大蒜素微乳的制备与质量研究

目的 研究稀释后可供静脉注射的大蒜素微乳的处方及制备工艺,并对大蒜素微乳进行质量评价.方法 以聚氧乙烯氢化蓖麻油RH-40为表面活性剂、无水乙醇为助表面活性剂、油酸为油相,绘制该系统的三元相图;在此基础上,进行处方筛选并确定优的处方和该注射液的制备工艺;建立高效液相色谱法测定微乳中大蒜素的含量;分别考察大蒜素微乳的外观性状、pH值、离心稳定性、形态、粒径及粒度分布、稳定性等.结果 该液相色谱含量测定方法简便、准确、可靠、切实可行;所制得的大蒜素微乳较稳定,外观澄明,略带淡蓝色乳光,为O/W型微乳,呈微弱酸性;球形完整,分散良好;粒径为14.9 nm,稀释50倍后粒径为13.3 nm,均呈Gauss分布.结论 大蒜素微乳易于制备,较稳定,各项理化性质良好,质量易控.

TFPI-2/KD1的克隆表达及其生物学性质研究

目的 克隆表达人组织因子途径抑制物-2(hTFPI-2)Kunitz结构域1(KD1)基因.方法 提取健康女性正常分娩胎盘中总RNA,采用RT-PCR法合成hTFPI-2全长cDNA后行PCR扩增,以扩增得到的hTFPI-2/KD1基因片段与原核表达载体pET22b进行连接并转化E.coli DH5α,获得重组质粒pET22bhTFPI-2/KD1.将重组质粒pET22b-hTFPI-2/KD1转化至E.coli BL21,获得重组菌株E.coli BL21[pET22b-hTFPI-2/KD1].以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和蛋白质印迹分析,并利用Ni2+-NTA柱进行亲和层析纯化,采用发色底物法和明胶酶谱法分别检测hTFPI-2/KD1抑制胰蛋白酶和基质金属蛋白酶(MMP)的活性.结果 核酸序列测定显示克隆的hTFPI-2/KD1基因序列与理论序列相符.SDS-PAGE和蛋白质印迹分析显示E.coli BL21[pET22b-hTFPI-2/KD1]诱导表达产物相对分子质量与预期相符,经纯化后获得了完整的hTFPI-2/KD1蛋白,发色底物法和明胶酶谱法检测显示其具有抑制胰蛋白酶、MMP-2和MMP-9的活性.结论 通过原核表达系统成功获得高效表达并具有生物活性的hTFPI-2/KD1,为进一步研究其功能奠定了基础.

角质细胞生长因子对老龄鼠胸腺细胞增殖作用的研究

目的 观察角质细胞牛长因子(KGF)通过恢复胸腺上皮细胞(TEC)数量促进老龄鼠胸腺细胞增殖的作用.方法 ①体内实验:BALB/C小鼠10只,随机分为KGF处理组和对照组,每组各5只,连续7 d分别给予皮下注射重组人KGF(5 mg·kg-1·d-1)和生理盐水,4周后枪测小鼠胸腺和脾组织的细胞总数,流式细胞仪分别检测胸腺组织中CD4单阳件(CD4SP)、CD8单阳性(CD8SP)、CD4CD8双阳性(DP)、CD4CD8双阴性(DN)以及脾组织中CD4SP、CD8SP各T细胞业群的比例:②体外实验:鼠胸腺上皮来源的1C6细胞,分别经含不同浓度(25、50、100、200、400、800 ng/m1)的重组人KGF和不含重组人KGF的完全培养液(对照组)作用24 h,采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率.结果 细胞计数和流式细胞仪检测显示,与对照组相比,KGF处理组平均胸腺细胞总数和CD4SP、CD8SP、DP、DN各T细胞亚群的平均细胞数以及KGF处理组平均脾细胞总数和CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的平均细胞数均有明显增加(均P<0.05).MTT法检测显示,在低浓度(<200 ng/ml)时,1C6细胞增殖率随KGF浓度的增加不断升高;当KGF浓度为200 ng/ml时,1C6细胞增殖率达到高值:而在高浓度(＞200 ng/ml)时,1C6细胞增殖率随KGF浓度的增加又逐渐下降;与对照组比较,浓度为100、200、400 ng/ml的重组人KGF对1C6细胞具有明显的促增殖作用(均P<0.05).结论 KGF可通过恢复老龄鼠TEC数量以及促进胸腺细胞生成和增加成熟T细胞向外周输出而增强机体的免疫力.

