中国医药生物技术杂志
Chinese Medicinal Biotechnology 중국의약생물기술
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国医药生物技术协会
- 影响因子： 0.36
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 1673-713X
- 国内刊号： 11-5512/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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力学刺激对体外保存软骨活力影响的实验研究
目的 对体外保存猪膝关节软骨施加滚压力学刺激,探究力学刺激对软骨组织活力的影响.方法 利用滚压力学加载装置可以为骨软骨组织提供含有组织培养液的环境,并进行仿生的力学刺激.用骨软骨取材器械体外无菌获取猪膝关节软骨,于培养液保存过程中施加力学刺激(1.5和4.0 MPa)后在第2周检测软骨的细胞存活率、蛋白多糖表达、组织形态学、杨氏模量.结果 1.5 MPa组显示高的软骨细胞存活率、蛋白多糖含量与杨氏模量,组织形态表现良好,差异有统计学意义(P<0.05);与静态对照组相比,4.0 MPa组上述指标下降(P<0.05),形态学表现较差.结论 对体外保存软骨施加适宜的滚压力学刺激,能在2周时间提高软骨细胞存活率,增强细胞外基质表达,并提升生物力学性能,为组织库软骨保存技术提供一种新方法.
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新型培美曲塞衍生物对A549细胞增殖、迁移及细胞凋亡的影响
目的 探究新型培美曲塞(PMX)衍生物对A549细胞增殖、迁移及细胞凋亡的影响.方法 MTT法初步筛选12种化合物对A549细胞的细胞毒性,筛选出高活性候选化合物进一步研究其对A549细胞增殖的影响;Transwell细胞迁移实验及划痕愈合实验测定候选化合物对A549细胞迁移的影响;流式细胞术测定候选化合物对A549细胞凋亡的影响.结果 初筛发现其中9种化合物对A549细胞增殖具有抑制作用,其中化合物A12抑制作用为显著,IC50为(1.26±0.15)μmol/L,且抑制作用存在浓度及作用时间依赖性:IC50在作用72 h处低,为(1.06±0.24)μmol/L;Transwell细胞迁移实验及划痕愈合实验结果表明A12能够抑制A549细胞的迁移能力,且抑制作用具有浓度依赖性;流式细胞术实验结果显示A12能够显著提高A549细胞的早期凋亡率(P<0.05)、晚期凋亡坏死率(P<0.01)及总凋亡率(P<0.05).结论 筛选得到的新型PMX衍生物A12能够明显抑制A549细胞的增殖及迁移活性,并能诱导其凋亡.
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双靶向配体化力达霉素DTLL的制备优化和稳定性研究
目的 通过对具有高效抗肿瘤活性的类抗体偶联药物——双靶向配体化力达霉素(DTLL)制备过程的优化,获得纯度高和活性强的DTLL产品;探讨影响DTLL稳定性的主要因素,为临床申报和工业化生产提供依据.方法 分别对DTLL前体(DTLP)蛋白表达载体、宿主菌株、表达温度、诱导剂终浓度、菌体密度和诱导时间进行优化.以高压破碎法提取可溶性目的蛋白,采用Ni+亲和与分子筛层析两步纯化,得到高纯度DTLP,再与力达霉素发色团组装获得DTLL.采用HPLC、MTS、ELISA法进行稳定性试验,分别监测DTLL冻干样品的蛋白纯度、发色团含量、细胞毒和亲和力活性的变化.结果 经过发酵提取工艺优化,每升发酵液所得DTLP蛋白约为22 mg,是优化前每升9 mg的2.4倍,其蛋白纯度达到99.7％;DTLL组装效率达到68％;稳定性试验结果显示,DTLL冻干样品对光照敏感,在-80℃低温避光环境下可稳定保存.结论 成功优化了双靶向配体化力达霉素DTLL的制备工艺,提升了产品纯度和产率,为其后续生产和临床申报提供了实验基础,也为其他抗体偶联药物的制备提供了较成熟完善的技术平台.
