中国医药生物技术杂志
Chinese Medicinal Biotechnology 중국의약생물기술
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中国医药生物技术协会
- 影响因子: 0.36
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1673-713X
- 国内刊号: 11-5512/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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新型脱细胞动脉基质的制备及理化性能评估
目的 探索新型脱细胞动脉基质的制备方法,并分析评估其各项理化性能.方法 采用自主设计的三联脱细胞程序,逐步去除动脉血管中的细胞和抗原成分.通过甲苯胺蓝、HE 及天狼猩红染色和羟脯氨酸定量分析,对比脱细胞前后血管基质成分与天然半月板之间的差异;并采用 Hoechst33258 荧光染色法观察脱细胞前后动脉中 DNA 残留情况;通过 MTT 法考察材料经脱细胞程序后的毒性强弱以及对细胞活性的影响;将兔半月板细胞接种到脱细胞血管基质后培养,观察两者的相容性.结果 三联脱细胞方法制备的牛大动脉基质的组织学染色结果与正常半月板类似,进一步胶原定量证实,材料经脱细胞后胶原含量无明显统计学差异;通过 Hoechst33258 染色,未发现血管基质中细胞核和 DNA 残留;甲苯胺蓝及天狼猩红染色证实脱细胞血管基质支架可以很好地保留胶原成分;MTT 结果显示脱细胞动脉基质无细胞毒性,具有良好的生物相容性.半月板细胞接种材料后扫描电镜结果显示,脱细胞血管基质能很好促进细胞黏附,并诱导细胞的增殖.结论 自主设计的脱细胞程序能完全去除主要抗原成分,无DNA 及细胞碎片的残留,并保留了大部分细胞外基质成分、完整组织结构和良好的力学性能,同时具有良好的细胞生物相容性.对比性分析研究得出,在结构和成分上,脱细胞血管基质与半月板具有高度相似性,是未来非常有应用潜力的组织工程半月板支架之一.
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慢性乙型肝炎患者血清IL-17表达水平及其调控IL-6/STAT3信号通路的研究
目的 探究白介素-17(IL-17)在慢性乙型肝炎(CHB)患者中的表达水平及其与 IL-6/STAT3 信号通路的关系.方法 收集 50 例 CHB 患者和 50 例健康体检者的血清并回顾性收集相关临床特征以及病毒学特征信息,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者血清中 IL-17 水平;采用 Spearman 相关分析方法分析 IL-17 与 CHB 患者HBV-DNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)以及门冬氨酸氨基转移酶(AST)之间的相关性;进一步用人源重组 IL-17 (rhIL-17)处理 HBV 复制细胞系 HepG2.2.15 后,采用实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)方法检测细胞中 IL-6 mRNA水平,通过 ELISA 方法检测细胞上清 IL-6 含量,同时采用蛋白免疫印迹法检测 STAT3 以及磷酸化 STAT3 (pSTAT3)的表达水平.结果 与健康对照组相比,IL-17 在 CHB 患者中明显升高,同时 IL-17 含量与 HBV-DNA、ALT 及 AST 之间呈显著正相关性;当 rhIL-17 作用于 HepG2.2.15 细胞时,可以检测到 IL-6 表达水平以及细胞中 pSTAT3 明显升高.结论 IL-17 在 CHB 患者中明显升高,与 HBV-DNA 病毒载量之间呈正相关性,并参与、激活 IL-6/STAT3 信号通路,与 HBV 复制及 CHB 疾病的进展密切相关.
