烷基化低分子量聚乙烯亚胺作为基因递送载体的初步研究

目的考察烷基化低分子量聚乙烯亚胺作为基因递送载体的安全性和有效性。
　　方法以1-溴十二烷和分子量为1800的分枝状 PEI （bPEI1.8K）为原料，合成 bPEI1.8K-C12，并用1H-NMR 对其结构进行确认；采用 MTT 法考察 bPEI1.8K-C12的细胞毒性；红细胞溶血实验考察 bPEI1.8K-C12的生物相容性；测定bPEI1.8K-C12/DNA 复合颗粒的粒径分布和 zeta 电位；采用激光共聚焦显微镜观察 bPEI1.8K-C12/DNA 复合颗粒的细胞摄取行为；采用琼脂糖凝胶阻滞电泳考察 bPEI1.8K-C12对DNA 的固缩能力；并用荧光素酶报告基因和绿色荧光蛋白报告基因考察 bPEI1.8K-C12的体外转染效率。
　　结果经1H-NMR 确认，成功合成了 bPEI1.8K-C12；MTT结果表明 bPEI1.8K-C12对人乳腺癌 MCF-7细胞的毒性与bPEI1.8K 相当；红细胞溶血实验结果表明高浓度 bPEI1.8K-C12静脉注射时具有潜在溶血性；质量比相同时，bPEI1.8K-C12/DNA 复合颗粒的平均粒径和 zeta 电位均比相应的bPEI1.8K/DNA 大；烷基化修饰后，bPEI1.8K-C12对 DNA 的固缩能力降低，MCF-7细胞对 bPEI1.8K-C12/DNA 复合颗粒的摄取效率大大增加，bPEI1.8K-C12递送报告基因质粒的体外转染效率显著高于 bPEI1.8K，甚至与 lipofectamine2000相当。
　　结论 bPEI1.8K-C12是一种安全高效的基因递送载体，具有较高的进一步开发前景。

螃蟹甲内生真菌Chaetosphaeronema sp.的化学成分研究

目的研究一株来源于藏药螃蟹甲内生真菌 PHY-24的化学成分。
　　方法采用麦麸培养基，对内生真菌 PHY-24进行放大培养，通过硅胶柱色谱、MCI 柱色谱、ODS 柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、高效液相色谱等对其发酵液中的化学成分进行分离纯化，利用 NMR、MS 等波谱方法进行化学成分的结构鉴定，并测定这些成分抗 HIV-1整合酶链转移反应活性。
　　结果从内生真菌 PHY-24发酵液的乙酸乙酯提取部分分离并鉴定了4个化合物，分别是：integrastatin B（1）、2-乙酰基-3,5-二羟基-苯乙酸（2）、curvulin （3）、O-methylcurvulinic acid（4）。其中化合物（1）和（2）具有抗 HIV-1整合酶链转移反应活性，其 IC50分别为6.22和75.1μmol/L。
　　结论4个化合物均为从此属真菌中首次分得，其中化合物（1）、（2）具有抗 HIV-1整合酶链转移反应活性。化合物（2）的活性为首次报道。

产虾青素酿酒酵母工程菌的构建

目的对酿酒酵母固有的β-胡萝卜素代谢途径进行扩展，构建能够合成虾青素的酿酒酵母工程菌。
　　方法对不同来源的虾青素合成基因 crtZ（β-胡萝卜素羟化酶）与 crtW （β-胡萝卜素酮化酶）进行随机组合，采用overlap PCR 技术构建串联表达质粒，并将其导入产β-胡萝卜素酿酒酵母工程菌内，发酵产物经 HPLC 和 UPLC-MS鉴定，确定其成分。
　　结果构建出8种 TEF1p-crtZ-ADH1t-PGK1P-crtW-CYC1t组合的串联表达模式，其中基因组合分别为 crtZ1-crtW1， crtZ1-crtW4工程菌 HCCB08571、HCCB08572产生了虾青素；工程菌 HCCB08566、HCCB08568、HCCB08573未检测到产物虾青素，而出现了中间产物玉米黄质和斑蝥黄质。
　　结论成功构建了产生虾青素及其中间体的酿酒酵母工程菌。

