中国医药生物技术杂志
Chinese Medicinal Biotechnology 중국의약생물기술
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国医药生物技术协会
- 影响因子： 0.36
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1673-713X
- 国内刊号： 11-5512/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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可溶性HLA-G1与NK-92细胞表面ILT2及KIR2DL4受体相互作用的研究
目的 探讨可溶性 HLA-G1(sHLA-G1)对人 NK-92细胞杀伤活性的抑制与细胞表面免疫球蛋白样转录分子2(ILT2)和杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4)受体的关系.方法 ①通过原核表达技术获得 sHLA-G1重组蛋白(重组蛋白),并采用蛋白质印迹法进行鉴定.②取NK-92细胞,加入终浓度20μg/ml的重组蛋白分别培养10、30 min,再分别加入抗HLA-G1/G5、抗ILT2和抗KIR2DL4抗体,采用流式细胞术检测各组 NK-92细胞表面sHLA-G1和ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率;以NK-92细胞单独培养作为对照组.③以人白血病K562细胞为靶细胞,以经不同方式处理的NK-92细胞为效应细胞,效靶比为5∶1,共同培养2h,采用流式细胞术检测NK-92细胞对K562细胞的杀伤率.NK-92细胞处理方式为单纯重组蛋白处理(分别加入终浓度为0、10、20 μg/ml的重组蛋白培养30 min)和表面受体封闭+重组蛋白处理(分别加入抗ILT2、抗KIR2DL4、抗LT2+抗KIR2DL4抗体培养30min,再分别加入终浓度为0、10、20μg/ml的重组蛋白培养30 min).结果 ①蛋白质印迹分析表明所获重组蛋白为带有组氨酸标签的特异蛋白.②NK-92细胞与20μg/ml重组蛋白共培养30 min后,sHLA-G1表达阳性率明显高于而ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率均明显低于对照组(均P＜0.05).③以终浓度0、10、20μg/ml的重组蛋白处理的NK-92细胞对K562细胞的杀伤率分别为39.79%±2.00%、27.79%±0.75%、21.36%±0.67%(两两比较,均P＜0.01);单独封闭ILT2受体,杀伤率分别为23.09%±1.63%、21.13%±0.38%、18.42%±0.47%(两两比较,均P＜0.01);单独封闭KIR2DL4受体,杀伤率分别为30.74%±0.44%、26.03%±0.38%、21.15%±0.35%(两两比较,均P＜0.01).结论 sHLA-G1通过与NK-92细胞表面ILT2和KIR2DL4受体直接结合而抑制 NK-92细胞的杀伤活性.
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梗死心肌组织裂解液对鼠骨髓间充质干细胞诱导分化作用的体外研究
目的 探讨梗死心肌组织裂解液对骨髓间充质干细胞(MSC)向心肌细胞分化的诱导作用.方法 取SD大鼠梗死区心肌组织及其周围区域正常心肌组织分别制备梗死心肌组织裂解液和正常心肌组织裂解液;用Balb/c小鼠骨髓细胞进行MSC培养,取生长较好的第2代MSC制备MSC贴片,分别用DMEM培养基(空白对照组)、加入正常心肌组织裂解液的DMEM培养基(正常心肌组织裂解液组)和加入梗死心肌组织裂解液的DMEM培养基(梗死心肌组织裂解液组)培养.取各组培养14 d的MSC,透射电镜下观察细胞超微结构;并进行免疫细胞化学染色,观察α-肌动蛋白(actin)、心肌特异性转录因子4(GATA-4)、心肌特异性肌球蛋白重链(MHC)、心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)、心肌特异性肌钙蛋白I(cTnI)、心肌增强因子2(MEF-2)、连接蛋白(Cx)43和Cx45的表达情况.结果 超微结构观察显示空白对照组细胞器结构正常;正常心肌组织裂解液组细胞内未见明显的肌丝样结构;而梗死心肌组织裂解液组部分细胞内可见细小的肌丝样结构.免疫细胞化学染色分析显示,空白对照组MSC不表达心肌细胞特异性蛋白;正常心肌组织裂解液组MSC仅表达α-actin;而梗死心肌组织裂解液组MSC表达α-actin、GATA-4、MHC、cTnT、cTnI和MEF-2等心肌特异性标志蛋白,但不表达Cx43和Cx45.结论 梗死心肌组织裂解液可以诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化.
