首页 > 文献资料
-
葛根素对2型糖尿病大鼠脂肪组织ADRP基因表达的影响
目的:观察葛根素(Pue)对实验性2型糖尿病(2-DM)大鼠脂肪组织中脂肪分化相关蛋白(ADRP)基因mRNA表达的影响.方法:wistar大鼠喂以高糖高脂饮食伴尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(STZ)25 mg·kg-1复制2-DM大鼠模型,将造模大鼠随机分为模型组(腹腔注射丙二醇)和3个Pue治疗组(腹腔注射40,80,160 mg·kg-1),另选lO只大鼠为正常组.各组大鼠连续腹腔注射6周后,空腹取材,测定空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)水平,并计算胰岛素抵抗指数(IR);同时以RT-PCR法检测脂肪组织ADRP基因mRNA的表达.结果:与2-DM模型组比较,Pue高、中剂量组大鼠脂肪组织ADRP基因mRNA表达显著降低(P<0.05);Pue高、中、低剂量组大鼠FBG,IR及Pue高、中剂量组大鼠FINS显著降低(P<0.05或P<0.01).结论:Pue可通过降低2-DM大鼠ADRP基因mRNA表达,降低胰岛素抵抗水平,从而降低2-DM大鼠血糖.
-
HO-1通过Adipophilin途径对脂肪干细胞在低氧无血清条件下的保护机制探讨
目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对脂肪干细胞(ADSCs)在低氧无血清的条件下的保护机制.方法 分离培养SD大鼠ADSCs,取第三代ADSCs分为四组:对照组(Control,Con);低氧无血清(serum-free and oxygen deprivation,SOD)组;慢病毒介导的HO-1组;HO-1+Znpp组.蛋白印迹(Western-blot)法检测四组细胞外信号调节蛋白激酶1/2(ERKl/2)、脂肪分化相关蛋白(Adipophilin,Adi)的表达量;用ERK1/2抑制剂PD98059孵育四组细胞,检测各组细胞中ERKl/2、Adipophilin的变化情况.ELISA法测定四组细胞培养上清液中TNF-a,hs-CRP含量.结果 (1)对照组ERK 1/2、Adipophilin的表达量极低;与对照组相比,SOD组ERK 1/2、Adipophilin的表达量显著升高(P＜0.01),HO-1组与SOD组相比ERK 1/2、Adipophilin的表达量显著降低(P＜0.05);HO-1+Znpp组与HO-1组相比ERK 1/2、Adipophilin的表达量显著升高(P＜0.05)(2)用ERK 1/2抑制剂PD98059孵育四组细胞,较孵育前:SOD组ERK l/2、Adipophilin的表达量显著降低(P＜0.01);HO-1组、HO-1+Znpp组ERK1/2、Adipophilin的表达量降低,但差异无统计学意义(P＞0.05);(3) SOD组TNF-a,hs-CRP浓度较对照组显著升高(P＜0.01);HO-1可显著降低TNF-a,hs-CRP分泌,而这种保护效应可被HO-1抑制剂锌原卟啉(Znpp)所逆转;(4)随着Adipophilin的表达减少,TNF-a,hs-CRP浓度相应降低.结论 HO-1降低ADSCs在低氧无血清条件下的凋亡,其机制与抑制ERK 1/2激活,降低Adipophilin表达,从而减少炎症因子TNF-a,hs-CRP分泌有关.
-
脂肪分化相关蛋白在妊娠期糖尿病孕妇脂肪和胎盘的表达及意义
妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是指妊娠期发生或首次发现的糖代谢异常[1].GDM孕妇可伴有各种脂质代谢功能紊乱,有理论认为从母体到胎儿的脂质转运异常是导致母儿不良结局的重要原因.但其中胎盘的作用以及脂质在其中的转运过程尚不完全清楚.脂肪分化相关蛋白(adipose differentiation-related protein,ADRP)是一种反映细胞内脂质积聚及与脂肪积聚相关疾病的灵敏而特异的指标.该蛋白对脂肪组织的分化和功能非常重要,特别是与肥胖及胰岛素抵抗有关.研究认为糖尿病可能会导致不同组织中相关脂肪代谢基因的表达改变.因此本研究拟探讨ADRP在GDM孕妇脂肪组织及胎盘组织中的表达及其意义.