内质网应激对3T3-L1脂肪细胞成纤维细胞生长因子21 mRNA表达的调节作用

目的在 mRNA 水平探讨内质网应激对3T3-L1脂肪细胞成纤维细胞生长因子21表达的影响。
　　方法利用经典鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化，再用毒胡萝卜内酯分别按照剂量梯度（0、6.25、12.5、25、50和100 nmol/L）和时间梯度（0、1、3、6和12 h）进行处理，实时 PCR 检测内质网应激相关蛋白 C/EBP 同源蛋白和葡萄糖调节蛋白78以及成纤维细胞生长因子21 mRNA的表达水平。
　　结果毒胡萝卜内酯能诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞发生内质网应激，促进 C/EBP 同源蛋白、葡萄糖调节蛋白78和成纤维细胞生长因子21 mRNA 水平显著升高，且与毒胡萝卜内酯的剂量和处理时间呈正相关。当用100 nmol/L毒胡萝卜内酯处理6 h 后，成纤维细胞生长因子21 mRNA水平显著增高，为对照组的114.55倍（P<0.05）。蛋白激酶 C 抑制剂钙磷酸蛋白 C 能阻断由毒胡萝卜内酯诱导的内质网应激，并伴随成纤维细胞生长因子21 mRNA 水平的下降。
　　结论内质网应激能上调3T3-L1脂肪细胞成纤维细胞生长因子21 mRNA 表达，且可被蛋白激酶 C 抑制剂钙磷酸蛋白 C 阻断。

吉西他滨对肺微血管内皮细胞的损伤及表没食子儿茶素没食子酸酯的保护作用

目的观察吉西他滨对大鼠肺微血管内皮细胞的影响及表没食子儿茶素没食子酸酯的保护作用。
　　方法利用植块法分离大鼠肺微血管内皮细胞。SRB 法检测药物对肺微血管内皮细胞和 A549增殖的影响。流式细胞仪用于检测细胞周期和细胞凋亡。Western blot 法检测凋亡相关蛋白含量。测定细胞内活性氧和超氧化物歧化酶水平以及乳酸脱氢酶渗透情况。
　　结果吉西他滨能显著减少肺微血管内皮细胞细胞增殖并将其阻滞于 S 期。吉西他滨引起肺微血管内皮细胞细胞凋亡具有时间依赖性，处理24、48、72 h 后细胞凋亡率分别为7.2%、15.4%、23.3%。同时，吉西他滨作用后细胞内活性氧含量上升，而处理48 h 后超氧化物歧化酶水平显著下降。进一步研究发现，表没食子儿茶素没食子酸酯能够提高吉西他滨处理后肺微血管内皮细胞的存活率，并且减弱吉西他滨造成的超氧化物歧化酶水平的下降。
　　结论吉西他滨对肺微血管内皮细胞具有损伤作用，能够引起肺微血管内皮细胞的凋亡和氧化应激的发生，而表没食子儿茶素没食子酸酯对吉西他滨引起的肺微血管内皮细胞损伤具有保护作用。

以蛋白激酶A为靶点的抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用

目的建立以蛋白激酶 A 为靶点的抗结核药物高通量筛选模型，应用该模型筛选具有特异性酶活抑制活性的微生物发酵液粗提物样品。
　　方法以结核分枝杆菌 H37Rv 基因组 DNA 为模板，扩增目的基因片段 pknA，构建表达载体 pET43.1a-pknA，在大肠杆菌中克隆表达了重组 MTB PknA 蛋白；采用三步级联的反应方法，利用还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸到氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸这一反应大吸光值波长的变化，建立和优化蛋白激酶 A 抑制剂高通量药物筛选模型。
　　结果成功构建了表达载体 pET43.1a-pknA；建立了稳定灵敏，可用于靶向结核分枝杆菌蛋白激酶 A 的抗结核药物高通量筛选模型；利用该模型对4000个微生物发酵液粗提物样品进行筛选，终得到21个抑制蛋白激酶 A 活性的阳性样品，阳性率0.53%；以耻垢分枝杆菌和海分枝杆菌为检定菌，平板纸片法检测阳性样品的抗分枝杆菌活性，然后对阳性样品的细胞毒性和酶活抑制特异性进行评价后，终得到8个阳性样品，其中 I10AA-02916、I09AA-02717、I09AB-02729、I08AB-00801这4个阳性样品酶活抑制特异性、抗菌活性均较好，且细胞毒性较低。
　　结论建立了高稳定性的以蛋白激酶 A 为靶点的抗结核药物高通量筛选模型，应用该模型所得到的发酵液阳性样品值得进一步研究。