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PDCD5通过Wnt/β-catenin通路抑制肾细胞癌侵袭转移及其机制研究
目的 探讨肾细胞癌(RCC)患者PDCD5的表达水平及其参与调控RCC侵袭与转移的可能机制.方法 利用免疫组化检测RCC标本与癌旁组织中PDCD5的蛋白表达水平,同时分析PDCD5与疾病分期、预后的相关性;利用transwell及划痕实验检测PDCD5对肾癌细胞系A498侵袭与转移的影响;利用Western blot检测A498细胞转染PDCD5后MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin及Wnt/β-catenin通路的变化.结果 ①与癌旁组织相比,RCC标本中PDCD5明显下调(P<0.001),且与疾病分期及预后正相关;②PDCD5明显抑制了肾癌细胞系A498的转移与侵袭能力(P<0.01);③PDCD5通过抑制A498细胞系中MMP2、MMP9及N-cadherin的表达水平,增强E-cadherin的表达水平调控EMT转化,同时Wnt/β-catenin通路关键蛋白下调.结论 PDCD5通过调控Wnt/β-catenin通路影响肾细胞癌EMT转化,负性调控了RCC病人的侵袭与转移进程.
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miR-195在胃癌细胞中的表达及对癌细胞凋亡的机制研究
目的 探讨miR-195在胃癌细胞中的表达及对癌细胞凋亡的影响和机制.方法 以人胃黏膜正常细胞GES-1作为对照,RT-PCR检测人胃癌MNK-28、SGC-7901、BGC-823细胞中miR-195基因的表达;将miR-195 mimics转染BGC-823细胞,48 h后RT-PCR检测miR-195的mRNA表达;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达.结果 miR-195在MNK-28、SGC-7901、BGC-823细胞中的mRNA表达均显著低于GES-1(P<0.01),miR-195在BGC-823细胞中的表达低,选择作为后续研究对象;过表达组细胞凋亡率及cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组,Notch1、Hes1蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),而空转染组细胞凋亡率及cleaved caspase3、Notch1、Hes1蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 miR-195在胃癌细胞的过表达可促进癌细胞的凋亡,其机制与下调cleaved caspase3蛋白表达及Notch1信号通路有关.
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PML/RARα融合基因FISH检测试剂盒的研究
目的 自主研制用于检测白血病染色体PML/RARα融合基因的双色荧光原位杂交(FISH)检测试剂盒.方法 根据染色体基因图谱,选定合适的细菌人工染色体(BAC)克隆重叠群分别作为PML基因探针和RARα基因探针.对入选的BAC克隆进行STS-PCR鉴定和荧光原位杂交鉴定.后将完成鉴定的PML探针标记红色荧光素,RARα探针标记绿色荧光素,加上配套试剂组成FISH检测试剂盒.用双盲法检测白血病临床样本37例,对自制探针和同类进口探针在各项技术参数上进行对比研究.结果 自制试剂盒检测PML/RARα融合基因与进口探针相比,其阴、阳性率和同类进口产品完全符合;自制探针的荧光信号更强,信噪比更高.结论 自主研制的PML/RARα融合基因FISH检测试剂盒设计合理、质量可靠,可用于替代价格昂贵的进口产品.
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HPPCn调控HIF-2α促进肝癌细胞的索拉非尼耐药
目的 确定HPPCn调控低氧诱导因子-2α(HIF-2α)促使肝癌细胞索拉非尼耐药的机制.方法 利用实时聚合酶链式反应测定和Western blot印迹检测mRNA及蛋白水平表达.使用MTS测定来确定细胞存活率.细胞transwell和划痕实验被用来检测细胞迁移和侵袭的能力.皮下异种移植小鼠模型模拟肿瘤体内转移.结果 缺氧诱导肝癌细胞索拉非尼耐药;HIF-2α 参与了缺氧诱导的索拉非尼耐药的发生;HPPCn沉默通过抑制HIF-2α抑制缺氧诱导的索拉非尼耐药.结论 持续的索拉非尼治疗产生的抗血管生成效应会引起缺氧,诱导索拉非尼耐药.HPPCn或HIF-2α敲低联合索拉非尼为治疗原发性肝细胞癌提供更有前景的治疗策略.
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小G蛋白ARL8B是潜在的抗原发性胃低分化黏液样腺癌的药物作用靶标
目的 发现更多表达小G蛋白ARL8B而ARL8A无表达的肿瘤细胞系,以扩大ARL8B在抗肿瘤药物研究中的应用范围.方法 利用实时荧光定量PCR法测定一些肿瘤细胞系中的ARL8B/ARL8A的相对表达量;以ARL8A和ARL8B都表达的细胞系作对照,对新发现的只表达ARL8B的肿瘤细胞系实施siRNA降低ARL8B表达量,用CCK8法检测ARL8B表达量被降低后的细胞活力变化;用Western blot考察ARL8B表达量降低诱导肿瘤细胞凋亡的原因.结果 发现MGC-803细胞表达ARL8B而ARL8A无表达,胃癌细胞系BGC-823和MKN-45均表达ARL8A和ARL8B.ARL8B被敲低后MGC-803细胞出现了明显的凋亡,BGC-823和MKN-45细胞无明显的凋亡出现.细胞自噬水平显著提高是引起细胞凋亡的原因.结论 MGC-803细胞系来源于胃低分化黏液样腺癌患者,是新发现的表达ARL8B而ARL8A无表达的肿瘤细胞系,降低ARL8B表达能导致明显的细胞凋亡,提示ARL8B是抗胃低分化黏液样腺癌潜在的药物作用靶标.
