首页 > 文献资料
-
巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢与动脉粥样硬化
巨噬细胞源性泡沫细胞的形成是动脉粥样硬化形成和发展中的早期变化.巨噬细胞向泡沫细胞的转变与巨噬细胞清道夫受体介导脂蛋白的吸收,ATP结合盒转运子介导胆固醇的流出及细胞内胆固醇的代谢机制相关.对巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢的研究,将为防治动脉粥样硬化寻找新的突破口.
-
miR-146a促进动脉粥样硬化斑块形成调控机制研究
目的 探讨miR-146a对动脉粥样硬化斑块的影响及其机制.方法 利用miR-146a增强剂(miR-146a mimic)和miR-146a拮抗剂(miR-146a inhibitor)转染大鼠外周血单核巨噬细胞,转染成功后予巨噬细胞泡沫化.油红O染色和脂质染色的半定量分析miR-146a对细胞的脂质堆积情况的影响.Western blot检测胆固醇酯水解酶(cholesteryl.ester hydrolase,CEH)、ABCA1和ABCG1的表达情况.结果 Western blot检测显示,miR-146a mimic转染组的CEH表达明显降低,miR-146ainhibitor转染组的ABCA1和ABCG1表达量较对照组和miR-146a mimic转染组明显增多.油红O染色显示miR-146a mimic转染组、对照组和miR-146a inhibitor转染组的阳性细胞比例分别为82.1％±3.1％、73.2％±0.16％和16.25％±2.1％.结论 miR-146a能够抑制大鼠外周血单核巨噬细胞细胞内CEH的表达,进而阻碍游离胆固醇的外流,终导致动脉粥样硬化斑块的形成.
-
Tim-3通过胆固醇酯水解酶影响巨噬细胞泡沫化过程的机制
目的 观察Tim-3是否通过调节巨噬细胞内胆固醇脂水解酶(CEH)的表达干扰泡沫化细胞的形成,进而影响动脉粥样硬化的发生发展.方法 Western印迹检测CEH蛋白的表达;液体闪烁计数测定THP-1 巨噬细胞内胆固醇流出情况;HPLC检测胞内脂质含量;油红O染色显示胞内脂滴情况;ELISA检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、MIF、白细胞介素(IL)-10的分泌情况.结果 Ad-Tim-3组细胞中CEH的表达被明显抑制,胞内胆固醇流出减少,胞内总胆固醇(TC)、胆固醇酯(CE)及游离胆固醇(FC)的含量明显增加,TNF-α和MIF分泌增多,IL-10的分泌减少;Ad-CEH组和Ad-Tim-3+Ad-CEH组细胞中CEH的表达水平被明显增强,胞内胆固醇流出增加,胞内TC、CE及FC的含量明显减少,TNF-α和MIF分泌减少,IL-10分泌增多.结论 Tim-3可以通过增强巨噬细胞内CEH的活性抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化.
-
TGF-β1/Smad7信号通路在白藜芦醇增强胆固醇酯水解酶表达中的作用
目的 探讨TGF-β1/Smad-7信号通路在白藜芦醇增强胆固醇酯水解酶(cholesteryl ester hydrolase,CEH)表达中的作用.方法 用氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导小鼠单核巨噬细胞株RAW 264.7转化为泡沫细胞,将经泡沫化处理的巨噬细胞进行2次分组,第1次分为正常对照组、白藜芦醇组、LY2157299组和白藜芦醇+ LY2157299组,第2次分为正常对照组、白藜芦醇组、Ad-Smad-7组和白藜芦醇+Ad-Smad-7组,均处理48 h,通过胆固醇流出试验检测各组巨噬细胞内胆固醇流出率,油红0染色检测细胞泡沫化情况,RT-PCR法和Western blot法检测细胞中p-Smad-7和CEH基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平.结果 与正常对照组比较,白藜芦醇组巨噬细胞内胆固醇流出率明显升高(P＜0.05),白藜芦醇+ LY2157299组、LY21 57299组、白藜芦醇+Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组胆周醇流出率均明显降低(P＜ 0.05);白藜芦醇组巨噬细胞泡沫化程度明显下降(P＜0.05),白藜芦醇+LY2157299组、LY2157299组、白藜芦醇+Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组巨噬细胞泡沫化程度明显增强(P＜0.05);白藜芦醇组巨噬细胞中CEH基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平明显增强(P＜0.05),p-Smad-7基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05),而白藜芦醇+LY2157299组、LY2157299组、白藜芦醇+ Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组CEH基因mRNA的转录及蛋白的表达均明显被抑制(P＜0.05),p-Smad-7基因mRNA的转录及蛋白的表达均明显增强(P＜0.05).结论 白藜芦醇可能是通过TGF-β1/Smad-7信号通路来增强CEH的表达.
