ASIC1 a对大鼠关节软骨细胞基质代谢及MAPK信号通路表达的影响

目的：研究ASIC1a(acid-sensing ion channel 1a)对大鼠关节软骨细胞基质代谢及MAPK信号通路表达的影响。方法 SD大鼠关节软骨细胞分离、培养与鉴定,建立软骨细胞ASIC1a 表达沉默模型。将软骨细胞分为正常组( pH 7.4)、pH 6.0酸化组、以及ASIC1a特异性阻滞剂PcTx-1、表达沉默组和非特异性阻滞剂Amiloride处理的酸化组,对二甲基亚甲蓝分光法检测大鼠关节软骨细胞培养上清中GAG的含量,氯胺T法检测 Hyp的含量, ELISA法检测 MMP-2、TIMP-2的含量,Western blot 法检测酸化及阻断 ASIC1a 后ERK1/2、p38 MAPK 磷酸化蛋白的表达。结果激活ASIC1a明显抑制大鼠关节软骨细胞GAG、Hyp和TIMP-2代谢水平( P<0.01),对MMP-2的代谢水平降低抑制作用较弱(P<0.01),且ASIC1a能引起ERK1/2、p38 MAPK磷酸化水平升高,阻断 ASIC1a后,磷酸化水平升高受到明显抑制(P<0.01)。结论 ASIC1a参与了酸诱导的大鼠关节软骨细胞基质代谢的失衡,其机制可能与激活 ERK1/2和 p38 MAPK磷酸化有关。

5-氨基乙酰丙酸辅助二甲双胍的降血糖作用

目的：探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA )对二甲双胍( Met)降血糖作用的影响及其机制。方法腹腔注射链脲菌素诱导小鼠糖尿病模型,用5-ALA和Met治疗30 d,监测小鼠体征,检测空腹血糖、葡萄糖耐量、血浆胰岛素、瘦素水平,评估胰岛素敏感性,进行肝脏、胰腺组织学检查。结果添加5-ALA的Met组比单用Met组血糖、糖耐量实验的曲线下面积均明显降低；血浆胰岛素、瘦素水平有所下降,胰岛素敏感性改善更为明显。模型组小鼠肝窦周围细胞排列紊乱,可见空泡样变；给药各组均未见此改变。模型组小鼠胰岛数量及细胞胞质较正常组明显减少,胞核固缩；添加5-ALA的各治疗组胰岛数量均较模型组增多,细胞形态趋于正常,且呈现出一定的5-ALA剂量依赖性。结论5-ALA可通过提高胰岛素敏感性及保护肝脏、胰腺的形态与功能,增强Met的降血糖作用。

阿魏酸预处理对阿霉素诱导H9 c2心肌细胞损伤的保护作用

目的：研究阿魏酸( FA)对阿霉素( DOX)诱导H9c2心肌细胞损伤的影响。方法1μmol·L-1DOX处理H9c2细胞24 h,建立心肌损伤模型。 FA 预处理组,10、20、40μmol·L-1 FA预处理2 h后,再与DOX共培养24 h。 CCK-8比色法测定细胞生存率；相差显微镜观察细胞形态学改变；生化试剂盒检测LDH、CK、MDA、SOD；DCF-DA荧光染色流式细胞术检测细胞内活性氧；AO-EB染色、DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡；Western blot法测定caspase-3、Bax、Bcl-2表达。结果 DOX降低H9c2细胞生存率,诱导氧化应激损伤和细胞凋亡。 FA预处理剂量依赖性提高细胞生存率,减轻LDH、CK外漏和损伤细胞形态学改变。 FA减少ROS生成,降低细胞MDA水平,增加SOD酶活性,抑制DOX诱导的氧化应激。 FA下调促凋亡蛋白caspase-3和Bax,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2,减少心肌细胞凋亡。结论 FA可抑制DOX诱导的氧化应激和心肌细胞凋亡,减轻心肌损伤。

含表皮生长因子受体的外泌体诱导肿瘤特异性调节T细胞

目的：探讨树突状细胞( DC)能否捕获含表皮生长因子受体( EGFR)外泌体并转化为成熟DC,诱导生成肿瘤特异性调节T细胞,及后者对肿瘤特异性CD8+T细胞的作用。方法提纯 NSCLC肿瘤标本中的外泌体并验证其有EGFR成分,通过外泌体诱导DC转化为免疫耐受型,观察后者诱导生成的调节T细胞对肿瘤特异性CD8+ T细胞的影响。结果 NSCLC样本中的EGFR阳性率为80%,而对照肺组织仅为2%。与外泌体共培养7 d后,DC呈现IDO表达高于对照组(80.8%±3.2% vs 65.6%±6.4%, P <0.05)。IDO+DC 诱导生成调节T细胞亦明显超过对照组(24.1%±5.2% vs 4.2%±2.3%,P<0.01),进而明显抑制肿瘤特异性CD8+ T细胞增殖(5.4%±0.2% vs 86.7%±9.3%,P<0.01)。结论肿瘤细胞的EGFR能够通过外泌体形式排出细胞外,EGFR+外泌体能够诱导免疫耐受 IDO +DC 产生,进而诱导调节T细胞生成,后者对肿瘤特异性CD8+ T细胞有强大抑制作用。

