基于斑马鱼骨质疏松模型评价一组2-乙酰苯并五元杂环类化合物的抗骨质疏松活性

目的采用地塞米松建立斑马鱼骨质疏松模型，筛选先导物G39及其结构类似物的抗骨质疏松活性。
　　方法斑马鱼 AB 系胚胎受精后6~72 h 浸于地塞米松溶液建模，受精后3 d分组给药直至受精后6 d，收集固定斑马鱼幼体；采用茜素红染色法显示成骨发育状况，显微拍照后以 G39为对照，进行斑马鱼头面骨成骨面积和骨矿化密度的半定量分析，比较六种2-乙酰苯并五元杂环类化合物潜在的抗骨质疏松活性。
　　结果 G395μg/ml 组对地塞米松导致的斑马鱼骨质疏松具有显著的改善作用，且实验结果与地塞米松大鼠模型具有一致性。以此筛选 G39衍生物体内活性，发现苯并呋喃衍生物410活性优于 G39。
　　结论地塞米松斑马鱼骨质疏松模型评价周期缩短、成本低，使抗骨质疏松药物体内活性批量筛选成为可能，为更快更准地发现抗骨质疏松候选药物打下坚实基础。通过本研究筛选得到了全新结构类型的抗骨质疏松化合物410，其活性较 G39更强，值得进一步研究。

BMP-2表达上调剂的筛选及其抗骨质疏松活性研究

目的筛选上调骨形态发生蛋白2（BMP-2）表达的新型小分子活性化合物，为研发抗骨质疏松药物提供先导化合物。
　　方法应用国家新药（微生物）筛选实验室前期建立的BMP-2表达上调剂的高通量筛选模型，对化合物库中10000余个化合物进行筛选，以染料木素作为阳性对照；应用实时定量 PCR 和 Western blot 方法检测活性化合物对 U-2OS 细胞 BMP-2 mRNA 和蛋白表达水平的影响。在mRNA 水平考察了活性化合物对 Runx2表达的影响， Western blot 法检测活性化合物对 Smad1/5/8蛋白磷酸化水平的影响；用 PNPP 法检测碱性磷酸酶活性，验证活性化合物体外促进成骨细胞分化的作用。
　　结果在 BMP-2表达上调剂模型细胞上筛选得到活性化合物 E19773，其在模型细胞上的 EC50为46.2μmol/L；实时定量 PCR 结果显示，化合物 E19773能够提高 U-2OS细胞 BMP-2和 Runx2的 mRNA 表达水平；Western blot结果显示，Smad1/5/8蛋白磷酸化水平明显升高；碱性磷酸酶结果表明 E19773能够在体外促进成骨细胞的分化。
　　结论化合物 E19773在0.75~50μmol/L 浓度范围内能明显上调 BMP-2的表达，主要通过 Smads 通路来调控细胞成骨分化，是活性较好的 BMP-2上调剂。

利用四唑盐染料WST反映巨噬细胞受脂多糖刺激活化后的氧化应激和代谢变化

目的通过四唑盐染料显色方法分析巨噬细胞受脂多糖刺激后的氧化应激和代谢变化，分析这种方法在炎症研究中的应用价值。
　　方法通过活细胞计数方法和 CCK-8检测试剂分别检测RAW264.7巨噬细胞的活力；用 CCK-8和 WST-1显色方法研究超氧阴离子的释放；用 DCFH-DA 荧光染色和流式细胞术检测细胞内活性氧的生成；用乳酸检测试剂盒和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 NAD+(H)检测试剂盒分别检测上清中乳酸和细胞内 NADH 的含量。
　　结果经脂多糖刺激的 RAW264.7细胞的活细胞计数结果和 CCK-8显色结果存在反差；相同数目的正常培养细胞和脂多糖刺激细胞的 CCK-8显色比较，后者读数显著升高，超氧化物歧化酶能够下调 CCK-8显色读数，WST-1显色结果与 CCK-8一致，脂多糖刺激细胞中的活性氧含量显著增加；脂多糖导致 RAW264.7细胞上清中的乳酸含量和细胞内的 NADH 含量显著增加。
　　结论应用 WST 染料测定经脂多糖刺激的 RAW264.7细胞活力时，测定结果会受到细胞中还原性物质——超氧阴离子和 NADH 含量变化的干扰。通过 WST-1或 WST-8显色实验，可验证脂多糖能够刺激 RAW264.7巨噬细胞发生氧化应激和能量代谢变化。这一显色实验在炎症研究和药物筛选中可能有重要应用价值。

依博素生物合成基因ste22的异源置换研究

目的依博素是由链霉菌产生的一种新型胞外多糖，具有显著抗类风湿性关节炎的作用，我们研究已确定了该多糖的生物合成基因簇（ste）。为了对依博素结构进行改造以提高其生物活性，对其生物合成基因 ste22进行了异源置换研究。
　　方法采用 PCR 扩增方法从乳酸菌获得了编码葡萄糖糖基转移酶的基因 gtf，通过基因同源重组双交换，从链霉菌中置换了 ste22基因。采用白细胞介素-1合成酶活性测定方法及小鼠巴豆油急性炎症模型，初步确定了基因置换株的依博素衍生物生物活性。
　　结果获得了葡萄糖糖基转移酶基因置换株 Streptomyces sp.139（gtf-22），产生了依博素新衍生物 EPS-22g。研究表明该衍生物与依博素相比，葡萄糖比例从2.14%显著上升到48.64%，体外活性实验显示，其对炎症细胞因子白细胞介素-1合成关键酶 ICE 抑制率高于依博素，小鼠巴豆油急性炎症体内活性分析结果证明，该衍生物抑制活性亦高于依博素。
　　结论采用异源基因置换生物合成基因的方法改造依博素产生菌，可能是获得生物活性较好新多糖衍生物的一种有效手段。

甘草悬浮培养细胞对芦荟大黄素的选择性糖基化

目的研究甘草悬浮培养细胞对芦荟大黄素的生物转化。
　　方法将芦荟大黄素与甘草细胞悬浮培养细胞共孵育7d后，培养液经由大孔吸附树脂处理，细胞用甲醇提取，合并两部分浸膏后依次采用 Sephadex LH-20凝胶柱色谱、正相硅胶柱色谱、反相半制备 HPLC 等技术进行分离纯化，利用质谱和核磁共振波谱技术进行结构鉴定。
　　结果分离得到了一个芦荟大黄素的选择性糖基化产物——芦荟大黄素-(3-羟甲基)-O-β-D-葡萄糖苷。
　　结论甘草悬浮培养细胞对芦荟大黄素具有位置选择性糖基化能力。

脱细胞半月板细胞外基质对半月板细胞的影响

目的探讨脱细胞半月板细胞外基质（dMECM）对传代半月板细胞增殖、细胞活性以及细胞表型的影响。
　　方法用 CCK-8法检测 dMECM 对半月板细胞增殖的影响；将 P3代的内侧半月板纤维软骨细胞种植在 dMECM修饰盖玻片上，以未修饰盖玻片为对照，体外培养7、14 d后进行细胞活性检测，糖胺多糖、胶原分泌含量测定并用RT-PCR 检测半月板细胞特异性基因 mRNA 表达变化。
　　结果 CCK-8结果证实，与对照组比较，生长在 dMECM修饰盖玻片上的 P3代兔半月板纤维软骨细胞具有更好的细胞增殖特性（P<0.05）；细胞死/活染色结果证实 dMECM组可维持更好的细胞活性；糖胺多糖和胶原定量检测结果证实 dMECM 组在第7、14天时，比对照组分泌更多的糖胺多糖和胶原（P<0.05）。RT-PCR 的检测结果证实体外培养7、14 d 时，dMECM 组 II 型胶原 mRNA 表达显著上调（P<0.05）。
　　结论 dMECM 可以很好地促进半月板纤维软骨细胞的增殖、分化以及细胞活性的维持，可能是未来半月板组织工程领域非常有前景的支架材料之一。

人抑瘤素M在大肠杆菌中的表达、纯化及其对胆固醇代谢关键基因表达的影响

目的构建人抑瘤素 M（OSM）的原核表达载体，通过表达及纯化获得重组蛋白，为深入研究 OSM 的功能及机制奠定基础。
　　方法利用 PCR 技术，从质粒 pOTB7-hOSM 中扩增出人OSM 蛋白编码序列，与原核表达载体 pET-16b 连接，构建表达质粒 pET16b-OSM。在 BL21(DE3)工程菌中表达目的蛋白，Western blot 法检测 OSM 蛋白的表达。为提高OSM 的可溶性表达，采用共表达分子伴侣的方法提高其上清产物的表达量。将放大发酵的产物处理后，经镍亲和层析法纯化，获得 OSM 成熟蛋白，SDS-PAGE 电泳分析蛋白纯度。MTT 法检测 OSM 对 A375细胞的抑制活性，实时荧光定量 PCR 试验分析 OSM 对 HepG2细胞中胆固醇代谢相关基因（LDLR、ABCA1、ApoA-I 和 SR-BI）表达的影响。
　　结果成功构建 pET16b-OSM 原核表达质粒，酶切鉴定和测序分析与预期结果完全一致。在 E. coli BL21(DE3)中实现了目的蛋白的表达，通过共表达分子伴侣质粒 pTf16，进一步提高了可溶性表达的水平。放大发酵产物经镍亲和层析纯化获得 OSM 成熟肽，电泳检测纯度大于98%。MTT 法检测所制备的 OSM 蛋白抑制 A375细胞生长的 EC50为315 ng/ml。mRNA 水平检测证实 OSM 能剂量依赖地上调胆固醇代谢相关的低密度脂蛋白受体和 ABCA1基因的表达。
　　结论成功构建了 OSM 的原核表达载体，获得了具有生物学活性的目的蛋白，证实了其对胆固醇代谢关键基因转录的影响，为下一步功能及机制研究奠定基础。

哺乳动物细胞灌流培养技术的开发与应用

动物细胞培养始于20世纪初，发展至今已成为生物、医学等领域广泛采用的技术方法。同微生物细胞相比，动物细胞表达蛋白质因具有蛋白空间折叠和糖基化修饰等功能而备受青睐[1-2]。近年来，蛋白药物的上市和带来的巨大经济效益，掀起了哺乳动物细胞培养的热潮。对于倍增时间长、对外界环境敏感、培养难度大的动物细胞，如何完善其培养工艺，提高细胞蛋白表达量，并有效投入大规模生产，成为国内外研究的热点。

测序技术发展状况及相关专利分析

基因是生物体的遗传信息载体，其遗传和表达影响生物体的繁衍及各种生命活动。对于人类而言，个体基因组DNA 序列突变往往会导致疾病的发生，获取个体的基因组DNA 信息将有助于疾病的预防、诊断和治疗[1]。正因如此，科学家们奉献了无数心血研究 DNA 或RNA 测序技术，以期解密这些神奇的生命密码。于此同时，基因测序所带来的巨大经济利益也使得更多科研机构和企业积极投身于这项改变世界的事业，企业乃至国家之间的竞争愈演愈烈。

流感疫苗的研究进展

流感病毒（ influenza virus ）是正黏病毒科（Orthomyxoviridae）的代表种，系 RNA 病毒，直径80~120 nm，呈球形或丝状，其包膜上含有血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA），从而形成了不同的亚型。人流感病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型，是流行性感冒的病原体[1]。其特点是容易发生变异，其中甲型流感病毒容易发生变异，可感染人和多种动物，为人类流感的主要病原，常引起大流行和中、小流行。例如，2009年甲型 H1N1流感在全球范围内的大流行造成了至少1.2万人死亡[2]。乙型流感病毒一般不会引起全球范围内的大流行，但是它能够引起地区性、季节性的流行。丙型流感病毒只会引起人类轻微的上呼吸道感染，极少造成流行。目前，预防人类流感致病和流行有效的方法仍是接种疫苗。本文就近年来流感疫苗的研究进展作一概述。

