中国医药生物技术杂志
Chinese Medicinal Biotechnology 중국의약생물기술
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中国医药生物技术协会
- 影响因子: 0.36
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1673-713X
- 国内刊号: 11-5512/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
长链非编码RNA H19和转录因子SIRT6在口腔鳞癌中的表达及其与预后的关系
目的 研究长链非编码 RNA H19(LncRNA H19)和转录因子去乙酰化酶 6(SIRT6)在口腔鳞癌中的表达及临床意义.方法 纳入 2014 年 11 月 – 2015 年 5 月我院收治的89 例口腔鳞癌患者作为研究对象,并以手术切除的口腔鳞癌组织为口腔鳞癌组,以癌旁组织作为正常组.采用实时定量 PCR 检测 LncRNA H19 与 SIRT6 表达水平,免疫组化法检测 SIRT6 蛋白表达,收集患者临床病理资料,根据口腔鳞癌组检测结果中位值将 LncRNA H19 分为高表达组与低表达组,观察 LncRNA H19、SIRT6 表达与患者临床病理特征的关系.采用 Kaplan-Meier 生存曲线、Log-Rank 检验分析 LncRNA H19 与 SIRT6 相对表达量对患者预后的影响.结果 与正常组相比,口腔鳞癌组 LncRNA H19 表达水平显著升高(P < 0.05),而 SIRT6 mRNA 与蛋白表达显著降低(P < 0.05);LncRNA H19、SIRT6 均与淋巴结转移、TNM分期、分化程度显著相关(P < 0.05);Kaplan-Meier 分析结果显示,LncRNA H19 低表达组无进展生存期、总体生存时间显著高于高表达组(P < 0.05),SIRT6 阳性表达组无进展生存期、总体生存时间显著高于阴性表达组(P < 0.05).结论 口腔鳞癌组织中 LncRNA H19 高表达,而 SIRT6低表达,两者均与口腔鳞癌的发生发展及预后有关,且均可成为临床早期诊断与治疗的潜在靶标.
-
SIRT2沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响
目的 探究沉默信息调节蛋白 2 ( SIRT2 )对人胃癌SGC-7901 细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制.方法 采用实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 SIRT2 在胃癌 SGC-7901 细胞和正常胃上皮 GES-1 细胞中的表达.采用 RNA 干扰技术处理 SGC-7901 细胞,SIRT2 沉默组转染靶向 SIRT2 的干扰小 RNA ( SIRT2-siRNA1 组、SIRT2-siRNA2 组),阴性对照组转染 SIRT2-siRNA 阴性对照序列,空白对照组不转染.CKK-8 法和平板细胞克隆形成实验检测 SGC-7901 细胞增殖, Transwell 法检测SGC-7901 细胞侵袭迁移能力,蛋白印迹检测 SGC-7901 细胞中 SIRT2、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)和磷脂酰肌醇-3 激酶(PI3K)蛋白表达.结果 人胃癌细胞 SNU-1、KATO III、SGC-7901 中 SIRT2 mRNA 和蛋白水平均高于正常胃上皮 GES-1 细胞(P <0.05).转染 SIRT2-siRNA 的 SGC-7901 细胞中 SIRT2 mRNA 和蛋白水平均低于阴性及空白对照组(P < 0.05);转染 SIRT2-siRNA 后,SGC-7901 细胞增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力均降低(P < 0.05 );转染SIRT2-siRNA 后 SGC-7901 细胞中 Akt、PI3K 蛋白磷酸化程度显著下降(P < 0.05).结论 SIRT2 在胃癌细胞中表达上调,沉默 SIRT2 可能通过调节 PI3K/Akt 通路抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,推测 SIRT2 可能作为潜在靶标应用于胃癌的基因治疗.
