中国医药生物技术杂志
Chinese Medicinal Biotechnology 중국의약생물기술
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国医药生物技术协会
- 影响因子： 0.36
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1673-713X
- 国内刊号： 11-5512/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
巢式序列特异性引物PCR方法检测HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合的临床应用研究
目的 探索临床应用巢式序列特异性引物聚合酶链式反应(PCR-SSP)方法 检测HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合状态的可行性.方法 选取25对拟行HLA单倍体相合造血L干细胞移植治疗的实体肿瘤患者及其供者,供受者为母子关系15例,父子关系10例.采集供受者外周血提取基因组DNA,采用巢式PCR-SSP方法 检测患者外周血中供者来源的HLA-DRB1位点,并计算母胎微嵌合阳性率.随机选取经巢式PCR.SSP证实嵌合刚性和阴性且供受者性别不同的患者各4例,采用荧光原位杂交(FISH)技术进行重复检测,并与巢式PCR-SSP方法 的检测阳性率进行比较,同时采用噻唑蓝法检测这8例患者分别与其亲缘供者和HLA完全不相合无关第3人之间的混合淋巴细胞增殖反应(MLR),并计算增殖指数(SI).结果 巢式PCR-SSP方法 灵敏度町高达0.001%,并具有较好的特异性.巢式PCR-SSP检测显示,在母子移植关系患者中母胎微嵌合阳性检出率为40%(6/15),而在父子移植关系患者中母胎微嵌合阳性检出率为0.巢式PCR-SSP方法 的检测灵敏度与FISH技术相比明显增高,其检测阳性率分别为50%(4/8)和12.5%(1,8).MLR检测显示,嵌合阳性患者对其亲缘供者和无关第3人外周血单个核细胞(PBMC)的S1分别为(0.949±0.023)、(1.320±0.095),嵌合阴性患者对其亲缘供者和无关第3人PBMC的SI分别为(1.133±0.036)、(1.245±0.069);嵌合阳性患者对其亲缘供者PBMC的增殖反应强度与嵌合阴性患者相比明显降低(P=0.001),并且也显著低于其对无关第3人PBMC的增殖反应强度(P=0.003).结论 巢式PCR-SSP方法 灵敏度高、特异性好,适用于临床HLA单倍体相合供受者间母胎微嵌合状态的快速检测.
-
卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv与鼠HSP70融合蛋白的构建、表达及鉴定
目的 构建卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv与小鼠热休克蛋白70(mHSP70)融合蛋白6811ScFv/mHSP70,并初步鉴定其免疫活性.方法 根据Genebank上已发表的mHSP70基因序列(NM_010478)合成引物行PCR扩增,以扩增所得mHSP70基因插入pET30a(+)-6811ScFv质粒后转化入E.coli DH5a,获得pET30a(+)-6B11ScFv/mHSP70重组质粒.将鉴定正确的pET30a(+)-6811ScFv/mHSP70重组质粒转化入E.coli BL21(DE3),获得E.coli BL21(DE3)[pET30a(+).6811ScFv/mHSP70]重组菌株.以异内基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并行SDS-PAGE分析,对表达产物进行复性和Ni2+-NTA柱亲和层析纯化后,采用蛋白质印迹法和ELISA方法 进行鉴定和免疫活性检测.结果 6811ScFv/mHSP70融合基因测序结果基本与理论序列相符.SDS-PAGE分析显示,重组菌株表达产物相对分子质量与预期相符.复性、亲和层析纯化后的蛋白复性率达20.9%,蛋白纯度达95%以上.蛋白质印迹分析证实6B11ScFv/mHSP70融合蛋白相对分子质量为104 000,ELISA检测表明其具有6811ScFv和mHSP70的免疫活性.结论 构建表达的6811ScFv/mHSP70融合蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其体内外抗卵巢癌活性奠定了基础.
