2型糖尿病大鼠主动脉Wnt/β-catenin信号通路的变化及SIRT1的调节作用

目的：检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白及沉默信息调节因子( SIRT1)在2型糖尿病大鼠主动脉中的表达变化,探究SIRT1对Wnt/β-catenin信号通路的调节作用,明确二者在糖尿病主动脉病变发生发展中的作用。方法高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,实验将大鼠分为空白对照组、糖尿病2、4、8和12周模型组,血清检测空腹血糖( FBG),总胆固醇( TC)、甘油三酯( TG)、高密度脂蛋白( HDL-C)、低密度脂蛋白( LDL-C),空腹胰岛素( FINS), HE染色法观察主动脉病理结构变化,RT-PCR法和Western blot法检测主动脉Wnt2、β-catenin、TCF4、SIRT1和sFRP2等相关蛋白基因转录及表达变化。结果与正常组比较,2型糖尿病大鼠TC、TG、LDL-C水平明显升高,HDL-C水平明显降低,随着时间延长,糖尿病大鼠各时间点模型组与2周模型组相比较,TC、TG、LDL-C水平升高越来越明显,HDL-C水平降低更明显,差异均具有显著性( P<0．01)；显微镜下糖尿病组大鼠主动脉可见不同程度局灶性内皮细胞空泡变性、甚至坏死。糖尿病组大鼠相对于正常对照组主动脉Wnt2和β-catenin的表达在2周及4周明显增加( P<0．01),4周后维持在较高水平；而TCF4、SIRT1的表达与正常对照组相比表现为持续的增加( P<0．01)；sFRP2的表达在持续的降低(P<0．01)。结论2型糖尿病大鼠主动脉病变发生发展过程中, SIRT1通过调节 sFRP2的表达来调控 Wnt/β-catenin信号通路的激活,参与糖尿病主动脉损伤的发生发展过程,进一步研究其在糖尿病主动脉损伤中的作用机制可能为糖尿病主动脉病找到新的治疗靶点。

HSP70抑制剂PFTμ对干扰素γ诱导的iNOS表达的研究

目的：观察热休克蛋白70抑制剂 PFTμ对干扰素γ( IFN-γ)诱导的RAW 264．7细胞一氧化氮( NO)的生成及诱生型一氧化氮合酶( iNOS)表达的作用。方法采用IFN-γ诱导的 RAW 264．7细胞株建立细胞炎症反应模型，采用Griess试剂法测定细胞 NO释放量；采用Western blot法测定相应目的蛋白的表达；采用反转录聚合酶链反应( RT-PCR)分析iNOS mRNA表达的变化。建立小鼠心脏缺血/再灌注( I/R)模型，分为对照组和给药组，测定小鼠心肌梗死面积的变化。结果 PFTμ可抑制IFN-γ诱导的RAW264．7细胞NO的生成、iNOS蛋白及mRNA表达。其作用机制可能是通过部分抑制RAW264．7细胞核内的IRF-1蛋白表达。 PFTμ可减少缺血/再灌注小鼠心脏梗死面积( P<0．05)。结论PFTμ可通过部分抑制细胞核内IRF-1蛋白表达而发挥抗炎症反应的作用。

鞣花酸体外抗真菌活性及对小鼠白色念珠菌感染模型的治疗作用研究

目的：研究鞣花酸体内外抗真菌作用，确定其抗真菌谱，评价其对小鼠白色念珠菌感染的治疗作用。方法根据美国临床实验室标准化委员会( NCCLS )推荐的《酵母菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》( M27-A)，测定鞣花酸对临床常见念珠菌的MIC值，确定其抗真菌谱，筛选出对其敏感的真菌菌株；采用小鼠腹腔注射白色念珠菌造成系统性真菌感染模型，以小鼠存活率、血清SOD和MDA含量、肝脏组织病理学为评价指标，观察鞣花酸的体内抗真菌作用。结果鞣花酸体外对念珠菌中白色念珠菌( C. albicans)敏感，平均MIC为25．0 mg · L-1；与模型组比较，鞣花酸体内可明显改善造模小鼠的一般症状，使动物体重明显增加(P<0．05)，高剂量组丙二醛(MDA)含量降低(P<0．05)，超氧化物歧化酶(SOD)活力增加(P<0．01)，肝脏组织病理学有明显改善。结论鞣花酸有明显的体内外抗真菌活性，具有一定开发利用价值。