-
microRNA-20a靶向调控唾液酸转移酶ST8SIA2在结直肠癌耐药中的作用
目的 探究基于 miR-20a 为探针调控 ST8SIA2 在结直肠癌耐药中的功能和机制,为寻求逆转药物提供新的治疗策略及靶点.方法 采用 RT-PCR、Western blot 分别检测结直肠癌 Lovo细胞及其耐药细胞株 Lovo/5-FU 中 miR-20a、ST8SIA2 的表达水平;利用 CCK-8 及 Western blot 实验检测上调、下调 miR-20a 后两种细胞株的药物敏感性及其 ST8SIA2 的表达情况;靶基因预测及双荧光素酶报告实验验证 miR-20a与 ST8SIA2 的靶向关系;利用 CCK-8 实验进一步检测Lovo 细胞中 miR-20a 和 ST8SIA2 表达调控对细胞药物敏感性的影响.结果 ①与 Lovo 细胞相比, miR-20a 在耐药细胞株Lovo/5-FU 中呈现高表达,ST8SIA2 呈现低表达;②特异性上调 Lovo 细胞中 miR-20a 表达,ST8SIA2 表达减弱,该细胞的药物敏感性减弱;③特异性下调 Lovo/5-FU 细胞中 miR-20a 表达,ST8SIA2 表达增加,该细胞的药物敏感性增强;④特异性上调 Lovo 细胞中 ST8SIA2 表达,可逆转 miR-20a 对细胞产生的作用.结论 miR-20a 及 ST8SIA2 的表达水平与结直肠癌耐药性密切相关,miR-20a 可能是通过靶向负调控 ST8SIA2 的表达进而调控结直肠癌细胞的耐药.
-
白喉和破伤风类毒素抗原ELISA检测方法的建立
目的 建立定量检测白喉和破伤风类毒素抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.方法 分别采用白喉、破伤风单抗包被酶标板,兔抗白喉、破伤风多抗作为二抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 IgG抗体作为酶标抗体,以平行线法建立定量检测白喉和破伤风类毒素抗原含量的夹心 ELISA 法,并进行方法学验证.结果 两种定量检测 ELISA 方法的验证结果均符合规定.检测白喉类毒素抗原 ELISA 方法的定量限为 8.90 × 10-4Lf/ml,回收率为 98.35%,批内变异系数(CV)≤10.59%,批间 CV ≤ 13.51%;检测破伤风类毒素抗原ELISA 方法的定量限为 2.13 × 10-3Lf/ml ,回收率为107.28%,批内 CV ≤ 13.96%,批间 CV ≤ 10.06%.结论 建立了白喉、破伤风类毒素抗原 ELISA 检测方法,该法特异性强、准确度高、重复性好,可用于白喉破伤风疫苗产品的质量控制和生产过程控制.
-
以HIV-1 IN-LEDGF/p75相互作用为靶点的抑制剂筛选
目的 晶状体上皮源性生长因子 p75 蛋白(LEDGF/p75)与 HIV-1 整合酶(IN)之间的蛋白-蛋白相互作用是开发抗 HIV-1 药物的有效靶点,本文旨在寻找以 HIV-1 IN-LEDGF/p75 相互作用为靶点的小分子抑制剂.方法 采用均相时间分辨荧光技术(HTRF)筛选了 799 个化合物,比对 IN-LEDGF/p75 相互作用的抑制活性.结果 发现 5 个化合物——肾上腺酮、6-溴-1,2-二氢萘-1,2-二酮、头孢噻吩、根皮含柘树呫吨酮 L 和迷迭香酸对该相互作用表现出不同程度的抑制作用,其 IC50值分别为12.3、22.7、26.2、18.5 和 1.13 μmol/L.结论 为 HIV-1 IN-LEDGF/p75 相互作用抑制剂的发现以及新的抗 HIV-1 药物的开发提供了重要基础.