-
人胆固醇酯水解酶重组腺病毒载体的构建
目的 构建人胆固醇酯水解酶(hCEH)基因重组腺病毒载体,并在人胚肾细胞(HEK293)中扩增.方法 将hCEH基因整合入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-hCEH,线性化后与pAdeasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得含目的基因的重组质粒pAd-hCEH,酶切后用脂质体转染HEK293,包装成重组体腺病毒Ad-hCEH,经扩增和纯化得到高滴度重组病毒.采用PCR法进行鉴定,绿色荧光蛋白(GFP)追踪,荧光显微镜下观察并计算Ad-hCEH病毒滴度.结果 重组穿梭质粒及其载体经鉴定后,电泳结果与预期相符.Ad-hCEH-EGFP感染HEK293后,随时间增加,HEK293表达绿色荧光的量也增加.hCEH碱基序列经测序与Genebank中已知序列完全吻合.Ad-hCEH电泳结果显示1 700 bp附近有一条带,与目的片段相符合.终测得Ad-hCEH滴度为1.2×1010 pfu/ml.结论 成功构建了携带hCEH基因的重组腺病毒载体.
-
MicroRNA-155通过CEH影响巨噬细胞泡沫化过程
目的 探讨microRNA-155(miR-155)通过干扰人THP-1单核巨噬细胞内胆固醇酯水解酶(CEH)的表达来影响巨噬细胞泡沫化形成的机制.方法 通过油红O染色和和高效液相色谱法(HPLC)分析胆固醇酯(CE)含量,观察阳性细胞率和细胞内胆固醇酯(CE)含量的变化情况.Western blot检测上述各组细胞内CEH、三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1)、清道夫受体(SR-A)的表达变化.结果 转染miR-155 mimics的细胞阳性比率、胆固醇酯、游离胆固醇(FC)、总胆固醇(TC)含量均随着时间的延长明显下降(P＜0.05);miR-155 mimics组细胞阳性比率、胆固醇含量和SR-A的表达均被明显降低(P＜0.05),而CEH和ABCA1的表达被明显增强(P＜0.05);miR-155 mimics+siRNA-CEH和siRNA-CEH组细胞阳性比率、胆固醇含量和SR-A的表达均明显增加(P＜0.05),而CEH和ABCA1的表达被明显降低(P＜0.05).结论 高表达的miR-155可以明显抑制巨噬细胞泡沫化的形成,该作用可能是通过增强巨噬细胞内CEH的表达进而影响ABCA1和SR-A等相关基因的表达来得以实现.
关键词： microRNA-155 胆固醇酯水解酶 巨噬细胞 -
胆固醇酯水解酶与动脉粥样硬化
胆固醇酯以脂滴的方式存储在胞浆内是泡沫细胞的主要特点,也是动脉粥样硬化斑块发生发展的关键因素.只有游离胆固醇才能从细胞内外流到细胞外与胆固醇接受体结合,巨噬细胞内胆固醇酯代谢的第一步就是“水解”.水解是游离胆固醇外流的限速步骤,该反应由中性胆固醇酯水解酶催化.此外,胆固醇酯水解酶还调节胆固醇逆转运,从而参与体内胆固醇的终清除.本综述旨在分析当前各种胆固醇酯水解酶的特点,阐述其参与细胞胆固醇酯水解来调节动脉粥样硬化的作用,为进一步明确能够作为防治动脉粥样硬化形成靶点的水解酶提供线索.
-
中性胆固醇酯水解酶与动脉粥样硬化
目的：巨噬细胞来源的负荷有胆固醇酯的泡沫细胞是动脉粥样硬化的标志，并且细胞内胆固醇酯的水解反应是泡沫细胞形成的关键步骤，该反应由中性胆固醇酯水解酶催化。此外，中性胆固醇酯水解酶还调节胆固醇逆向转运，从而参与体内胆固醇的终清除。为进一步明确动脉粥样硬化的形成，本文针对中性胆固醇酯水解酶的功能及其在动脉粥样硬化发生中的作用进行综述。
