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结核感染T细胞斑点实验临床检测研究
目的 探讨结核感染T细胞斑点实验(T-SPOT.TB)在临床快速诊断结核病中的应用价值.方法 利用T-SPOT.TB方法检测外周血中结核感染特异的效应T淋巴细胞的频率.同时与涂片抗酸染色、BACTEC960培养及实时定量PCR方法做比对.结果 164例结核病患者中,155例T-SPOT.TB阳性,提示方法敏感度为94.5%(155/164),显著高于其他方法.60例非结核呼吸道疾病对照组中有5例阳性,20例健康对照均为阴性,方法的特异度为93.8%(75/80).结论 T-SPOT.TB方法敏感度和特异度均非常高,可用于结核病的快速诊断,尤其是对于结核病和非结核分枝杆菌病的早期鉴别.
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两种γ干扰素释放试验及PPD试验结果在结核感染诊断中的比较
目的 研究2种γ干扰素(IFN-γ)释放试验(interferon-γelease assays,IGRA)和PPD试验在结核感染诊断中的相关性及应用价值.方法 对2010年178名驻京部队河南籍入伍新兵进行PPD试验,用结核分枝杆菌特异性重组培养滤液蛋白10(culture filtrate protein 10,CFP10)-期分泌性靶抗原6(early secretory antigenic target 6,ESAT6)融合蛋白(重组CFP10-ESAT6融合蛋白)-酶联免疫斑点试验(enzyme linked-immunospot assay,ELISPOT)检测新兵外周血释放IFN-γ的效应T淋巴细胞,并用结核分枝杆菌CFP10-ESAT6重组蛋白-化学发光酶免疫法(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA)检测其全血中IFN-γ水平.结果 178名入伍新兵中,PPD试验、ELISPOT和CLEIA的阳性率分别为39.89％(71/178)、31.46％(56/178)和21.35％(38/178).前者阳性率显著高于后二者(x2=14.3663,P＜0.01),ELISPOT法阳性率也显著高于CLEIA法(x2=4.6834,P＜0.05).在107名PPD试验阴性者中,ELISPOT、CLEIA法检测阳性者分别为33例(30.84％)、14例(13.08％),前者阳性率显著高于后者(x2 =9.8425,P＜0.01).在71例PPD阳性者中,ELISPOT、CLEIA法检测阳性者分别为23例(32.39％)、24例(33.80％),两者差异无统计学意义(x2 =0.0318,P＞0.05). ELISPOT法和PPD试验的一致率为54.49％ (97/178,U=0.218,P＞0.05);CLEIA法和PPD试验的一致率为65.73％(117/178,U=3.227,P＜0.01),ELISPOT和CLEIA法的一致率为66.29％(118/178,U=1.885,P＞0.05);PPD试验、ELISPOT和CLEIA检测方法的一致率为42.70％(76/178).ELISPOT法检测的斑点数与PPD试验反应的硬结平均直径之间缺乏相关性(r=0.138 51,P＞0.05);CLEIA法检测的IFN-γ水平与PPD试验反应的硬结平均直径之间有低的相关性(r=0.252 44,P＜0.01);ELISPOT检测的斑点数与CLEIA检测的IFN-γ水平之间也有低的相关性(r=0.2755,P＜0.01).在卡介苗接种者中,PPD试验检测的阳性率为50.00％ (48/96),ELISPOT为22.92％ (22/96),CLEIA为23.96％(23/96);在无卡介苗接种者中,PPD试验检测的阳性率为28.05％ (23/82),ELISPOT为47.56％(39/82),CLEIA为17.07％(14/82).结论 两种IGRA方法与PPD试验之间的一致性差、相关性低,用IGRA方法能够有效地筛查结核感染,而ELISPOT检测的阳性率高于CLEIA.