-
10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-β-O-乙酰转移酶迭代饱和突变与活性位点分析
目的 利用迭代饱和突变技术进一步提高 10-去乙酰巴卡亭 Ⅲ-10-β-O-乙酰转移酶双突变体 DBATG38R/F301V的活性;通过丙氨酸扫描确定 DBAT 活性中心的重要位点.方法 利用迭代饱和突变技术在现有双突变体DBATG38R/F301V的基础上对 Ser396进行半饱和突变,筛选对10-去乙酰紫杉醇(DT)催化活性提高的突变体;对获得的高活性突变体蛋白进行催化 DT 的适温度和适 pH 测定;在适 pH 条件下,将其分别用适反应温度和 0 ℃温育 6 h,考察该蛋白的热稳定性;采用生物信息学方法分析活性提高的分子机制.对 DBAT 底物结合区域尚未进行分析的几个氨基酸进行丙氨酸扫描研究,分析这些位点在DBAT 催化 10-DAB 和 DT 过程中的作用.结果 获得了三突变体 DBATG38R/F301V/S396I,其催化 DT 的活性为 DBATG38R/F301V的 1.6 倍,该蛋白催化 DT 的适条件为 37.5 ℃,pH 7.5;该蛋白在 37.5 ℃ 静置 6 h 后催化 DT 的活力为初始值的 30%,在 0 ℃ 静置 6 h 后为初始值的 70%;丙氨酸扫描结果显示,Asn45在 DBAT 催化10-DAB 和 DT 时都非常重要,而 Asn42、Glu350、Glu355和Lys389位点对催化 10-DAB 的影响更大.结论 将活性口袋内的亲水性氨基酸向疏水性氨基酸突变可能有利于 DBAT 对 DT 的催化,但氨基酸侧链的长度和空间构型也是影响催化活性的重要因素;发现 Asn45可能是一个潜在的 DBAT 催化或底物结合位点.
-
大鼠尾腱细胞外基质制备方法及其用于肌腱损伤修复的前期研究
目的 探究大鼠尾腱细胞外基质制备方法及其复合脂肪间充质干细胞构建微组织,为组织工程法修复肌腱损伤所需生物材料提供实验基础.方法 取 20 只 150 ~ 200 g SD 大鼠鼠尾作为实验材料,分别抽取出大鼠尾腱,经 PBS 彻底清洗后反复冻融 3 次,然后经过 1% SDS 于室温下处理 24 h,并用大量 PBS 清洗 1 周除去细胞残渣,后 60Co 消毒备用.对制备的大鼠尾腱细胞外基质进行病理学染色,观察细胞残留情况.同时,检测该来源的生物源性材料残留 α-Gal 含量.此外,观察制备的大鼠尾腱细胞外基质复合脂肪间充质干细胞对细胞增殖的影响.同时,用 CCK-8 试剂盒检测该生物材料的细胞毒性.结果 大体观察可见,经脱细胞处理过的尾腱体积增大,呈乳白色匀浆状.HE 以及 DAPI 染色结果显示,经脱细胞处理后的尾腱细胞核大量减少,细胞数量显著降低,每个高倍镜视野内细胞残余量不大于 5 个.脱细胞尾腱残留α-Gal 含量与正常尾腱相比有统计学差异,脱细胞尾腱残留DNA 极少.复合脂肪间充质干细胞培养 7 d 相比培养 1 d活细胞数量明显增多.CCK-8 毒性测试结果显示这种脱细胞大鼠尾腱的生物相容性较好,没有细胞毒性.结论 经过脱细胞方法制备的大鼠尾腱细胞外基质可有效除去细胞成分,并且与脂肪间充质干细胞有较好的生物相容性,可作为一种生物材料用于肌腱损伤修复.