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补肾调经方和逍遥丸对超促排卵小鼠子宫内膜细胞Wnt通路的影响
目的 观察补肾调经方和逍遥丸对超促排卵小鼠子宫内膜Wnt 通路的影响.方法 将 90 只雌性小鼠随机分为 6 组:补肾高、低剂量组,疏肝高、低剂量组,控制性超促排卵组(COH)和空白对照组,每组 15 只.各组每日腹腔注射生理盐水,连续8 d;第 9 天,除空白对照组腹腔注射生理盐水外,各组注射孕马血清,48 h 后注射人绒毛膜促性腺激素.各组小鼠分别与雄鼠按 1:1 合笼,次晨观察妊娠情况后给药.补肾高、低剂量组分别给予补肾调经方口服液(5.4 和 2.7 g/ml),疏肝高、低剂量组分别给予逍遥丸混悬液(0.6 和 0.3 g/ml), COH 组和空白对照组给予生理盐水,连续 4 d.处死小鼠并取材,应用 RT-PCR 方法分别测定小鼠子宫 Wnt7a 和β-catenin 的表达情况.结果 与空白对照组比较,COH 组 Wnt7a 和 β-catenin 表达降低;与 COH 组比较,补肾高剂量组和疏肝高剂量组Wnt7a 和 β-catenin 表达增加(P < 0.05);补肾高剂量组与疏肝高剂量组间比较无统计学意义(P > 0.05).结论 补肾调经方、逍遥丸改善小鼠子宫内膜容受性,促进胚胎着床,其机制与上调 Wnt7a 和 β-catenin 表达水平,激活 Wnt/β-catenin 信号转导通路有关.
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海洋链霉菌IMB3-202产生的吲哚咔唑生物碱
目的 分离鉴定海洋链霉菌 IMB3-202 产生的抗菌和抗肿瘤活性产物.方法 利用 AntiSMASH 对菌株基因组进行生物信息学分析;运用多种色谱手段分离纯化 IMB3-202 的活性产物;通过波谱学方法鉴定化合物的化学结构;采用微量肉汤稀释法和 MTT 法分别测定化合物的抗菌和细胞毒活性.结果 菌株 IMB3-202 基因组含有一条吲哚咔唑类生物合成基因簇.通过发酵条件优化,从中分离鉴定了 4 个吲哚咔唑类化合物,结构分别确定为星形孢菌素、3'-O-去甲基星形孢菌素、holyrine A 和 K252c.星形孢菌素、3'-O-去甲基星形孢菌素和 holyrine A 对 HeLa 细胞、HCT116 和MCF-7 等肿瘤细胞具有很强的抑制活性,IC50值为 0.75 ~1192.8 nmol/L.星形孢菌素对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌显示出较弱的抗菌活性,低抑菌浓度值为 128 μg/ml.结论 通过基因组序列分析,可以在基因水平上预测产物结构,快速识别特定类型产物.
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抗CD19 CAR-T对K562CD19+肿瘤细胞特异性杀伤作用的研究
目的 构建表达抗 CD19 分子的嵌合抗原受体,制备抗CD19 CAR-T 细胞,研究其对 CD19 表型细胞的特异性识别和杀伤效果.方法 通过分子克隆方法,构建能够自剪切 EGFP 荧光报告的抗 CD19 CAR 分子,将其重组到慢病毒载体中并包装获得慢病毒.通过慢病毒递送的方式,将抗 CD19 CAR 过表达于 primary-T 细胞,流式细胞术分析确认表达后,通过ELISA 检测 CAR-T 细胞 IL-2 分泌情况,后用 LDH 释放法评价靶向杀伤作用.结果 成功获得抗 CD19 CAR 的慢病毒递送载体;流式细胞术表明 CAR 分子在 T 细胞表面高效稳定表达;ELISA结果显示 CAR-T 细胞在靶细胞刺激下 IL-2 分泌水平显著升高(P < 0.01);LDH 结果显示 CAR-T 细胞特异性杀伤 CD19 表型细胞,且杀伤效果在 E:T = 10:1 时达到50% 以上,显著高于对照组(P < 0.05).结论 成功获取了具有靶向 CD19 表型细胞的 CAR-T 细胞,能高效特异性杀伤肿瘤细胞.
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波拉霉素发酵工艺的优化
目的 对吸水链霉菌 LP93的发酵培养基及发酵条件进行优化,获得波拉霉素优发酵条件,为其工业化生产的小型中试发酵工艺提供依据.方法 以枯草芽孢杆菌为检定菌株进行波拉霉素发酵液活性测定,以抑菌圈直径为提示指标,通过摇瓶试验确定优发酵工艺.结果 波拉霉素发酵佳的氮源为黄豆饼粉 3.0% +(NH4)2SO40.5%、佳碳源为葡萄糖 3.5%、发酵 72 h 时补加 1% 葡萄糖和 0.5% 黄豆饼粉、终发酵 96 h,且豆油和泡敌添加量为 0.5% 和 0.05% 时,对波拉霉素发酵无影响.结论 为波拉霉素中试发酵条件的确定提供了依据.