5-羟基-1-氢-吲唑对SH-SY5 Y细胞的保护作用及其机制研究

目的：研究5-羟基-1-氢-吲唑对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导凋亡的SH-SY5Y神经细胞的保护作用及其可能的作用机制。方法以MPP+诱导SH-SY5Y细胞凋亡建立体外帕金森病细胞模型,以MTT法筛选药物有效保护浓度；以免疫化学染色以及Hoechst 33258核染研究药物的神经保护作用以及抗凋亡作用；以Western blot法检测与神经元凋亡密切相关的磷酸化tau蛋白及其上游激酶磷酸化糖原合成激酶( P-GSK-3β)和周期依赖性蛋白激酶5( cyclin dependent kinase,CDK5)的表达。结果 MPP+可引起 GSK-3β的活化以及CDK5活性升高,诱导tau的异常磷酸化和神经细胞凋亡；而5-羟基-1-氢-吲唑可下调GSK-3β与CDK5的活性,降低磷酸化tau的水平和抑制MPP+导致的SH-SY5Y细胞的凋亡。结论5-羟基-1-氢-吲唑可抑制MPP+引起的SH-SY5Y神经细胞凋亡,作用机制可能是通过同时抑制GSK-3β和CDK5两条信号传导通路,而降低tau蛋白的磷酸化水平,进一步发挥神经元保护作用。

大黄酸对马兜铃酸A引起的斑马鱼肾脏损伤的保护作用

目的：观察大黄酸在马兜铃酸A引起的斑马鱼肾脏损伤中的作用。方法将肾脏发育完成的斑马鱼仔鱼(4dpf)用马兜铃酸A处理24 h,造成马兜铃酸肾病模型,同时加入大黄酸处理,然后观察仔鱼的表型变化情况,并用肌酐检测试剂盒测定仔鱼组织中的肌酐含量,利用qPCR对仔鱼组织中的炎性相关因子( cox2a)和致纤维化因子( TGFβ-1)进行定量检测。结果马兜铃酸A处理24h后,部分仔鱼出现眼周水肿及血循环系统异常,表现为心跳微弱,心腔缩小,血流缓慢甚至停滞,发生率具有剂量相关性,马兜铃酸处理组仔鱼组织中的肌酐含量比对照组明显升高,cox2a和TGFβ-1表达量也比对照组明显上升,同时加入大黄酸能降低异常仔鱼所占比例,降低组织肌酐含量,并下调cox2a的表达,但对马兜铃酸引起的TGFβ-1的上升无影响。结论大黄酸对马兜铃酸引起的斑马鱼肾脏损伤有一定的保护作用。

转化生长因子-β激活激酶1抑制剂对AGEs诱导小鼠骨髓来源巨噬细胞活化作用及机制

目的：应用转化生长因子-β激活激酶1( TGF-β acti-vated kinase-1,TAK1)抑制剂(5Z-7-oxozeaenol,OZ)作用于晚期糖基化终末产物( adavnaced glyeation end porudets,AGEs)诱导的小鼠骨髓来源巨噬细胞( bone marrow-derived macro-phages,BMMs),探讨TAK1信号通路在AGEs诱导的BMMs活化中作用及机制。方法获取C57小鼠的BMMs,运用流式细胞术鉴定BMMs纯度。检测TAK1抑制剂在不同浓度下对AGEs培养巨噬细胞活力的影响,激光共聚焦显微镜和流式细胞术检测巨噬细胞M1亚型；RT-PCR检测各组细胞中 MCP-1与 TNF-α mRNA 的表达；Western blot 法检测TAK1、MAPK及NF-κB通路蛋白的表达。结果 AGEs刺激能增加M1型巨噬细胞百分比,TAK1抑制剂可抑制AGEs诱导下巨噬细胞向M1表型活化；与正常对照组比较,AGEs刺激不仅上调 BMMs 中 MCP-1、TNF-α mRNA 的表达( P <0．01),而且p-TAK1、TAB1、p-JNK、p-p38MAPK、NF-κBp65蛋白表达也明显增加( P <0．05)；通过 TAK1抑制剂下调 p-TAK1表达的同时 AGEs 培养 BMMs 的 TAB1、p-JNK、p-p38MAPK、NF-κBp65及TNF-α、MCP-1表达均明显降低(P<0．05)。结论 AGEs能诱导BMMs向M1表型活化,TAK1抑制剂可能通过 TAK1/MAPKs、MAPKs/NF-κB 途径抑制AGEs对巨噬细胞的激活和炎症因子的表达。