-
豹皮樟总黄酮体外对酒精性脂肪肝大鼠肝细胞脂肪变性的影响
目的 探讨豹皮樟总黄酮(TFLC)对酒精性脂肪肝(AFL)大鼠肝细胞脂肪变性的影响.方法 大鼠自由饮用含乙醇饮料,起始浓度为5%,依次增加为10%,15%,20%,25%,30%和35%,每个浓度持续1周,第8周~第12周浓度为40%的方法制备大鼠AFL模型,原位二步灌流法分离AFL大鼠肝细胞,用细胞角蛋白18(CK18)抗体进行肝细胞鉴定.肝细胞培养16 h后加入TFLC 1,10和100 mg·L-1或谷胱甘肽(GSH)10 mmol·L-1孵育48 h.MTT法测定肝细胞存活,用试剂盒方法检测肝细胞丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性以及肝细胞内甘油三酯(TG)含量,免疫组化和逆转录PCR方法测定脂肪分化相关蛋白(ADRP)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)mRNA和蛋白表达的变化.结果 TFLC对正常大鼠肝细胞存活无明显影响.TFLC 100 mg·L-1明显增加AFL大鼠肝细胞存活(P<0.05).AFL大鼠肝细胞培养液ALT和AST活性分别为(63±12)和(74±19)U·L-1,TFLC 10和100 mg·L-1分别将ALT活性降低到(42±12)和(44±8)U·L-1(P<0.05),将AST活性降低到(46±14)和(47±8)U·L-1(P<0.05).AFL大鼠肝细胞内TG含量为(2.3±0.6)mmol·L-1,TFLC 10和100 mg·L-1分别将AFL肝细胞内TG含量降低到(1.4±0.3)和(1.5±0.5)mmol·L-1(P<0.05).AFL肝细胞ADRP和PPARγ阳性表达细胞分别为(41±6)%和(37±10)%,TFLC 100 mg·L-1治疗组ADRP和PPARγ阳性表达细胞分别降低为(26±6)%(P<0.01)和(25±5)%(P<0.05).结论 TFLC可能通过改善肝细胞活性、减少肝细胞内TG生成、抑制ADRP表达及调控肝细胞PPARγ的表达,从而改善AFL大鼠肝细胞的脂肪变性.
-
肿瘤坏死因子-α上调大鼠分化脂肪细胞脂肪分化相关蛋白水平及其机制
目的:研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对大鼠原代分化脂肪细胞内脂肪分化相关蛋白(adipose differentiation-related protein,ADRP)表达的影响及其机制.方法:以SD大鼠附睾来源的原代分化脂肪细胞为对象,设正常对照组和TNF-α(25μg/L)干预组.细胞孵育后测定培养基中甘油含量作为评价脂肪分解的指标.Western blot检测脂滴包被蛋白perilipin和ADRP的蛋白表达.用免疫荧光染色以及脂滴染色的方法,观察脂肪细胞内脂滴的形态变化以及蛋白在细胞内的定位.结果:在脂肪细胞分化5～8 d,TNF-α可显著刺激其脂肪分解,该作用在孵育8 h开始出现并持续到48 h.Western blot结果显示TNF-α增加ADRP蛋白表达,减少perilipin蛋白并增加其磷酸化水平.形态学结果显示TNF-α引起脂滴碎裂,增加的ADRP与perilipin一起包被在细胞内碎裂脂滴表面.结论:TNF-α慢性刺激脂肪分解过程中引起脂滴碎裂,增加脂滴表面包被蛋白ADRP,而该蛋白表达增加可能与脂滴碎裂相关.