血清TNF-α升高对糖尿病肾脏脂质积聚的影响研究

目的：明确糖尿病小鼠血清TNF-α升高与肾脏脂质代谢的关系。方法 CD1小鼠按体重腹腔注射链脲佐菌素(150 mg·kg-1),72 h后空腹血糖大于16.7 mmol·L-1者确定为1型糖尿病模型,饲养1个月后,采用ELISA方法检测血清中TNF-α水平,免疫组织化学和Western blot方法检测SREBP-1和ADRP的表达。结果与正常对照小鼠相比,糖尿病小鼠血清 TNF-α水平明显升高,为正常对照小鼠的7.73倍。 SREBP-1和ADRP主要表达于肾小管上皮细胞,糖尿病小鼠肾脏SREBP-1前体片段、成熟片段和 ADRP表达明显高于正常对照小鼠,分别是对照组的2.31倍、1.74倍和1.72倍。小鼠血清TNF-α水平和肾脏ADRP表达的相关性分析证实二者间存在正相关,相关系数为0.914。结论糖尿病小鼠血清TNF-α升高可能是导致肾脏脂质积聚的因素之一。

雷酚萜甲醚抑制人胃癌细胞AGS增殖及诱导凋亡作用研究

目的：研究雷酚萜甲醚( TME )在体外对人胃癌AGS细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法采用 MTT法观察TME对人胃癌AGS细胞、正常人胃黏膜上皮细胞GES-1的增殖抑制作用；克隆形成实验观察细胞克隆的形成；光镜下及AO / EB染色观察细胞形态；流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期；JC-1染色和DCFH-DA荧光探针分别检测TME对AGS细胞线粒体膜电位的改变和活性氧产生的影响；West-ern blot检测凋亡蛋白caspase-3、caspase-8和Bcl-2、Bax表达情况,以及 caspase 广谱抑制剂 z-VAD-fmk 对 caspase-3、caspase-8蛋白表达的影响。结果 TME可明显抑制人胃癌AGS细胞的增殖,并诱导其凋亡,作用48 h时IC50为23.85μmol·L-1,而对正常人胃黏膜上皮细胞GES-1的抑制作用明显低于AGS。 TME能够抑制AGS细胞克隆形成,并使细胞出现明显的凋亡形态改变。 Annexin V-FITC / PI双染实验表明,随TME剂量的增加,细胞凋亡百分数也增加。 JC-1和DCFH-DA结果显示, TME使细胞内线粒体膜电位降低、细胞内活性氧水平增加。 Western blot结果显示, TME增加了Bax / Bcl-2的比例,激活caspase-8和caspase-3,并且加入z-VAD-fmk后, caspase-3、caspase-8蛋白的表达降低。 TME可使AGS细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 TME能抑制人胃癌AGS细胞增殖和诱导凋亡,抗肿瘤作用机制与激活凋亡通路、影响细胞周期及Bcl-2蛋白家族相关。

松花粉硫酸酯化多糖调控小鼠T细胞[Ca2+]i的研究

目的：探讨马尾松花粉硫酸酯化多糖组分( SPPM60-D)对小鼠脾脏T淋巴细胞内[ Ca2+] i 的调控机制。方法水煮醇沉法提取马尾松花粉粗多糖,60%乙醇分级,Sephacryl S-400HR 纯化得PPM60-D,氯磺酸-吡啶法进行硫酸酯化得SPPM60-D。尼龙毛柱法分离纯化小鼠脾脏T 淋巴细胞,用SPPM60-D 处理,测定T 淋巴细胞内[Ca2+]i,ELISA 试剂盒检测细胞上清中IL-2和IL-4水平。结果 ConA 与SPPM60- D 均能升高T 细胞内[Ca2+]i,与对照组相比,升高率分别为211.5%、201.8%(P <0.01)。2-APB、LY294002、 U73122、维拉帕米均可以抑制[Ca2+]i 的升高,而TAK-242对其没有明显作用；SPPM60-D 使细胞上清中IL-2和IL-4水平上升了6.94倍和5.95倍(P <0.01),2-APB 可以明显抑制上述细胞因子水平,而TAK242没有明显作用。结论推测SPPM60-D 的作用机制是经TCR/ CD3受体,通过TCR/ CD3-PI3K-PLC-IP3 R-Ca2+信号通路,促进小鼠T 淋巴细胞[Ca2+]i 的升高,从而提高T 淋巴细胞IL-2和IL-4的水平。