-
岩藻糖环境对胶质细胞Aβ42蛋白内化过程的影响
目的 探讨岩藻糖环境对胶质细胞内化不同形态 Aβ42蛋白过程的影响.方法 分别测定岩藻糖富集及缺失两种环境中小鼠小胶质细胞及大鼠星型胶质细胞对单体及寡聚体 Aβ42蛋白的摄取量,检测被岩藻糖活化后小胶质细胞的 MAPK 激酶磷酸化程度变化,探明清道夫家族 SRA 受体及 SRB 受体在两种胶质细胞中的表达差异.结果 小鼠小胶质细胞在岩藻糖预处理及岩藻糖环境持续作用下对 Aβ42单体摄取量均显著增加,岩藻糖预处理导致大鼠星型胶质细胞单体 Aβ42摄入量降低.岩藻糖预处理导致小鼠小胶质细胞和大鼠星型胶质细胞对寡聚体 Aβ42摄取量下降,岩藻糖持续作用后,该趋势出现反转.基因检测表明两种胶质细胞中 SRB 受体高表达,SRA 受体在星型胶质细胞无表达.岩藻糖持续作用引起小鼠小胶质细胞p38-MAPK 信号通路的激活,该信号可能引发小胶质细胞细胞吞饮过程.结论 岩藻糖与胶质细胞清道夫受体的作用模式对细胞的Aβ42的内化过程产生影响,SRA 受体可能参与小胶质细胞吞噬过程中 p38-MAPK 激酶的激活过程而增强小胶质细胞对病理蛋白的摄取.为寻找阿尔茨海默病中胶质细胞相关的潜在免疫治疗靶标提供了理论依据.
-
间充质干细胞临床前安全性研究概况
间充质干细胞(MSC)于 1974 年被第一次定义,而后在 20 世纪 90 年代得到推广[1].2006 年,细胞疗法国际协会针对细胞表面阳性标志物为 MSC 建立了一个低标准,即 CD90+、CD105+、CD73+、CD45–、CD34–、CD14–、CD79–、HLA–、DR–[2].初的临床试验中,MSC 主要是用于成骨不全[3]或黏多糖症的研究.近年来研究表明,MSC也具备促血管生成、免疫调节、抗炎、营养支持等生物活性,这为其用于缺血性、炎性疾病等方面的治疗提供了可能性[4].另外 MSC 在实验中易于获得、可在体外大量扩增及有多系分化潜能的性质也表明其可成为组织工程的一个强有力工具[5].
关键词: -
免疫细胞中O-GlcNAc修饰研究进展
蛋白翻译后修饰( post-translational modifications , PTMs)可参与蛋白的结构、活性、亚细胞定位及其整体功能的调节[1].至今,已报道的蛋白质修饰位点超过 80 000 多个,修饰种类包括磷酸化、乙酰化、甲基化、糖基化和泛素化等,有一半以上蛋白为糖蛋白[2].糖基化参与多种重要的生物学进程,如细胞间黏附、细胞基质的相互作用、细胞信号的转导、免疫保护、炎症、代谢调节等[3].
关键词: -
热激活延迟荧光分子探针在生物成像中的研究进展
近年来快速发展的生物荧光成像技术将荧光显像技术与分子探针结合,对特定分子靶点和通路在组织水平、细胞和亚细胞水平进行非侵袭性显影,实现在活体状态下可视、无损分析和监测不同阶段疾病发展,为疾病的诊断和治疗开启了一片崭新的天地.荧光信号高特异性、高信噪比是生物荧光成像质量关键,然而由激发光源产生的杂散光及生物体内几乎涵盖整个紫外-可见光区的大量内源性荧光物质产生的荧光背景噪音干扰,严重影响了目标荧光信号的灵敏度及精准性,降低了成像信噪比.为提高生物成像信噪比,除了需要先进的荧光成像设备外,还需要开发新型高效的荧光探针.近年来出现的激活型智能荧光分子探针[1]、近红外荧光探针[2]及双光子荧光探针[3]均能在一定程度上降低背景噪音,提高信噪比,使得荧光成像更加清晰.由于生物环境的复杂性和多样性,已有荧光探针很难避免来自生物环境自身的干扰.