-
不同工艺人血白蛋白与地西泮结合功能的比较研究
目的 研究比较不同生产工艺制备的人血白蛋白(HSA)与地西泮的结合功能.方法 在0.1 mol/L的地两泮储备液中加入PBS缓冲液,并调整地两泮的终浓度分别为5.0、10.0、15.0、20.0、25.0 μmol/L,用可见-紫外分光光度计于波长254 nm处测定各样品的吸光度(A)值并绘制标准曲线.取预处理后的各HSA样品(0.615 mmol/L),分别加入终浓度为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mmol/L的地两泮储备液,采用超滤离心法测定超滤透析液中游离地西泮浓度,据此参照公式计算在地西泮浓度为0.1 mmol/L时HSA与地两泮的结合率,以及各HSA样品与地西泮之间的结合常数.结果 标准曲线显示地西泮浓度与A254值呈线性关系.各HSA样品与地西泮结合率的检测结果显示,HSA与地西泮的结合率高为98.18%,低为97.47%,不同生产工艺制备的样品间比较,HSA与地西泮的结合功能差异均无统计学意义.各HSA样品结合常数范围在6×104～10×104 mol-1之间,国内不同生产工艺制备的各HSA样品的结合常数平均值约为9.00×104 mol-1,与国外HSA样品(8.91×104 mol-1)比较差异无统计学意义,其中采用Cohn's改良法(离心)制备的样品结合常数平均值低(7.78×104 mol-1),采用Cohn's经典法(压滤)制备的样品结合常数平均值高(9.57×104 mol-1),生产工艺对于HSA的结合常数没有明显影响.结论 不同生产工艺制备的HSA与地西泮的结合功能基本一致.
-
耐高温微生物β淀粉酶的制备及其酶学性质的研究
目的 筛选高产微生物β淀粉酶的优良菌株,通过微生物发酵法制备微生物β淀粉酶.方法 从南宁明阳生化淀粉厂附近的土壤分离出枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)原始菌株,取10 g土样制成稀释100-2～10-4的倍,平面涂布,单菌落平面纯培养后,纯化选得产β淀粉酶原始菌株,鉴定为枯草芽孢杆菌(命名为NKJ-00),采用NTG诱变法对枯草芽孢杆菌诱变得突变株,过滤、离心得β淀粉酶粗酶液,采用硫酸铵沉淀法纯化:用蒸馏水代替酶液作为对照组.测定β淀粉酶的酶活力,且对其适温度、熟稳定性、pH的稳定性和金属离子对其的影响等酶学性质进行了测定;后对β淀粉酶转化可溶性淀粉溶液制备麦芽糖的能力进行了测定.结果 枯草芽孢杆菌原始菌株产酶能力为220～230 U/ml,得到的4株突变株产酶活力远高于原始菌株,其中NJK-05产酶能力及稳定性佳,传6代后发酵产酶能力稳定在1500 U/ml以上.用NKJ-05菌株发酵制得耐高温微生物β淀粉酶,酶适温度60～65℃,酶活力为2.2万U/ml,50～65℃是稳定的,pH 5～8时相对稳定.pH>8相对酶活下降较明显,pH<5时,相对酶活迅速下降:金属离子对β淀粉酶活性有一定的抑制.提取纯化后的β淀粉酶作用于22%～25%的可溶性淀粉溶液得到60%～70%的麦芽糖浆.结论 β淀粉酶可通过微生物发酵法生产,微生物β淀粉酶的稳定性、耐高温等指标均超过植物β淀粉酶,纯度基本上达到工业生产的要求.