miR-181 a对乳腺癌耐药蛋白表达调控作用的研究

目的：探讨miRNA-181a对乳腺癌耐药蛋白( BCRP)及其介导的乳腺癌细胞耐药性的调控作用。方法应用生物信息学预测 BCRP mRNA-3ˊUTR 与 miR-181a 的结合位点；荧光素酶报告分析检测miR-181a与BCRP mRNA-3ˊUTR的结合作用；qRT-PCR和Western blot检测细胞中相关蛋白表达水平。结果与阴性转染组比较,miR-181a mimic 与PGL3-BCRP 3ˊUTR共转染后,荧光素酶活性明显降低( P<0.05)。 miR-181a mimic转染到MCF7/MX细胞48 h后,与阴性转染组相比,导致原本 miR-181a低表达的 MCF-7/MX细胞中miR-181a的表达增加(P<0.05),BCRP mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05),而MRP、P-gp、LRP的mRNA和蛋白水平均无明显改变(P>0.05)；MCF-7细胞在miR-181a inhibitor转染48 h后,与阴性转染组相比,miR-181a的表达降低( P<0.05)。同时, BCRP mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05)。而MRP、P-gp、LRP的mRNA和蛋白水平无明显改变(P>0.05)。结论 miR-181a可通过靶向作用于BCRP mRNA-3ˊUTR区,调控BCRP表达。

二烯丙基二硫活化NADPH氧化酶诱导人白血病K562细胞凋亡

目的：研究DADS诱导人白血病K562细胞凋亡的分子机制。方法应用MTT法检测细胞的活性；流式细胞术检测细胞内的活性氧( reactive oxygen species, ROS)水平以及凋亡细胞百分率；Real-time PCR 检测NADPH氧化酶各亚基mRNA水平；免疫共沉淀检测蛋白 Rac2与蛋白 p67phox的结合；Westernblot检测Rac2蛋白的表达。结果 DADS能明显抑制K562细胞的增殖,呈时间和剂量依赖性；6 mg ·L-1 DADS 作用人白血病K562细胞6 h后,NADPH氧化酶复合物的6个亚基mRNA水平都明显上调；5.0、10.0 mg ·L-1 DADS作用人白血病K562细胞24 h后蛋白 Rac2的表达水平明显上调；免疫共沉淀结果显示, DADS 诱导的K562细胞凋亡过程中有Rac2与p67phox结合；流式细胞术检测凋亡细胞百分率结果显示, PMA能明显提高DADS诱导K562细胞凋亡的作用,而DPI能抑制DADS诱导K562细胞凋亡。 PMA能提高DADS诱导K562细胞活性氧的水平,而DPI明显抑制了活性氧的产生。结论 NADPH氧化酶的活化是DADS诱导K562细胞凋亡过程中活性氧的主要来源,DADS通过活化NADPH氧化酶诱导K562细胞凋亡。

蛇床子素对髓核致神经根炎性痛大鼠ERK/MAPK信号通路及COX-2 mRNA表达的影响

目的：观察硬膜外腔给予蛇床子素对髓核致神经根炎性痛大鼠的镇痛作用,及对脊髓背角ERK/MAPK信号通路和COX-2 mRNA表达的影响。方法成年♂ SD大鼠125只,随机分为5组,每组25只,分别为Blank组、Sham组、手术模型组( NP组)、蛇床子素组( Ost组)、溶剂对照组( Vehi-cle组),其中Ost组于术后d 6于硬膜外腔给予50μl蛇床子素1 mg/rat,Vehicle组给予相同体积的溶剂。各组大鼠分别于术前1 d,术后3、6、7、10、14、21 d 测定机械痛阈值(50%MWT),在术后14 d测定机械痛阈后每组随机取15只大鼠,取术侧腰段脊髓背角,Western blot法和荧光定量PCR法检测 ERK、pERK 和 COX-2 mRNA 的表达。结果与Blank组相比,Sham组仅在术后d 150%MWT降低,差异有统计学意义( P<0.05),后逐渐恢复至术前水平, pERK和COX-2 mRNA的表达差异无统计学意义( P>0.05)；而 NP组、Vehicle组和 Ost 组术后50% MWT 值明显降低( P <0.05),pERK和COX-2 mRNA的表达明显上调(P<0.05)。硬膜外腔给药后,与 Vehicle组相比, Ost组50%MWT明显升高( P<0.05),给药后d 8 pERK和COX-2 mRNA的表达明显下调(P<0.05)。各组间ERK的表达差异无统计学意义(P>0.05)。对pERK1、pERK2和COX-2 mRNA的表达进行相关性分析,Spearman秩相关系数为0.878(P<0.01)和0.910(P<0.01),表明 pERK和 COX-2 mRNA的表达呈正相关(P<0.05)。结论术后早期应用蛇床子素对髓核导致的神经根炎性痛具有明显的镇痛效应,其机制可能是通过抑制脊髓背角pERK的活化,从而下调COX-2 mRNA的表达。