大黄酸调控Rac1/LIMK1/cofilin信号通路抑制卵巢癌细胞运动与侵袭

目的：探讨大黄酸对卵巢癌淋巴结高转移 SKOV3-PM4细胞运动和侵袭能力的影响,揭示大黄酸调控 Rac1/LIMK1/ cofilin信号通路与抑制卵巢癌细胞运动侵袭作用的机制。方法划痕实验观察大黄酸对卵巢癌细胞运动的影响,Matrigel-Transwell方法检测细胞侵袭能力,激光共聚焦扫描显微镜和扫描电镜观察大黄酸对卵巢癌细胞形态和细胞骨架超微结构的影响, Western blot分别检测 Rac1/LIMK1/cofilin通路上Rac1、LIMK1、PAK1、cofilin蛋白的表达。结果与空白对照组相比,大黄酸能抑制SKOV3-PM4细胞侵袭和迁移能力,浓度为8．8、17．60、26．40μmol · L-1的大黄酸处理24 h后,细胞体外迁移和侵袭能力均明显下降( P <0．05)；细胞出现伪足减少,细胞内微丝断裂、分布紊乱,质膜凹凸不平、细胞间的间隙变宽等超微结构改变； Western blot结果表明大黄酸能明显下调Rac1蛋白的表达水平,并呈浓度依赖性。卵巢癌细胞经大黄酸及Rac1抑制剂处理后,磷酸化LIMK1、cofilin、PAK1蛋白水平与空白对照组比较明显下降,且大黄酸联合Rac1抑制剂处理后的磷酸化蛋白下调更为明显( P<0．05)；而Rac1激活剂联合大黄酸组比大黄酸组磷酸化蛋白上调明显( P<0．05)。结论大黄酸为潜在的Rac1小分子抑制剂,其作用机制可能是调控 Rac1/LIMK1/ cofilin信号通路,抑制卵巢癌淋巴结转移细胞运动和侵袭的能力。

酸敏感离子通道1a在高糖环境下肝纤维化发病中的作用研究

目的：研究ASIC1a(acid-sensing ion channel 1a)对糖尿病合并肝纤维化的病理影响及高糖环境下PDGF-BB刺激的HSC-T6细胞活化增殖的作用。方法采用链脲佐菌素( STZ)制备大鼠糖尿病模型,四氯化碳( CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型,观察糖尿病组、单纯肝纤维化组及糖尿病并发肝纤维化双模型组肝组织损伤程度及ASIC1a的表达变化；体外实验,利用 ASIC1a 阻断剂阿米洛利( amiloride)预处理HSC-T6细胞,然后加入高糖处理HSC-T6细胞24 h,再添加重组小鼠血小板衍生生长因子( PDGF-BB)刺激24 h,观察HSC-T6的活化增殖情况； Western blot检测ASIC1a、α-SMA和 Collagen I蛋白表达水平。结果 STZ 诱导的糖尿病大鼠、CCl4诱导的肝纤维化大鼠和STZ加CCl4联合诱导的糖尿病肝纤维化双模型大鼠肝组织较对照组大鼠肝组织均出现不同程度的肝损伤,其中双模型大鼠的损伤为严重,且3组大鼠肝组织较对照组大鼠肝组织中ASIC1a表达明显升高,双模型大鼠肝组织中ASIC1a升高为明显；阿米洛利预处理HSC-T6,明显降低了高糖环境下ASIC1a的表达,并抑制了高糖环境下PDGF-BB 诱导的HSC-T6中α-SMA、Colla-gen I 的表达。结论高糖环境加剧CCl4诱导大鼠肝纤维化及PDGF-BB 诱导的 HSC 活化,其可能与高糖环境下ASIC1a的过表达有关。

基于Nrf2信号通路的三七总皂苷对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的保护作用机制研究

目的：探讨三七总皂苷对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及分子机制。方法利用 Aβ25-35诱导 PC12细胞损伤模型, MTT 法检测 PC12细胞活力,试剂盒测定LDH漏出量、ROS水平、MDA含量、Caspase-3活力以及抗氧化酶SOD、CAT和GHS-Px活力,TUNEL染色检测细胞凋亡, JC-1染色观察线粒体膜电位, Western blot 检测相关蛋白HO-1、Lamin-B、细胞核内Nrf2及总Nrf2的蛋白表达。结果三七总皂苷能够明显抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞活力下降(P<0．01)和LDH漏出(P<0．01),减少ROS和MDA的产生( P <0．01),增加 SOD、CAT 和 GSH-Px 活力( P <0．01),稳定线粒体膜电位,抑制 caspase-3的活化( P <0．01)。而且,三七总皂苷还能够上调 PC12细胞细胞核Nrf2、总Nrf2和细胞质中 HO-1的蛋白表达。 HO-1抑制剂SnPP能够抑制三七总皂苷的神经保护作用。结论三七总皂苷可能通过上调Nrf2/HO-1信号通路,从而抑制 Aβ25-35诱导PC12细胞氧化应激和凋亡。