抗丙型肝炎药物研究进展--药物、靶点和耐药性

丙型肝炎为丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）引起的全球性传染病。目前全球感染率约为3%，感染者约2亿人[1]。我国在2010年公布了一般人群的血清抗 HCV阳性率为0.43%。丙型肝炎以输血为主要传播途径。15%~40%的感染者6个月内感染症状可自行消失[2-3]，剩余60%~85%发展为慢性丙型肝炎[4]，其中约20%的慢性丙型肝炎患者在慢性感染 HCV 后20年左右的时间内发展为肝硬化甚至肝脏衰竭或 HCV 相关的肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）[5]。目前丙型肝炎的预防尚无疫苗可用。早期有效的丙型肝炎标准治疗方案是聚乙二醇（PEG）化干扰素α（PEG-IFN-α）与利巴韦林（ribavirin， RBV）联合应用24~48周，但只有40%~50%的基因型为1型患者和约80%的基因型为2或3型患者得到有效治愈[6-8]。2011年，新的标准三联疗法获美国 FDA 认证，该疗法在传统抗丙型肝炎标准方案（PEG-IFN-α和利巴韦林联合用药）基础上加入了两种新批准的蛋白酶抑制剂中的一种，使得对 HCV 基因1型感染治愈率提高到约70%[9-10]，但是其副反应、抗药性以及药物间相互作用等问题依然严重[11]。

促红细胞生成素长效化技术的研究与应用

促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）是早通过基因工程技术研制的蛋白类药物之一（1989年由 Amgen 公司研制成功并上市的重组人 EPO），二十多年来一直是基因工程药物中的常青树。由于 EPO 应用范围广、市场规模大，从而促使生物技术的革新不断应用于该品种，增强其生物学活性并延长其体内作用时间。本文将着重总结近年来 EPO药物长效化的各种理论和实践的成果，展望未来长效 EPO药物的发展趋势。

我会启动细胞制剂制备质量管理规范制订工作

4月3日，我会在北京友谊宾馆召开细胞制备实验室标准研讨会，正式启动了细胞制剂制备质量管理规范制订工作。协会再生医学专业委员会主任委员吴祖泽院士、医药生物技术临床应用专业委员会副主任委员任秀宝教授、张叔人教授，医药生物技术产品质量控制专业委员会孟淑芳研究员和相关专业分支机构的细胞治疗专家和质量管理人员近40位协会会员代表参会。李少丽副理事长、吴朝晖秘书长和相关部门负责人出席会议。

我会召开第五届理事会第二次常务理事会议

4月24日下午，我会第五届理事会第二次常务理事会议在北京飞天大厦召开，李少丽副理事长主持会议。会议听取了吴朝晖秘书长2015年1–4月份工作汇报，并向2013–2014年度分支机构评估中获奖的分支机构颁发了奖状和证书。组织生物样本库分会蝉联优秀奖，计算机辅助外科技术分会、产品质量控制专业委员会、骨组织库分会、再生医学专业委员会和心电学技术分会获得先进奖。会议还核准了新申请入会的6家会员单位。

“预防接种--孩子的权利，社会的责任”科普活动在京举行

4月25日是我国第29个“全国儿童预防接种日”，今年活动的主题是“预防接种--孩子的权利，社会的责任”。4月24日，我会和药品安全合作联盟共同主办的全国儿童预防接种日科普宣传活动在北京儿童医院举行。本次活动由国家卫生计生委宣传司、国家卫生计生委妇幼健康服务司、国家食品药品监督管理总局新闻宣传司、中国科学技术协会科普部、中国疾病预防控制中心指导，中国医药生物技术协会疫苗专业委员会、北京儿童医院、中国生物技术股份有限公司承办。活动特别制作了预防接种科普宣传短片，邀请专家解读预防接种的作用和好处，透析我国疫苗质量监管体系及质量保障，讲解疫苗使用的相关知识，使参与活动的医务人员和儿童家长进一步了解预防接种工作的重要性，提高预防接种的积极性，促进形成人人参与、科学防病的社会氛围。活动期间我会授予北京儿童医院“中国医药生物技术协会科学技术普及基地”，今后双方将共同开展生物技术科学普及活动。中国医药生物技术协会作为前沿技术领域的行业组织，今后将联合各方大力开展科普与公益活动，加深公众对医药生物技术的了解，更好地为社会服务。