灵芝多糖联合二甲双胍预防糖尿病大鼠主动脉病变及对VEGF表达的影响

目的：探讨灵芝多糖联合二甲双胍对2型糖尿病大鼠胸主动脉病变的预防作用及其作用机制。方法 SD大鼠高能量饮食4周后,腹腔注射小剂量链脲佐菌素( STZ)30 mg ·kg-1建立2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠模型。成模后随机分为模型组、灵芝多糖组(灵芝多糖600 mg·kg-1)、二甲双胍组(二甲双胍600 mg·kg-1)及联合用药组(灵芝多糖300 mg · kg-1+二甲双胍300 mg · kg-1),另设正常对照组。给药12周末测定大鼠空腹血糖、血清过氧化氢酶( CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px)、总胆固醇( TC)、甘油三酯( TG)水平；HE染色观察胸主动脉病理学变化；免疫组化、蛋白印记法检测胸主动脉VEGF的表达。结果联合用药组大鼠空腹血糖、血脂水平明显降低,血清CAT、GSH-Px水平明显升高,胸主动脉血管内皮生长因子( VEGF)表达得到抑制,主动脉病理观察显示联合用药组内膜增厚、内皮脂质沉积较模型组少。结论灵芝多糖联合二甲双胍对2型糖尿病大鼠主动脉病变有预防作用,其机制可能与抑制主动脉氧化应激,调节血脂,下调主动脉VEGF的表达有关。

新型Rho激酶抑制剂DL0805-1大鼠体内药代动力学初步研究

目的：建立一种高效液相色谱法( high performance liq-uid chromatography, HPLC)测定具有Rho激酶抑制作用的吲唑类化合物DL0805-1在大鼠血浆中血药浓度的方法,并用该法研究DL0805-1的药物代谢动力学。方法检测系统为Agilent 1200-DAD；色谱柱：Agilent TC-C18(4.6 mm ×250 mm,5μm)；检测波长：235 nm；柱温：35℃；流速：1 ml · min-1；流动相：乙腈与0.05% H3 PO4梯度洗脱；尾静脉给予大鼠DL0805-1,于不同时间点取血,测定血浆中DL0805-1的浓度并计算其药物代谢动力学参数。结果尾静脉给予DL0805-1后,在血浆中检测到原型及其代谢产物。其中, DL0805-1的半衰期为(2.34±1.42) h,达峰浓度为(3.51±0.44)mg·L-1,代谢产物半衰期为(1.27±0.45)h,达峰浓度为(3.55±0.22)mg·L-1。结论 DL0805-1在体内可能代谢成其它物质发挥生物学作用。该法灵敏度高,操作简便、准确,可用于大鼠血浆中DL0805-1的测定及药动学研究。

雷公藤甲素诱导鼻咽癌细胞凋亡作用

目的：探讨雷公藤甲素诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用及机制。方法 MTT测定雷公藤甲素对CNE-2Z细胞的抑制作用；碘化丙啶( propidium iodide, PI)染色测定雷公藤甲素对鼻咽癌细胞凋亡的影响；Western blot 测定葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP-78)、Akt的表达及Akt的磷酸化水平；ROS荧光探针-二氢乙啶测定细胞内活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)的水平。结果 MTT显示,雷公藤甲素对鼻咽癌细胞CNE-2Z的抑制作用随浓度增加及时间延长而增强；PI结果显示,雷公藤甲素能明显诱导鼻咽癌细胞的凋亡,25、50和100 nmol·L-1的雷公藤甲素作用细胞24 h, CNE-2Z 细胞的凋亡率分别为14.0%、26.9%和34.4%；Western blot显示,雷公藤甲素对CNE-2Z细胞GRP-78表达无明显影响,但可减弱Akt的表达及磷酸化水平；氧化应激实验结果表明,雷公藤甲素作用4h后,能增加鼻咽癌细胞CNE-2Z内ROS的水平。结论雷公藤甲素具有抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的作用,且具有浓度与时间依赖性。其机制可能是雷公藤甲素通过诱导氧化应激,抑制细胞内Akt的表达及其磷酸化,调节下游的信号通路,进而促进CNE-2Z细胞的凋亡。