灯盏细辛提取物中3种活性成分在Caco-2细胞模型吸收机制的研究

目的：研究灯盏细辛提取物( erigeron breviscapus ex-tract,Ebe)中3种活性成分灯盏甲素、咖啡酸和绿原酸的吸收机制。方法建立人结肠腺癌细胞系( the human colon carcinoma cell line,Caco-2细胞)模型；利用该模型研究Ebe的细胞摄取规律,通过UPLC-MS/MS法测定Caco-2细胞中灯盏甲素、咖啡酸和绿原酸的浓度,研究pH、时间以及药物浓度对3种活性成分的转运影响；考察在P-糖蛋白抑制剂(维拉帕米、环孢素A)存在与否时3种活性成分在 Caco-2细胞模型中的转运情况。结果受试物Ebe在所设置的浓度范围内(0．1~25．0 g·L-1)对 Caco-2细胞无毒副作用。灯盏甲素和绿原酸在Caco-2细胞摄取实验中具有浓度、时间依赖性,呈正相关,渗透系数维持在一个平衡状态。咖啡酸具有浓度饱和性,且加入P-糖蛋白抑制剂后咖啡酸的细胞摄取量明显增加。结论 Ebe中灯盏甲素和绿原酸主要表现为被动转运,P-糖蛋白参与了咖啡酸的摄取过程,咖啡酸的吸收主要由载体媒介转运实现。

马钱苷对糖基化终末产物诱导足细胞损伤的保护作用

目的：探讨山茱萸环烯醚萜苷特征性成分马钱苷对糖基化终末产物( AGEs)诱导肾脏足细胞损伤的保护作用及其机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞，分为空白对照组、模型组( AGEs组)、马钱苷组，并设氨基胍组作为阳性对照。 MTT法检测马钱苷对足细胞存活率的影响；Hoechst 33342/PI双染观察足细胞凋亡情况，流式细胞仪检测细胞凋亡率；Western blot法检测足细胞AGEs受体( RAGE )、足细胞损伤标志蛋白 desmin 以及凋亡相关蛋白 bax、bcl-2、cleaved caspase-3的表达。结果马钱苷能够抑制AGEs导致的足细胞损伤，下调足细胞Desmin、RAGE蛋白的表达，明显降低AGEs诱导的足细胞凋亡率，降低足细胞 Bax/Bcl-2的比值和促凋亡蛋白cleaved caspase-3的表达。结论马钱苷能够改善AGEs诱导的肾小球足细胞损伤，其作用机制与降低RAGE蛋白表达，抑制凋亡通路有关。

沙蓬粗寡糖对GK大鼠胰岛素抵抗的影响

目的：观察沙蓬粗寡糖( AOS)对糖尿病GK大鼠降血糖、改善胰岛素抵抗作用,探讨可能机制。方法将符合2型糖尿病GK大鼠随机分为模型对照组( MC)、格列苯脲组( GLB)、沙蓬粗寡糖高( AOS-H )、中( AOS-M )、低剂量组(AOS-L),以同源Wistar大鼠为正常对照(NC)。各组均灌胃给药8周,测定给药前后空腹血糖( FBG )、随机血糖( RBG)、糖耐量( OGTT)；给药8周测定非空腹非糖负荷状态的给药前后血糖及血清胰岛素含量变化；结束时测空腹血清血糖( FPG)、胰岛素( FINS)、OGTT,计算胰岛素抵抗指数( HOMA-IR )；取胰腺常规石蜡包埋, HE染色,观察其病理组织形态改变。结果 AOS对 GK大鼠空腹血糖影响不明显,但明显降低随机血糖,改善糖耐量,增加胰岛素敏感性,且明显减小AUC( P<0．01),以中剂量效果更好,与格列苯脲相似；AOS能促进胰岛素释放,以AOS中、低剂量促胰岛素释放作用更强,在释放时间和释放量上均早于和强于格列本脲；AOS可抑制GK大鼠胰岛组织病理改变,增加胰岛及胰岛细胞数量,与模型组比较,AOS给药组胰岛组织结构改变明显减轻。结论 AOS具有明显改善胰岛素抵抗和降低血糖作用,其机制可能是与快速促进胰岛素释放,增加胰岛细胞增值,改善胰岛功能有关。

阿魏酸钠治疗糖皮质激素性骨质疏松的实验研究

目的：探讨阿魏酸钠对于大鼠糖皮质激素性骨质疏松症的治疗作用。方法3月龄Wistar大鼠随机均分5组：对照组、模型组、治疗组(阿魏酸钠低、中、高剂量组)。动物处死前进行钙黄绿素双荧光标记。采用骨组织形态计量学方法测量胫骨的静态参数、动态参数、骨组织细胞和生长板变化。结果①静态参数：与对照组相比，模型组骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁数量明显减少，骨小梁分离度增大；与模型组相比，阿魏酸钠中、高剂量组骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁数量明显增加，骨小梁分离度明显减小。低剂量组骨小梁厚度明显增加。②动态参数：与对照组相比，模型组标记周长百分数、骨转化率、骨表面新骨形成率明显增大；与模型组相比，中、高剂量组新骨年形成率增加。③骨组织细胞：与对照组相比，模型组单位骨小梁面积成骨细胞数量、破骨细胞数量以及成骨细胞周长占骨小梁周长百分率均明显增加。与模型组相比：各个实验组均没有明显变化。④生长板：与对照组相比，模型组生长板宽明显增大；与模型组相比，各实验组生长板退行细胞高度、生长板宽均没有明显变化。结论阿魏酸钠对糖皮质激素性骨质疏松的治疗作用主要体现在增加骨量和改善骨小梁结构，并促进骨形成。