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抗结核抗体及结核感染T细胞斑点试验在结核病诊断中的应用
目的 探讨抗结核抗体(38kD-IgG)及结核感染T细胞斑点试验(T SPOT-TB)在结核病临床诊断中的价值.方法 以上述2种方法 单项及联合检测活动性结核病患者83例(菌阳结核患者43例,菌阴结核患者40例),非结核对照者50例(其中有呼吸系统疾病者15例,健康查体者35例),共计133例.结果 38 kD-IgG及T SPOT-TB试验检测菌阳结核的阳性率分别为79.1%和93.0%,联合检测阳性率为97.7%;2种方法 单项检测菌阴结核的阳性率均为72.5%,联合检测阳性率提高到92.5%.50名非结核对照中,2种试验特异性分别为70.0%和94.0%,联合检测特异性为66.0%.结论 对于菌阳患者,T SPOT-TB试验敏感性较高(93.0%),但与38 kD-IgG方法 相比,统计学上差异无统计学意义(χ2=3.49,P>0.05);T SPOT-TB试验的特异性明显高于38kD-IgG试验(χ2=9.76,P
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酶联免疫斑点试验在菌阴肺结核诊断中的价值
目的 探讨酶联免疫斑点检测技术(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT) (T-SPOT.TB)在菌阴肺结核诊断中的应用价值.方法 应用T-SPOT.TB试剂盒对55例菌阴肺结核(A组)和36例其他肺部疾病(B组)患者的外周血中Mtb特异性T淋巴细胞进行检测,同时对两组患者进行PPD试验、血清结核抗体(Mtb-AB)检测.结果 A组T-SPOT.TB的阳性率为89.1％(49/55),要明显高于B组的19.4％(7/36)(x2=44.59,P＜0.001).在A组,T-SPOT.TB的阳性率要明显高于PPD试验[36.4％(20/55)]、Mtb- AB[52.7％ (29/55)]及PPD试验+Mtb-AB的阳性率[23.6％(13/55)].(x2=12.13,x2=7.08,x2=21.54,P值均＜0.01).T-SPOT.TB在B组中的阴性率为80.6％(29/36),较PPD试验[86.1％(31/36)]及Mtb-AB阴性(63.9％,23/36)和PPD+Mtb-AB检测方法的阴性率[88.9％ (32/36)]经检验,差异无统计学意义(x2=0.39,x2=2.69,x2=0.41,P值均＞0.05).结论 T-SPOT.TB检测特异度和敏感度要优于PPD试验及Mtb-AB的检测,可用于菌阴肺结核的辅助诊断,具有一定的临床推广使用的价值.
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结核分枝杆菌IFN-γ酶联免疫斑点检测的建立和初步应用
目的 建立结核分枝杆菌特异性IFN-γ酶联免疫斑点(Elispot)检测技术,初步评价其在诊断结核分枝杆菌感染的敏感性和特异性.方法 采用以早期分泌抗原靶6 kDa蛋白(ESAT-6)抗原为主的重组蛋白库、多肽库为抗原,建立结核分枝杆菌特异性IFN-γElispot检测技术(简称Elispot);应用该技术对32例肺结核病患者、205例健康对照者和18例肺部其他疾病对照的外周血结核菌特异性IFN-γ水平进行检测;结核病人和部分健康对照同时采用全血干扰素试剂(Quantiferon-TB-Gold,QFT-G)进行平行检测.结果 采用Elispot检测,结核患者的阳性率高(75.0%),显著高于健康对照(7.3%)和其他肺部疾病患者(11.1%),结核患者反应水平与其他两组比较均差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.05).采用QFT-G在结核病人中的IFN-γ应答阳性率为78.1%,与Elispot检测结果进行配对比较无显著性差别(χ2=1.6,P＞0.05).结论 建立了结核菌特异性IFN-γElispot检测技术,该技术在诊断结核菌感染的初步应用显示出较好的特异性和敏感性,但仍需进一步扩大样本数观察.
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尿安非他明在不同保存条件下的浓度分析
[目的] 对在不同保存温度和不同保存时间下检测到尿安非他明浓度进行分析,探寻保存样本的适宜条件.[方法] 采用酶放大免疫法(EMIT)定量检测尿安非他明在不同保存条件下的浓度,用SPSS统计软件进行分析.[结果] 在6个月内,(4±2)℃下保存的样本与(-15±2)℃和(-25±2)℃保存的样本浓度有差别;而(-15±2)℃和(-25±2)℃保存的样本浓度无差别;(4±2)℃的样本在此期限内浓度差异较大,而(-15±2)℃和(-25±2)℃样本差异不大.[结论] 尿安非他明在-10℃以下浓度稳定,可较长时间保存.
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酶标方法检测食品中O157大肠杆菌
[目的]O_(157)大肠杆菌是污染食品引起食物中毒的主要病原菌,针对进出口食品卫生监测的需要,研究1种简便、快速、准确的实验方法.[方法]采用辣根过氧化物酶标记在特异性的O_(157)大肠杆菌单克隆抗体上(1gM型),利用抗原-抗体的特异性结合反应,后通过反应的颜色来判断阴、阳性结果.[结果]本方法检出率高,每克样品中有5个细菌即可检出,48h即可报告结果.[结论]酶标方法检测食品中O_(157)大肠杆菌快速、准确检测周期短,既可提高检出率,又可节省检测时间.