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脂蛋白相关磷脂酶A2表达与动脉粥样硬化进程相关性研究
目的 利用 ApoE 基因缺陷小鼠建立动脉粥样硬化(AS)模型,研究 AS 进展过程中脂蛋白相关磷脂酶 A2 (Lp-PLA2)水平的变化及其在血管组织中的分布,并比较Lp-PLA2 及其他生物标志物与 AS 的相关性.方法 将已敲除 ApoE 基因的小鼠随机分为两组,对照组饲以一般饲料,实验组饲以高脂饮食,建立 AS 模型.定期取小鼠血清测定 Lp-PLA2 及其他血脂、炎症指标,并取主动脉染色做抗 Lp-PLA2 免疫组织化学染色.结果 实验组 Lp-PLA2 明显高于对照组(P < 0.05), Lp-PLA2 与周龄呈显著的线性相关.多因素分析所得回归方程为 Y = 0.767778xLp-PLA2+ 0.000594xTG(r2= 0.89658),此方程可用于评估 AS 进展程度.Lp-PLA2 随 AS 病程发展在斑块内表达逐渐增多,主要分布在脂质核中心以及巨噬细胞富集的区域;AS 中后期 Lp-PLA2 大量分布在变薄的纤维帽下.结论 与传统风险因子相比,Lp-PLA2 与 AS 的相关性更好,与 AS 斑块不稳定性相关,可以用于评估 AS 进展程度.
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外泌体在乳腺癌中耐药机制的研究进展
自 20 世纪 70 年代末以来,全球乳腺癌的发病率一直呈上升趋势.近年来,乳腺癌的发病年龄不断趋于年轻化,我国乳腺癌发病率的增长速度已经超过发达国家增长速度.据国家癌症中心和卫生部疾病预防控制局 2012 年公布的乳腺癌发病数据显示:全国肿瘤登记地区乳腺癌的发病率位居女性恶性肿瘤的第一位.鉴于此,早发现、早诊断与早治疗成为了预防和治疗乳腺癌的关键.随着对乳腺癌生物学行为研究的不断深入,目前已经形成了手术、放疗、化疗、内分泌治疗、生物靶向治疗以及多种辅助治疗为一体的传统治疗方式.化疗作为肿瘤治疗的主要手段,已经广泛应用于肿瘤的临床治疗;但是随着药物治疗的不断进行,肿瘤细胞耐药性是肿瘤治疗中亟需解决的问题.肿瘤细胞耐药性复杂多样,基因的突变、抗凋亡机制的产生、肿瘤细胞微环境的改变均可诱发肿瘤细胞产生耐药.
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基于短刺小克银汉霉的芍药苷转化芍药内酯苷研究
芍药是我国传统的中药材,具有多种药理作用[1],广泛应用于保健食品、医药等领域[2].芍药内酯苷和芍药苷是其中主要的活性成分[3],但两者在药理作用上有较明显差别[4].芍药内酯苷具有抗抑郁作用[5],在促进睡眠、保护脑神经的药理活性甚至超过了芍药苷[6],此外其在镇痛、镇静、抗惊厥、调节免疫力、舒张平滑肌、抗炎、杀灭病原微生物和保护肝脏方面具有显著作用[7].芍药苷和芍药内酯苷互为同分异构体[8],且在大多数芍药品种中,芍药苷的含量显著高于芍药内酯苷[9].在芍药内酯苷抗抑郁药物的研发中,不仅需要采用高效的分离手段对两者进行分离,分离出来的芍药苷弃之不用造成资源的大量浪费[10].所以,我们想到如果能利用微生物转化的方法将芍药苷转化为芍药内酯苷,一方面可以降低双苷分离的难度,另一方面可以极大地提高资源的综合利用度.目前,这方面的研究较少,刘鑫鑫等[11]曾对芍药苷和芍药内酯苷的微生物转化进行过初步研究.从 18 种真菌中筛选出分别对芍药苷和芍药内酯苷具有转化能力的菌株,其中短刺小克银汉霉(Cunninghamella blakesleeana AS 3.910)、雅致小克银汉霉、华根霉可以将芍药苷转化为芍药内酯苷,但并没有深入研究各个菌种的转化能力.本研究在此基础上,就真菌短刺小克银汉霉转化芍药苷为芍药内酯苷的影响因素进行了系统考察,以芍药苷的转化率和芍药内酯苷的产率为考察指标,对转化工艺进行了优化.构建了较高效的微生物转化体系,提高了短刺小克银汉霉对芍药苷的转化能力,为进一步研究奠定了良好基础.