八肽胆囊收缩素及其受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠脑内CaMK Ⅱ蛋白表达的影响

目的：观察八肽胆囊收缩素( CCK-8)、CCK-1受体拮抗剂 L-364,718及CCK-2受体拮抗剂 LY-288,513对吗啡戒断大鼠额叶皮质、海马、纹状体细胞内钙/钙调蛋白依赖性的蛋白激酶Ⅱ( CaMK Ⅱ)表达的影响。方法建立吗啡依赖及纳洛酮催促戒断大鼠模型,观察CCK-8、L-364,718及LY-288,513对吗啡依赖大鼠戒断症状的影响；采用 Western blot方法检测上述脑区CaMK Ⅱ蛋白表达的变化。结果① CCK-8、L-364,718及LY-288,513能明显改善吗啡依赖大鼠戒断症状的发生；②与盐水对照组相比,吗啡依赖组大鼠额叶皮质、海马、纹状体细胞内CaMK Ⅱ蛋白表达明显升高；纳洛酮催促戒断后上述脑区CaMK Ⅱ蛋白表达较吗啡依赖组均明显降低；③ CCK-8、 L-364,718及LY-288,513均使吗啡戒断大鼠额叶皮质、海马及纹状体内CaMK Ⅱ蛋白表达升高。结论 CaMK Ⅱ参与了吗啡依赖及戒断的形成,CCK-8及其受体拮抗剂抑制吗啡依赖大鼠戒断反应的机制可能与其对相关脑区CaMK Ⅱ蛋白表达的调节有关。

二苯乙烯苷对糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用

目的：探讨二苯乙烯苷( TSG)对糖尿病大鼠心肌损伤的作用及对沉默信息调节因子2的哺乳动物同源体1(SIRT1)和磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)蛋白影响。方法建立2型糖尿病大鼠模型,分组给药,16周时处死大鼠,生化法测定血糖、血脂、肝功能及肌酸激酶( CK)、乳酸脱氢酶( LDH)和心肌组织游离脂肪酸( NEFA)；酶联免疫吸附法测定心肌肌钙蛋白Ⅰ( cTnⅠ)、心肌组织脂代谢相关酶脂肪酸跨膜转运载体蛋白( FATPs)和脂肪酸β氧化酶( FA-β-oxidase)的含量；放射免疫法测定血浆炎症因子肿瘤坏死因子( TNF-α)、白细胞介素6( IL-6)、白细胞介素1β( IL-1β)的含量, Western blot 检测心肌组织中 TNF-α、IL-6、IL-1β、SIRT1和AMPK蛋白的表达；并测定左心室胶原含量。结果TSG干预后能减低血脂水平,对血糖和胰岛素水平无明显影响。 TSG能减低糖尿病大鼠心肌组织中胶原含量,减少心脏游离脂肪酸含量,增加心肌组织脂代谢相关酶( FATPs和FA-β-oxidase)含量,抑制外周血和心肌组织中炎症因子( TNF-α、IL-6、IL-1β)的分泌。 TSG能明显增加糖尿病大鼠心脏SIRT1和pAMPK蛋白表达。结论 TSG对糖尿病大鼠心肌具有保护作用,其机制可能与抑制心肌炎症因子和改善能量代谢有关。

竹节参齐墩果烷皂苷对RAW264．7巨噬细胞SIRT1活性影响及抗炎作用研究

目的：探讨竹节参齐墩果烷皂苷( chikusetsu oleanane saponin, COS )对脂多糖( lipopolysaccharides, LPS )刺激RAW264．7巨噬细胞的SIRT1活性影响及抗炎作用。方法Griess法测定一氧化氮( NO)释放量；免疫印迹( Western blot)法检测炎性因子肿瘤坏死因子-α( TNF-α)、白介素1β( IL-1β)蛋白表达；免疫荧光分析 COS 对细胞核因子-κB ( NF-κB)和沉默信息调节因子1( silent information regulator 1,SIRT1)核转运的作用。结果 COS在25~300 mg·L-1与1 mg·L-1 LPS共培养时,对RAW264．7细胞生长无明显影响；与LPS组相比,COS能有效抑制NO释放和抑制TNF-α、IL-1β的分泌；还能抑制NF-κB的核移位,上调SIRT1的表达。结论 COS对LPS刺激的RAW264．7细胞炎症具有保护作用,其保护机制可能是 COS 上调 SIRT1表达,促进NF-κB去乙酰化作用,从而抑制NF-κB的核移位,减少TNF-α、IL-1β等炎症因子的产生。