应用Micro CT观察洛伐他汀和秋水仙碱对CCl4致肝损伤后小鼠骨代谢的影响

目的本实验应用Micro CT研究洛伐他汀和秋水仙碱对CCl4致肝损伤后小鼠骨代谢的影响,并比较二者的效果。方法体积分数40%的CCl4花生油皮下注射,建立小鼠肝损伤模型,同时,洛伐他汀按2.6 mg·kg-1,秋水仙碱按0.065 mg·kg-1每天1次灌胃给药,连续1个月,于实验结束后观察肝损伤血清学指标以及肝匀浆相关的抗氧化指标,并用Micro CT测定小鼠胫骨骨组织结构参数。结果单用CCl4小鼠肝指数明显增加,AST和ALT活性明显升高,肝匀浆中SOD活性和GSH-Px水平明显降低, MDA水平明显升高,且胫骨上段骨组织结构参数BVF、TMD值明显降低,SMI值明显升高,出现明显的骨质疏松症状。而洛伐他汀、秋水仙碱用药后对肝损伤没有明显影响,但洛伐他汀对肝损伤导致的骨丢失有明显的保护作用,秋水仙碱组则没有明显的保护作用。结论 CCl4致肝损伤后的小鼠出现骨质疏松症状,洛伐他汀用药后对CCl4致肝损伤的骨丢失有明显的预防作用。

4-苯基丁酸对糖尿病大鼠的心脏保护作用

目的：观察4-苯基丁酸(4-PBA)对糖尿病大鼠心脏功能的影响并初步探讨其机制。方法♂Sprague-Dawley ( SD)大鼠随机分成3组：对照组、糖尿病组和糖尿病+4-PBA组。单次腹腔注射链脲佐菌素(60 mg·kg-1)诱发大鼠糖尿病，在1型糖尿病模型制备成功后第5周开始每天给予大鼠4-PBA(1g·kg-1)灌胃，连续治疗20周。实验结束后，经右颈总动脉插管检测大鼠大动脉和左心室血流动力学变化，同时收集血清和心脏，比色法检测血糖，血清和心肌组织中超氧化物歧化酶( SOD)和一氧化氮合酶( NOS)活性，丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量。结果4-PBA治疗对糖尿病大鼠血糖、体重和心脏重量无明显影响，但可改善糖尿病大鼠血流动力学，表现为大动脉收缩压和舒张压、心率、左心室收缩压和左心室内压大上升和下降速率(± dp/dt)的轻度升高，左心室舒张压的轻度降低和舒张时程的缩短(P>0.05)，左心室弛缓时间明显缩短(P<0.05)。4-PBA治疗尚可明显升高糖尿病大鼠血清和心肌组织SOD和NOS活力以及NO含量，并降低MDA含量(P<0.05)。结论4-PBA治疗对糖尿病大鼠心脏有潜在保护作用，这一作用是通过改善糖尿病大鼠血流动力学和明显缓解其心脏舒张功能障碍而实现，并与其抑制动物体内氧化应激和促进心肌NO生成有关。

松果菊苷对帕金森病大鼠纹状体及海马细胞外液中单胺类神经递质的影响

目的：研究松果菊苷(echinacoside,ECH)对帕金森病(Parkinsonˊsdisease,PD)大鼠纹状体及海马细胞外液中单胺类神经递质的影响,以探讨ECH对脑神经保护作用的可能机制。方法采用双点注射6-羟基多巴胺损毁术制作PD模型,各组大鼠腹腔注射相应的药物或生理盐水连续4周,进行双靶点微透析程序,将透析液注入高效液相-电化学检测器(HPLC-ECD),测定各组大鼠纹状体及海马细胞外液中多巴胺(DA)、3,4-二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)、去甲肾上腺素(NE)及5-羟色胺(5-HT)的含量。结果与对照组相比,模型组大鼠纹状体及海马细胞外液中NE、DA、DOPAC、HVA、5-HT含量均明显降低(P<0.01)；与模型组相比,各给药组大鼠的纹状体及海马细胞外液中5种物质的含量均明显升高(P<0.05,P<0.01)；ECH高剂量组与阳性药MD组相差不大。结论ECH对PD大鼠纹状体及海马细胞外液中的单胺类神经递质的含量减少具有改善作用,对于PD具有一定的治疗作用,这是ECH对PD大鼠脑神经保护作用的可能机制之一。