GSK3β抑制剂SB216763通过激活小鼠成纤维细胞自噬相关蛋白抑制TGF-β1诱导的I型胶原产生

目的探讨 SB216763对小鼠成纤维3T3-NIH 细胞 I 型胶原表达和分泌的影响。
　　方法使用转化生长因子 TGF-β1诱导胶原的表达，使用天狼猩红染色试剂盒及 Western blot 检测 I 型胶原和自噬相关蛋白的表达。
　　结果给予 TGF-β1后，细胞培养上清中胶原含量从（11.85±0.90）mg/ml 上升至（16.70±0.67）mg/ml（P<0.001），说明 TGF-β1可以剂量依赖地促进成纤维细胞中胶原的表达与分泌；同时，TGF-β1还可以抑制自噬相关蛋白 Vsp34、Beclin-1的表达，促进 p62的堆积；给予 SB216763后，细胞培养上清中胶原的含量从（16.83±0.47）mg/ml 下降为（13.16±0.45）mg/ml（P<0.05），说明 SB216763可以降低 TGF-β1诱导 I 型胶原的表达；此外，SB216763还可以恢复成纤维细胞中自噬相关蛋白 Vsp34、Beclin-1的表达，降低 p62的表达。
　　结论小分子抑制剂 SB216763通过激活自噬活性抑制TGF-β1诱导的 I 型胶原表达。

聚合物静电纺纤维促进组织血管修复的研究进展

近十年，由于不健康饮食习惯及人口的老龄化，缺血性血管疾病的发病率有逐年增高的趋势。动脉缺血引发的脑部、心脏和外周血管疾病成为威胁人类健康的头号杀手，引起了医生和科研人员的广泛关注和重视。目前临床治疗缺血性疾病的方法主要包括血管搭桥手术、腔内介入和药物治疗。这些方法虽然可以在一定程度上缓解缺血病症，却仍存在许多不足之处，如术后再闭塞以致需要二次手术、介入材料的生物相容性及机械性能不足以及药物治疗效果不够稳定持久等问题。因此，需要探究更加有效的方法来促进缺血组织血管化，大程度恢复组织血液供应。

重组人血小板源生长因子的药学研究进展

血小板源生长因子（platelet-derived growth factor， PDGF）是一种通常存贮于血小板α颗粒中的碱性蛋白质，由血小板趋化到受损部位的巨噬细胞，受损血管处的平滑肌细胞以及受损部位的血管内皮细胞等多种细胞所分泌。自从发现 PDGF 后，人们已成功地纯化了人、猪、牛、羊等的PDGF，并对其理化性质进行了大量的研究。PDGF 是一种热稳定的阳离子型糖蛋白，分子量为28~35 kD，是由分子量分别为13~14 kD 和16~17 kD 的两个亚基通过二硫键连接组成。PDGF 的等电点为9.8~10.2，具有耐高温（100℃）、耐酸（pH 2.5）以及耐受各种解离剂（4 mol/L 盐酸胍、6 mol/L 尿素、2%SDS）的特点。凝胶层析发现，人PDGF 在体内有两种形式，即 PDGF-I（分子量为31 kD）和 PDGF-II（分子量为28 kD），两者在氨基酸及以共价键相连的碳水化合物的组成上有所不同，但其致丝裂活性相似[1]。

定向进化技术在蛋白质开发中的应用进展

定向进化技术是一种利用实验室手段通过反复改造遗传多样性，结合文库高通量筛选而获得理想性状生物体的过程，现已成为在基础生物学和应用生物学领域应用广泛和有效的技术之一。目前已成功应用于蛋白质的研究和开发。蛋白质在生物催化、生物医药等领域具有广泛的应用。如何提高目的蛋白的产量、改善蛋白质的理化特性以及构建具有新催化活性的蛋白质以满足日益增长的需求是亟待解决的问题。而定向进化技术的发展为实现这样的目的提供了强有力的技术支持。本文就定向进化技术在蛋白质开发中的应用进行了综述。