钠钾ATP酶抑制剂通过调节DNA损伤感应复合体Mre11/Rad50/Nbs1的表达诱导肝癌HepG2细胞周期阻滞

目的：研究钠钾ATP酶抑制剂华蟾毒配基( cinobufa-gin)对人肝癌 HepG2细胞 DNA损伤修复阻断及其发生机制。方法免疫组化分析人肝癌临床组织标本、正常肝组织中钠钾ATP酶α1亚单位的表达；以人肝癌细胞HepG2为靶细胞,实验分为对照组、5μmol · L-1华蟾毒配基作用6、12和24 h组；单细胞电泳检测 DNA双链断裂, Real time-PCR和Western blot检测损伤修复基因Mre11、Rad50、Nbs1和p53的表达变化,流式细胞术检测细胞周期。结果肝癌组织钠钾ATP酶α1亚单位表达与癌旁组织相比明显升高( P <0．05)；华蟾毒配基诱导HepG2细胞DNA断裂的发生率与作用时间高度相关,作用时间延长断裂效应更加明显(P<0．05),Mre11,Nbs1,Rad50和p53表达随药物作用时间延长逐渐升高(P<0．05),流式细胞术分析细胞周期对照组S期细胞比例为(21．32±4．21)%,5μmol·L-1华蟾毒配基处理6 h 后为(33．25±5．72)%,处理12 h 后为(56．72±6．29)%,作用24 h后为(67．32±9．42)%。结论华蟾毒配基激活 Mre11/Rad50/Nbs1损伤感应复合体介导肝癌HepG2细胞周期阻滞。

脑转移瘤动物模型的制备方法及研究进展

脑转移瘤( brain metastasis)是指源于中枢神经系统以外的肿瘤细胞转移到脑组织的颅内常见恶性肿瘤。目前脑转移瘤造模有外周接种和直接脑内接种瘤细胞两大类方法。外周接种方法包括造模动物左心室或颈动脉内注射、原位接种等途径；脑内接种方法包括肿瘤细胞株直接接种于动物特定脑区的简化方法和临床脑转移瘤活检标本直接接种于裸大鼠脑内的新方法。该文综述了脑转移瘤模型的制备方法，包括可选用的接种动物、瘤细胞系、接种方法和模型的检测方法，并介绍这一领域的新研究进展。

人参皂苷Rg1对成体干细胞特性与功能的影响

人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)是从人参中提取的一种重要单体成分,具有多种药理学活性,可通过多种作用机制对造血干细胞、间充质干细胞、神经干细胞和内皮祖细胞等的增殖、分化、衰老、分泌等产生明显调控作用,在组织器官损伤和机体衰老中产生明显治疗效果,该文就Rg1对成体干细胞特性与功能的影响进行了综述。

炎症免疫反应软调节

炎症反应和免疫反应在整体、组织、细胞和分子等各层次密不可分。该文提出炎症免疫反应( inflammatory immune responses, IIR)是机体炎症免疫相关细胞依据内外环境变化所表现出的适度或异常的系统反应；简述了参与IIR的炎症免疫细胞(巨噬细胞、树突细胞、T 细胞、B 细胞等及其亚型)、非炎症免疫细胞(如胶质细胞、内皮细胞、上皮细胞、成纤维细胞、滑膜细胞、肝细胞等)及细胞因子/受体信号转导的研究进展,指出了目前临床上使用的影响IIR药物存在的问题,提出炎症免疫反应软调节( soft regulation of inflammato-ry immune responses,SRIIR)是研发治疗IIR相关疾病创新药物的新方向。

法尼酯衍生物X受体在慢性肝病中的作用及机制研究进展

法尼酯衍生物X受体( farnesoid X receptor, FXR)在胆汁酸代谢、脂代谢、糖代谢等物质代谢过程中发挥关键作用。慢性肝脏疾病的发生发展与机体代谢功能紊乱密切相关。近期研究显示,作为代谢调控关键因子,FXR在慢性肝脏疾病中,如病毒性肝炎、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、肝纤维化、肝癌等扮演着重要角色。该文就近年来FXR在慢性肝脏疾病的发生发展过程中的作用及机制作一综述,旨在为抗纤维化研究及药物研发提供新的视角和治疗靶标。