关键词: -
直接肽反应试验及其研究进展
变应性接触性皮炎(allergic contact dermatitis,ACD)是人类常见的免疫毒性疾病之一.据估计 15% ~ 20% 的人会对一到多个市场中的化学品皮肤过敏[1].支持皮肤致敏过程并终导致 ACD 的关键机理事件已被阐释清楚.经济与合作发展组织(Organization for Economic Cooperation and Development,OECD)报告中将其定义为有害结局通路(adverse outcome pathway,AOP)[2].皮肤致敏性评价作为物质安全性评价的重要组成部分并代表了化学品的技术标准.近年来,特别是欧洲国家,发展替代方法用以取代动物试验的社会、科学和经济的压力显著增加.为此,众多研究者开发基于肽或蛋白反应活性的方法用以筛选并鉴定潜在皮肤致敏物质,其中包括直接多肽反应试验(direct peptide reactivity assay,DPRA).DPRA 立足于 AOP 中的分子起始事件,通过监测待测物对半胱氨酸和赖氨酸多肽的消除从而评估待测物的致敏性,其准确度和灵敏度较高,并易于操作.2013 年欧洲替代方法研究中心将 DPRA 推荐为皮肤致敏试验的方法,今已被 OECD 接受并公布[3].该文将从DPRA 的原理、局限性、优化发展和与其他替代方法的整合等方面作详细介绍.
关键词: -
呼吸道合胞病毒抑制剂的研究进展
人呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是一种导致婴幼儿、老年人和免疫力低下的成年人下呼吸道疾病的重要 RNA 病毒[1-4].据估计全球每年有超过 3300 万5 岁以下的儿童感染呼吸道合胞病毒,其中约 10% 会引起急性下呼吸道感染,死亡人数为 6.6 万 ~ 19.9 万[5].其中1 岁以下婴儿下呼吸道感染死亡病例中三分之一是 RSV感染造成的,RSV 感染是婴幼儿死亡的重要原因[6].RSV感染患者在一生中可能反复感染该病毒,研究表明几乎100% 的婴幼儿都会至少感染过一次 RSV [7].另外,RSV感染患者康复后易发生肺功能异常、支气管哮喘等肺部疾病[2, 8].
关键词: -
重组纤溶酶抑制剂Textilinin-1蛋白含量测定方法的对比研究
Textilinin-1 是从拟眼镜蛇 Pseudonaja textilis textilis中提取的 Kunitz 型蛋白酶抑制剂,具有纤溶酶抑制活性,可抑制基于纤溶酶被激活导致纤维蛋白溶解所导致的出血,因此具有开发为止血药的潜力,可以作为外科手术中抑肽酶的替代药物[1].目前已有含 Textilinin-1 基因的重组毕赤酵母菌种,能高效表达目的蛋白[2].
关键词: -
典型人类遗传资源管理模式及对我国的启示
人类遗传资源是源于人体、可用于识别人体特征的遗传材料或信息,不仅是重要的科技研发资源和基础,也蕴藏着巨大的经济价值、社会价值,是生物产业发展的基石,也是关乎国家安全的战略性资源.由于人类遗传资源涉及深层次的国家安全和伦理问题,其管理制度具有更为严格和特殊的要求[1].这也是很多国家在对人类遗传资源的管理上,采取与其他生物遗传资源相区分做法的原因[2].本文着眼于国际上典型人类遗传资源管理制度模式进行梳理分析并提出对我国管理策略的建议.
关键词: -
我国生物医药产业聚集效应分析及发展建议
生物医药产业具有高技术、高投入、高风险、高附加值的特征,因对人才、资本、合作的依赖性决定了其还具有聚集化发展的特性.美国的生物技术产业依靠聚集式发展在世界上已经形成了代际优势,园区作为产业聚集的主要表现形式具有重要意义,如美国的旧金山湾区聚集了全美近 24%的生物医药企业[1].以园区形式的聚集,可帮助生物医药企业快速获取技术、资金、人才等资源,从而促进其成长[2].
关键词: