器神经末梢钙离子内流和增加钾离子外流有关.
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硝普盐、3-吗啉-悉尼酮亚胺和精胺对豚鼠胃窦环行肌钙敏感钾电流的影响
目的：探讨一氧化氮对豚鼠胃窦环行肌钙敏感钾电流的影响.方法：采用全细胞式的膜片箝方法，用精胺、硝普盐、3-吗啉-悉尼酮亚胺(SIN-1)作为一氧化氮供体.结果：外向钾电流被四乙铵(1 mmol·L-1)和ChTX(200 nmol·L-1)显著抑制.在穿孔膜式条件下，精胺(100μmol·L-1)、SIN-1(200 μmol·L-1)、硝普盐(100μmol·L-1)均增加钙敏感钾电流.1μmol·L-1亚甲蓝完全阻断硝普盐与SIN-1导致的增加效应.结论：一氧化氮增加豚鼠胃窦环行肌钙敏感钾电流，该效应可能通过环磷酸鸟苷介导.