-
我国部分省份(地区)汉族人群HLA-Ⅰ类基因多态性地区差异分析
目的 探讨我国部分省份(地区)汉族人群HLA-Ⅰ类经典基冈座位HLA-A、HLA-B、HLA-Cw位点的群体遗传学特点及其基因频率分布的地区差异.方法 选取1014例无关汉族拟行造血干细胞移植治疗患者及其健康家系供者的血液样本,提取基因组.DNA后,采用序列特异性引物聚合酶链式反应(PCR-SSP)分型技术进行HLA-A、HLA-B、HLA-Cw位点基因分型,分析不同地区汉族人群及不同种族间的基因频率分布特征.基于文献报道的我国不同地区汉族人群及不同种族的HLA-Ⅰ类基因频率资料,计算种群间遗传距离(D),比较不同地区汉族人群及不同种族间遗传距离差异.结果 Hard-Weinberg吻合度检验表明,本研究抽样群体适于进行遗传学统计分析.HLA-A位点共检测出14种基因型,常见的是A*02(0.330)、A*11(0.240)、A*24(0.155)、A*33(0.075);HLA-B位点共检测出27种基因型,常见的是B*13(0.134)、B*15(0.143)、B*40(0.133)、B*46(0.102);HLA-Cw位点共检测出13种基因型,常见的是Cw*01(0.157)、Cw*03(0.247)、Cw*07(0.181)、Cw*08(0.106).群体汉族与其他人种间HLA-A、HLA-B基因频率差异均有统计学意义(P<0.05);除兰州汉族人群仅同南方汉族、湖南、山东、江苏、台湾汉族人群间HLA-A、HLA-B基因频率差异有统计学意义(P<0.05)外,其余各地区汉族人群间HLA-A、HLA-B基因频率差异均有统计学意义(P<0.05).各地区汉族人群间平均遗传距离D=0.164,辽宁和北方汉族人群间遗传距离(D=0.064)小,江苏与湖南汉族人群间遗传距离(D=0.299)大;不同地区汉族人群间遗传距离普遍小于种族间遗传距离.结论 我国不同地区汉族人群HLA-Ⅰ类基因频率分布存在显著差异,但其差异要明显小于世界不同人种间的分布差异.我国汉族人群所特有的HLA-Ⅰ类基因频率分布格局资料对区域性疾病的个性化治疗、遗传易感性及疾病防治等研究具有很好的理论及应用价值.
-
转入人肿瘤坏死因子α基因的鱼腥藻IB02(+)的细胞毒活性及其体内抗肿瘤药效学研究
目的 测定转入人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因的鱼腥藻IB02(+)的抗肿瘤药效.方法 在相同的培养条件下通过100 L光生物反应器培养4组转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+),分别命名为批次1、2、3、4,经过反复冻融和真空冷冻干燥处理,得到转入hTNFa基因鱼腥藻IB02(+)粗提物干粉样品.采用结晶紫染色法检测转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+)粗提物干粉样品的细胞毒活性,并通过测定不同批次间的细胞毒活性差异检测其稳定性.采用转入人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因鱼腥藻IB02(+)对小鼠肝癌细胞H-22的抑制来测定体内抗肿瘤药效.结果 转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+)的细胞毒活性约为8000 U/mg.4种不同批次的转入hTNFα基因蓝藻IB02(+)细胞毒活性相当,hTNFα蛋白性质比较稳定.小鼠1次口服人耐受量为16.0g/kg,在观察期内所有受试小鼠无一死亡,生长发育正常,主要脏器未见异常,未显示明显毒性.药效学研究表明,口服6 g/Kg转入hTNFα基因蓝藻IB02(+)对小鼠肝癌细胞H-22的抑制率平均值(37.7±3.4)%,高值为41.5%(P<0.001).结论 转入hTNFα基因鱼腥藻IB02(+)抗肿瘤作用明显,无明显的毒副作用且药效学性质稳定.
-
利用噬菌体随机肽库筛选表达Aβ靶向肽的噬菌体
目的 抗Aβ神经毒性的Aβ靶向肽噬菌体的筛选.方法 分别合成Aβ1-10序列组成的短肽并将其生物素化;以生物素化Aβ1-10为靶分子,用噬菌体展示技术及液相亲和捕获法筛选出特异性高亲和力的噬菌体;采用生物传感分析技术,通过结合特异性实验和短肽竞争性抑制实验,检测所筛选的噬菌体与靶分子之间的亲和动力学关系.结果 经过对靶分子Aβ1-10的3轮筛选,筛出了与Aβ1-10特异性结合的单克隆噬菌体;生物传感分析技术结果进一步表明,靶分子(Aβ1-10)与所筛选噬菌体之间的结合具有高度特异性.结论 筛选出了展示特异性高亲和力结合Aβ1-10短肽的噬菌体.
-
肿瘤分子靶向治疗药物及临床应用研究新进展
随着分子生物学的不断发展,人们对肿瘤发生、发展机制的了解也越来越深入.近年来,与该过程相关的一些特异性蛋白质,如生长因子受体、信号转导分子、细胞周期蛋白、细胞凋亡调节因子、血管内皮生长因子(VEGF)等被相继发现,并且都有可能成为肿瘤治疗的分子靶点,于是学者们提出了肿瘤分子靶向治疗的概念,即利用特异性分子(单克隆抗体、小分子物质)封闭或抑制这些分子靶点,从而抑制肿瘤细胞的生长、转移或诱导其凋亡[1].