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基因扩增产物微孔杂交法检测新城疫致病毒株
[目的]建立一种快速、简便、敏感、实用的方法以鉴别新城疫病毒(NDV)强弱毒株.[方法]依据NDV强弱毒株F0蛋白在裂解位点处的核酸序列有差异,设计一种针对强毒株的探针,利用基因扩增物微孔杂交法,检测标本中NDV致病毒株.[结果]缩短杂交时间,加快反应速度,能从强、中、弱毒株中扩增出371bp的核酸产物.利用酶显色法杂交结果,比电泳法观察PCR结果高4倍.[结论]本方法经优化PCR参数后,可作为新城疫的诊断方法,又可作为出入境检疫的常规方法.
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国产抗HCV酶联免疫诊断试剂质量分析
目的了解国产抗HCV EIA试剂的质量情况.方法用16种国产抗HCV EIA试剂盒和2种进口试剂对1 426份来源于血站及医院的血清进行了检测,并对疑难样品用RIBA及PCR试剂进行了确证.对各种试剂的灵敏度,特异度及检测的抗体谱进行了分析.结果目前国产试剂灵敏度不低于国外试剂,特异度尚有待于改进.国产试剂漏检及假阳性的主要原因为HCV NS3区抗原相对较弱,抗原纯度较低,用量不足,有待于改进.结论国产抗HCV试剂灵敏度不低于国外试剂,特异度有待提高.
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低浓度混苯对女工生殖激素分泌的影响
目的探讨低浓度混苯作业对女工月经周期生殖激素分泌的影响。方法对50名暴露组女工采用气相色谱法测定呼吸带空气中的苯、甲苯和二甲苯的浓度，对暴露组女工及外对照组和内对照组女工各35名进行月经周期特征前瞻性调查，用酶免疫分析法测定尿液中的孕二醇-3-葡糖苷酸（PdG）、雌酮结合物（E1C）和卵泡刺激素（FSH）。结果空气中混苯以低浓度苯为主，苯检出率29.10%、浓度8.88（0.90～876.47） mg/m3、超标率21%、大超标倍数20.91倍；与内对照组和外对照组相比，低浓度混苯接触组女工黄体期长度缩短；与内对照组相比，暴露组的排卵前E1C水平、卵泡早期FSH水平以及卵泡早期和黄体期PdG水平明显降低。结论低浓度混苯可以干扰接触女工下丘脑-垂体-卵巢轴中FSH、雌激素和孕激素的正常水平。
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中药治疗肺炎支原体感染疗效观察
随着免疫酶技术及分子生物学技术的迅速发展,呼吸道感染的病原学诊断取得很大进步.肺炎支原体(MP)被认为是急性呼吸道感染的一种常见病原微生物,一年四季均可发病,临床主要表现为上感、咽炎、鼻咽炎、气管和支气管炎、毛细支气管炎、肺炎等,并可引起心、脑、肝、肾及溶贫等多系统肺外并发症,为国内外儿科临床医师所重视.
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细胞因子及特异性抗体的检测在肾综合征出血热诊断中的意义
探讨检测血清细胞因子及肾综合征出血热(HFRS) 病毒特异性抗体IgM和IgG的含量在HFRS发病机制及诊断中的意义.选择24例HFRS患者及30例健康人血清标本,采用生物素-亲和素-酶免疫技术检测IL-2、IL-6和TNF-α,ELISA方法检测血清HFRS病毒特异性抗体IgM和IgG,并对其进行统计学分析. 结果显示, ELISA法检测HFRS患者抗HFRS病毒IgM和IgG的阳性率分别为75.00 % 和50.00 %,健康对照组的抗体阳性率为零;HFRS患者血清IL-2、IL-6、TNF-α的含量分别为10.88±2.31pg/mL、256.46±102.51pg/mL和45.63±5.32pg/mL,高于健康对照组0.59±0.24pg/mL(P＜0.01)、53.8±19.21 pg/mL(P＜0.01)和5.81±3.58 pg/mL(P＜0.01). 结论 :HFRS患者血清IL-2、IL-6和TNF-α及血清特异性抗体IgM和IgG的含量较健康人明显升高,检测这些指标对该病发病机理、诊断及预后评价有一定意义.