吴朝晖秘书长赴大兴区生物医药产业基地调研

为了充分发挥科协系统的智囊作用，围绕生物医药产业及相关产业的发展为区领导决策提供参考建议，吸引更多科技工作者关注、投身生物医药产业，北京市大兴区科协邀请研究生物医药领域和研究区域经济发展的权威专家到生物医药产业基地进行调研。吴朝晖秘书长作为专家成员之一受邀参观了生物医药基地三家企业--北京民海生物科技有限公司、北京华脉泰科医疗器械有限公司、博辉瑞进生物科技有限公司，并与企业有关领导进行了座谈。参观结束后生物医药基地相关负责人介绍了基地现状、发展方向、目前有待提升的方面等情况，专家结合调研情况进行了座谈。

第二届北京国际生物医学峰会在京举行

5月22–23日，第二届北京国际生物医学峰会在北京国家会议中心举行，本次峰会由我会与中国医药企业管理协会、中国生命科学研究发展基金和北京华牛世纪生物技术研究院主办，我会李少丽副理事长出席开幕式并致辞。

欢迎关注协会微信公众服务平台

微信是目前被广泛使用的通讯工具，协会已开通微信公众服务平台，欢迎关注订阅。关注后可快捷地接收各种信息：包括协会近期的活动和会议通知、生物医药政策法规、医药企业和行业动向、基础与临床医学研究成果、新的医药生物技术、协会搜集的科技转化项目等，也可通过回复和投票等方式与协会互动。关注方法为在添加公共微信账号中搜索“中国医药生物技术协会”，选中后点击“关注”按钮，也欢迎推荐给其他人士。

使用Corning? Transwell?渗透支持物进行趋化性或侵袭试验的优化考虑

趋化性和侵袭试验对于研究伤口愈合、细胞分化、细胞通讯、胚胎发育和肿瘤转移是有帮助的。由于这些生物体系的复杂性，对建立结构清晰、具重现性的研究模型进行优化是必不可少的。尽管已有对于已知的化学诱导物、细胞接种密度和孵育时间的资料可用，但是对于特定的模型系统所知信息仍然有限。以下内容着重讨论使用通透性支持物进行趋化性和侵袭试验时，优化实验和获取精确结果所需要考虑的重要因素。

国家食药监管总局发布《生物制品稳定性研究技术指导原则》

为指导生物制品的稳定性研究工作，国家食品药品监督管理总局组织制定了《生物制品稳定性研究技术指导原则（试行）》。

国家卫生计生委等联合印发国家基本药物目录管理办法

为巩固完善基本药物制度，建立健全国家基本药物目录遴选调整管理机制，国家卫生计生委、国家发展改革委、工业和信息化部、财政部、人力资源社会保障部、商务部、食品药品监管总局、中医药局、总后勤部卫生部对《国家基本药物目录管理办法（暂行）》（卫药政发〔2009〕79号）进行了修订，形成了《国家基本药物目录管理办法》。详情请登录国家卫生和计划生育委员会网站 http：//www.nhfpc.gov.cn/yaozs/s3581/201504/8147002103b741179217eced1ad77efc.shtml 查阅。

财政部重新发布中央管理的食品药品监督管理部门行政事业性收费项目

按照《国务院机构改革和职能转变方案》的要求，为进一步规范行政事业性收费管理，财政部将重新审核后中央管理的食品药品监督管理部门行政事业性收费项目及有关问题发布通知。

国家卫生计生委规范预防接种工作

为进一步规范预防接种行为，提高预防接种工作质量，国家卫生计生委重申预防接种工作要求：
　　一、健全预防接种服务网络，理顺运行机制县级卫生计生行政部门要根据辖区服务对象、服务半径、人口密度、地理条件和医疗卫生资源配置等情况，合理设置预防接种单位，确定服务模式和服务周期，提高预防接种服务可及性，严格对预防接种单位和人员的资质管理，确保预防接种服务安全、有效。

国家食品药品监督管理总局印发体外诊断试剂质量评估和综合治理工作方案

为全面了解体外诊断试剂质量安全状况，进一步规范体外诊断试剂生产、经营和使用秩序，切实加强监管，严厉打击违法违规行为，国家食品药品监督管理总局组织制定了体外诊断试剂质量评估和综合治理工作方案。