海藻糖分子的细胞保护作用研究进展

海藻糖(trehalose)是由2个葡萄糖分子通过α,α-1,1糖苷键连接的非渗透性的一个非还原性双糖,在自然界中广泛分布,尤其是那些具有较强抗脱水作用的生物体,这些生物体甚至在丧失了身体99%水分的情况下仍能生存.

以人血清白蛋白为载体的长效蛋白质药物的研究进展

基因工程和蛋白质工程的发展极人地促进了以胰岛素、干扰素、白介素和单克隆抗体等为代表的多肽和蛋白质类药物的研究与开发,使之成为现代医药产品研究发展的方向.

抗肿瘤药物的靶向给药系统研究进展

目前,临床常用的抗肿瘤药物有70种左右,已进入临床试验的抗肿瘤新药就有四百多种,大多数药物由于特异性较差,常规治疗剂量即可对正常组织器官产生显著的毒副作用而导致患者不能耐受.

几种天然镇痛多肽的研究进展

疼痛是与组织损伤或潜在损伤相关的一种不愉快的主观感觉和情感体验,是许多疾病的共同症状.以往临床治疗以阿片类和非甾体类镇痛药为主,但是对慢性神经源性等疼痛的治疗效果不理想,且阿片类镇痛药在发挥镇痛作用的同时往往还伴随饱和性和依赖性等副作用.

TAC1在白念珠菌对抗真菌药物产生耐药性中的作用

由于器官移植患者大量使用免疫抑制剂、癌症患者长期接受放化疗以及广谱抗生素的滥用和艾滋病的广泛传播,免疫功能低下者人数不断增多,真菌感染发生率逐年增加,尤其是白念珠菌(Candida albicans)感染为常见.三唑类药物氟康唑是治疗念珠菌感染的常用药物,长期用药和重复给药往往会引起耐药现象,终导致治疗失败.

第四届全国生物治疗学术大会在天津召开

如何正确进行生物医学科研设计V.如何合理选择4种多因素实验设计(2)

编者按生物医学科研的研究对象是生物体,而生物体具有极大的变异性.科研的目的就是要从表面上看似杂乱无章的事物或现象中找出规律性的东西来,以便正确地解释和揭示事物或现象的变化,发展乃至消亡的规律,从而达到认识人类社会并促进其发展、认识自然、改造自然以至于征服自然之目的.人类要完成此重任,仅靠热情和苦干是不够的,必需加上巧干.

干细胞研究为制药业辟新径

干细胞这一概念自19世纪问世以来,已得到科学家越来越广泛的研究.干细胞分为两类:一类是胚胎干细胞,是有发育全能性的细胞,可以定向分化为几乎所有种类的细胞,甚至形成复杂的组织和器官,由此在药物开发、细胞治疗和组织器官替代治疗中发挥着重要作用,成为组织器官移植的新资源;另一类是成体干细胞,它是出生后遗留在机体各种组织器官内的干细胞.

生物治疗肿瘤治疗的新希望

生物治疗(Biotherapy)通常是指通过调动机体的防御机制或借助生物制剂的作用,以调节机体的生物学反应,从而抑制或阻止肿瘤生长的治疗方法.20世纪80年代,美国学者Oldham提出了生物反应调节(BRM)理论,以后生物治疗成为继手术、放疗、化疗之后的第四大肿瘤治疗模式.并因其安全、有效、毒副作用低等特点,被认为是本世纪肿瘤综合治疗模式中活跃,有前途的手段.

突变型Axin2对细胞增殖的影响及其机制的研究

目的 Axin是新近发现的Wnt信号传导系统的抑痛基因,本文在体研究其羧基端缺失突变(mtAxin2)对细胞增殖的影响并探索其相关机制.方法 采用pCMV-Flag-mtAxin2质粒瞬时转染293细胞,并用G418筛选稳定表达mtAxin2的细胞株;使用Dual-Luciferase报告检测系统检测Firefly和Renilla荧光酶活性,采用Trpan Blue染色方法检测细胞增值活性,用流式细胞仪检测mtAxin2对细胞周期的影响,应用Western blot方法检测mtAxin2对Wnt信号传导系统下游皋因的影响,G0/1细胞间步化S期进入实验研究mtAxin2对细胞生长影响的机理.结果 经G418筛选后在293细胞中获得的细胞株,western blot检测可见明显的mtAxin2蛋白表达;Western blot和Dual-Luciferase报告检测系统显示在稳定表达mtAxin2的细胞株中β-catenin蛋白水平增加,TCF活性增高;通过Trypan Blue排除实验计数绘制细胞生长曲线,显示mtAxin2促进细胞的生长;流式细胞仪检测发现在稳定表达mtAxin2的细胞株中S期细胞的比例较高.Western blot结果显示在稳定表达mtAxin2的细胞株中β-catenin蛋白水平上升的同时,磷酸化的β-catenin蛋白水平却下降,下游基因产物CyclinD1和cdc2表达也增加;G0/G1期同步化细胞释放后12 h流式细胞仪检测发现稳定表达mtAxin2的细胞株巾S期细胞比例明显增加,为293细胞的2～3倍.结论 Wnt信号传导系统在细胞生长中起重要作用,mtAxin2通过cyclin D1促进了细胞的增殖,发挥癌基因的作用.

海藻酸钠/壳聚糖微囊冻存的低温显微实验

目的 研究海藻酸钠.壳聚糖.海藻酸钠微胶囊(ACA)的冻存机制,探索一种ACA微囊低温保存的降温方法.方法 ACA微囊随机分为2组,分别加入生理盐水(对照组)与终浓度为10%的低温保护剂二甲基亚砜(DMSO)(DMSO组),每组ACA微囊悬液置于可控低温显微镜载物台中,分别以1、10、30、100℃/min的降温速率降温至-120℃左右时停止降温,在显微镜下观察ACA微囊的形态改变.将2组完全冷冻的ACA微囊以50℃/min复温速率复温至37℃,在倒置显微镜下观察其形态学改变,计算微囊的完好率、皱缩率与破损率.结果 对照组以1、10℃/min的降温速率冻存ACA微囊时,生成的冰晶粗大,冰晶的生长可导致微囊发生形变;而DMSO组以30、100℃/min的降温速率冻存ACA微囊时,生成的冰晶较为细小,对微囊的损伤也更小,并且复温后的微囊形态保存良好,与对照组和同组以1、10℃/min降温速率冻存比较,其微囊完好率明显增高(P<0.05).结论 微囊在低温保存过程中主要受到冰晶生长所导致的机械性损伤,提高降温速率与添加低温保护剂可以有效地抑制冰晶生长.

活化单倍相合异基因造血干细胞治疗晚期难治性肿瘤的初步观察

目的 探讨活化单倍相合异基因造血干细胞(allogeneic haploidentieal hematopoietic stem cells,haplo-HSC)治疗各类晚期难治性肿瘤的安全性和临床疗效.方法 42例晚期转移性或化疗抵抗件肿瘤患者入组,均接受一个疗程haplo-HSC治疗,分别通过影像学检查、生活质量评分以及外周血淋巴细胞业群、细胞因子变化情况来评估临床疗效和免疫学反应.结果 ①42例患者中,7例部分缓解(PR),25例疾病稳定(SD),10例疾病进展(PD),有效率(CR+PR)为16.67%,临床获益率(CR+PR+SD)为76.19%.中位随访时间21个月,中位达进展时间(mTTP)为3.7个月,中位生存时间为7.8个月,1年生存率为14%;②治疗后患者的CD3+、CD4+.、CD4+,CD8+、CD3-CDl6+CD56+NK均明显升高(P<0.05),而CD8+、CD4+CD25+Treg明显降低(P<0.05);TNF-α、IFN-γTh1类细胞因子明显升高(P<0.01),而FGF-β明显下降(P<0.05);③除一过性的发热、乏力外,未出现其他不良反应.结论 晚期难治性肿瘤患者,采用活化haplo-HSC治疗可以增强自身免疫功能,提高生存率和牛活质量,并且有良好的耐受性.

氟达拉滨联合瘤苗抗肿瘤生物治疗作用的实验研究

目的 探讨氟达拉滨对小鼠CD4+CD25+Treg细胞的影响,同时研究其抗肿瘤作用.方法 氟达拉滨或生理盐水分别腹腔注射10只小鼠,用流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞相对量.氟达拉滨或生理盐水分别腹腔注射10只小鼠,4 d后用丝裂霉素灭活的肿瘤细胞免疫小鼠,观察小鼠抗肿瘤的能力(观察肿瘤发生率和出瘤时间);用乳酸脱氢酶杀伤实验进一步验证氟达拉滨可增强CTL的杀伤活性.结果 氟达拉滨组CD4+CD25+Treg细胞占淋巴细胞百分比为(1.150±0.256)%,对照组为(1.488±0.270)%,氟达拉滨组明显低于对照组(P<0.05);氟达拉滨+接种瘤苗组、生理盐水+接种瘤苗组、氟达拉滨+未接种瘤苗组和生理盐水+未接种瘤苗组小鼠第13天肿痛发生率分别为10%、30%、50%和70%,两两间差异均有统计学意义(P<0.05);氟达拉滨+接种瘤苗组、生理盐水+接种瘤苗组、氟达拉滨+未接种瘤苗组和生理盐水+未接种瘤苗组小鼠分别在接种后第13天、第10天、第8天和第5天发现出瘤现象;对照组的肿瘤牛长曲线较为陡直,氟达拉滨组的生长曲线较为平缓.氟达拉滨联合瘤苗接种组和单纯瘤苗接种CTL的活性分别为24.425±13.544和17.575±10.260,两者间差异有统计学意义(P<0.05).结论 低剂量氟达拉滨降低CD4+CD25+Treg细胞,使其抗肿瘤免疫作用增强,联合接种灭活瘤苗进一步增强抵抗肿瘤攻击的能力.

GM-CSF修饰的异体肿瘤细胞疫苗治疗晚期肿瘤的Ⅰ期临床试验

目的 探讨GM-CSF修饰的异体肿瘤细胞疫苗的安全性和临床有效性.方法 收录我院2007年1月至2008年5月病理明确的Ⅳ期癌症患者50例,其中恶黑11例,卵巢癌10例,肾癌15例,胃癌,结直肠癌14例.每周皮卜注射肿瘤细胞和GM-CSF分泌细胞混合物1 ml:共受6次.在第1、5次注射同时,进行DTH接种试验.治疗前后取外周血样进行淋巴细胞亚型及细胞因了检测.治疗完成1个月后进行影像学检查.结果 所有患者对治疗耐受良好,无脱组患者.丰要不良反应为,注射局部的红肿疼痛,硬结,瘙痒和发热.4例治疗后影像学好转但未达到部分缓解,32例稳定,14例进展.DTH阳性率68%(34/50).流式细胞仪检测治疗后CD8+T细胞(CTL)明显增加(P<0.05),CD4+CD25+CD127-T细胞(Treg)降低(P<0.05).ELISA检测IFN-γ治疗前后的变化无统计学意义,但有升高趋势.结论 异体GM-CSF肿瘤疫苗免疫治疗安全,耐受良好,能改善患者的机体免疫状态.

CD80,CD86和ICAM-1在急性白血病细胞上的表达及意义

目的 通过流式细胞术检测初诊患者急性白血病细胞上共刺激分子CD80、CD86以及黏附分子ICAM-1的表达,以了解其表达规律.方法 通过流式细胞仪检测60例初治急性白血患者白血病细胞上CDS0、CD86和ICAM-1的表达率;男37例,女23例,年龄2～85岁,中位年龄28岁:其中ALL20例,AML 40例(M16例、M27例、M37例、M415例、M55例).结果 ALL组中的CD86的表达为(32.880±6.665)%,显著高于正常对照(P<0.01),而CD80与正常BM对照比较无统计学意义;CD80、CD86在AML(M1、M2和M3)细胞上的表达分别为(0.766±0.187)%、(27.210±7.581)%,均显著高于相应的正常骨髓对照(P<0.01);在AML(M4和M5)细胞上CD80、CD86的表达与正常对照比较均无统计学意义.ICAM-1在ALL组中的表达与正常BM对照比较无统计学意义;在AML(M1、M2和M3)细胞上(63.820±7.484)%,显著高于相应的正常骨髓对照(P<0.01):而AML(M4和M5)细胞上表达为(50.590±7.092)%,显著低于相应的正常骨髓对照(P<0.01).结论 CD80、CD86和ICAM-1在初治ALL和AML白血病细胞上的表达呈一定变异性,CD86在ALL上呈高表达,CD80、CD86和ICAM-1在AML(M1、M2和M3)上均呈高表达,而ICAM-1在AML(M4和MS)上均呈低表达.

逆飙而上默克雪兰诺的中国攻略

2008年11月28日,卫生部国际交流与合作中心--默克雪兰诺合作签字仪式在卫生部举行,本刊记者出席了签字仪式,并对默克雪兰诺高层全球副总裁兼国际部总裁乐崔礼(Franck Latrille)博士、国际业务部亚太区高级副总裁soeren Hermansson先生及中国区总经理隋承浩博士进行了专访.