-
脂肪分化相关蛋白的研究进展
脂肪分化相关蛋白(ADRP)是细胞内脂肪积聚的一个特异指标.它在未分化的脂肪细胞中含量很低,在分化过程中急剧增加.ADRP不仅参与巨噬细胞中脂质的代谢,刺激纤维母细胞中脂质的聚集和脂滴的形成,而且也参与肺泡Ⅱ型细胞与纤维母细胞间的脂质转移,促进脂肪酸的摄取.ADRP的调控与环氧化酶抑制物、长链脂肪酸及某些药物有关.
-
葛根素对2型糖尿病大鼠脂代谢及脂肪分化相关蛋白基因表达的影响
目的 观察葛根素(Pue)对2型糖尿病(T2DM)大鼠脂代谢及脂肪分化相关蛋白(ADRP)基因mRNA表达的影响.方法 大鼠高糖高脂饮食伴尾静脉注射小剂量链脲佐菌素(STZ)25mg/kg复制T2DM大鼠模型,将造模大鼠随机分为模型组(腹腔注射丙二醇)和3个Pue治疗组(腹腔注射40、80、160mg/kg的Pue),另选10只大鼠为正常对照组(腹腔注射丙二醇).持续腹腔注射6周后,测定各组大鼠空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)和血脂水平,并计算胰岛素敏感指数(ISI);同时以RT-PCR法检测脂肪组织ADRP基因mRNA水平.结果 模型组大鼠FBG、FINS、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA)水平及ISI与对照组比较,差别有统计学意义(P<0.05);Pue高、中剂量组大鼠FBG、 FINS、 TC、 TG、 LDL-C、 FFA水平及ISI与模型组比较,差别有统计学意义(P<0.05),Pue低剂量组大鼠FBG、 TC、 TG、 FFA水平及ISA与模型组比较,差别有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,模型组大鼠脂肪组织ADRP基因mRNA表达显著增高(P<0.01),Pue高、中剂量组大鼠ADRP基因mRNA表达较模型组下降(P<0.05).结论 Pue可通过降低T2DM大鼠脂肪组织ADRP基因mRNA表达,改善糖脂代谢紊乱和胰岛素抵抗.
-
黄芪注射液对糖尿病非酒精性脂肪肝模型大鼠血糖、血脂及肝脏脂肪分化相关蛋白表达水平的影响
目的：研究黄芪注射液对糖尿病非酒精性脂肪肝模型大鼠血糖、血脂及肝脏脂肪分化相关蛋白表达水平的影响。方法采用高糖高脂结合链脲佐菌素诱导 Wistar 大鼠糖尿病非酒精性脂肪肝模型；将大鼠随机分为对照组、模型组及黄芪注射液干预组,分别于实验8周、12周及16周检测大鼠血清血糖、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)的表达水平；HE 切片观察大鼠肝脏病理形态的改变；免疫印迹(western blot)检测大鼠肝脏脂肪分化相关蛋白(ADRP)的表达水平。结果高糖高脂结合链脲佐菌素大鼠血糖、TG、TC 增高,肝脏脂肪发生变性,糖尿病非酒精性脂肪肝模型构建成功。实验12周,干预组大鼠血清血糖、TG、TC 水平均低于模型组,但差异无统计学意义(P >0.05),肝脏脂肪变性程度与模型组大鼠基本相当,炎细胞浸润程度较模型组程度轻；实验16周,干预组大鼠血清血糖及 TG 水平明显低于模型组,差异有统计学意义(P <0.05),肝脂肪变性程度较模型组明显减轻,炎细胞浸润基本消失；与正常对照组相比,NAFLD 大鼠肝脏 ADRP 水平显著增高(P <0.05),通过黄芪注射液治疗后,NAFLD 模型肝脏 ADRP 的表达水平下调。结论黄芪注射液可改善 NAFLD 大鼠血糖血脂代谢紊乱,减轻肝脏的炎症反应和变性,具有一定的肝脏保护作用。
-
巨噬细胞在动脉粥样硬化形成中的作用
巨噬细胞是机体免疫系统的重要一员,具有趋化、吞噬、免疫及分泌等功能.在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)形成过程中,巨噬细胞受低密度脂蛋白氧化修饰过程中的炎性因子趋化,大量吞噬氧化低密度脂蛋白,变为“泡沫细胞”,进而导致动脉粥样硬化病变,并通过免疫及分泌功能生成肿瘤坏死因子α等物质加速病变的进展,其功能变化与动脉粥样硬化形成和发展息息相关.ADRP作为PAT家族蛋白中的一员,因在脂滴形成中的重要作用而受到广泛关注.ADRP是动脉粥样硬化过程中的一个关键分子,不仅在病变中起着提高炎症反应与调节脂质代谢的双重作用,而且通过限制泡沫细胞的形成,而影响了动脉粥样硬化的走向.