2015年世界无烟日暨《北京市控制吸烟条例》实施宣传活动在京举行

2015年5月31日是第28个世界无烟日，由国家卫生计生委、中央文明办、全国爱卫办、教育部、新闻出版广电总局、共青团中央、中国科协、北京市人民政府8部门共同主办，中国健康教育中心、中国疾病预防控制中心和北京市卫生计生委承办的2015年世界无烟日暨《北京市控制吸烟条例》实施宣传活动于当日在北京国家体育场（鸟巢）举行，国家卫生计生委副主任崔丽、北京市人大常委会副主任孙康林、世界卫生组织西太区主任申英秀博士出席活动并讲话。

涉及西他列汀的中国专利申请分析与预警

二肽基肽酶-IV（DPP-IV）是一个以同型二聚体形式存在于细胞膜上的多功能酶，它可以裂解包括胰高血糖素样肽-1（GLP-1）和抑胃肽（GIP）在内的多种肽类激素，而这两者与 II 型糖尿病有着密切联系[1]。DPP-IV 抑制剂通过抑制 DPP-IV 减少 GLP-1的降解，增加 GLP-1的血浆浓度，从而改善餐后血糖。此外，DPP-IV 抑制剂还可抑制GIP、垂体腺苷酸环化酶激活多肽和胃泌素释放肽等参与调节血糖的其他肽类的降解[2]。磷酸西他列汀（ sitagliptin phosphate，商品名 Januvia）简称西他列汀（西格列汀），系首个 DPP-IV 抑制剂[3]。西他列汀能够血糖依赖性地增加胰岛素的分泌，降糖作用较为适中，不会引发低血糖的发生，并且无增加体重、恶心、呕吐等副作用[4]，其化学结构见图1。

浅议专利法第33条的理解和适用

近年，知识产权，特别是专利在促进我国医药生物技术研发和产业发展中的作用越来越大。随着我国国家知识产权战略的逐步推进，医药企业实现由仿制向自主创新的模式转变将成为大势所趋。为了能及时有效地保护科研人员的智力成果，申请专利是佳选择。为了帮助广大医药工作者进一步了解医药及生物领域知识产权保护的政策和法律法规，提高发明专利申请文件的质量，了解专利局的审查实践，更好地做好专利申请工作。我刊特邀了国家知识产权局专利局专利审查协作北京中心相关专家撰写了系列讲座，希望能够对医药企业，科研院所的相关工作人员提供一定的帮助。

奥巴马版“精准医学”的“精准”解读

21世纪的经济将有赖于美国的科学技术和研究开发。我们曾消灭了小儿麻痹症，并初步解读了人类基因组。我希望，我们的国家能引领医学的新时代--这一时代将在合适的时间给疾病以合适的治疗。对那些患有囊泡纤维化的病人，我们能将他们转危为安，这个病在过去是不可逆转的。今天晚上，我要启动一个新的“精准医学计划（Precision Medicine Initiative）”。这一计划将使我们向着治愈诸如癌症和糖尿病这些顽症的目标迈进一步，并使我们所有人，都能获得自己的个体化信息。我们需要这些信息，使我们自己，我们的家人更加健康。

2015中国制药技术大会通知

第七届中国医药生物技术论坛将于10月在合肥举行

近年来我国生物医药产业迅猛发展，各省市纷纷出台促进生物医药产业发展的相关鼓励政策，设立专门产业园区，民间投资热情高涨，其中干细胞、抗体、基因测序等领域的进展给人们带来无限的遐想，特别是近期美国推出“精准医学”计划后，更是在全球掀起了又一轮生物技术热潮。近日，国家卫生计生委和国家食品药品监督管理总局联合推出了《干细胞临床研究管理办法（试行）》征求意见稿，预计不日即将出台，产业界对此也多有期待。在此形势下，第七届中国医药生物技术论坛将于10月21–23日在安徽合肥举办，论坛将邀请有关部门领导、专家就我国干细胞临床研究管理政策进行专题解析，还将举办细胞治疗管理的专题讨论，邀请美国 FDA、加拿大、韩国等国细胞药品审评的官员，与我国细胞治疗管理部门的官员和审评专家进行面对面的交流和研讨，共同推动我国细胞治疗管理的进步。另外，还将就细胞治疗、抗体、基因测序和精准医疗等方面，邀请国际知名专家、我国两院院士做精彩演讲。

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