协会新版网站为会员提供在线信息发布和交流等功能

10月1日，我会新版网站正式上线。新版网站与协会信息管理系统相融合，具备信息和通知发布、会员在线申请和管理、分支机构管理、行业自律、会议管理、成果转化等功能。会员登录协会网站，不仅可以完成会员信息更新、接收协会通知、查询会费交纳情况；还可在协会网站创建和更新会员单位网页，向公众展示会员单位风采和动态；另外还可在线注册参加协会举办会议，发布和浏览技术和成果供需项目，实现在线交流等功能。

我会筹备迎接民政部第二次对社会组织评估工作

民政部民间组织管理局今年重新修订了社会组织的评估标准，并于近日发出通知，对第一批通过评估的社会组织进行第二次评估工作。社会组织评估是加强社会组织规范化管理的重要举措，也是落实各项培育扶持政策的基础，对于推动社会组织的组织建设、制度建设和能力建设，增强社会组织服务社会的功能十分必要。我会于2008年参加了首次评估，获得 AAA等级。目前我会正在根据有关通知的要求，认真准备材料，做好自评和参评的准备工作。民政部在评估过程中还将随机抽取会员单位，听取会员和理事单位对协会的评价。

2014中国（山东）国际生物医药产业博览会圆满落幕

由中国医药生物技术协会联合山东省医药行业协会、济南市人民政府共同主办，济南市商务局、济南博商展览有限公司承办的“2014第二届中国（山东）国际生物医药产业博览会”于10月16–18日在济南国际会展中心隆重举行。协会彭玉理事长出席开幕式并致辞，吴朝晖秘书长主持开幕式及主论坛。

杨晓明当选疫苗专业委员会主任委员

10月29日，疫苗专业委员会换届工作会议在南京召开，会议由协会吴朝晖秘书长主持，彭玉理事长出席会议并致辞。会议首先听取了第一届委员会主任委员赵铠院士的工作报告，随后经过两轮民主选举，产生了新一届委员会，共37位委员。中国医药集团总公司杨晓明总工程师当选新一届委员会主任委员，副主任委员由中国生物技术股份有限公司沈心亮首席科学家、中国食品药品检定研究院王军志副院长、北京生物制品研究所有限责任公司王玉琳总经理担任。会议还选举产生了9位常务委员。与会委员均表示今后将积极参加分会各项活动，利用这个平台，为我国疫苗事业的发展作出贡献。

第七届全国生物治疗大会在上海圆满落幕

由中国医药生物技术协会主办，医药生物技术临床应用专业委员会、上海东方肝胆外科医院、上海细胞治疗工程技术研究中心承办的第七届全国生物治疗大会于10月25日在上海圆满落幕，国内外300余代表参加了会议。来自康奈尔大学、美国 Moffitt 癌症中心、澳门大学、法国 Txcell 公司、英国 GE 公司、复旦大学、中国医学科学院肿瘤研究所、上海交通大学、第二军医大学、中山大学肿瘤医院、天津医科大学肿瘤医院、北京大学人民医院等国内、外专家作了大会发言，介绍了国内外免疫细胞治疗、肿瘤疫苗、干细胞治疗、靶向治疗的进展、经验与展望，对肿瘤免疫治疗等问题进行了探讨。我会刘海林顾问和吴朝晖秘书长出席会议。

一种基于TIL的肿瘤相关抗原特异性T细胞的筛选方法

Wolfl 等[1]的研究建立了一种以 CD137为表面标记，从人 CD8+T 细胞中快速鉴定和分离抗原特异性 T 细胞的方法。由于 CD137分子表达于活化的 CD4+和 CD8+T 细胞表面[2]，其表达上调依赖于 T 细胞经抗原刺激后活化，并可在抗原刺激后12 h ~5 d 内持续表达[3]。因此可以CD137为标记，从 T 细胞中检测和分离比例较低的抗原特异性 T 细胞。

中检院发布《食品药品医疗器械检验机构仪器设备管理指南》

仪器设备管理是质量管理的重要组成部分，为提高仪器设备管理水平，指导规范系统各级检验机构仪器设备管理工作，中国食品药品检定研究院结合检验机构的实际情况，组织编写了《食品药品医疗器械检验机构仪器设备管理指南》（以下简称《指南》）。