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一种基于酶标纳米金探针的蛋白质检测方法
目的 研究酶标纳米金探针的制各条件,并构建利用酶标纳米金探针检测蛋白质的检测体系,实现对蛋白质的高灵敏度检测.方法 首先标记捕获抗体的磁珠探针、抗原及标记检测抗体和辣根过氧化物酶(Streptavidin-peroxidase,SA-HRP)的纳米金探针(AuNP probes)进行免疫反应形成三明治结构,然后利用磁力分离器收集三明治结构,再加入四甲基联苯胺(Tetrabenzidine,TMB)溶液发生酶促显色反应,后在450 nm处进行分光光度检测,从而间接测定蛋白质含量.结果 通过一系列优化实验建立检测体系,具体为:纳米金探针重悬液确定为50 mmol Tris(pH7.8,1.25%蔗糖,0.2%BSA,0.05%PEG,0.05%PVP,0.15% Tween20):检测体系中纳米金的适加入量为3 μl;2步孵育适时间依次为1 h和45 min.使用该方法检测并绘制癌胚抗原(CEA)标准曲线,表明CEA浓度在250 pg/ml～25 ng/ml区间时线性关系良好,R2为0.991.通过灵敏度实验表明该检测体系的低检测灵敏度为25 pg/ml,而传统ELISA方法的检测灵敏度仅为1.65 ng/ml.结论 酶标纳米金探针检测体系实现了通过普通光学仪器进行高灵敏度蛋白质检测的目标,是一种很有发展前景的蛋白质检测技术.
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免疫酶技术在修饰的安卡拉痘苗病毒感染性滴度检测中的应用
修饰的安卡拉痘苗(modified vaccinia Ankara,MVA)是MVA病毒在原代鸡胚成纤维细胞(CEF)中经过一系列的传代得到[1],在人体内可以表达MVA病毒蛋白及其携带的外源基因蛋白,但却不形成完整的病毒颗粒,为人体内复制缺陷性病毒[2],安全性好,即使在免疫功能缺陷病人和免疫抑制的恒河猴体内也未显示出明显的副作用.
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突变型乙肝病毒前C-C基因疫苗免疫BALB/C小鼠的研究
目的 了解乙肝病毒前C-C基因疫苗(VEC)的突变型VE2、VE4免疫BALB/c小鼠后诱发特异性体液和细胞免疫的效果.方法 分别用突变型和非突变型DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠抗HBc、抗HBelgG,免疫第28天取小鼠脾细胞用酶免疫斑点(ELISPOt)方法和CTL杀伤试验检测特异性细胞免疫功能.结果 VE2、VFA组抗HBe水平高于VEC组,抗HBc水平差异无统计学意义.3种质粒均能引发特异性细胞免疫反应,VE4、VE2强于VEC;联用VM7免疫后能使VEC、VE2、VE4特异性细胞免疫反应增强.结论 突变型前C-C基因疫苗在诱导BALB/c小鼠特异性体液和细胞免疫方面优于突变前.γ干扰素基因可作为基因佐剂增强HBV DNA疫苗诱导的特异性细胞免疫反应.
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HIV感染者中结核杆菌ESAT-6蛋白特异性T细胞反应的检测
目的 检测结核杆菌抗原早期分泌抗原靶分子(ESAT-6)融合蛋白其在人类免疫缺陷病毒感染患者中特异性T细胞反应,从而为艾滋病合并结核杆菌感染的诊断方法的建立提供理论依据.方法利用重组表达结核杆菌ESAT-6蛋白做为抗原,通过酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测HIV感染者中特异性T细胞反应,并以正常健康者、无HIV感染的结核患者作为对照.结果 ESAT-6重组蛋白对结核患者外周血单核细胞ELISPOT方法检测证实其具有良好的抗原性,斑点形成单位数(SFU/106 PBMC)在结核组和HIV合并结核感染组中显著升高,并与无合并结核感染临床表现的HIV组以及健康对照组间均存在明显的差别.结论重组结核杆菌ESAT-6蛋白可以作为抗原通过ELISPOT方法检测HIV感染者中结核杆菌合并感染.