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TCRVβ7.1基因修饰的T细胞对肝癌细胞体外杀伤及体内靶向识别作用的研究
目的 探讨 TCRVβ7.1基因修饰的T细胞对肝癌细胞的体外杀伤活性及其在体内靶向识别肝癌细胞的作用.方法 ①体外实验:以特异性识别肝癌细胞的TCRVβ7.1基因转染健康人外周血单个核细胞(PBMC),转染前和转染后24、48 h用流式细胞术检测转染基因的表达.将人肝癌 BEL-7402 细胞分为4组,其中3组分别与未经修饰的PBMC(PBMC组)、转染pcDNA3.1空质粒的PBMC(空质粒组)、转染TCRVβ7.1基因的PBMC(基因修饰组)共培养,1组作为阴性对照组.共培养前和共培养24、48 h,以噻唑蓝(MTT)法检测PBMC对人肝癌BEL-7402细胞的杀伤活性.②体内实验:用重度联合免疫缺陷小鼠建立荷肝癌动物模型,于肿瘤周围皮下注射基因修饰的PBMC,于注射后2、7、14、28、42d 各处死2只小鼠,分别取肿瘤、脾、肝、肺、肠、卵巢、心、脑、肾组织,检测基因修饰的 PBMC 在小鼠体内的存活时间及组织分布情况.结果 ①体外实验:流式细胞术检测表明TCRVβ7.1基因成功转染到T细胞并得到有效表达.MTT法检测显示,基因修饰组T细胞对肿瘤细胞的杀伤率(24、48 h分别为31.24%±2.26%、40.95%±3.45%)明显高于PBMC组(分别为6.92%±3.12%、7.84%±2.29%)和空质粒组(分别为9.23%±2.46%、10.36%±3.34%),差异均有统计学意义(P＜0.01).②体内实验:肿瘤周围注射基因修饰的PBMC后2d,小鼠肿瘤组织已经出现PBMC(8个/视野),随时间延长PBMC数量呈上升趋势,28d达大值(18个/视野).取材于不同时间的小鼠组织标本的检测显示,基因修饰的PBMC只分布于肿瘤组织,而在其他组织中没有出现.结论 TCRVβ7.1基因修饰可诱导T细胞活化并提高T细胞对肝癌细胞的杀伤活性;外源性TCRVβ7.1基因修饰T细胞在荷肝癌小鼠体内的分布具有肿瘤靶向性.
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125I粒子植入治疗荷人乳腺癌裸鼠移植瘤的实验研究
目的 综合评价125I粒子植入治疗荷人乳腺癌裸鼠移植瘤的疗效,为临床应用提供实验依据.方法 在3～4周龄雌性 Nc-nu/nu 裸鼠右侧乳房脂肪垫部位注射人乳腺癌 MCF-7 细胞悬液0.1ml(5×106个/ml),建立荷人乳腺癌动物模型.18只荷瘤裸鼠分为治疗组(肿瘤中心部位植入放射性活度为 29.6 MBq的125I粒子1枚)和对照组(不进行任何干预),每组9只.饲养21d,观察裸鼠肿瘤体积的变化,计算抑瘤率.第21天以脱颈椎法处死2组裸鼠,处死前检测外周血白细胞计数;处死后取肿瘤、肝脏、心脏、右侧肾脏组织进行组织形态学观察,以免疫组织化学方法检测肿瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡抑制基因 Bcl-2的表达,透射电镜行肿瘤组织超微结构观察.结果 治疗组肿瘤体积治疗前后分别为(118±14) mm3和(21±3) mm3(t=20.32,P=0.00);对照组分别为(118±14) mm3和(339±32) mm3(t=18.98,P=0.00),治疗组与对照组比较,抑瘤率为93.8%±17.8%.2组治疗前后比较外周血白细胞计数差异均无统计学意义.光镜观察治疗组裸鼠肝脏、心脏、右侧肾脏组织均未见出现水肿、充血等明显放射损伤改变,125I粒子植入部位周围可见纤维组织增生,瘤细胞中心区出现大小不等的坏死区.肿瘤组织PCNA及 Bcl-2表达阳性率治疗组分别为35.42%±3.91%和11.90%±0.75%,对照组分别为 73.39%±3.55%和20.09%±1.69%,治疗组PCNA及Bcl-2表达阳性率均明显低于对照组(t=21.55,P=0.00;t=13.26,P=0.00).透射电镜观察肿瘤组织内见凋亡细胞,并有大量胶原纤维增生和凋亡小体形成.结论 125I粒子植入对荷人乳腺癌裸鼠移植瘤的增殖有明显抑制作用,能够有效地缩小肿瘤体积,有望作为乳腺癌保乳治疗的综合性手段之一应用于临床.
