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丙烯酰胺神经损伤大鼠背根神经节ATP酶活性的变化
目的 以实验大鼠为研究对象,寻找丙烯酰胺(acrylamide,ACR)神经损伤的生理生化基础.方法 48只Wistar大鼠随机分为对照组(腹腔注射5 ml/kg生理盐水)和染毒组(腹腔注射7.5、15和30 mg/kg ACR),每组12只,雌雄各半；步态评分评价神经行为改变；组织病理学法检测背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)(电子显微镜)、心、肝、脾、肺、肾等(光学显微镜)的超微结构改变；神经生化法(定磷)检测大鼠背根神经节中Ca2+-ATP酶、Na+-K+-ATP酶活性的变化.结果 实验结束时,30 mg/kg ACR染毒组大鼠体重较对照明显降低,步态评分较对照显著增加(P＜0.05),异常体征明显；背根神经节病理改变明显,心、肝、脾、肺、肾等组织未见明显病变；丙烯酰胺各染毒组大鼠钙ATP酶(Ca2+-ATPase)、钠钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)活性均较对照组显著降低(P＜0.05).结论 背根神经节ATP酶活性的变化是丙烯酰胺神经损伤的重要生理生化基础之一.
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染料木素抗大鼠心肌肥厚作用及其与ATPase活性的关系
目的:观察染料木素(Gen)对异丙肾上腺素(iso)所致大鼠心肌肥厚的保护作用及其对心肌组织Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase活性及羟脯氨酸含量的影响.方法:0.2 g·L-1的iso 5 mL·kg-1·d-1,背部皮下注射,连续10 d,建立大鼠心肌肥厚模型.造模第2天开始给予不同浓度的染料木素、二甲基亚砜或NS,连续14 d,末次给药后禁食12 h,称体重,麻醉,取心脏,称全心及左心室质量,计算全心质量指数及左心室质量指数,测定心肌组织Na+-K+-ATPase,Ca3+-Mg2+-ATPase活性及羟脯氨酸(Hyp)含量.结果:模型组全心质量指数及左心室质量指数分别为(3.30±0.24),(2.55±0.14)mg·kg-1,与正常对照组相比显著升高(P＜0.001);心肌组织Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活力为(1.81±0.25),(1.00±0.22)U·mg-1,与正常对照组相比活性显著降低(P＜0.01);Hyp含量为(0.80±0.05)mg·g-1,与正常对照组相比含量显著升高(P＜0.001).与模型组相比,染料木素高、低剂量组(0.3,0.1 μmol·kg-1)全心质量指数分别为(2.83±0.22),(2.97±0.19)mg·kg-1;左心室质量指数分别为(2.32±0.16),(2.34±0.13)mg·kg-1均显著降低(P＜0.01或P＜0.05);高剂量组心肌组织Na+-K+-ATPase(2.58±0.40)U·mg-1及Ca2+-Mg2+-ATPase(1.35±0.22)U·mg-1活性升高(P＜0.01或P＜0.05),染料木素高、低剂量组心肌组织Hyp含量分别为(0.48±0.11),(0.57±0.14)mg·g-1显著降低(P＜0.01或P＜0.05).结论:染料木素可通过提高Na+-K+-ATPase及Ca2+-Mg2+-ATPase的活性,降低Hyp含量,从而抑制心脏纤维化,起抗心肌肥厚作用.
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槲皮素对2型糖尿病大鼠肾脏肥大的影响机制
目的:观察槲皮素对2型糖尿病大鼠肾脏肥大的影响并探讨其作用机制.方法:建立2型糖尿病大鼠模型,按随机数字表法分为正常对照组、糖尿病模型组以及槲皮素组,测定各组大鼠血糖、血脂、总胆固醇、血清胰岛素、胰岛素敏感指数(ISI)、肾脏肥大指数和单根近端小管(PT)钠钾ATP酶(Na+,K+-ATPase)活性,免疫组化法测定肾脏Toll样受体4(TLR4)蛋白表达.结果:与模型组比较,槲皮素组大鼠血糖、血脂、总胆固醇、血清胰岛素水平、肾脏肥大指数、Na+,K+-ATPase活性和肾内TLR4蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义.结论:槲皮素能抑制2型糖尿病大鼠肾脏肥大,其机制可能与降低血糖、血脂、总胆固醇和肾脏TLR4蛋白表达,升高ISI及稳定Na+,K+-ATPase活性有关.
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针刺对神经源性肌萎缩肌组织NT-3、IGF-I、NGF的影响
目的:通过动物实验观察针刺对神经源性肌萎缩的治疗作用,探讨其作用机制.方法:双重结扎大鼠坐骨神经复制神经源性肌萎缩动物模型,针刺环跳、阳陵泉、足三里等穴位,观察腓肠肌湿重(脏器指数)及病理改变,检测肌组织的钠钾ATP酶、NT-3、IGF-Ι、NGF含量.结果:双重结扎大鼠坐骨神经可复制神经源性肌萎缩动物模型,针刺环跳、阳陵泉、足三里等穴位可减轻萎缩肌组织的病理改变,增加萎缩肌组织的湿重和脏器指数,提高钠钾ATP酶活性和NT-3、NGF活性.结论:针刺可治疗双重结扎大鼠坐骨神经引起的神经源性肌萎缩,其机制与提高钠钾ATP酶活性和NT-3、NGF含量密切相关.
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Klotho蛋白减轻低氧/复氧诱导的心肌细胞系H9C2损伤
目的 研究Klotho蛋白对低氧-复氧诱导的心肌H9C2细胞系损伤的保护作用及其机制.方法 将H9C2心肌细胞分为对照组、低氧/复氧组(1％O2低氧6 h,5％CO2以及95％空气培养箱中复氧2 h)和Klotho蛋白(10μg/mL)干预组.通过酶标仪间接测定细胞内钙离子([Ca2+]i)水平;CCK8法和TUNEL法分别检测细胞活性及细胞凋亡;分光光度法检测细胞中钠ATP酶(Na+/K+-ATPase,NKA)和反向模式钠/钙交换体(Na+/Ca2+-exchange,NCX)的活性.结果 体外培养的H9C2细胞低氧/复氧(6 h/2 h)处理后可明显降低H9C2细胞活性(P<0.05);增加细胞内Ca2+水平和凋亡率(P<0.05);降低细胞中Na+/K+-ATPase的活性(P<0.05);增加反向模式Na+/Ca2+交换体的活性(P<0.05);10μg/mL Klotho蛋白处理可明显减轻上述损伤.结论 Klotho蛋白可减轻低氧/复氧诱导下的H9C2细胞内钙超载,终减少该细胞系细胞的凋亡.
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钠钾ATP酶的信号转导功能新进展
钠钾ATP酶不仅是主动跨膜转运钠钾离子的载体蛋白,而且可能作为内源性洋地黄物质的受体参与信号转导.它通过在质膜上与小窝蛋白、Src激酶之间的相互作用,并在细胞内借助Src激酶反式激活上皮生长因子受体,组装信号转导的复合物激活信号转导的级联反应,从而介导内源性洋地黄物质增加心脏和血管的收缩性、促进正常细胞肥大或增殖、促进肿瘤细胞的凋亡等作用.研究内源性洋地黄物质与钠钾ATP酶结合后激活的信号转导通路将有助于明确它在病理生理条件下的重要性,有可能为治疗高血压和肿瘤提供新思路,并深化对细胞内信号转导机制的认识.
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哇巴因诱导白血病细胞增殖的信号通路研究
本研究通过检测哇巴因与特异性信号通路抑制剂联用对多种白血病细胞株生长的影响,探讨哇巴因诱导白血病细胞增殖及凋亡的信号传导途径.采用MTT法检测哇巴因与特异性信号通路抑制剂对多种白血病细胞株存活率的影响,用RT-PCR与Western blot检测白血病细胞株钠钾ATP酶α1亚单位表达水平的变化.结果显示:在低浓度的哇巴因(10 nmol/L)作用下,Jhhan和M07e细胞株存活率均呈上升趋势,细胞株中纳钾ATP酶α1亚单位表达升高,PP2、PD98059能不同程度地抑制哇巴因对白血病细胞株的促增殖作用.结论:钠钾ATP酶具有重要的信号传导功能,它能通过特异性结合哇巴因激活多种信号通路调节白血病细胞的生长.哇巴因对白血病细胞的促增殖效应与Src激酶、ERK1/2等信号通路活化有关.