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ELISPOT,MHC肽五聚体和ICCD三种检测特异性细胞免疫应答方法的比较研究
目的 比较三种特异性细胞免疫应答的检测方法,寻求一种简便、重复性好、易于质控的评价疫苗细胞免疫的检测方法.方法 采用HIV DNA疫苗肌内注射BALB/c小鼠,第6周用艾滋病重组MVA痘苗病毒腹腔注射加强免疫,于第10天制备脾脏细胞悬液,并用酶联免疫斑点法(Enzyme-Linked Immune Spot,ELISPOT)、MHC肽五聚体法和胞内细胞因子染色分析法(Intra-cellular cytokine detection,ICCD)分别检测细胞免疫应答.结果 ELISPOT、MHC肽五聚体染色以及胞内细胞因子染色分析法检测疫苗组细胞免疫应答的阳性率分别为5/5、4/5和3/5;而且ELISPOT和MHC肽五聚体染色法之间有一定相关性(r=0.647),而ELISPOT和胞内因子染色法之间以及MHC肽五聚体染色和胞内因子染色之间无相关性.结论 ELISPOT试验操作相对简单,灵敏度高、重复性好,是评价疫苗细胞免疫的有效方法.
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微孔板化学发光酶免疫分析法定量检测基质金属蛋白酶抑制剂-Ⅰ的方法研究
目的 建立定量检测人血清中金属蛋白酶抑制剂-Ⅰ (TIMPⅠ)的微孔板化学发光酶免疫分析方法.方法 以辣根过氧化物酶标记TIMP Ⅰ单抗,以过氧化氢(H202)-鲁米诺(luminol)化学发光体系作为检测体系,采用双抗体夹心反应模式,优化筛选温育条件、抗体包被条件、酶标记物稀释度和发光反应时间等指标.同时进行了回收实验,热稳定性实验,并随机选取60例肝纤维化患者血清与进口试剂进行比对实验.结果 所建立方法的线性范围为0.2 ～ 12 ng/ml,相关系数0.996,检出限为0.12 ng/ml,批内、批间变异均小于10％.检测TIMP Ⅰ的临床高、中、低值血清回收率为分别为100.6％、96.5％和106.5％;在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察,线性相关系数均＞0.98,标准偏差＜6％；比对实验分析证明2种方法相关性具有统计学意义.结论 成功建立定量TIMP Ⅰ微孔板化学发光酶免疫分析方法,该方法具有较高的准确性、灵敏度及良好的重复性,并与进口试剂检测结果一致.
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免疫酶斑点法检测汉坦病毒抗原的研究
目的建立一种新的诊断肾综合征出血热(HFRS)的实验手段.方法采用R22株、陈株和湖北株3种汉坦病毒接种家兔,制备兔抗汉坦病毒多克隆抗体(抗HTV-IgG).然后采用混合的3种抗体进行免疫酶斑点法实验(IEDA),检测患者血清和尿液中的汉坦病毒抗原.同时采用间接免疫荧光法(IFA)检测患者血清中抗汉坦病毒-IgM作对照.结果经用相关分析,IEDA与IFA检测的结果高度相关.血中汉坦病毒抗原检出率为73.68%,尿中为65.00%.发病5 d内,血中检出率为94.34%,尿中检出率为83.33%.5病日内的早期诊断率前者明显高于后者.结论IEDA与IFA相比,阳性率比后者有较大提高,特别是5病日内的早期阳性率的提高明显,值得用于临床HFRS的早期诊断.
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酶免疫试验检测牛肉中污染的牛中枢神经组织的研究
目的研究应用酶免疫试验(EIA)检测牛肉中污染的牛中枢神经(CNS)组织的影响因素,并将该方法应用到进口牛肉和国产牛产品的检测中.方法对含有不同浓度中枢神经组织的牛肉匀浆分别进行加热处理和不加热处理,放置不同时间后用RIDASCREEN(r)Risk Material 10/5和RIDASCREEN(r)Probennahme-zubehor Sampling tools试剂盒进行检测;对与标准相同浓度脑组织的PBS悬液和样品稀释缓冲液(SDB)悬液用试剂盒进行检测;对美国进口牛肉及国产市售牛产品中是否含有中枢神经组织进行检测.结果该试剂盒可检出生肉产品和加热处理的肉产品中的中枢神经组织.样品的吸光度值随着中枢神经组织含量的增加而增加;加热和放置时间的延长可使样品的吸光度值下降;脑组织的PBS悬液比相应浓度的样品稀释缓冲液(SDB)悬液的吸光度值高,二者的吸光度值都比相应浓度的标准高.进口牛肉的检测结果均为阴性;国产牛产品除牛尾为阳性外其余样品均为阴性.结论酶免疫法用于检测牛肉中污染的中枢神经组织具有很高的灵敏性;加热和放置时间延长可使样品的吸光度值下降.如果屠宰过程不当,会造成牛产品被中枢神经组织成分污染.