-
糖尿病大鼠肾脏组织中XBP-1 s和ADRP的表达
目的：探索糖尿病大鼠肾脏拼接型X盒子结合蛋白1(spliced X-box binding protein-1, XBP-1s)和脂肪分化相关蛋白( adipose differentiation related protein, ADRP)在糖尿病大鼠肾脏组织中的表达及二者表达的相关性。方法腹腔注射STZ成功构建糖尿病大鼠模型,正常喂养2个月后,采用免疫组化和Western blot技术检测大鼠肾脏组织中XBP-1s和ADRP的表达。结果 XBP-1s和ADRP表达均定位于肾小管上皮细胞,对照大鼠相比,糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中XBP-1s和ADRP表达均显著增高,分别升高2.017倍和1.544倍,差异有统计学意义(t=2．648、2．741,P<0．05)。进一步行相关性分析显示：大鼠肾脏组织中XBP-1s表达增强往往伴随着ADRP的表达增强(相关系数为0．723,P<0．05)。结论 XBP-1s表达升高可能是导致糖尿病大鼠肾脏组织中ADRP上调的因素之一。
关键词： 糖尿病 肾小管上皮细胞 大鼠 拼接型X盒子结合蛋白1 脂肪分化相关蛋白 -
血清TNF-α升高对糖尿病肾脏脂质积聚的影响研究
目的：明确糖尿病小鼠血清TNF-α升高与肾脏脂质代谢的关系。方法 CD1小鼠按体重腹腔注射链脲佐菌素(150 mg·kg-1),72 h后空腹血糖大于16.7 mmol·L-1者确定为1型糖尿病模型,饲养1个月后,采用ELISA方法检测血清中TNF-α水平,免疫组织化学和Western blot方法检测SREBP-1和ADRP的表达。结果与正常对照小鼠相比,糖尿病小鼠血清 TNF-α水平明显升高,为正常对照小鼠的7.73倍。 SREBP-1和ADRP主要表达于肾小管上皮细胞,糖尿病小鼠肾脏SREBP-1前体片段、成熟片段和 ADRP表达明显高于正常对照小鼠,分别是对照组的2.31倍、1.74倍和1.72倍。小鼠血清TNF-α水平和肾脏ADRP表达的相关性分析证实二者间存在正相关,相关系数为0.914。结论糖尿病小鼠血清TNF-α升高可能是导致肾脏脂质积聚的因素之一。
-
葛根素对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及脂肪分化相关蛋白基因表达的影响
目的 观察葛根素对实验性2型糖尿病(2-DM)大鼠胰岛素抵抗及脂肪分化相关蛋白(ADRP)基因mRNA表达的影响.方法 采用高糖高脂饮食伴尾静脉注射小剂量链脲佐茵素(STZ)复制2-DM大鼠模型.将大鼠随机分为正常对照组、2.DM模型组和高、中、低剂量药物组(分别腹腔注射葛根素注射液160,80,40 nag·kg-1·d-1).6用后,测定空腹血糖(FPG)、血脂、血清胰岛素(FINS),并计算胰岛素敏感指数(ISI),同时以逆转录-聚合本酶链反应(RT-PCR)法检测脂肪组织ADRP基因mRNA水平.结果 与2-DM模型组比较,高、中、低剂量药物组FPG、FINS、游离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)含量显著降低,ISI明显升高(P＜0.05或P＜0.01);高和中剂量药物组大鼠脂肪组织ADRP基因mRNA表达显著降低.结论 葛根素可通过下调2-DM大鼠脂肪组织ADRP基因mRNA表达,降低胰岛素抵抗水平,改善脂代谢紊乱.
-
血清淀粉样P物质对泡沫细胞形成的影响
目的 通过观察泡沫细胞形成、脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达的情况,探讨血清淀粉样P物质(SAP)对泡沫细胞发生发展的影响.方法 利用THP-1细胞,通过佛波酯(PMA)处理48 h,诱导其分化成为巨噬细胞,再用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)联合脂多糖(LPS)诱导其成为泡沫细胞作为对照组,实验组在上述过程中加入不同浓度SAP(10、20 mg/L)进行干预.采用油红O染色分析SAP对泡沫细胞形成的影响,观察脂质蓄积;同时利用Bodipy493/503染色,在荧光显微镜下观察泡沫细胞内脂滴形态及数量;提取上述泡沫细胞内的脂质,通过试剂盒定量测定细胞内甘油三酯(TG)和胆固醇酯(CE)含量;利用Western blot对脂滴表面相关的蛋白进行分析,如乙酰辅酶A羧化酶(ACCl)、脂肪分化相关蛋白(ADRP)、47 kDa的尾连蛋白(TIP47)、组蛋白去甲基化酶(JMJD3)、脂肪酸合成酶(FAS)的表达水平.结果 油红O染色和Bodipy493/503染色显示,实验组细胞内的脂滴大小更大、数量更多,且20 mg/L SAP干预组较10 mg/L SAP干预组趋势更明显;脂质定量检测结果显示,实验组TG、CE含量增高,20 mg/L SAP干预组较10 mg/L SAP干预组更高;Western blot结果显示,SAP能够增强ADRP、TIP47、JMJD3、FAS的表达水平,除了FAS在不同SAP浓度干预组表达水平一样外,其余均随着SAP浓度的增加表达水平也增强.结论 SAP能够促进泡沫细胞形成,增强脂质蓄积;SAP能够增强相关脂蛋白的表达水平.
-
脂肪分化相关蛋白通过抑制中性胆固醇酯水解酶表达促进RAW264.7细胞内脂质积蓄
目的 探讨RAW264.7巨噬细胞中脂肪分化相关蛋白(adipophilin)调控中性胆固醇酯水解酶(nCEH)表达进而介导脂质积蓄的作用机制.方法 用已成功构建的沉默与高表达Adipophilin的逆转录病毒质粒载体转染包装细胞PA317,继而收集病毒液感染RAW264.7巨噬细胞,筛选出Adipophilin沉默细胞株和高表达细胞株.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹分析技术(Western blot)分别检测nCEH的mRNA和蛋白表达水平,液体闪烁计数仪、高效液相色谱法检测细胞内胆固醇流出及胆固醇酯含量.结果 ①高表达Adipophilin的细胞组胆固醇、胆固醇酯含量明显高于空白对照组(P＜0.01),而沉默Adipophilin表达的细胞组则显著低于空白对照组(P＜0.01),Adipophilin可抑制nCEH mRNA和蛋白的表达.②用100 nmol/L蛋白激酶Cδ(PKCδ)激动剂佛波酯(PMA)孵育高表达Adipophilin的RAW264.7细胞30 min后,nCEH的mRNA与蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而用100 nmol/L PKCδ抑制剂卡马拉素(Rottlerin)同样孵育30 min后,nCEH的表达水平较对照组增高(P＜0.05).结论 Adipophilin促进巨噬细胞内脂质积蓄可能通过抑制nCEH表达来实现,在这一调控机制中PKCδ发挥了重要作用.
-
巨噬细胞荷脂过程中脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1及中性胆固醇酯水解酶相互结合
目的 探讨脂肪分化相关蛋白是否与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1或中性胆固醇酯水解酶相互结合.方法 50 mg/L氧化型低密度脂蛋白孵育RAW264.7细胞0、0.5、1、3、6h,使用逆转录-聚合酶链反应及蛋白免疫印迹分析技术检测脂肪分化相关蛋白、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶的mRNA及蛋白的表达;应用免疫共沉淀技术检测脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1或中性胆固醇酯水解酶是否相互结合.结果 随着氧化型低密度脂蛋白与RAW264.7细胞孵育时间的延长,逆转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分析显示,脂肪分化相关蛋白、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶的mRNA和蛋白质随着时间的延长而增多,与0h相比,差异有显著性(P＜0.05,n=3).免疫共沉淀实验显示,RAW264.7细胞与氧化型低密度脂蛋白孵育0、0.5、1、3h时脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1结合,6h时脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1不结合;孵育0、0.5、1h时脂肪分化相关蛋白与中性胆固醇酯水解酶不结合,3、6h时与中性胆固醇酯水解酶结合.结论 在荷脂的RAW264.7细胞中脂肪分化相关蛋白与中性胆固醇酯水解酶及酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1相互结合.脂肪分化相关蛋白与酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1和中性胆固醇酯水解酶在细胞内脂质代谢中可能协同作用.
-
Calphostin C抑制脂肪分化相关蛋白诱导的ACAT1表达
目的 我们已经发现adipophilin通过改变乙酰辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)的表达来促进细胞内脂质蓄积,病理状态下形成泡沫细胞,成为动脉粥样硬化的始动因素.本研究旨在探讨该过程所涉及的信号通路,阐明adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制.方法 通过克隆adipophilin基因,构建逆转录病毒载体pQCXIP-HA-Adi,使用siRNA技术构建pSuper-retro-adipophilin siRNA逆转录病毒载体,包装病毒后,感染RAW264.7细胞,筛选后获得高或低表达adipophilin的细胞.将该细胞分别与300 nmol/L PKC抑制剂Calphostin C孵育16 h或同时再加入50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)共孵育,应用RT-PCR和Western blot检测细胞内ACAT1的表达.当低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育时,在不同的时间点取样,RT-PCR和Western blot检测各时间点细胞内ACAT1的表达.结果 高表达adipophilin细胞中ACAT1表达增加,低表达adipophilin细胞中ACAT1表达减少.无论在高或低表达adipophilin的细胞中,Calphostin C能够抑制ACAT1的表达,与不孵育Calphostin C组相比差别有显著性.与ox-LDL孵育使高表达adipophilin的细胞荷脂,同样能够发现Calphostin C抑制ACAT1的表达.低表达adipophilin的细胞与Calphostin C共孵育1h后,ACAT1 mRNA开始下降；孵育8h后,ACAT1蛋白开始下降；孵育16 h后ACAT1 mRNA及蛋白表达均明显下降,与对照组相比差别有显著性.高及低表达adipophilin或负荷脂质状态下,Calphostin C能够时间依赖性的抑制ACAT1的表达.结论 adipophilin引起细胞内脂质积聚的机制可能是,PKC信号分子作用于adipophilin,并进一步影响ACAT1的表达,终导致细胞内脂质积聚.
-
脂肪分化相关蛋白促进RAW 264.7细胞内酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1高表达
目的 观察高表达脂肪分化相关蛋白细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达的变化,阐明脂肪分化相关蛋白促进细胞内脂质蓄积的机制.方法 构建的pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒载体转染PA317包装细胞,获得pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒.用病毒感染RAW 264.7细胞, Puromycin筛选后获得稳定高表达脂肪分化相关蛋白的RAW264.7细胞株.应用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法检测经感染后细胞内脂肪分化相关蛋白和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达.并应用阿托伐他汀处理高表达脂肪分化相关蛋白的RAW 264.7细胞,观察酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达的改变.结果 用pQCXIP-HA-Adi逆转录病毒感染RAW 264.7细胞后,脂肪分化相关蛋白和酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1 mRNA和蛋白表达明显升高,而对照组表达无明显变化.加入阿托伐他汀后,即在去除底物对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达影响的情况下,高表达脂肪分化相关蛋白细胞内酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达仍升高.结论 高表达脂肪分化相关蛋白可明显上调RAW 264.7细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1的表达.
-
脂肪分化相关蛋白通过酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1促进巨噬细胞脂质蓄积
目的 观察高表达脂肪分化相关蛋白对酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达及脂质蓄积的影响.方法 构建表达载体pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白,使用THP-1巨噬细胞,通过瞬时转染使之高表达脂肪分化相关蛋白,依次用氧化型低密度脂蛋白和(或)丙泮尼地处理.逆转录聚合酶链反应和Western blot检测酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1及脂肪分化相关蛋白的表达,油红O染色和高效液相色谱检测细胞内脂质的蓄积.结果 随着氧化型低密度脂蛋白浓度的增加,巨噬细胞脂肪分化相关蛋白及酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达明显增强,两者呈伴行关系.丙泮尼地能抑制酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达上调,且随处理时间延长,其表达逐渐减少,并且能减少细胞内脂滴生成.与对照组相比,瞬时转染pcDNA3.1-HA-脂肪分化相关蛋白能使脂肪分化相关蛋白表达明显升高.高表达脂肪分化相关蛋白的巨噬细胞能使酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达增加,促进细胞内胆固醇酯蓄积,并协同增强氧化型低密度脂蛋白的作用.加入丙泮尼地后,高表达脂肪分化相关蛋白的作用被减弱.结论 高表达脂肪分化相关蛋白能上调THP-1巨噬细胞酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1表达,促进细胞内脂质蓄积.脂肪分化相关蛋白可能通过酰基辅酶A∶胆固醇酰基转移酶1促进细胞内胆固醇酯的蓄积.
-
脂肪分化相关蛋白在兔动脉粥样硬化模型中的表达
研究脂肪分化相关蛋白与动脉粥样硬化发生和发展的关系.使用高胆固醇饲料喂养新西兰白兔12周,复制动脉粥样硬化模型.用生物化学法测定血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯及动脉壁胆固醇含量;苏丹Ⅳ染色观察主动脉斑块面积;HE染色观察主动脉及肝脏的病变;免疫组织化学法观察脂肪分化相关蛋白在主动脉病变区及肝脏中的表达. 结果发现,喂高胆固醇饲料的动物血清总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯及动脉壁胆固醇含量显著升高,主动脉病变面积为40.1%±7.3%,脂肪分化相关蛋白在主动脉动脉粥样硬化病变区免疫组织化学染色呈强阳性,在肝脏中染色呈阴性.喂高胆固醇饲料能成功复制出兔动脉粥样硬化模型.脂肪分化相关蛋白在兔动脉粥样硬化病变中表达明显增高,提示脂肪分化相关蛋白与动脉粥样硬化的发生发展密切相关.
-
脂肪分化相关蛋白对泡沫细胞形成中脂质蓄积的影响
动脉粥样硬化是一种常见的心血管代谢性疾病,它的主要并发症心肌梗死与缺血性脑卒中已经成为世界首要的死因.泡沫细胞的形成在动脉粥样硬化的发生和发展中起到关键作用.这些细胞的产生与细胞内脂质蓄积密切相关.脂肪分化相关蛋白(PLIN2)能够促进细胞内脂质蓄积.本文主要阐述在泡沫细胞形成中,PLIN2对于脂质蓄积的影响,为动脉粥样硬化防治提供新的思路.