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洛伐他汀对高糖诱导大鼠近端肾小管上皮细胞钠钾ATP酶活性的影响
+,K+-ATPase活性.结果 高糖组Na+,K+-ATPase活性显著高于正常对照组,小剂量组、中剂量组明显减低,大剂量组显著性减低.结论 高糖诱导的PTEC Na+,K+-ATPase活性明显升高,洛伐他汀对高糖诱导的原代PTEC的Na+,K+-ATPase活性的升高有明显抑制作用.
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门冬氨酸钾减轻大鼠可控性皮质打击伤引起的脑损伤
目的 门冬氨酸钾(potassium aspartate,PA)作为一种电解质补充剂,在临床上广泛使用.以往的研究发现门冬氨酸钾在脑缺血/再灌注大鼠中对细胞凋亡有神经保护的作用.本研究将探讨门冬氨酸钾对创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)是否有保护作用.方法 TBI通过大鼠可控性皮质打击伤(control ed cortical impact,CCI)产生.门冬氨酸钾组或溶剂对照组在CCI发生后30 min以腹腔注射给予生理盐水或62.5 mg/kg剂量的PA,观察脑血流灌注量,改良神经功能缺损评分(modified Neurological Severity Score,mNSS)和皮质损伤体积,并检测脑水肿以及脑组织三磷腺苷(adenosine triphosphate,ATP)、乳酸含量和钠钾ATP酶活性.结果 在CCI引起的大鼠皮质损伤中,与溶剂对照组相比,急性给予62.5 mg/kg剂量的PA治疗可以明显改善神经功能缺损(P<0.05),降低皮质损伤体积(P<0.01),减轻脑水肿(P<0.05).此外,与溶剂对照组相比,门冬氨酸钾治疗组显著减少ATP缺失(P<0.01),降低乳酸含量(P<0.05),并增加钠钾ATP酶的活性(P<0.05).结论 PA能通过增加ATP含量和钠钾ATP酶的活性并降低脑水肿,对TBI具有神经保护作用.这为PA在临床脑损伤时的应用提供了实验证据.
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强心甾类固醇选择性抗肿瘤机制与相关抗肿瘤药的研究进展
强心甾类固醇(CTS)是一类能与真核细胞胞膜钠钾ATP酶特异性结合的化学物质.近年来研究发现CTS具有抗肿瘤活性,CTS制剂能选择性抑制肿瘤细胞增殖或促进肿瘤细胞凋亡.目前已证实CTS能与钠钾ATP酶结合激活一系列信号通路,导致肿瘤细胞选择性凋亡,而正常细胞不受影响.本文就CTS抗肿瘤机制的研究进展以及新一代具有更强抗瘤活性的CTS衍生物特点作简略综述.
