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巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢与动脉粥样硬化
巨噬细胞源性泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化形成和发展中的早期变化.巨噬细胞向泡沫细胞的转变与巨噬细胞清道夫受体介导脂蛋白的吸收,ATP结合盒转运子介导胆固醇的流出及细胞内胆固醇的代谢机制相关.对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢的研究,将为防治动脉粥样硬化寻找新的突破口.
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细胞因子对肌源性泡沫细胞形成中酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1的影响
目的 动脉粥样硬化是一个炎性过程,探讨炎性细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)是否通过调节酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)的活性,参与泡沫细胞形成,进一步探讨动脉粥样硬化形成的机制.方法 在小鼠主动脉平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞中分别加入IL-1β(10 μg/L)和TNF-α(20μg/L),孵育24 h,用放射性同位素标记的方法检测ACAT-1的活性.结果 ①与平滑肌细胞相比,泡沫细胞AcAT-1酶活性明显增加[(84.8±16.7)比平滑肌细胞(48.5±12.5)nkat/g,P<0.05].②TNF-α对平滑肌细胞和平滑肌源性泡沫细胞中ACAT-1酶活性无影响(P>0.05).③IL-1β干预后,肌源性泡沫细胞中ACAT-1酶活性由(84.8±16.7)提高到(138.3±4.7)nkat/g(P<0.05).结论 IL-1β增加ACAT-1酶活性,促使胆固醇的酯化和胆固醇的沉积,参与动脉粥样硬化的形成和发展.
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增龄对高脂喂养大鼠胰岛素抵抗和骨骼肌内脂肪的影响
目的 探讨增龄对高脂喂养大鼠胰岛素抵抗(IR)和骨骼肌内脂肪影响的可能机制.方法 将雄性Wistar 4～5月龄大鼠16只和22～24月龄大鼠16只分别随机分为青年对照组和老年对照组,青年高脂组和老年高脂组(高脂饲料喂养),每组8只.8周后,行葡萄糖耐量试验,测定0、30、60和120 min的血糖和葡萄糖曲线下面积(AUC)；采用正葡萄糖-高胰岛素钳夹试验的葡萄糖输注率(GIR)评价IR.结果 与老年对照组和青年对照组比较,老年高脂组和青年高脂组GIR降低,骨骼肌TG及长链酯酰辅酶A(LCACoA)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)；与老年对照组比较,老年高脂组大鼠各时间点血糖及AUC比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).GIR与胰岛素、骨骼肌TG及LCACoA呈负相关.结论 老年和高脂喂养大鼠骨骼肌TG和LCACoA含量增加,可能是老年容易发生IR的原因之一.
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肺炎衣原体通过c-jun氨基末端激酶信号通路上调胆固醇酰基转移酶1的表达
目的 观察c-jan氨基末端激酶(JNK)信号通路在肺炎衣原体(C.pn)调控人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)表达中的作用,初步探讨C.pn诱导泡沫细胞形成的机制和途径. 方法 THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞后随机分为4组:对照组、C.pn感染组、SP600125(JNK特异性抑制剂)+C.pn组、SP600125组.分别用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot法检测各组细胞ACAT1 mRNA和蛋白表达,油红O染色和酶荧光化学法检测泡沫细胞的形成. 结果 C.pn组ACAT1 mRNA(4.16±0.26)及蛋白(1.20±0.10)表达明显高于对照组(分别为2.17±0.18和0.61±0.03,均P<0.05),且可观察到C.pn诱导的泡沫细胞形成.而SP600125能呈浓度依赖性地抑制C.pn诱导的ACAT1 mRNA及蛋白表达上调(r值分别为-0.92和-0.96,均P<0.05)及泡沫细胞形成. 结论 C.pn通过JNK信号通路上调巨噬细胞ACAT1的表达,导致细胞内胆固醇酯蓄积,从而诱导巨噬细胞源性泡沫细胞形成.