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药物研究所北京市自然科学基金绩效浅析
北京市自然科学基金于 1990 年 10 月 30 日设立,其宗旨是根据北京市科技、经济和社会发展的需要,加强和发展相应的基础性研究,发现和培养人才,以促进北京市科学技术进步,持续不断地支持首都经济和社会发展.中国医学科学院药物研究所是国家主要的药物研究机构之一,作为医药卫生领域内具有科技优势的中央在京单位,药物研究所通过承担北京市自然科学基金项目,积极开展医药相关的基础研究和应用基础研究,营造了良好的学术氛围,培养和造就了一批优秀青年科技人才,孵育了一批具有开发潜力的创新药物;并通过与北京市属单位的合作,努力提高北京市基础性研究的创新能力和学术水平,为北京市和全国医药卫生事业的建设和发展做出了重要贡献.
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生物样本库安全管理体系的建立与完善
精准医学时代的到来促进了生物样本库的迅速发展[1],我国生物样本库的数量已经呈现逐步上升趋势.然而,生物样本库建设过程中安全管理体系的建立需要引起生物样本库建设者的高度重视.生物样本库安全管理体系需要考虑生物安全和生物安保两个层面,其中生物安全(biosafety)是指为避免微生物和医学实验室各种活动中生物因子(例如:细菌、病毒、真菌、毒素以及含有感染性病毒的各种样本)可能对人、环境和社会造成的危害,而采取的防护措施(硬件)和管理措施(软件),以达到对人、环境和社会的安全防护目的的一种综合行为[2].而生物安保(biosecurity)是指防止病原体或毒素丢失、被盗、移出或误用造成疾病或死亡的危险而实施的方法和措施[3].近年来,实验室安全事故频繁发生.例如,2013 年南京理工大学一实验室爆炸致1 人死亡,3 人重伤,对人员生命和国家财产造成了巨大的损失,这与安全管理体系重视不足有关[4].本文主要探讨生物样本库安全管理体系的建立和完善.
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微生物实验室生物安全规范
为提高学校实验室处理微生物(包括原生动物、真菌、浮游生物、细胞依赖性细菌和病毒)和转基因生物的生物安全性,保障相关工作人员掌握开展工作必需的知识,避免实验室感染,防止实验室事故,特制定此规范.
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BSL-3实验室实验活动及意外事故对室内环境生物污染的定量分析
目的 对 BSL-3 实验室内常见的实验活动及意外事故进行模拟,定量研究产生的微生物气溶胶浓度,分析各种实验活动的风险程度,为相关实验操作的风险评估和人员防护提供参考.方法 用粘质沙雷菌和噬菌体 ΦX174 作为替代微生物,在BSL-3 实验室对 6 种实验活动及意外事故进行模拟,通过空气和表面采样检测,对实验活动的生物风险进行定量分析研究.结果 6 种实验活动及意外事故都会产生不同浓度的微生物气溶胶.注射攻毒实验动物意外喷出可产生浓度达104CFU/m3的气溶胶,培养瓶意外坠落和冻干粉意外洒落产生的气溶胶浓度可达 103CFU/m3(PFU/m3),吹吸混匀、离心时离心管破裂及超声裂解产生的气溶胶浓度为 10 ~100 CFU/m3(PFU/m3).结论 BSL-3 实验室内实验活动及意外事故产生的气溶胶浓度不可忽视,会引发生物污染与人员感染风险.