Wnt/β-catenin信号通路参与脑缺血后神经血管单元调控及相关药物的研究进展

Wnt信号通路广泛存在于各种生物中，参与调控细胞增殖、分化、凋亡等多种生理病理过程。近年来的研究发现， Wnt/β-catenin信号通路在缺血性脑中风神经血管单元保护中可能发挥重要调控作用。舒林酸、雌二醇等化药，红景天等含苷类成分的中药，姜黄等含挥发油的中药以及丹龙醒脑方等复方可通过调控该通路发挥神经血管保护作用。该文拟对近年来Wnt/β-catenin信号通路在缺血性脑中风后神经血管单元保护中的调节作用等相关研究进展以及目前通过调控该信号通路发挥神经血管保护作用的化学药及中药予以综述，以期为缺血性脑中风的药物改善机制提供方法学基础，同时为研究降低中风后遗症致残率新药提供思路。

梓葛冻干粉针抗脑神经血管单元炎症及氧化损伤

由梓醇和葛根素配伍制成的抗缺血性中风新药--梓葛冻干粉针( injection of lyophilized powder with catalpol and puerarin, C-P),可透过血脑屏障并且是安全的[1-2],可明显减少中风模型小鼠大脑梗死灶面积[3]。本研究在体外构建神经血管单元(neurovascular unit, NVU)模型并作氧糖剥夺再灌注( oxygen-glucose deprivation/reperfusion, OGD/R )损伤[4],观察C-P对NVU的整体保护作用,探讨其抗炎和抗氧化机制,为C-P治疗缺血性中风提供科学依据,也为缺血性中风的治疗药物筛选提供一种多细胞体外研究模式。

共轭亚油酸异构体对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制和促凋亡作用

共轭亚油酸( conjugated linoleic acid,CLA)是一组具18个碳原子,含有共轭双键的多不饱和脂肪酸,是必需脂肪酸亚油酸的同分异构体。近年来大量动物试验表明,CLA具有抗癌[1]、抗动脉粥样硬化[2]、降低脂肪沉积[3]等重要生理功能。虽然目前国内外关于CLA对癌细胞凋亡的影响已做了大量研究工作,但还未见t9, t11-CLA单体抗癌活性的报道。本文通过比较3种 CLA 异构体--c9, t11-CLA；t10, c12-CLA；t9,t11-CLA对乳腺癌细胞MCF-7细胞生长、凋亡及细胞周期的影响,以筛选出更有效抗癌的CLA异构体。

TRPV1通道异源表达体系的建立和功能的初步研究

目的：构建能够表达 TRPV1通道用于实验研究的HEK 293T细胞表达体系。方法采用脂质体转染方式将TRPV1质粒转入人胚胎肾 HEK 293T细胞，建立 TRPV1型通道瞬时异源表达体系，并对转染后的 TRPV1表达体系进行了鉴定，同时对该通道功能特性进行了研究。结果经荧光显微镜观察，转染率可达40%~50%；Western Blot研究发现转染后的 HEK 293T细胞在与 TRPV1通道蛋白相应的位置上具有明显的条带，提示 TRPV1通道蛋白在转染后的细胞中有异源性表达；共聚焦显微成像显示，转染后的 HEK 293T 细胞在受到 TRPV1通道激动剂刺激后，胞内荧光强度明显变强，提示 TRPV1通道介导钙离子功能正常。结论研究结果表明，基于 HEK 293T细胞的 TRPV1通道瞬时转染的异源表达体系成功构建。

VSVG/HIV-1 NL4-3 Luc假病毒筛选抗HIV-1药物的条件优化及应用

目的：建立并优化 VSVG/HIV-1 NL4-3 Luc假病毒筛选抗HIV药物药效模型。方法参照Promega公司的荧光素酶活性分析系统,比较VSVG/HIV-1 NL4-3 Luc对4种不同细胞的感染力。通过采用3种不同实验条件对不同类型HIV-1上市药物进行活性评价,进一步验证了该模型的可行性与有效性。后,应用该系统对特定靶点化合物进行筛选,并与HIV-1ⅢB病毒筛选体系所得结果进行比较。结果 VSVG/HIV-1 NL4-3 Luc对CRFK细胞的感染力强,报告基因的表达水平与加入的病毒量呈剂量依赖关系。比较3种实验条件下不同阳性药物抑制VSVG/HIV-1 NL4-3 Luc的半数有效剂量浓度EC50,发现第3种条件优。而用该假病毒对合成化合物进行筛选,发现其EC50与病毒HIV-1ⅢB所得EC50基本一致。结论成功建立并优化了基于VSVG/HIV-1 NL4-3 Luc假病毒的抗HIV药物筛选系统。

