中国医药生物技术杂志
Chinese Medicinal Biotechnology 중국의약생물기술
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中国医药生物技术协会
- 影响因子: 0.36
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 1673-713X
- 国内刊号: 11-5512/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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沙门菌效应分子SopB激活HeLa细胞MAPK蛋白激酶的磷酸化
目的 研究沙门菌感染宿主细胞的过程中,沙门菌Ⅲ型分泌系统分泌的效应蛋白SopB对宿主细胞蛋白激酶MAPK的激活作用,同时寻找SopB蛋白与MAPK激活有关的结构域.方法 通过基因克隆的方法将沙门菌SopB全长基因以及各种SopB truncation均被克隆至pCS2-EGFP质粒载体中,利用磷酸钙转染法将该SopB重组质粒转染至HeLa细胞,24h后通过western blot方法利用磷酸化的pERK 1/2、p-p38以及pJNK抗体检测HeLa细胞MAPK蛋白激酶受SopB激活的情况.结果 在HeLa细胞中过量表达SopB蛋白能够显著诱导蛋白激酶MAPK的磷酸化激活,进一步在HeLa细胞中表达SopB各种truncation片段证实,SopB对HeLa细胞MAPK蛋白激酶的激活与其N末端29个氨基酸直接相关.结论 SopB可以激活宿主细胞MAPK信号途径,且这种活性与其N末端29个氨基酸有关.
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以次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型的建立及应用
目的 建立以结核分枝杆菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶为靶点的新型抗结核药物高通量筛选模型.方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,pBEV表达质粒为载体,将guaB2基因克隆至pBEV以构建pBEV::guaB2重组表达质粒,表达并纯化重组的结核分枝杆菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶;建立以测定反应体系340 nm吸光值变化速率来评价该酶活性的检定方法;构建次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂的高通量筛选模型,对该模型的可靠性进行评价并应用该模型对1765个化合物进行筛选.结果 成功构建了结核分枝杆菌guaB2基因的表达载体;佳反应条件下重组结核分枝杆菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶酶比活力为736 U/mg;所建立的高通量筛选模型Z’因子为0.68,可用于次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂筛选;应用此模型对1765个化合物样品进行筛选,得到5个具有酶抑制活性的样品,阳性率为0.28%.结论 建立了稳定性好、灵敏度较高的结核分枝杆菌次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶抑制剂高通量药物筛选模型,应用该模型筛选得到的阳性药物具有进一步深入研究的意义.
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HCV非结构蛋白NS5A基因的斑马鱼肝脏表达模型
目的 建立HCV非结构蛋白NS5A基因在斑马鱼肝脏特异表达的模型,研究HCV NS5A的体内作用机制并初步探讨HCV NS5A对肝病理标志基因表达的影响.方法 克隆肝基因表达调控序列——斑马鱼脂肪酸结合蛋白基因增强子序列(eFABP)和HCV非结构蛋白基因NS5A序列,利用CMV启动子序列,构建HCV NS5A基因和报告基因绿色荧光蛋白基因eGFP在肝脏共表达的基因构件pFC-5AiR.经细胞转染实验验证所建构件的报告基因DsRed表达红色荧光蛋白后,将该基因构件线性化并经显微注射导入斑马鱼胚胎;通过荧光显微镜观察和整体原位杂交技术对目的基因NSSA的表达进行定位,验证其肝脏特异性表达.采用RT-PCR方法和western blot方法对HCV NS5A基因的转录和翻译水平进行检测;并检测肝脏病理相关的标志基因的转录水平变化.结果 细胞转染实验证明基因构件pFC-5AiR的报告基因DsRed能够在肝癌细胞Huh7中表达;斑马鱼胚胎注射该基因构件后在肝脏能够观察到红色荧光蛋白基因DsRed的表达;RT-PCR和western blot结果显示HCV基因NS5A能够在斑马鱼体内正确表达;原位杂交结果进一步证明了NS5A的表达集中在斑马鱼肝脏内.进一步RT-PCR检测表明HCV NS5A在斑马鱼体内的表达可导致一些肝代谢和纤维化相关基因的上调,如Adiponectin、LDLR、Argsyn、TGF-β和HMGR等,推测NS5A在肝脏脂肪病变和纤维化中具有一定作用.结论 成功建立了斑马鱼肝脏表达HCV NS5A的模型;初步数据表明HCV NS5A在斑马鱼体内的表达与部分肝代谢和纤维化标志基因的异常表达相关;该模型可以用于HCV NS5A的体内病理机制的研究.
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DNA甲基化与心力衰竭
心力衰竭(简称心衰)是危害人类健康的一类重要疾病,可明显缩短寿命、降低患者生活质量.虽然药物治疗可缓解患者症状,延长患者生命,但其发病率和病死率仍然居高不下.因此,探究心衰的分子机制及特异性治疗措施已成为当今研究热点,尤其是心衰表观遗传学改变的研究越来越受到重视,其中DNA甲基化备受关注.以往研究发现动脉粥样硬化患者雌激素受体α (ER-α)等抗增殖基因高甲基化,使血管平滑肌异常增生,促进动脉粥样硬化的发生[1].