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Src/ROS介导低浓度哇巴因对大鼠心肌细胞收缩力的影响
目的 观察低浓度(1×10-8mol·L-1)哇巴因(OUA)对大鼠心肌细胞的收缩作用,并研究低浓度哇巴因发挥正性肌力作用有关的钠钾泵(NKA)信号转导通路.方法 在急性分离的大鼠心室肌细胞上,利用全细胞膜片钳技术记录钠钾泵电流(Ip),并观察低浓度哇巴因对Ip作用的影响.利用细胞动缘探测系统测定心肌细胞的长度及收缩力的大小.①观察并比较1×10-8～1×10-3 mol·L-1浓度哇巴因增强大鼠心室肌细胞收缩力的作用.②分别用信号转导抑制剂PP2(1μmol·L-)、NAC(100 μmol·L-1)及PD98059 (50 μmol·L-1)与1×10-8 mol·L-1哇巴因共同灌流,记录信号转导抑制剂对1×10-8mol·L-1哇巴因增强大鼠心室肌细胞收缩力的影响.结果 1×10-8 ～1×10-3 mol·L-1的哇巴因均能增加大鼠心室肌细胞收缩力(P＜0.01);1 μmol· L-1PP2+1 ×10-8 mol·L 1哇巴因组与1×10-8 mol·L-1哇巴因组相比心肌细胞收缩力减小(P＜0.05),100 μmol·L-1 NAC+1×10-8 mol·L-1哇巴因组与1×10-8 mol·L-1哇巴因组相比心肌细胞收缩力也明显减小(P＜0.01);而50 μmol·L-1 PD98059+1×10-8 mol·L-1哇巴因与1×10-8 mol·L-1哇巴因组相比信息及细胞收缩力没有显著性差异(P＞0.05).结论 1×10-8 ～1×10-3 mol·L-1的哇巴因均能增加大鼠心室肌细胞收缩力,且具有浓度依赖性.低浓度哇巴因的正性肌力作用与离子转运功能无关而与钠钾泵的信号转导功能有关,其中Src/ROS信号途径参与调节了1×10-8 mol·L-1的哇巴因的正性肌力作用.
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雾化吸入氟化碳对脂多糖性肺损伤大鼠肺内AQP-1及钠钾ATP酶活性的影响
目的 观察雾化吸入氟化碳(perfluorocarbon,PFC)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)大鼠肺水肿、肺内水通道蛋白-1(AQP-1)及钠钾ATP酶活性的影响.方法 大鼠腹腔注射脂多糖(lipopolysaecharide,LPS)建立ALI模型并雾化吸入PFC进行干预.在LPS注射后6h观察PFC对AU大鼠动脉血气、肺损伤评分、肺湿干质量比值、肺泡通透指数及钠钾ATP酶活性等的影响,并采用western-blot观察肺内AQP-1表达的变化.结果 LPS性肺损伤以肺水肿为主要表现之一.雾化吸入PFC可以缓解LPS诱导ALI后的低氧血症,降低ALI大鼠的肺损伤评分、肺湿干质量比值、肺泡通透指数,同时增加肺组织钠钾ATP酶活性及AQP-1的表达.结论 雾化吸人PFC减轻LPS性肺损伤大鼠肺水肿,上调肺损伤期间钠钾ATP酶活性与AQP-1表达.
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模拟高原低氧对大鼠心肌线粒体中钙浓度的影响及中药的保护作用
目的 观察急进高原及持续低氧对大鼠心肌线粒体中钙离子浓度的影响,探讨中药复方对心肌线粒体的保护作用.方法 SD雄性大鼠分为平原对照组(C)、急进高原1d组(H1)、中药干预1d组(Z1)、急进高原3d组(H3)、中药干预3d组(Z3)、急进高原7d组(H7)、中药干预7d组(Z7).用荧光分光光度法测线粒体内游离Ca2+浓度；采用分光光度法测线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶.结果 与c组比较,急进高原的3组线粒体内Ca2浓度明显降低(P＜0.001),7H组线粒体膜钠钾泵活性、钙镁泵活性明显降低(P＜0.05).相等时间段比较表明,Z3组、Z7组线粒体内Ca2+浓度明显升高(P ＜0.001).Z7组钠钾ATP酶活力明显升高(P＜0.05).结论 急进高原使大鼠心肌线粒体中钙浓度明显降低,中药复方改善了低氧对线粒体的影响.