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早期体内力学刺激促进藻酸钙复合自体软骨细胞修复羊关节负重区软骨缺损的实验研究
目的 观察膝关节持续被动活动仪(CPM)体内力学刺激对组织工程软骨修复大动物关节负重区软骨缺损效果的影响.方法 研究、设计和制造能够适用于体内力学刺激羊膝关节软骨缺损修复的膝关节连续被动活动仪(CPM);将实验动物(山羊膝关节双髁负重区制造直径6 mm软骨缺损)分为三组:空白组:单纯缺损未植入修复组织;藻酸钙+骨膜+细胞组:藻酸钙复合自体软骨细胞凝胶植入软骨缺损区,自体骨膜覆盖缺损区;藻酸钙+骨膜+细胞+CPM组:藻酸钙复合自体软骨细胞凝胶植入软骨缺损区,自体骨膜覆盖缺损区,术后早期接受CPM锻炼.分别于术后3个月、6个月、12个月(12个月组仅包括CPM力学刺激组)取材,通过修复组织的大体、组织学观察及其评分比较3组软骨修复效果.结果 藻酸钙复合软骨细胞能够较好地修复羊负重区关节面软骨缺损,将缺损修复的大体观察、组织学等结果进行单因素统计学分析,发现接受体内CPM力学刺激组效果好,其修复组织中透明软骨比例多,其次为藻酸钙+骨膜+细胞组.结论 膝关节持续被动活动仪(CPM)体内力学刺激能够促进组织工程软骨修复大动物关节负重区软骨缺损的效果.
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乙酰肝素酶对血管内皮细胞增殖、迁移及血管活性因子表达的影响
目的 检测乙酰肝素酶(HPA)过表达对血管内皮细胞增殖、迁移及血管活性因子表达的影响,进一步揭示HPA参与调节动脉粥样硬化斑块内血管新生过程的作用机制.方法 构建HPA基因的过表达载体,转染HUVEC细胞.利用Western blot检测HPA蛋白的过表达情况.利用CCK8法检测细胞增殖情况,细胞迁移实验检测HPA对细胞迁移能力的影响.利用Western blot检测HPA对Ang2和Tie2蛋白表达的影响.结果 构建的HPA表达载体转染HUVEC细胞后可使HPA蛋白水平明显上调.随着转染时间的增加,HPA转染组的相对增殖率可达对照组的2～3倍.HPA转染组的穿膜细胞数明显多于对照组.HPA转染组的Ang2和Tie2的蛋白表达水平高于对照组.结论 HPA过表达可提高HUVEC细胞的增殖和迁移能力,促进血管活性分子Ang2和Tie2的表达,提示HPA可能通过调控Ang2/Tie2的表达来影响易损斑块内病理性血管新生.
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抗结核药物靶点的研究进展
结核病( tuberculosis , TB )是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的一种慢性致死性疾病,目前是全世界十大致死疾病之一[1].近些年来,由于抗结核药物的大量使用,抗结核作用位点的突变,艾滋病和结核耐药菌株的出现等原因,抗结核治疗面临严峻挑战.据世界卫生组织估算,2016年,全球有 1040万人患有结核病,170万人因该病死亡(包括 40万艾滋病毒感染者),有 60万利福平耐药新发病例,其中有 49万耐多药结核病患者[1].耐多药结核病( MDR-TB )和广泛耐药结核病(XDR-TB)是控制和治疗结核病的重大挑战.然而,近几十年来仅有强生公司的新型结核分枝杆菌 ATP合酶抑制剂贝达喹啉( bedaquiline )和日本大冢公司的德拉马尼(delamanid)两种抗结核药物被批准上市,而且目前已有耐药菌株出现及引起副作用的报道[2].因此,寻找新的抗结核药物作用靶点,开发新型抗结核药物迫在眉睫.本文就近几年来有关抗结核药物靶点的研究作简要综述,旨在为研究新型抗结核药物以及发现潜在的新型抗结核药物靶点提供一些参考.