沉默EZH2表达逆转人非小细胞肺癌顺铂耐药性

目的探讨沉默EZH2表达逆转人肺癌顺铂耐药性的作用及机制。方法以实时荧光定量 PCR 和 Western blot法检测人非小细胞肺癌A549及其顺铂耐药株A549/DDP细胞中EZH2的表达；以siRNA沉默EZH2的表达, MTT法检测细胞增殖力；流式细胞术检测细胞周期分布与凋亡；?-半乳糖苷酶染色法检测细胞的衰老； Western blot法检测细胞衰老通路 P14ARF、P16INK4a、P53、P21、CDK1、CDK2、Rb、E2F1和H3K27me3的表达。结果 A549/DDP细胞的EZH2在mRNA和蛋白质水平上的表达均明显高于A549细胞。沉默EZH2的表达并未引起细胞发生明显的凋亡现象,但G0/G1期比值明显升高(从0.53±0.08升到0.84±0.09, P <0.01),明显增加耐药株对顺铂的敏感性[IC50从(41.2±4.3)μmol·L-1降低到(19.4±3.3)μmol·L-1,P<0.01]。细胞呈衰老特征,细胞衰老通路的 P14ARF、P16INK4a、P53、P21、Rb表达上调,CDK1、CDK2、H3K27me3、E2F1表达下调。结论沉默EZH2的表达能诱导A549/DDP细胞衰老,逆转其对顺铂的耐药性,其机制与调节INK4a/ARF/Rb衰老通路有关。

高糖激活PI3 K/AKT/mTORC1通路诱导人肾小管上皮细胞骨桥蛋白的表达

目的：探讨高糖刺激上调人肾小管上皮细胞株( HK-2)骨桥蛋白(OPN)表达的分子机制。方法利用高糖(25 mmol·L-1)刺激 HK-2细胞,并应用特异性抑制剂、siRNA抑制PI3K和(或)mTOR活性,应用Real-time PCR检测OPN mRNA表达；Western blot 检测 OPN、p-AKT、p-S6、Raptor 和Rictor蛋白表达。结果高糖刺激呈时间依赖性上调HK-2细胞OPN 表达,其中, OPN mRNA 在刺激48h 后达高峰；OPN蛋白表达在72h达到高。此外,高糖刺激激活PI3K/AKT/mTORC1信号通路。利用 PI3K 特异性抑制剂LY294002、mTORC1特异性抑制剂 rapamycin 抑制 PI3K/AKT/mTOR通路后,HK-2细胞的OPN表达明显降低。进一步,siRNA敲低Raptor降低HK-2细胞中OPN蛋白的表达,而敲低Rictor对OPN蛋白表达无影响。结论高糖通过激活PI3K/AKT/mTORC1通路上调HK-2细胞OPN的表达。

哮喘大鼠血清褪黑素及海马褪黑素受体1的变化

目的：检测哮喘大鼠海马组织褪黑素受体1(melatonin receptor 1,MT1)的表达及血清褪黑素的水平,并探讨其在哮喘发生、发展过程中的作用机制。方法60只健康SD大鼠按随机原则分为对照组(20只)、哮喘组(40只)。通过卵清蛋白( OVA)致敏、激发建立哮喘大鼠模型,采用免疫组织化学、逆转录PCR及蛋白免疫印迹技术,检测不同时期哮喘组及对照组大鼠海马组织MT1的表达,并通过ELISA方法检测血清褪黑素水平的变化。结果与对照组比较,哮喘组大鼠海马组织MT1基因和蛋白表达水平均增加(P<0.05),而血清褪黑素水平降低,差异有统计学意义( P<0.05)。在哮喘组中,与哮喘d 5及d 10比较,d 17大鼠海马组织MT1表达增加(P<0.05),而哮喘组d 5与d 10间差异无显著性(P>0.05)。结论褪黑素及MT1可能参与哮喘的发病机制。在哮喘的发生、发展中,大鼠海马组织MT1的表达上调呈时间依赖性,可能是机体应对血清褪黑素水平降低的一种适应性代偿,在哮喘炎症反应和免疫应激过程中发挥神经保护和神经免疫调节作用。