复智散通过细胞周期依赖性蛋白激酶5通路减轻皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化

目的：探讨复方中药复智散( FZS)能否通过抑制细胞周期依赖性蛋白激酶5(CDK5)通路,减轻Aβ25-351诱导的新生鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化。方法选用24 h内新生Wistar大鼠,分离纯化皮层神经元,进行体外培养。皮层神经元在体外培养7 d后,应用20μmol · L-1 Aβ25-351作用于皮层神经元24 h。药物治疗组则应用 FZS (20 mg · L-1)、CDK5抑制剂Roscovitine (15μmol · L-1)、钙蛋白酶(calpain)制剂Calpeptin(20μmol·L-1)预处理24 h,然后用20μmol·L-1 Aβ25-351作用24 h。用Western blot检测 Tau蛋白Ser396、Ser202和Thr231位点磷酸化水平和CDK5的激活蛋白p25/p35的蛋白水平；荧光酶标仪测定荧光强度来反映calpain活性；免疫沉淀法检测CDK5激酶活性。结果20μmol·L-1 Aβ25-351作用于皮层神经元24 h后,Tau蛋白在Ser396、Ser202、Thr231位点磷酸化水平增加, CDK5激酶活性升高,CDK5激活蛋白 p25水平升高, calpain 活性升高。20 mg·L-1 FZS治疗组则明显抑制了Aβ25-351导致的Tau蛋白在Ser396、Ser202、Thr231位点磷酸化水平增加,抑制了CDK5激酶活性、p25蛋白水平以及calpain活性升高。 CDK5

桂芍通络对兔动脉粥样硬化早期外膜滋养血管新生及氧化应激水平的干预作用

目的：观察桂芍通络对兔动脉粥样硬化早期外膜滋养血管新生及氧化应激的影响。方法84只家兔随机分为正常组、高脂组、外膜损伤组、桂芍通络高剂量( GH)组、桂芍通络中剂量( GM)组、阿托伐他汀( ATO)组、通心络( TXL)组,每组各12只。正常组给予普通饲料,高脂组给予高脂饲料喂养建立早期高脂血症模型,外膜损伤组及各用药组实施高脂饮食复合右侧颈动脉硅胶管包裹术。 GH组给予4．16 g (生药)·kg-1·d-1灌胃,GM组给予2．08 g(生药)·kg-1·d-1灌胃,ATO组给予阿托伐他汀2．5 mg·kg-1·d-1灌胃,TXL组给予通心络超微粉0．6 g · kg-1· d-1灌胃,连续给药4周后取材,生化法检测各组血脂4项水平变化；HE染色观察内中外膜病理形态学变化；检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)表达水平；荧光原位杂交检测 NADPH 氧化酶亚单位 p22phox 和gp91 phox mRNA的定位与表达；Western blot检测颈动脉组织VEGF、VEGFR蛋白表达情况。结果与正常组相比,高脂组血清总胆固醇( TC )、甘油三酯( TG )及低密度脂蛋白( LDL-C)水平明显升高( P<0．01)；外膜损伤组外膜新生滋养血管及VEGF、VEGFR-2蛋白表达均明显增加(P<0．01),与外膜损伤组比较,GH组、GM组、ATO组及TXL组术侧颈动脉损伤及滋养血管新生程度、颈动脉外膜NADPH氧化酶亚单位p22phox和gp91phox mRNA均有不同程度减轻；SOD、T-AOC活力升高, MDA含量、颈动脉外膜VEGF、VEGFR蛋白表达水平降低( P<0．05或P<0．01)。结论桂芍通络具有抑制兔动脉粥样硬化早期血管外膜滋养血管新生的作用,其机制可能与提高血管本身及外膜的抗氧化能力有关。

血府逐瘀汤调控内皮祖细胞修复损伤血管内皮的研究

目的：在中医活血化瘀理论指导下,将中医治疗和细胞疗法相结合,探讨血府逐瘀汤调控内皮祖细胞( EPC)修复大鼠损伤血管内皮的作用,并阐释其机制。方法以内皮损伤大鼠为受试对象,灌胃血府逐瘀汤并静脉输注EPC,探讨该方联合EPC输注后,对大鼠内皮损伤模型血管内皮损伤的修复作用,并从细胞分子环节阐释其机制。结果与单用EPC组和单用药物组比较,血府逐瘀汤联合EPC组内膜厚度明显减少(P<0．05),降低甘油三酯、总胆固醇和升高高密度脂蛋白水平的作用更为明显(P<0．05),血钙下降更为明显(P<0．05),血管eNOS蛋白表达明显增加(P<0．05),血管SDF-1表达明显增高。结论血府逐瘀汤可促进EPC修复损伤的血管内皮,其作用机制可能与该方能改善机体内环境,促进EPC的归巢有关。

《2015中国科技期刊引证报告》出炉,《中国药理学通报》4项第一

2015年9月,中国科技信息研究所在北京发布《2015中国科技期刊引证报告》,《中国药理学通报》核心影响因子0．899,总被引频次3312,综合评价总分66．50,基金论文比0．96,4项指标均列我国药理学类期刊第1名。

敬告读者

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