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一种便携式无活细胞表达的生物合成新技术及其应用
1 生物合成新技术概述合成生物学将工程设计原则合理地应用于分子生物学、新的基因装置设计,在疾病的诊断和治疗的领域发挥作用[1],如,创建全细胞生物传感器[2],基因修饰益生菌[3]以及细胞生物分子加工厂.源自基因工程的生产细胞系基础上,生物合成已成为药品生产[4]、蛋白质疗法[5]、燃料及其他产品[6]的主流技术.然而介导细胞宿主遗传基因进行生物合成,要伴随生物安全、实际障碍、特殊性实验室限制技术的问题,并且疫苗和其他蛋白质的生产需要稳定的冷链配送,但配送成本高,也影响了偏远地区对药物制品的应用.
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HPLC法快速检测重组人神经生长因子原液中醋酸残留量
神经生长因子(nerve growth factor,NGF)是早发现的神经营养因子,其在神经细胞的生长、发育、分化、存活和损伤神经修复中起着重要的作用[1].目前,临床采用鼠颌下腺提取的 NGF用于各类神经损伤的修复,疗效显著[2].由中国仓鼠卵巢细胞(CHO 细胞)表达的重组人神经生长因子(rhNGF)相较于鼠神经生长因子(mNGF)具有活性更高、免疫风险更低的特点,具有广阔的市场前景[3].
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贝伐珠单抗仿制药生物活性测定方法的开发与应用
贝伐珠单抗是一种人源化的抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)重组单克隆抗体,其人类免疫球蛋白 G(IgG)片段占 93％,其余的是鼠源结构,人源化部分可以使该药的 t1/2 延长和免疫原性降低[1].VEGF 是血管生成的重要调控因子, VEGF-A/VEGFR2信号由 PLC-γ1通过促进其激动激酶 C和 Raf-MEK信号通路,终通过 ERK1/2促进血管内皮细胞的增殖[2].原位杂交研究表明,多种人实体肿瘤中均存在 VEGF mRNA的表达[3].肿瘤新生血管的生成是肿瘤与其周围环境中血管生长因子相互作用的结果[4],贝伐珠单抗可以与 VEGF特异性结合,从而阻断其与受体结合,使血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)无法活化,从而发挥抗血管生成的作用.因 VEGF能促进异常肿瘤血管内皮细胞增殖、迁移、新生和增加肿瘤血管通透性,故贝伐珠单抗结合 VEGF后,异常肿瘤血管得到改善,肿瘤血管通透性变得正常,肿瘤部位的血管出现退化,肿瘤体积变小.同时,组织间隙的压力下降,终使化疗药物更多更顺利地到达肿瘤部位[5].
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应用2周龄ICR小鼠建立CVA16感染模型
Enterovirus 71(EV71)和 coxsackievirus A16(CVA16)都属于小核糖核酸病毒科的单正链 RNA病毒,是引起手足口病的两个主要病原体[1].临床上,这两种病毒的感染通常是自限性的,小部分感染常与神经系统疾病相关,包括无菌性脑膜炎、脑干脑炎和急性弛缓性麻痹等[2].手足口病已成为一个严重的公共卫生问题,在日本、马来西亚、新加坡、越南、中国大陆等亚太地区存在周期性的爆发流行[3-5].目前临床上尚无有效的抗病毒药物用于手足口病的预防和治疗.
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细胞治疗产品开发流程及管理对策
随着经济发展和社会进步,公众对健康服务的需求日益提高,健康需求已成为驱动未来科学发展的"核心驱力".细胞治疗作为国际医学前沿重点发展领域,为恶性肿瘤、严重创伤等许多缺乏有效治疗手段的重症带来了新的希望,具有广阔的应用前景和巨大的市场价值.目前,细胞治疗已经进入多元化发展阶段,从临床研究和品种布局来看,全球细胞治疗领域都处于相当活跃的状态.近年来,国内新型生物医药技术加快突破,细胞治疗基础研究不断深入,研究成果大量涌现.同时,应该清楚地认识到国内细胞治疗的产业化刚刚起步,相关市场尚未成熟,监管体系仍需完善.
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注射剂过滤除菌的风险控制
注射剂是指药物与适宜的溶剂或分散介质制成的供注入体内的溶液、乳状液或混悬液及供临用前配制或稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂.《中国药典》规定,根据无菌保证水平(sterility assurance level,SAL)的高低和风险的大小,注射剂首选终端灭菌工艺,对于不能耐受终端灭菌工艺的药物,即对热不稳定的一些药物品种,可选择用无菌生产工艺制备.
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