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一种正压式防护口罩对微生物气溶胶防护效果的研究
目的 研究一种正压送风式防护口罩对病毒和细菌气溶胶的防护效果.方法 制备粘质沙雷菌和噬箘体 ΦX174 悬液,分别作为细菌和病毒的替代物,发生微生物气溶胶,用空气动力学粒子分析仪检测粒子直径,用 Andersen 六级采样器采集微生物气溶胶样本,检测正压式防护口罩在不同送风气流的条件下对微生物气溶胶的防护效率.结果 实验所发生的粘质沙雷菌和噬箘体 ΦX174 的气溶胶粒子数量中值直径为 1.8 μm 左右,该正压式防护口罩对气溶胶总粒子和微生物气溶胶粒子的防护效率均达到 99%以上,送风气流对该正压式防护口罩的微生物气溶胶防护效率有显著影响,气流速度越大,防护效率越高.结论 该正压式防护口罩对细菌和病毒具有良好的防护效果,使用该正压式防护口罩时应尽可能选择使用较高的送风气流.
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两种过氧化氢蒸汽发生器在生物安全三级实验室中的应用比较
目的 观察两种过氧化氢蒸汽发生器分别对生物安全三级实验室的房间及传递窗的空间和内表面的灭菌效果.方法 采用载体定性杀菌试验方法,检测不同浓度的过氧化氢空间分布量对密闭房间和传递窗的熏蒸消毒灭菌效果,同时还检测了同一浓度的过氧化氢空间分布量对不同体积密闭房间的熏蒸消毒灭菌效果.结果 用 BIOQUELL Z-2 型过氧化氢蒸汽发生器对房间进行灭菌验证,当过氧化氢空间分布量达到 10 g/m3时可以将放置在房间内不同位置的嗜热脂肪芽孢杆菌载体完全杀灭;采用 10 g/m3的过氧化氢空间分布量对 5 个不同体积的房间进行灭菌验证,均可以达到灭菌效果.用BIOQUELL L-2 型过氧化氢蒸汽发生器对传递窗进行灭菌验证,用 25 g 过氧化氢可以将放置在传递窗内不同位置的嗜热脂肪芽孢杆菌载体完全杀灭.结论 BIOQUELL Z-2 和 BIOQUELL L-2 型过氧化氢蒸汽发生器均可用于生物安全三级实验室房间和传递窗的消毒灭菌,灭菌效果符合要求.
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五种防护口罩的面形密合度定量测试比较
目的 定量测试五种型号的医用防护口罩的面形密合度,为合理选择和佩戴口罩提供参考依据.方法 利用口罩密合度测试仪 Model8038 定量测试 29 名参试人员对五种防护口罩的面形密合度,检测通过率.结果 29 名参试人员中,有 7 人未能通过五种防护口罩的面形密合度测试,有 9 人只通过了一种防护口罩的面形密合度测试,6 人通过了两种防护口罩的面形密合度测试,6 人通过了三种防护口罩的面形密合度测试,只有 1 人适合佩戴四种口罩.5 种防护口罩在不同动作下面形密合度的通过率没有差异(P > 0.05),口罩类型和性别对面形密合度的通过率存在差异(P < 0.05).结论 同一佩戴者对不同型号的口罩以及不同的佩戴者对同一型号的口罩,其面形密合度不同,在使用防护口罩时,应首先做面形密合度测试,选择适合自己脸形的防护口罩.
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BSL-4实验室设施和关键设备生物防护风险研究
目的 在正常运行的生物安全四级(BSL-4)实验室内,用生物学方法对实验室设施和关键设备进行气溶胶防护效果测试,为 BSL-4 实验室的风险评估提供数据参考.方法 用粘质沙雷菌和噬菌体 ΦX174 代替高致病性微生物发生气溶胶,通过安德森采样器定量采样法来测试设施和关键设备的生物防护效果.结果 所测试的设施设备对生物气溶胶的防护效率均达到99.9% 以上,其中气密门和正压防护服在模拟意外发生的情况下依然达到超过 99.99% 的防护效率.结论 在所测试的 BSL-4 实验室设施设备正常运行情况下,发生生物泄漏风险的概率很小.