中国医药生物技术杂志
Chinese Medicinal Biotechnology 중국의약생물기술
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国医药生物技术协会
- 影响因子： 0.36
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1673-713X
- 国内刊号： 11-5512/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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树突状细胞诱导的CIK细胞对肺癌生长的抑制作用
目的 探讨树突状细胞诱导的 CIK 细胞对肺癌移植瘤细胞生长的抑制作用.方法 建立肺癌皮下移植瘤模型;分离患者外周血单个核细胞,培养成熟的 DC 及 CIK 细胞;用反复冻融肺癌组织的方法 制备肿瘤细胞裂解物并负载 DC,诱导 DC-CIK 细胞;进行肺癌移植瘤内注射,比较两组裸鼠移植瘤体积及重量,观察其抑瘤情况.结果 DC-CIK 细胞对肺癌皮下移植瘤细胞的抑制率为70.3%,抑制作用明显强于 DC 或 CIK 细胞的抑制作用(P < 0.05).结论 树突状细胞诱导的 CIK 细胞能够有效抑制肺癌移植瘤生长.
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链霉菌I06A-00625发酵产物的提取分离、结构鉴定及活性研究
目的 从链霉菌 I06A-00625(cpcc201504)的代谢产物中分离得到具有抑菌活性的抗生素,并进行结构鉴定.方法 通过大孔吸附树脂 X-5、葡聚糖凝胶 LH-20 和HPLC 色谱对发酵液中活性成分进行分离纯化;根据紫外、高分辨质谱并结合 1H-NMR 和 13C-NMR 数据确定化合物结构,并进行抗菌活性研究.结果 分离纯化得到 6 个单一组分,分别为化合物I06A625A、206A 和 206B 及 3 个四烯大环内酯类抗生素Tetramycin A、Tetramycin B 和 Tetrin A.其中 206A 为首次从天然产物中分离得到.I06A625A 具有抗铜绿色假单胞菌活性;Tetramycin A、Tetramycin B 和 Tetrin A 具有抗真菌活性.结论 链霉菌 I06A-00625 可产生抗铜绿色假单胞菌的核苷类化合物及抗真菌的四烯类化合物等多种活性成分.
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人胚胎主动脉血管内皮祖细胞的分离、培养及鉴定
目的 研究人胚胎血管内皮祖细胞(EPCs)分离、扩增及鉴定的方法,并评价其分化成血管内皮细胞的能力,为人胚胎血管来源 EPCs 作为干细胞技术治疗疾病的细胞材料提供依据.方法 从 14 周龄流产人胚胎主动脉中应用胶原酶消化法分离获得 EPCs,用含有碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子和白血病抑制因子的低血清培养基体外扩增培养EPCs.分离培养的 EPCs 鉴定采用细胞免疫荧光染色、RT-PCR 及流式细胞术,检测 EPCs 细胞的特异标志CD133、CD34 和血管内皮细胞生长因子受体 2(VEGFR2).培养的 EPCs 应用 VEGF 进行诱导分化,并评价其分化成为血管内皮细胞的能力.结果 分离的人胚胎主动脉 EPCs 细胞表达 EPCs 的标志分子 CD133、CD34 和 VEGFR2.EPCs 在体外特定低血清培养条件下表现很强的增殖能力.培养的 EPCs 细胞经过VEGF 诱导后,细胞表达 CD133 明显降低,表达 vWF、CD31 和 ELAM-1 增强,并且体外成管能力和摄取Ac-LDL 能力增强,表明细胞分化成为血管内皮细胞.结论 人胚胎早期主动脉的 EPCs 具有很好的体外自我更新能力和分化成为血管内皮细胞的潜能,可作为 EPCs 治疗疾病的细胞材料.
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LC-MS/MS测定大鼠血浆中黄藤素含量及其药代动力学研究
目的 建立大鼠血浆中黄藤素的 LC-MS/MS 定量方法,并利用此方法 考察黄藤素在大鼠体内的药物动力学.方法 色谱柱为 Zorbax Eclipse XDB-C18(2.1 mm × 50 mm,1.8 μm),流动相为 0.1% 甲酸溶液-乙腈(70:30),采用多级反应模式(MRM)检测;通过大鼠眼底静脉取血,血浆经乙腈沉淀蛋白,取上清液进行 LC-MS/MS 分析,测定黄藤素血药浓度,通过 DAS 2.0 计算其药动学参数.结果 血浆中黄藤素在 0.442 ~ 44.2 ng/ml 范围内呈现良好的线性关系,方法 学精密度、回收率、稳定性等均符合要求;大鼠体内黄藤素药动学符合二室模型特征,灌胃给予40 mg/kg 黄藤素后,大鼠血浆中的黄藤素浓度在 2.8 h 达峰值,t1/2 为 6 h,大血药浓度为 19.8 ng/ml.结论 本研究建立的大鼠体内黄藤素测定方法 灵敏度高、专一性好,可用于黄藤素的体内药物动力学研究,为黄藤素应用研究提供了有力支持.