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核酸识别Toll样受体特性及在系统性红斑狼疮中的作用
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种由于免疫系统紊乱导致机体产生多种自身抗体的自身免疫病.SLE发病缓慢,临床表现多样化,涉及多个系统和多种脏器损伤,造成细胞和体液免疫功能障碍,产生多种自身抗体.SLE的常见临床表现为发热、皮疹、关节痛、浆膜炎及肾、心血管、肺、神经系统、消化系统等系统损伤,死亡率高.虽然目前SLE发病的确切机制尚不清楚,但对于其发病原因比较公认的是核酸识别Toll样受体对于自身核酸复合物的识别而引发的针对自身的免疫反应.Toll样受体是一类介导机体天然免疫并能作为桥梁连接机体天然免疫与获得性免疫的重要受体.Toll样受体被配体激活后能够产生多种炎症细胞因子并释放Ⅰ型干扰素,从而介导机体抵御多种病原微生物的免疫反应.Toll样受体信号的异常激活将导致自身免疫疾病的发生.本综述首先从细胞生物学与信号转导的角度阐述Toll样受体在机体天然免疫过程中的作用,之后将探讨Toll样受体信号激活在SLE发病过程中的影响.
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国内外iPS细胞相关研究文献分析
胚胎干细胞因其分化的全能性被认为是攻克疑难杂症的"救星",但因其技术尚未成熟,仍存在伦理方面的争论,寻找新的、能够规避伦理问题的多能干细胞源成为近年来干细胞研究的热门.2006年,日本京都大学Takahashi和Yamanaka[1]在Cell上发表文章,首次报道了诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells)的研究,掀开了iPS细胞研究的序幕.与iPS细胞相关的研究分别被《自然》和《科学》杂志评为2007年第一和第二大科学进展.短短几年间,iPS细胞相关研究迅速升温,新成果不断涌现.本文拟通过检索国内外期刊文献数据库、专利文献数据库,对近年来国内外iPS细胞相关研究文献情况进行分析,为研究人员了解研究现状,把握相关研究热点提供参考.
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浅析国内外生物医学材料专利技术发展趋势
生物医学材料,是指用于替代部分活体系统或与组织密切接触的新型高技术人工材料.生物医学材料按照材料的种类可分为金属生物材料、无机非金属生物材料、高分子生物材料及复合生物材料.其中,技术含量较高的创新性生物医学材料集中应用于组织工程领域,包括人工器官、人工膜及黏合剂等[1].例如,金属材料主要用作骨科、牙科植入材料,人工心脏瓣膜,心血管支架,植入电极等;无机材料主要用作骨修复材料、牙科材料等.
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疾病体外检测和诊断技术的新发展
从全球范围来看,疾病体外检测、诊断试剂的需求在不断增长,年增长率达到5.5%;我国诊断试剂的市场增长率达到近20%[1].特异、敏感和快速的疾病体外检测和诊断方法是预防和治疗疾病的重要手段和前提.一些新的检测技术和平台正逐渐应用于疾病的检测和诊断,引起了越来越多的关注.随着纳米技术( nanotechnology)和材料的兴起与蓬勃发展,依赖纳米材料和技术的新的疾病诊断方法的研究正在成为疾病检测和诊断的热点;基于纳米材料和技术的新的疾病诊断方法可能成为新一代疾病体外检测和诊断方法而受到世界各国的广泛重视.其他像芯片技术(microarray chip)、微流控技术( microfluidic device)和生物传感器( biosensor)等也开始应用于疾病的体外检测,这些新技术相互结合为新的疾病检测方法研发提供了更多的选择.
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甲型H1N1流感病毒(2009)及其核酸诊断试剂的研发与临床应用
流感是一种至今尚无法完全控制的急性呼吸道传染病,可周期性地引起世界性大流行.自20世纪以来,有明确记载并有病原学依据的世界流感大流行一共有4次.其中发生于1918 - 1919年[1-3]的西班牙大流感,由H1N1亚型流感病毒引起,这是目前所知大的一次流感大流行,估计有2500万~4000万人死亡;发生于1957年的亚洲流感,由H2N2亚型流感病毒引起,导致了数百万人的死亡,H2N2病毒是由当时流行的H1N1病毒与禽流感病毒H2N2病毒重配而来;1968年的香港流感是由H3N2病毒[4]引起,该病毒由禽流感病毒和当时流行的人流感病毒重配;1977年H1N1亚型流感病毒在20年后重新出现,这次流感规模远远小于前几次,其病毒就是1957年之前在人群中流行的H1N1病毒,但这种病毒如何在自然界存在,然后又重新爆发的机制尚不清楚,很难设想一种病毒在某种宿主中存在20年而没有发生任何变异.