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磷酸酯酶抑制剂冈田酸对HepG2.2.15细胞中乙型肝炎病毒复制的影响
目的 初步鉴定可能与HBV核心蛋白去磷酸化有关的磷酸酯酶.方法 以磷酸酯酶2A抑制剂冈田酸(OA)处理体外培养的人肝癌HepG2.2.15细胞.将细胞分为4组,分别加入终浓度为0(对照组)、10、20、30ng/ml的OA(OA 10 ng组、OA 20 ng组、OA 30 ng组),每组各设5孔.在培养0、2、4、6 d时分别收集各组细胞培养上清液,采用电化学发光方法检测HBsAg浓度,荧光实时定量PCR方法检测HBV DNA拷贝数.取培养2d时的各组细胞,采用蛋白质印迹方法检测HBcAg异质性,免疫荧光细胞化学染色方法检测HBcAg亚细胞定位.结果 OA 10ng组、OA 20 ng组各时间点细胞培养上清液HBsAg浓度、HBV DNA拷贝数分别与对照组相应各时间点比较,差异均无统计学意义;在培养2 d时HBcAg电泳条带、亚细胞定位分别与对照组比较均无明显异常.OA30 ng组在培养2、4、6 d时细胞培养上清液HBsAg浓度(ng/ml)均明显低于对照组相应各时间点(分别为385.9±43.1 vs 510.2±63.3、346.5±39.6 vs 484.6±59.4、295.1±32.8 vs 467.2±52.9,P值分别为0.028、0.022、0.016);在培养2 d时细胞培养上清液HBV DNA拷贝数(ml-1)明显高于对照组相应时间点(6.71±6.07 vs 6.34±5.72,P=0.022),而在培养4、6 d时均明显低于对照组相应各时间点(分另为5.80±5.19 vs 6.29±5.68、4.75±4.15 vs 6.25±5.58,P值分别为0.008和0.005);在培养2 d时HBcAg电泳条带明显增宽,约20%的HepG2.2.15细胞的细胞核内HBcAg红色荧光信号明显增强.结论 短时间、高浓度的OA处理可提高HBV DNA的复制水平和核心蛋白的磷酸化水平,提示磷酸酯酶2A可能参与了HBV核心蛋白的去磷酸化过程.
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Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤干细胞中作用研究进展
Wnt信号通路是调控细胞生长、运动和分化的关键途径,在胚胎和器官发育以及维持干细胞的自我更新方面起重要作用.
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以Pin1为靶点的肿瘤反义基因治疗研究进展
肽基脯氨酰顺反式异构酶1(peptidyl-prolyl cis/trans isomerase 1,Pin1)是进化上非常保守的肽基脯氨酰异构酶(peptidyl-prolylisomerase,PPIase)家族的成员,属微小菌素蛋白[1],初报道于1996年,在分离与NIMA(never in mitosis geneA)相互作用的蛋白时得到[2].
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胸苷激酶1在乳腺癌诊断和预后判断中的应用研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,全世界每年约有130万妇女患乳腺癌,约有50万妇女死于乳腺癌.我国虽属低发国家,但据北京、上海、天津等大城市的统计,乳腺癌发病率以每年约3%的速度增长,发病年龄也从50～55岁提前了10岁左右,逐渐成为城市女性的第一杀手.