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红色荧光蛋白在酿酒酵母中的表达特性研究
目的 研究红色荧光蛋白编码基因 Dsred 在酿酒酵母菌中的快速克隆与表达.方法 根据已发表基因序列设计引物,采用连续重叠 PCR方法 快速克隆获得全长 Dsred 基因,将其与 pMD-18T 载体连接后进行测序鉴定.通过 In-fusion 方法 将鉴定正确的pMD-Dsred 重组载体与酿酒酵母表达载体 pYeDP60 进行连接,测序后利用 LiAc 方法 将鉴定正确的 pYeDP60-Dsred重组表达载体转化至酿酒酵母菌 W303-1B 中,PCR 扩增筛选阳性克隆,获得的 W303B[pYeDP60-Dsred] 工程菌经诱导培养后进行 SDS-PAGE 电泳分析和绿光激发荧光成像检测.将工程菌分别接种至 YPD、YPG、SCG 和 SCD 培养基,培养 48、72、96、120 和 144 h 后分别测定吸光度(A600)值.取诱导表达后的工程菌(菌液组)进行离心(菌体组)、离心后加甘油(高渗组)处理,分别置于 -70、-20、4、28 和 37 ℃条件培养,荧光显微镜观察其表达特性.结果 连续重叠 PCR 扩增和测序鉴定结果 表明,扩增获得的 Dsred 基因长为 678 bp,其序列与已发表的基因序列完全一致;Dsred 基因已成功插入 pYeDP60-Dsred 重组表达载体,且受酵母诱导型启动子 GAL10-CYC1 调控表达.PCR扩增筛选和 SDS-PAGE 分析显示,pYeDP60-Dsred 重组表达载体已成功导入酿酒酵母菌中,诱导表达产物相对分子质量与预期相符,且诱导后工程菌可在绿光激发下发出红色荧光.4 种培养基内工程菌的菌体生长情况无明显差别,重组Dsred 红色荧光蛋白表达不会抑制酿酒酵母菌体生长.荧光显微镜观察显示,工程菌经不同处理后,高渗组红色荧光蛋白成熟时间短,菌液组时间长;红色荧光蛋白在 37 ℃条件下培养时成熟早,但降解速度较快.结论 成功构建了 pYeDP60-Dsred 重组酿酒酵母表达载体,实现了Dsred 基因在酿酒酵母菌体内的异源表达.红色荧光蛋白表达对酿酒酵母菌体生长无明显影响,且离心保留菌体和加入甘油等缺水高渗处理都有利于红色荧光蛋白的成熟.
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以肽脱甲酰基酶为靶点的抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用
目的 建立以肽脱甲酰基酶(PDF)为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型筛选得到活性微生物发酵液粗提物样品.方法 以结核分枝杆菌 H37Rv 基因组为模板,扩增肽脱甲酰基酶的基因片段 def,构建表达载体 pET-28a-def,表达并纯化结核分枝杆菌 PDF 酶;基于 PDF 水解三肽底物for-Met-Ala-Ser 释放出游离 NH2,而游离 NH2 可与荧光胺反应产生荧光的原理,利用测定所产生荧光值的方法,建立高通量药物筛选模型;使用该模型对 12 400 个微生物发酵液粗提物样品进行筛选,同时以耻垢分枝杆菌为检定菌,平板纸片法检测样品的抗菌活性,并检测所得阳性样品的细胞毒性.结果 成功构建了表达载体 pET-28a-def;所建立的模型稳定可行,可用于以肽脱甲酰基酶为靶点的抗结核药物的高通量筛选;用该模型对 12 400 个微生物发酵液粗提物样品进行筛选,终得到 8 个对肽脱甲酰基酶抑制活性和抗耻垢分枝杆菌活性均较好的阳性样品,阳性率 0.06%;其中 5 个样品的细胞毒性较小.结论 建立了灵敏度好、稳定性高的结核分枝杆菌肽脱甲酰基酶抑制剂高通量药物筛选模型,应用该模型所得到的阳性样品具有进一步深入研究的意义.