甲基苯丙胺所致的大鼠神经毒性损伤及nNOS抑制剂的保护作用

目的：探讨神经元型一氧化氮合酶( nNOS)在甲基苯丙胺( METH)所致大鼠中枢神经系统氧化应激损伤中的作用机制。方法建立METH中毒动物模型,并给予nNOS抑制剂7硝基吲唑(7-NI)预处理,观察各组间动物行为学的变化,并检测nNOS表达、多巴胺( DA)含量、硝基化蛋白表达及凋亡等指标。结果 METH 组大鼠纹状体中nNOS 蛋白表达水平明显升高,而METH +7-NI 组nNOS 表达水平较 METH 组明显降低。METH 组DA 明显降低(P <0.01),而 METH +7-NI 组、7-NI 组与对照组比较,DA 无差异(P >0.05)。METH 组硝基化蛋白含量明显升高(P <0.01),而 METH +7-NI 组硝基化蛋白表达较METH 组明显降低(P <0.05)。METH 组与对照组相比,凋亡细胞数明显升高(P <0.01),而7-NI 对凋亡的增高表现出明显的保护作用(与 METH 组相比P <0.01)。METH 组和METH +7-NI 组的动物刻板行为评分均明显高于7-NI 和对照组(P <0.01), METH、METH +7-NI 组间差异无显著性(P >0.05)。结论 METH 可导致大鼠大脑纹状体nNOS 蛋白表达水平增高、DA 含量的降低、硝基化蛋白水平升高及细胞凋亡增多等多种神经毒性表现,7-NI 能部分减轻其神经毒性作用。METH 明显增加大鼠的不自主刻板运动,而应用7-NI 预处理后,对刻板行为的改善并不明显。

稳定表达CRFR1的HEK293细胞株建立与功能鉴定

目的：建立稳定表达CRFR1的HEK293细胞株,并鉴定cAMP评价体系构建是否成功。方法采用Lipofectamine 2000将CRFR1质粒转染至HEK293细胞中,经G418筛选单克隆阳性细胞,采用Western blot技术、RT-PCR法、免疫荧光法证实稳定表达CRFR1细胞株构建成功。并用CRF刺激稳定表达 CRFR1的 HEK293细胞株,绘制 CRF 刺激HEK293-CRFR1细胞释放cAMP的量效曲线。结果 West-ern blot、RT-PCR、免疫荧光结果表明, CRFR1受体在HEK293细胞系中成功表达。 cAMP释放量效实验显示,CRF刺激 HEK293-CRFR1细胞释放 cAMP 的 EC50为(5.64±0.05)×10-10 mol · L-1。结论成功建立了稳定表达CRFR1的HEK293细胞株,并且cAMP含量评价体系构建成功,为研究CRFR1的生物学功能及筛选CRFR1受体靶向药物奠定了基础。

JAK2/STAT3调节抗增殖蛋白表达在H2 S后处理心肌细胞中的保护作用

目的：探讨JAK2/STAT3信号通路是否通过调节抗增殖蛋白而在硫化氢( H2 S)后处理中减轻缺氧/复氧( H/R)心肌细胞的损伤。方法体外培养的原代新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型。随机分为6组：正常对照组( Nor-mal组)、缺氧/复氧组( H/R组)、硫化氢后处理组( NP组)、硫化氢后处理+AG490组( N+A组)、AG490组( AG组)、溶媒组( DMSO组)。分别在缺氧前、复氧2 h检测心肌细胞的存活率、培养液中LDH的释放；复氧末,采用流式细胞术观察各组心肌细胞的凋亡情况；应用Western blot方法检测t-STAT3、p-STAT3、PHB蛋白的表达情况。结果缺氧前,组间各个指标检测值差异未见统计学意义( P>0.05)。复氧2 h,与H/R组比较,NP组心肌细胞存活率明显提高了( P<0.05),LDH的释放以及细胞凋亡率明显降低(P<0.05)；同时p-STAT3、PHB蛋白表达水平明显升高。 AG490逆转了H2 S后处理产生的心肌保护效应,使N+A组细胞活力及p-STAT3、PHB的表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论 JAK2/STAT3信号通路可能通过上调抗增殖蛋白的表达而在硫化氢( H2 S)后处理中减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。

ABCB1基因多态性对阿片类药物依赖和镇痛耐受的影响及机制

药物依赖是当前神经科学研究的热点问题,其病因错综复杂。近年来,药物依赖与ATP结合盒 B亚家族成员1转运蛋白( ATP-binding cassette subfamily B member 1 trans-porter, ABCB1)基因多态性的关系越来越受到关注,特别是位于26号外显子区域的3435C>T。该文就阿片类药物依赖和镇痛耐受与ABCB1基因多态性的关系进行综述,对于深入阐明药物依赖的机制以及指导美沙酮个体化治疗具有重要意义。

G蛋白偶联雌激素受体在雌激素相关肿瘤发生中的作用

在经典的雌激素核受体α和?之外，雌激素或雌激素样物质也可以经过膜受体，即 G 蛋白偶联雌激素受体( GPER)发挥功能。 G蛋白偶联雌激素受体是雌激素非基因通路信号转导过程的重要介导因子，在雌激素相关肿瘤细胞的发生和治疗中具有重要的意义。现针对G蛋白偶联雌激素受体在雌激素相关肿瘤细胞中介导的效应及有关机制的研究进展进行综述。