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IFN-λ家族的功能研究进展
自从1957年,Isaacs和Lindenmann[1]报道了流感病毒感染的鸡胚胎细胞能够分泌一种可以抵抗流感病毒或其他病毒感染的蛋白质,有关IFN的研究就不断深入.2003年,2个研究组Kotenko等[2]和Sheppard等[3]几乎同时报道了一个新的干扰素家族-IFN-λs(IFN-λ1、IFN-λ2、IFN-λ3),同时被国际人类基因组组织(HUGO)分别命名为IL-29(IFN-λ1)、IL-28A(IFN-λ2)、IL-28B(IFN-λ3).
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促凋亡基因Puma的研究进展
p53上调节的细胞凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)是2001年由Yu等[1]和Nakano等[2]2个独立研究小组同时发现的,是Bcl-2蛋白家族的促凋亡成员之一,具有强大的促凋亡作用,可被内、外源性p53快速诱导活化.
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在中国医药生物技术协会第3届理事会第10次常务理事扩大会议上的报告
各位常务理事、各位理事:在去年的理事会会议及今春的常务理事会会议上,协会理事会制订了今年的工作目标,提出了"六个一工程",即"办一个精品会议,创一份权威期刊,买一处永久会所,发展100家团体会员,发展1000名个人会员,筹备一个富有朝气、开拓进取、团结务实的新一届协会领导集体".协会秘书处据此规划了今年的工作,现在向各位理事简要汇报协会今年以来的工作.
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天花疫苗天坛株病毒中和试验方法的建立和验证
天花疫苗天坛株病毒是自1926年从天花患者的疱痂中分离出来的病毒经连续传代减毒而获得.自1980年WHO宣布全球消灭天花后,天花疫苗停止使用[1-2].2001年9月11日美国遭受恐怖袭击后,天花疫苗重新成为世界范围内用于反生物武器研究和使用的重点.
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免疫酶技术在修饰的安卡拉痘苗病毒感染性滴度检测中的应用
修饰的安卡拉痘苗(modified vaccinia Ankara,MVA)是MVA病毒在原代鸡胚成纤维细胞(CEF)中经过一系列的传代得到[1],在人体内可以表达MVA病毒蛋白及其携带的外源基因蛋白,但却不形成完整的病毒颗粒,为人体内复制缺陷性病毒[2],安全性好,即使在免疫功能缺陷病人和免疫抑制的恒河猴体内也未显示出明显的副作用.
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如何合理选择统计分析方法处理实验资料(Ⅵ)
编者按生物医学期刊是宣传和反映生物医学科研与临床研究成果的重要媒体,是培养年轻科研工作者的摇篮,也是一个国家科研实力的重要象征.期刊中学术论文的质量是期刊存在的重要保证,而学术论文质量高低的重要标志之一是科研设计和统计分析质量的高低.
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胰岛移植治疗糖尿病的进展与展望
糖尿病是严重危害人类健康的疾病之一,已经成为继心脑血管疾病和肿瘤之后的人类健康第三大杀手.目前全世界的糖尿病患者总数已经超过2亿,并且以每年200万人的速度增加.我国糖尿病的患者总数已超过6000万,仅次于印度列世界第2位.
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关于生物安全三级实验室管理体系构建的思考
自2003年暴发SARS疫情以来,我国政府以及相关职能部门对境内病原微生物实验室的管理给予了高度重视,陆续从政府层面上出台了一系列法律、法规和相关标准,国务院各相关职能部门层面上提出了有关具体要求,明确了生物安全三级、四级实验室必须通过中国合格评定国家认可委员会的认可后方可使用的严格政策.
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分子基因检测预测EGFR-TKI靶向治疗非小细胞肺癌的疗效——第43届美国临床肿瘤学会年会非小细胞肺癌靶向治疗动态
靶向治疗作为一项极具潜力的新方法已逐渐成为非小细胞肺癌(NSCLC)临床标准治疗的一部分,与传统化疗相比具有无可比拟的优越性.靶向治疗的研究和应用将大大改善NSCLC患者的整体生存质量和生活质量,使肺癌由"不可治愈"变为"慢性病"的短期目标得以实现.