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肝脏特异HPPCn转基因小鼠的建立及表型分析
目的 建立高表达 HPPCn 转基因小鼠,为研究该基因在肝癌发生发展中的功能提供研究模型.方法 显微注射外源基因 pGEM-A1b/his-HPPCn 至FVB/N 小鼠原核,注射受精卵移植到假孕受体出生个体.PCR 和 Southern blot 鉴定转基因小鼠基因型,Western blot和 Realtime-PCR 检测转基因阳性和阴性小鼠肝脏 HPPCn蛋白表达情况,HE 染色和透射电镜观察肝脏病理改变.结果 经检测,显微注射共产生 2 只首建鼠,转入的重组HPPCn 基因能在肝脏中特异表达,并能够稳定遗传.转基因小鼠肝脏内 HPPCn 含量明显增高.转基因后并未对小鼠造成不良影响.结论 HPPCn 参与了肝癌发生发展的过程,其在体内的高水平表达,为在体内研究该基因的功能提供了工具.
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Has-miR-204的生物学信息分析及研究进展
MicroRNA(miRNA)是一类由 21 ～ 25 个核苷酸组成的非编码蛋白质的单链小分子 RNA,它们广泛存在于真核生物中,在物种进化中相当保守,其表达具有组织特异性和阶段特异性.miRNA 基因通常位于基因间或内含子区域,在核内由 RNA 聚合酶 II 转录产生具有帽子结构多聚腺苷酸尾巴的初级 miRNA(primary miRNA,Pri-miRNA).
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海洋生物活性药物对细胞周期与凋亡的调控在抗肿瘤治疗中的作用
作为生命的发源地,海洋具有丰富的生物多样性.多数无脊椎动物(如贝类和海绵类)不具有天然抵抗力,即内在免疫系统,需要合成具有生物学活性的次级代谢产物以获得相应的功能.这些代谢产物在保护宿主的生存和适应极端环境方面起着重要的作用,也是近年来药物研发的热点.
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干细胞库研究应用进展
干细胞是一类具有自我复制更新和多向分化潜能的原始细胞群体,在一定条件下,它可以分化成多种功能的细胞或组织器官.干细胞可用于白血病、心血管疾病、糖尿病、骨及软骨缺损、老年性痴呆、帕金森病、自身免疫性疾病、脊髓损伤和遗传性缺陷以及恶性肿瘤等疾病的治疗.
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增强CpG免疫刺激作用途径的研究进展
CpG 基序(CpG motifs)是指含有非甲基化的胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)核苷酸核心的寡聚脱氧核苷酸(ODN)序列,又称为免疫刺激序列,一般为 6 个寡聚核苷酸.1995年,Krieg 等[1]研究发现非甲基化的 CpG 二寡聚核苷酸是病原体 DNA 免疫刺激活性的结构基础,自此,对 CpG 基序的各种研究得以展开,包括 CpG 基序免疫刺激机制、CpG 基序个数及结构对免疫刺激活性影响、CpG 寡聚脱氧核苷酸作为佐剂使用等.
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EGFR抑制剂细胞磷酸化筛选模型的建立与应用
表皮生长因子受体(EGFR)是一种具有酪氨酸激酶(PTK)活性的跨膜糖蛋白受体,由 N 端胞外区、跨膜区、胞内区 3 部分组成,胞内区共 542 个氨基酸残基,由近膜区、酪氨酸激酶区、C 末端等 3 个亚区构成,近膜区的前13 个氨基酸(645 ～ 657)介导胞内二聚化[1].自身磷酸化位点位于 C 末端,其中 Tyr1068 为主要的 3 个磷酸化位点(Tyr1068、Tyr1148 和 Tyr1173)之一,与细胞信号传递密切相关[2].表皮生长因子(EGF)与 EGFR 胞外区 N 端结合,受体之间二聚化形成同源或异源二聚体,二聚体促使EGFR 胞内区氨基酸残基自磷酸化,进而启动胞内信号通路,调控癌细胞的增殖、存活及凋亡[3].
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如何用SAS软件正确分析生物医学科研资料XVI.用SAS软件实现2×2列联表资料的统计分析
分析定性资料时,首先应正确判断资料所对应的列联表类型；其次根据不同的分析目的,并结合统计分析方法的应用条件,选择合适的分析方法.通常,列联表可分为:2 × 2表(4 类)、R × C 表(5 类)和高维列联表(3 类)以及具有重复测量因素的高维列联表[1].本期主要介绍 2 × 2 列联表资料统计分析的 SAS 实现.
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斯坦曼的树突细胞与诺贝尔奖
2011 年 10 月 3 日北京时间 17 点 30 分,瑞典皇家科学院诺贝尔奖委员会在瑞典卡罗琳斯卡医学院宣布,美国科学家布鲁斯·巴特勒(Bruce A.Beutler)、卢森堡科学家朱尔斯·霍夫曼(Jules A.Hoffmann)和加拿大科学家拉尔夫·斯坦曼(Ralph M.Steinman)因在免疫系统研究领域的贡献获得 2011 年度诺贝尔医学生理学奖.其中,拉尔夫·斯坦曼的获奖理由是"发现树突状细胞并阐明其在获得性免疫中的作用"[1-2].