关键词： 衣原体 肺炎 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 酰基辅酶A 泡沫细胞 -
肺炎衣原体通过上调酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1诱导人单核细胞株THP-1源性泡沫细胞形成的实验研究
目的 观察酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)在肺炎衣原体(C.pn)诱导泡沫细胞形成中的作用,初步探讨C.pn诱导泡沫细胞形成的机制.方法 人单核细胞株(THP-1)给予160 mmol/L佛波酯(PMA)孵育48 h,诱导分化为巨噬细胞后随机分为4组:阴性对照组、阳性对照组、C.pn感染组和ACAT抑制剂58-035+C.pn感染组.分别运用RT-PCR和Western blot检测各组ACAT1 mRNA和蛋白表达.运用油红O染色观察细胞浆内脂滴的变化,用酶荧光学法检测细胞内胆固醇酯含量的变化.结果 C.pn感染呈浓度和时间依赖性地上调ACAT1 mRNA和蛋白表达.高浓度的C.pn(5×105和1×106IFU)感染THP-1源性巨噬细胞48 h后,细胞浆内脂滴明显增多,胆固醇酯与总胆固醇的比值明显增加(＞50%).ACAT抑制剂58-035可以抑制C.pn诱导的细胞浆内脂滴的增多.随着58-035浓度的增加,逐渐抑制C.pn诱导的细胞内胆固醇酯含量的增加.结论 ACAT1表达上调是C.pn诱导泡沫细胞形成的机制之一,这可能为进一步阐明C.pn感染促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据.
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缬沙坦对兔动脉粥样硬化斑块中ACAT-1和PPAR-γ表达的影响
目的 研究酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)和过氧化体增殖物激活型受体γ(PPAR-γ)在动脉粥样硬化斑块中的表达,以及血管紧张素Ⅱ 1型受体拮抗剂缬沙坦对ACAT-1和PPAR-γ表达的影响.方法 24只雄性日本大耳白兔随机分为对照组、缬沙坦干预组和高胆固醇饮食组,每组8只.喂养12周后,抽取静脉血检测血脂水平,并进行主动脉内膜/中膜比值测定,以RT-PCR和Westem blotting方法检测各组主动脉ACAT-1、PPAR-γ mRNA及蛋白的表达.结果 高胆固醇饮食组及缬沙坦干预组的血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均无差别(P＞0.05),但均高于对照组(P＜0.01).高胆固醇饮食组内膜和内膜/中膜厚度比值显著高于对照组和缬沙坦干预组(P＜0.01,P＜0.05),而缬沙坦干预组内膜和内膜/中膜厚度比值显著高于对照组(P＜0.01).与对照组比较,高胆固醇饮食组和缬沙坦干预组ACAT-1、PPAR-γmRNA和蛋白含量显著增加(P＜0.01或P＜0.05);ACAT-1 mRNA和蛋白在缬沙坦干预组的表达显著低于高胆固醇饮食组(P＜0.01或P＜0.05),而PPAR-γ mRNA和蛋白在缬沙坦干预组的表达显著高于高胆同醇饮食组(P＜0.05).高胆固醇饮食组和缬沙坦干预组ACAT-1和PPAR-γ mRNA的表达呈明显负相关(P＜0.05).结论 缬沙坦可能通过上调PPAR-γ抑制ACAT-1的表达,从而起到抗动脉粥样硬化的作用.
关键词： 动脉硬化 缬沙坦 酰基辅酶A 胆固醇酰基转移酶-1 过氧化体增殖物激活型受体γ -
饱和游离脂肪酸通过其代谢产物酰基辅酶A导致卵巢颗粒细胞凋亡
探讨脂肪酸对人卵巢颗粒细胞生长的影响.不同剂量的游离脂肪酸处理颗粒细胞1～3天,用台盼蓝排除法对活细胞进行计数.用染色体DNA断裂和细胞形态学改变确定细胞凋亡.检测脂肪酸代谢产物酰基辅酶A是否直接引起细胞凋亡.测定与细胞凋亡相关的Bcl-2和Bax蛋白质表达水平.结果表明,饱和脂肪酸通过其代谢产物酰基辅酶A呈剂量依赖性的引起颗粒细胞凋亡,并导致Bcl-2水平下降和Bax水平升高.说明饱和脂肪酸对卵巢颗粒细胞有直接致凋亡作用.提示,女性肥胖和胰岛素抵抗患者出现的性功能障碍可能与饱和脂肪酸水平增高有关.
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遗传性线粒体脂肪酸β-氧化途径代谢缺陷研究进展
近年来,国外学者对脂肪酸氧化代谢缺陷研究较为深入,已从DNA、RNA及蛋白质多个水平进行研究,而且,多种脂肪酸氧化代谢缺陷已列入产前或新生儿筛查项目.而目前国内对此研究甚少.因此,在国内开展遗传性脂肪酸氧化代谢缺陷方面的研究具有重要意义.
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瘦素对THP-1细胞泡沫化过程中ACAT-1表达的影响
目的:研究单核或巨噬细胞转分化和泡沫细胞形成过程中瘦素对人酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT-1)表达的影响.方法:在体外模拟动脉粥样硬化(AS)形成过程中,运用放射性同位素标记底物法、逆转录聚合酶链反应、蛋白质免疫印迹法检测ACAT-1 mRNA和蛋白表达水平.结果:单核或巨噬细胞转分化过程中ACAT-1酶活性、蛋白及mRNA水平均升高.巨噬细胞转变为泡沫细胞过程中ACAT-1表达水平无明显变化.高瘦素血症可明显增强单核或巨噬细胞转分化和泡沫细胞形成过程中ACAT-1表达.结论:高瘦素血症可能通过增强ACAT-1表达导致动脉粥样硬化提前发生.
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小鼠主动脉平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞与格列本脲共孵育的反应
目的:观察磺酰脲类药物格列本脲对平滑肌细胞及肌源性泡沫细胞内酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)酶活性的影响.方法:实验于2003-06/2005--07在华中科技大学同济医学院实验中心完成.①用组织贴块法培养小鼠主动脉平滑肌细胞,采用两步超速离心法制备低密度脂蛋白后,运用CuCl2氧化法制备氧化低密度脂蛋白,采用100 mg/L的氧化低密度脂蛋白作用于平滑肌细胞72 h.建立泡沫细胞模型.②在平滑肌细胞和泡沫细胞分别加入格列本脲,使终浓度为200μmol/L,孵育24 h,用放射性同位素标记法检测ACAT1酶活性.结果: ①平滑肌细胞转变为泡沫细胞后,ACAT1酶活性上升(P<0.05).②平滑肌细胞被格列本脲干预后,ACAT1酶活性无明显变化(P>0.05);肌源性泡沫细胞加入格列本脲后,ACAT1酶活性下降(P<0.05)结论:格列本脲能抑制肌源性泡沫细胞内ACAT1的酶活性,抑制平滑肌细胞向泡沫细胞的转化,有可能成为防止动脉粥样硬化的有效药物.
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过氧化物酶体增殖物激活受体α、γ调控长链酰基辅酶A合成酶1对肝纤维化进程的影响
在肝纤维化的发生发展进程中，过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）α、γ具有调控脂代谢、脂肪酸代谢和抗肝纤维化等生物学功能，并与调控脂肪代谢的相关酶类关系密切。长链酰基辅酶A合成酶1（ACSL1）作为脂肪代谢的关键酶之一，在肝脏中参与脂质的合成与分解代谢，可引起肝脏内脂质沉积、炎症反应，并在肝脏中直接或间接促进肝纤维化进程。回顾了PPARα、γ和ACSL1各自的生物学功能与作用；简述了PPARα、γ对ACSL1的转录调控机制；从肝脏脂代谢和肝星状细胞活化等两个方面分析了PPARα、γ对ACSL1的调控作用，进而影响肝纤维化进程。从而指出在肝脏中PPARα、γ通过调控ACSL1直接或间接参与肝纤维化进程。
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过氧化物酶体增殖物激活受体α、γ调控长链酰基辅酶A合成酶1对肝纤维化进程的影响
在肝纤维化的发生发展进程中，过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）α、γ具有调控脂代谢、脂肪酸代谢和抗肝纤维化等生物学功能，并与调控脂肪代谢的相关酶类关系密切。长链酰基辅酶A合成酶1（ACSL1）作为脂肪代谢的关键酶之一，在肝脏中参与脂质的合成与分解代谢，可引起肝脏内脂质沉积、炎症反应，并在肝脏中直接或间接促进肝纤维化进程。回顾了PPARα、γ和ACSL1各自的生物学功能与作用；简述了PPARα、γ对ACSL1的转录调控机制；从肝脏脂代谢和肝星状细胞活化等两个方面分析了PPARα、γ对ACSL1的调控作用，进而影响肝纤维化进程。从而指出在肝脏中PPARα、γ通过调控ACSL1直接或间接参与肝纤维化进程。
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同型半胱氨酸对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成中ABCA1、ACAT1表达的影响
目的 探讨同型半胱氨酸(Hcy)对THP-1单核细胞源性泡沫细胞形成中三磷酸腺苷-结合转运子A1( ABCA1)和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT1)表达的影响.方法 将THP-1单核细胞与佛波酯(PMA)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同培养,复制泡沫细胞模型,并分别用50、100、200、500 μmol/L Hcy和100μnol/L Hcy+叶酸+维生素B12( Vit B12)干预72 h,并设对照组(不加入Hcy).采用油红0染色检测泡沫细胞的形成.采用酶终点法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量的变化,观察Hcy对泡沫细胞CE流出的影响.采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定ABCA1、ACAT1 mRNA表达；免疫印迹法检测ABCA1、ACAT1蛋白表达.结果 油红O染色显示Hcy加剧了泡沫细胞的形成,但不呈量效关系.实验组(加入50、100、200、500 μmol/L Hcy和100 μmol/L Hcy+叶酸+Vit B12)泡沫细胞阳性百分率均高于对照组(P＜0.05、P＜0.01),以100 μmol/L Hcy组效应为明显(P＜0.01).在Hcy的干预下,泡沫细胞胞内TC、FC、CE流出减少,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),以100 μmol/L Hcy组效应为明显(P＜0.01).100μmol/L Hcy+叶酸+VitB12组与100.μmol/L Hcy组比较,前者泡沫细胞形成减少,胆固醇流出增多.RTPCR结果显示ABCA1 mRNA表达下调,ACAT1 mRNA表达上调,均以100 μmol/L Hcy组效应为明显(P＜0.01)；免疫印迹法检测ABCA1、ACAT1蛋白的表达与其mRNA表达一致.结论 Hcy下调了ABCA1的表达,上调了ACAT1的表达,促使了泡沫细胞形成.
关键词： 同型半胱氨酸 三磷酸腺苷-结合转运子A1 酰基辅酶A 胆固醇酰基转移酶 -
葡萄糖对THP-1源性巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1表达的影响
研究葡萄糖对人THP-1单核分化巨噬细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT-1)表达的影响.发现高糖作用下,巨噬细胞ACAT-1的mRNA及蛋白表达增加,这可能是糖尿病血管病变机制之一.
关键词： 酰基辅酶A 甾醇O-酰基转移酶-1 葡萄糖 -
粉防已碱对高脂饮食兔主动脉壁血管细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶表达的影响
目的:探讨中药粉防已碱对高脂饮食兔主动脉壁血管细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT)表达的影响.方法:将18只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组(普通饲料,C组)、高脂模型组(高脂饲料,CH组)和粉防已碱组(高脂饲料+Tet,Tet组).喂养12周后处死动物,从主动脉根部连续切片,常规HE染色,计算机图像扫描,分析主动脉内膜和管壁厚皮;血管壁脂质苏丹Ⅳ染色;Westem blot方法测定主动脉壁血管细胞酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶表达.结果:CH组粥样斑块面积,内膜和血管壁厚度显著高于Tet组(P＜0.01),而C和Tet组之间差异无显著性;ACAT蛋白含量各组差异无显著性(P＞0.05).结论:Tet具有抑制血管壁脂质沉积的作用,但不影响ACAT酶蛋白的表达.
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人ACAT1基因P1启动子的克隆及意义
目的 克隆人酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1) 基因P1启动子.方法 应用PCR方法从人单核细胞系THP-1扩增分离出ACAT1基因P1启动子全长片段,将PCR产物克隆入T载体,并对所获得的序列进行生物信息学分析.结果 经琼脂糖凝胶电泳及直接测序鉴定,克隆的ACAT1基因P1启动子片段碱基序列与GenBank数据库一致,未发现突变.结论 人ACAT1基因P1启动子克隆成功,此为动脉粥样硬化(AS)过程中ACAT1基因转录调控机制的研究奠定了基础.
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雌激素对高糖诱导的HepG2细胞ACAT2表达的影响
目的 探讨雌激素对高糖诱导的酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶2(ACAT2)在HepG2细胞中表达的影响.方法 将培养好的HepG2细胞以0.7×106/L接种于六孔培养板内,加入无血清培养基继续培养24h,将细胞分为四组,对照组加入正常培养基,甘露醇组计入终浓度为25 mmol/L甘露醇溶液,高糖组加入的葡萄糖溶液培养基孵育12 h；雌激素组用含总浓度25 mmol/L葡萄糖的培养基与细胞孵育4h后,再加入终浓度为1×10-8 moL/L的17β-雌二醇孵育8h.RT-PCR和Western blot法检测各组ACAT2的表达水平.结果 高糖组HepG2细胞ACAT2的表达明显高于对照组和雌激素组(P＜0.001),雌激素组与对照组、甘露醇组比较无统计学意义.结论 雌激素可下调高糖诱导的ACAT2表达.
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乙酰化低密度脂蛋白促进胆固醇酰基转移酶活性升高的机制研究
目的:研究乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)对人THP-1单核细胞(MC)分化的巨噬细胞(MP)酰基辅酶A、胆固醇酰基转移酶-1(ACAT-1)活性的影响及其机制.方法:体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯(PMA)作用使其分化为MP,后者再由乙酰化低密度脂蛋白Ac-LDL进行脂质负荷转变为泡沫细胞.该过程中以放射性同位素标记底物法检测ACAT-1酶活性的变化,并用Western blot法检测ACAT-1酶蛋白的表达及RT-PCR法检测ACAT-1 mRNA的水平.结果:在MC分化为MP的过程中ACAT-1酶活性升高了2倍,差异有统计学意义(P＜o.05),酶蛋白及mRNA水平呈现类似变化趋势;Ac-LDL作用于巨噬细胞,使ACAT1酶活性、酶蛋白及mRNA进一步升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MC分化为MP的过程中ACAT-1表达上调,使ACAT-1活性增强,而Ac-LDL可进一步促进ACAT-1基因表达增加,升高ACAT-1活性.
关键词： 动脉粥样硬化 酰基辅酶A 胆固醇酰基转移酶-1 低密度脂蛋白 -
格列本脲对泡沫细胞形成的影响
目的:研究格列本脲(glibenclamide)对THP-1单核巨噬细胞形成泡沫细胞的影响及机制.方法:体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯(PMA)作用使其分化为巨噬细胞,后者再由乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)进行脂质负荷转变为泡沫细胞.不同质量浓度的格列本脲单独或与Ac-LDL共同作用于上述巨噬细胞,以放射性同位素标记底物法检测酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶(ACAT)活性的变化,油红O染色法检测泡沫细胞的形成,酶比色法检测细胞中的总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量.结果:格列本脲使脂质负荷的巨噬细胞转变为泡沫细胞的数目减少,并明显抑制脂质负荷前后巨噬细胞中ACAT酶活性;随着格列本脲剂量增加,脂质负荷前后的巨噬细胞中胆固醇酯含量逐渐降低,呈剂量依赖性趋势.结论:格列本脲抑制泡沫细胞形成,其作用机制可能与其抑制ACAT酶活性和细胞中胆固醇酯含量有关.
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TNF-α,ox-LDL对人单核细胞株U937胆固醇酰基转移酶1表达的影响
目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人单核细胞U937酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)mRNA表达和蛋白质翻译的影响.方法 U937细胞培养到足够数量后,细胞计数传代分组:①对照组:加等量的培养基;②TNF-α组:加入TNF-α,使其终浓度为10 ng/ml;③ox-LDL组:加入ox-LDL,终浓度为100μg/m1.应用RT-PCR检测ACAT1 mRNA表达,蛋白定量应用免疫印迹法.结果与对照组相比,TNF-α组ACAT1 mRNA表达显著增加(0.573±0.032 vs 0.990±0.022,P＜0.01),而ox-LDL组ACAT1 mRNA表达水平(0.554±0.026)无显著变化.3组之间ACAT1酶蛋白含量差异无显著性意义.结论TNF-α能促进ACAT1 mRNA表达,但未见TNF-α和ox-LDL对ACAT1酶蛋白表达有任何影响.