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低氧及跑台运动对大鼠心肌线粒体钙浓度的影响及机制探讨
目的 探讨低氧及跑台运动对大鼠心肌线粒体钙及钠钾ATP酶和钙镁ATP酶活力的影响.方法 大鼠分为常氧对照组、常氧运动组、低氧对照组和低氧运动组.用MPA-心功能分析系统记录血压和心率,用荧光分光光度法测心肌线粒体钙浓度,用化学比色法测心肌线粒体Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活力.结果 ①与常氧对照组比较,常氧运动组和低氧运动组心肌线粒体Ca2+浓度升高(P＜0.01,P＜0.05),低氧对照组降低(P＜0.05);与低氧对照组比较,常氧运动组和低氧运动组也升高(P＜0.01).②与常氧对照组比较,常氧运动组和低氧运动组心肌线粒体Na+-K+-ATPase活力升高(P＜0.05,P＜0.01),低氧对照组活力降低(P＜0.05).③与常氧对照组比较,常氧运动组和低氧运动组心肌线粒体Ca2+-Mg2+-ATPase活力升高(P ＜0.05,P＜0.01),低氧对照组活力降低(P＜0.05).结论 单纯低氧对大鼠心肌线粒体钙浓度的影响与运动的影响相反,Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活力的改变是原因之一.
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哇巴因诱发人神经胶质瘤U251细胞凋亡的机制
[目的]研究哇巴因抑制人神经胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡的作用机制.[方法]通过MTT分析细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期,高内涵筛选和Western blotting法检测HIF-1α、Akt、mTOR等相关基因表达变化.[结果]MTT显示哇巴因抑制U251细胞24h的IC50值为3.3 μmol/L;流式细胞术显示哇巴因作用U251细胞出现S期阻滞;高内涵和Western blotting显示哇巴因通过下调神经胶质瘤细胞U251细胞中HIF-1 α 、Akt、mTOR和p-mTOR表达,同时上调p-Akt和Nrf2表达,抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡.[结论]哇巴因可抑制人神经胶质瘤U251细胞增殖、诱导细胞凋亡,可能将成为一类新的化学治疗神经系统肿瘤的天然产物.
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年龄相关性白内障血清微量元素与抗氧化酶的变化
目的：观察年龄相关性白内障（ ARC）不同分期患者血清微量元素与抗氧化酶含量变化，探讨微量元素与白内障发生发展的关系。方法收集ARC初发期患者32例（ IS组）、ARC膨胀期患者29例（ IMS组）、ARC成熟期患者21例（MS组）和健康者26例（对照组），分别测定血清锌（Zn）、铁（Fe）、钙（Ca）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）和钠钾ATP酶（Na＋，K＋-ATPase）的酶活性。结果与对照组和IS组比较，IMS组和MS组ARC患者血清Zn含量和SOD活性均显著下降（ P ＜0?．05）。此外，IMS组和MS组血清Fe含量和Na＋，K＋-ATPase酶活性较对照组也均显著下降（ P ＜0．05），血清Ca含量较对照组也均明显升高（ P ＜0．05）。与IS组比较，MS组血清Fe含量和Na＋，K＋-ATPase酶活性均显著下降（ P ＜0．05）。结论 ARC不同分期患者血清中微量元素含量和抗氧化酶活性均发生改变，其改变程度随晶状体混浊度加剧而逐渐加重，提示ARC患者应尽早采取营养监测和干预措施。
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灯盏花素治疗糖尿病大鼠血清对近端小管上皮细胞钠钾ATP酶活性的影响
目的:观察灯盏花素(Bre)治疗糖尿病大鼠血清对近端小管上皮细胞(PTEC)钠钾ATP酶活性的影响.方法:实验分为模型组(DM组)、灯盏花素治疗组(BR组)和正常对照组(NC组).前两组以链脲佐菌素(STZ,65 mg/kg)腹腔注射建立糖尿病大鼠模型.BR组在模型建立成功后连续4周予腹腔注射灯盏花素20 mg·kg-1·d-1,NC组和DM组则在相同的时间腹腔注射同体积的溶酶.4周后分别取大鼠血清培养PTEC,作用72 h.检测血糖及血、尿的肌酐水平,放免法测定尿微量白蛋白、尿β2-微球蛋白(β2-MG).液闪法测定PTEC钠钾ATP酶活性.结果:DM组显著高于NC组[(3 799.89±440.40) vs (2 221.52±459.89) pmol·mg-1·h-1,P<0.05];BR组与DM组比较明显降低[(2 193.56±552.57) vs (3 799.89±440.40) pmol·mg-1·h-1,P<0.05],与NC组比较无明显差异.BR组的血糖水平明显高于NC组,而与DM组差异无统计学意义,除此之外,其尿量、尿β2-MG、尿白蛋白排泄率(UAER)和肌酐清除率(Ccr)都与DM组有相同性质的变化,但变化幅度都小于DM组(P<0.05).结论:灯盏花素治疗糖尿病大鼠血清对PTEC钠钾ATP酶活性的升高有明显的抑制作用;其对DN的防治作用可能部分通过抑制PTEC钠钾ATP酶活性实现.