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实时荧光定量PCR检测WISP-1/NGX6基因体系与子宫颈癌细胞增殖转移的关系
目的 探讨原癌基因WISP-1和抑癌基因NGX6与子宫颈癌细胞增殖转移的关系.方法 参考人WISP-1、NGX6基因mRNA序列分别设计引物与探针.提取人正常子宫颈组织(30例)、子宫颈浸润癌(均为子宫颈鳞状细胞癌)组织未转移组及转移组(各30例)总RNA,采用实时荧光定量PCR技术分别检测各组标本组织中WISP-1、NGX6基因的表达量并进行对比分析.结果 原癌基因WISP-1在子宫颈癌组织转移组及未转移组中的表达量均明显高于正常子宫颈组织(均P< 0.001),在子宫颈癌组织转移组中的表达量明显高于未转移组(P<0.001).抑癌基因NGX6在子宫颈癌组织转移组及未转移组中的表达量均低于正常子宫颈组织(均P< 0.001),在子宫颈癌组织转移组中的表达量明显低于未转移组(P<0.05).结论 WISP-1/NGX6基因体系与子宫颈癌的细胞增殖有关,并且与子宫颈癌细胞的转移亦有相关性.
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环介导等温扩增技术在流感病毒检测中的应用
流感病毒是引起人类流感的病原体之一,属于正黏病毒科,分为甲型、乙型和丙型流感病毒,其中甲型和乙型流感病毒对人类具有流行病学意义.流感病毒感染可导致一系列呼吸道疾病,临床症状从轻微的上呼吸道症状至急性呼吸窘迫综合征和多器官功能衰竭,甚至死亡[1].流感大流行传播迅速,波及范围广,发病率和死亡率高,严重威胁着人类健康.1918年的H1N1"西班牙流感"、1957年H2N2"亚洲流感"和1968年H3N2"香港流感"三次流感大流行导致全球超过5000万人死亡.近暴发的2009年新甲型H1N1流感大流行,全球估计有数亿人感染,约2万确诊死亡病例[2].因此流感病毒的早期快速检测技术对于流感的防控及治疗具有重要的意义.
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两种ELISA试剂盒对我国单采血浆中水痘-带状疱疹病毒中和抗体滴度的测定和比较
目的 采用两种不同的检测抗水痘-带状疱疹病毒(VZV)中和抗体间接ELISA法试剂盒,对我国单采血浆中VZV特异性免疫球蛋白(VZIG)的效价进行测定,比较两种试剂盒测定结果的相关性和血浆筛查的适用性,并分析利用国内单采血浆研发生产VZIG的可行性.方法 随机选取182份单采血浆样品,100倍稀释后,使用Virion/Serion和VaccZyme/Binding Site两种商品试剂盒同时对样品进行测定,根据评估系统公式或曲线方程计算每份样品中VZIG的效价;采用Pearson乘积矩相关性方法对两种试剂盒的线性关系进行统计学分析.结果 ①VZIG高于10 IU/ml的血浆样品数量为13份(7%,Virion)和16份(9%,VaccZyme):②两种试剂盒检测结果之间的直线线性关系数R2为0.62 (P< 0.0001),变异系数为4%;③Virion与VaccZyme的工作范围有不同,前者对于低效价(0.2 ~ 0.4 IU/ml)样本的测定具有很好的灵敏度,而VaccZyme适用于高效价血浆样本(>150 IU/ml)的检测.结论 Virion与VaccZyme结果具有一致性和相关性;两种试剂盒的工作范围略有差异,VaccZyme较Virion更适用于高效价VZIG原料血浆的检测,可用于普通献浆员单采血浆中VZV中和抗体的筛查.
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HIV-1gp41蛋白的表达及其免疫反应性
目的 高效表达HIV-1 gp41基因片段,满足生产HIV体外检测试剂的需要.方法 以含HIV-1 gp41基因的质粒X1为模板,采用PCR方法扩增出gp41基因,克隆入E1载体构建重组表达质粒E1-1,转化E.coli BL21DE3感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,使用镍螯合琼脂糖亲和层析柱(Ni-NTA Agaros)纯化重组蛋白,通过ELISA法检测重组蛋白的免疫反应性和特异性.结果 SDS -PAGE鉴定结果表明,重组E1-1蛋白获得了正确的表达;纯化的重组E1-1蛋白纯度>95%; ELISA检测结果表明,重组E1-1蛋白具有较优的免疫反应性和特异性.结论 成功表达出具有较高免疫反应性的重组E1-1蛋白,可应用于HIV体外检测试剂.
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重大传染病诊断技术
近年来,我国在突发传染病,尤其是严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)和甲型H1N1流感等的防控经验显示,诊断试剂在传染病的预防和控制中发挥着越来越重要的作用.这些诊断试剂从方法学上讲,主要分为两大类,即免疫学诊断和分子诊断.本文对这两类诊断技术进行简要综述.
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革兰染色的现况和进展
本文对经典的革兰染色、革兰染色的自动染色仪、自动染色鉴别直读仪和革兰染色智能化与环保节水作一综述和展望.革兰染色(Gram stain)是1884年由丹麦医师Christain Gram创立,染色将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌两大类,在细菌学的形态鉴定、分类和用药选择等方面发挥了重要的作用[1].