天然海水高盐条件对海绵相关细菌抗菌活性及次级代谢产物的影响

海洋微生物生活在高盐、高压、低温、低光照、寡营养、弱碱性的海洋环境中，因而形成了独特的生理特征和代谢机制，可产生与陆生微生物结构与活性迥然不同的次级代谢产物，如生物碱、萜类、环肽类和聚酮类等[1-2]，成为海洋药物的重要来源之一。从海洋放线菌中分离得到的salinisporamide A 已经完成了 I 期临床研究，用于治疗多发性骨髓瘤[3]。以从海洋真菌 Aspergillus sp. CNC-139中获得的化合物为模板合成的 plinabulin（NPI-2358）已经进入II 期临床研究，用于治疗非小细胞肺癌[4]。来自于卡纳里水域深海沉积物中的链霉菌 NTK937产生的 caboxamycin是一种新型的苯并噁唑抗生素，显示出较强的抗菌活性，对革兰阳性菌枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）IC50仅为8μmol/L[5]。海洋是一个特殊的生态系统，据文献报道，通过模拟海洋环境的拟生态培养，可以诱导海洋真菌产生新的活性代谢产物[6-9]。同时有研究表明，高盐条件造成的极端环境（如高渗透压和营养剥夺等）可以激活生物体内的沉默基因或次级代谢产物合成酶，进而使海洋等来源的耐盐真菌产生新的活性化合物[10-11]。另据文献报道，培养基盐度对海洋真菌的活性物质具有显著影响，其生物活性和活性物质的种类和产量可能有较大的差别[12-13]。但是，应用天然海水培养基探讨海洋来源细菌的抗菌活性、次级代谢产物的 HPLC化学指纹的报道较少，本实验室曾研究报道天然海水对海绵相关细菌的抗菌活性有影响[14]。另有文献对细菌 HPLC 化学指纹研究进行了报道[15-17]，此外，有文献报道天然海水可影响细菌的生长[18-19]。本文以海绵相关细菌为主要研究对象，初步开展了相关探索，以期获得具有良好抗菌活性且次级代谢产物丰富的菌株。

生物医药领域专利申请权利要求延展及其常见问题分析

近年，知识产权，特别是专利在促进我国医药生物技术研发和产业发展中的作用越来越大。随着我国国家知识产权战略的逐步推进，医药企业实现由仿制向自主创新的模式转变将成为大势所趋。为了能及时有效地保护科研人员的智力成果，申请专利是佳选择。为了帮助广大医药工作者进一步了解医药及生物领域知识产权保护的政策和法律法规，提高发明专利申请文件的质量，了解专利局的审查实践，更好地做好专利申请工作。我刊特邀了国家知识产权局专利局专利审查协作北京中心相关专家撰写了系列讲座，希望能够对医药企业，科研院所的相关工作人员提供一定的帮助。

2014年诺贝尔生理学或医学奖揭晓

2014年诺贝尔生理学或医学奖评给了“脑”科学的研究者。获奖者一位是拥有美国和英国国籍的约翰?奥基夫（John O'Keefe），另外还有来自挪威的科学家迈-布里特?莫泽（May-Britt Moser）和爱德华?莫泽夫妇（Edvard I. Moser）。他们发现了“大脑定位细胞”，展示了人类较高的认知功能的细胞基础。

《中国医药生物技术》2014年第9卷关键词索引

说明：⑴本索引关键词按汉语拼音字母顺序排列；⑵冠有阿拉伯数字、西文字母、西文姓氏的关键词，按其后的汉字的拼音排序，在汉字相同的情况下，按数字、英文字母、希文字母顺序先后排序；⑶缩略词及未译出的原文英文字母顺序排列在各（字母）部之首；⑷文题、作者后括号内数字为期号，后为起止页。

上海市第一人民医院中心生物样本库负责人招聘通知

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应用PBL模式将循证医学引入肿瘤内科临床教学中的探索

肿瘤已成为威胁城乡居民健康的重要因素，且发病率日益升高。作为临床和基础研究为活跃的领域，抗肿瘤治疗的新技术、新进展日新月异，对肿瘤专科人才的培养提出了新的要求。为顺应迅速增长的患者需求，现二甲以上综合医院均有专门的肿瘤内科，县级以上区域均有肿瘤专科医院。然而目前肿瘤内科作为内科学下属二级学科，临床肿瘤学教学薄弱，教学内容及课时偏少。临床教学与实践是肿瘤学教育中的重要部分，是肿瘤专科医生获取专业知识重要的阶段和途径。因此，加强临床肿瘤教学，提高教学质量显得尤为重要。