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光量子治疗原发性高血压患者钠钾ATP酶改变的实验研究
光量子治疗原发性高血压临床虽取得比较满意的效果,但其降压机制未明.红细胞膜钠钾ATP酶活性变化,作为原发性高血压发病机制之一已得到认可[1].本文从检测红细胞膜ATP酶活性入手,观察30例原发性高血压患者于光量子治疗前后ATP酶活性的改变及血压的改变,以探讨光量子治疗原发性高血压其疗效机制与光量子对红细胞膜ATP酶活性的影响有关.
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槲皮素对高糖诱导大鼠近端小管上皮细胞肥大影响
目的 探讨槲皮素对高糖诱导大鼠肾脏近端小管上皮细胞(PTEC)肥大抑制作用及机制.方法 采用手工微分离法,获得原代大鼠PTEC,将细胞分为5组:对照组,高糖组,槲皮素低、中、高剂量组,作用72 h后检测细胞体积、3H-亮氨酸掺入量以及蛋白质含量;液闪法测定细胞钠钾ATP酶活性;Western blot测定单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达;酶联免疫吸附法测定细胞培养上清细胞间黏附分子1(ICAM-1)、白细胞介素lβ(IL-1β)、甘露糖结合凝集素(MBL).结果 与高糖组比较,槲皮素中、高剂量组作用72 h后PTEC体积[(113.33 ±2.44)、(114.71 ±2.55)FSC]明显减小,细胞内蛋白含量[(5.03±0.21)、(4.35 ±0.24) cpm/105细胞]明显降低,钠钾ATP酶活性[(2 489.76 ±218.54)、(2 311.55±209.63) μmol/g·h]明显降低,细胞MCP-1蛋白表达[(0.37+0.02)、(0.39+0.02)]和培养基中ICAM-1、IL-1β、MBL含量[分别为[(1 1.25±2.71)、(11.12±2.56),(97.21±12.26)、(96.11±10.53)和(16.87±3.79)、(15.63±3.78) μg/g]明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 槲皮素对高糖诱导大鼠PTEC肥大有明显的抑制作用,其机制可能与抑制高糖环境炎症因子表达和稳定钠钾ATP酶活性有关.
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低浓度哇巴因对人白血病细胞株Jurkat的生长调控作用及其分子机制初步研究
目的:观察低浓度哇巴因对人白血病细胞株Jurkat生长的影响并初步探讨哇巴因特异性调节Jurkat细胞生长的机制.方法:分别用不同低浓度哇巴国作用于人白血病细胞株Jurkat后,采用四甲基偶氮哇盐MTT法检测细胞增殖情况、流式细胞学FCM技术检测细胞凋亡情况以及细胞内线粒体膜电位变化情况,Westemblot法观察哇巴因对Jutkat细胞膜表面钠钾ATP酶的表达调节作用.结果:MTr及FCM检测结果表明随着哇巴因浓度的增高,哇巴因对Jurkat细胞的增殖抑制及促凋亡作用越明显.WestemBlot结果显示30nM及50nM哇巴因作用于Jurkat细胞株48h后引起细胞钠钾ATP酶表达下调,[3H]-哇巴因结合实验结果显示在Jurkat细胞株随着哇巴因作用浓度升高,细胞膜钠泵对哇巴因的素和力逐渐下降.结论:低浓度哇巴因即可抑制白血病细胞株Jurkat增殖并诱导其凋亡.这种特异性细胞生长调控作用与哇巴因引起的细胞膜钠钾ATP酶表达变化相关,终引起细胞内线粒体膜电位发生变化,释放相关凋亡蛋白,诱导细胞凋亡.