丹参酮类抗肿瘤作用与机制研究进展

丹参酮类是从传统中药丹参( Salvia miltiorrhiza Bunge)及其同属植物中分离到的一大类脂溶性天然产物，包括丹参酮ⅡA、隐丹参酮、丹参酮I、二氢丹参酮I等多种成分。丹参酮类与丹酚酸类均被证实是丹参的主要特征性成分和活性成分，具有较明显的心脑血管保护活性。近年来研究发现，丹参酮类在体内外有较好的抗肿瘤活性。该文就丹参酮类化合物尤其是丹参酮ⅡA的抗肿瘤作用与机制的新研究进展作一综述，以期为该类化合物的研究和开发提供参考。

忍冬属药材药效成分及药理作用研究进展

该文整理了迄今为止国内外有关忍冬属5种药材化学成分和药理作用的研究结果。5种药材均含有有机酸类(绿原酸)、黄酮类(木犀草苷)、三萜皂苷类、环烯醚萜类、挥发油类物质，均具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗氧化、保肝、调节免疫等药理作用。5种药材所含的主要药效成分和药理作用没有明显区别。不同化学成分具有某些相同的药理作用。

肠道菌群失调与结肠癌发生发展之间关系的研究进展

肠道菌群是机体重要的组成部分，正常状况下肠道菌群保持稳态，在促进营养物质消化吸收、维持肠道正常生理功能、调节机体免疫等众多生命活动中发挥重要的作用。但当体内外环境发生改变，如年龄、饮食习惯、肥胖等代谢性疾病以及抗生素等药物均会造成菌群失调。近年来，很多研究发现肠道菌群失调可以引发多种疾病，其中结肠癌的发生、发展与肠道菌群失调关系密切。同时，有研究资料表明，通过改善肠道菌群的失调状态可降低结肠癌的发生率和抑制结肠癌的生长恶化，但是具体的作用机制尚无清晰的认识。该文就近年来国内外关于肠道菌群失调与结肠癌发生、发展研究的有关热点问题及治疗进行概述，为肠道菌群研究和结肠癌的治疗提供理论参考。

胡颓子叶不同提取物药理活性的比较研究

胡颓子( Elaeagnus pungens Thunb.)为胡颓子科胡颓子属植物，别名：卢都子、半含春、甜棒子。中医将其用作平喘药[1]，胡颓子叶收载于1977年版《中国药典》一部，是胡颓子科植物胡颓子的干燥叶[2]，具有止咳平喘、止血、解毒之功效，用于主治肺虚咳嗽、气喘、咳血、吐血、痈疽、痔疮肿痛等症[3-6]。对胡颓子叶不同提取物进行镇咳、平喘、祛痰活性比较，为进一步对胡颓子叶的化学成分及药理活性进行深入研究提供实验依据。

2,3-吲哚醌对大鼠离体胸主动脉舒缩功能的影响

2,3-吲哚醌(2,3-indolinedione,isatin,ISA)为吲哚类衍生物,又名靛红,是近年发现存在于人和动物体内的一种内源性活性物质,且广泛存在于海洋生物如龙虾和十字花科植物中[1-2]。基础及临床研究表明,ISA 在人体不同器官和体液中均有分布[3-5]。研究表明,ISA使动物产生类似焦虑的行为,并且在焦虑和紧张的状态下,心脏、脑、血浆中其水平会升高[6-8]。然而,目前ISA对胸主动脉舒缩功能的调控作用及机制尚不十分清楚。因此,本研究利用离体血管环实验模型,探讨ISA对大鼠离体胸主动脉舒收缩功能的影响及机制,为心血管疾病的防治提供新的理论依据。

对乙酰氨基酚SD大鼠毒代动力学研究及P450的影响

两种大鼠哮喘模型的比较

目的：观察OVA致敏、pertussis致敏与二者共同致敏这3种致敏方法对大鼠哮喘模型复制的影响,以便确定一种较成功的哮喘大鼠模型。方法用3种方法分别致敏大鼠,抗原攻击后,用Medlab生物信号采集处理系统记录仪记录甲酰胆碱激发的气道高反应性。行支气管肺泡灌洗和腹腔灌洗,计数支气管肺泡灌洗液中细胞总数并分类,观察肺组织病理改变。结果 OVA+pertussis共同致敏、OVA单独致敏和pertussis单独致敏都可引起一定的大鼠肺功能下降、炎症细胞浸润增加以及肺组织病理改变,OVA+pertussis共同致敏效果优于OVA单独致敏和pertussis单独致敏。结论 OVA+pertussis共同致敏,再进行雾化攻击是一种比较成功的哮喘大鼠模型。

敬告读者