-
NK细胞免疫球蛋白样受体与异基因造血干细胞移植的研究进展
NK细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptors,KIR)是主要表达于人NK细胞表面的受体,在所有人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)Ⅰ类分子所识别的NK细胞独特型受体中,免疫球蛋白样超家族受体KIR占主导地位.由于它的配体参与多种免疫反应,因此,KIR在机体抗感染免疫、肿瘤免疫和移植免疫中都发挥重要作用.
-
鼻腔给药系统的研究进展
鼻腔给药系统是指在鼻腔给药后,经鼻黏膜吸收从而发挥局部或伞身治疗或预防作用的一类制剂.随着新辅料和新技术的逐渐应用,鼻腔以其可避免胃肠道酶的破坏作用和肝脏的首过效应,药物吸收迅速、起效快,易于被患者接受和顺应性好等特点,现已被看作是疫苗、激素、多肽等许多药物的佳给药途径.
-
中药有效成分石杉碱甲的多靶点作用研究进展
石杉碱甲(Huperzine-A,HupA)是从中国民问草药蛇足石杉(Huperzia serrata)(又名千层塔)中分离得到的1种新型石松类生物碱有效单体.近年来大量临床研究发现其对阿尔茨海默病(AD)、血管性痴呆(VD)、智力低下、精神分裂以及其他神经退行性疾病均有一定的治疗作用,且外周不良反应轻微.因此,HupA具有多重神经保护作用.除了乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)之外,它还具有多个分子作用靶点.
-
疫苗中和抗体体外检测方法的研究进展
中和抗体是抗病毒免疫的主要因素,也是疫苗免疫治疗效果的重要检测指标之一.预防疫苗的免疫保护性主要体现于是否可诱导出高滴度的中和抗体,因此中和抗体活性也是疫苗评估和质控的重要依据.迄今为止,根据已知抗原特性、抗原与抗体反应特点以及结果判定方法的不同,已建立了多种病毒中和抗体活性的体外测定方法.本文就近年来关于中和抗体活性体外测定方法的新研究进展做一综述.
-
秋水仙素诱导黄芩多倍体的研究
黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)为唇形科植物,以根入药.根含黄芩素、黄芩甙、双黄芩素、汉黄芩甙、可加黄芩素、黄芩黄酮Ⅰ和Ⅱ等多种有效成分[1].有清热燥湿,泻火解毒,止血,安胎的功效.多用于湿温、暑热痞满,泻痢,黄疸,肺热咳嗽,高热烦渴,血热吐衄,痈肿疮毒,胎动不安等症[2].
-
如何正确进行生物医学科研设计 V.如何合理选择4种多因素实验设计(1)
编者按生物医学科研的研究对象是生物体,而生物体具有极大的变异性.科研的目的就是要从表面上看似杂乱无章的事物或现象中找出规律性的东西来,以便正确地解释和揭示事物或现象的变化、发展乃至消亡的规律,从而达到认识人类社会并促进其发展、认识自然,改造自然以至于征服自然之目的.人类要完成此重任,仅靠热情和苦干是不够的,必需加上巧干.所谓巧干,就是要充分利用人类已经积累起来的宝贵经验,加上人类特有的创造性思维和勇于实践的精神,在确立了可行的奋斗目标之后,对未知事物或现象进行调查或试验.要想使调查或试验得出的结论真实可信,同时花费的人力、物力,财力和时间又比较少,就需要有科学完善严谨的科研设计方案的指导.
-
澳大利亚的生物科技:投资及合作机遇
谈及澳大利亚,人们首先联想到的往往是美丽的景观、丰富的矿产以及上好的羊毛等等,其实澳大利亚的生物科技也不逊色.笔者为澳大利亚驻华大使馆商务处的官员,多年从事澳中牛物科技领域的投资与合作促进工作,现就澳大利亚的生物科技,重点是澳大利亚医药生物技术的发展及其国际合作情况做一扼要介绍.
-
第二届中国生物产业大会会议纪要
在国家发改委等有关部委的支持下,由中国生物工程学会、中国医药生物技术协会等15个国家级学,协会、科学时报社和湖南省人民政府共同主办、长沙市政府承办的第二届中国生物产业大会于2008年6月21-22日在湖南省长沙市隆重召开.
