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短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法的建立及其应用
目的 建立短片段扩增杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因的序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)分型法.方法 选取330例湖南汉族健康志愿者血液标本,提取基因组DNA;合成短片段扩增KIR基因的序列特异性引物,采用PCR-SSP分型法扩增已知的16个KIR基因,分析湖南汉族人群KIR基因的频率分布特征.从330例DNA标本中随机选取100例,比较长、短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法检测基因的阳性率差异.结果 ①短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法可检测出所有KIR基因,扩增产物条带清晰,结果准确;②湖南汉族健康人群KIR2DL4、KIR3DL2、KIR3DL3、KIR3DPI基因阳性率均为100%,KIR2DLl、KIR2DL3、KIR3DL1、KIR2DS4、KIR2DP1基因阳性率分别为96.4%、96.1%、94.2%、94.2%和99.7%,而KIR2DS1、KIR2DL5、KIR3DS1、KIR2DL2、KIR2DS2、KIR2DS3、KIR2DS5基因阳性率均<40%;③长、短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法(长、短片段方法)均可检测出16个KIR基因,且KIR2DL3、KIR2DL4、KIR3DL2、KIR3DL3、KIR3DP1基因的阳性率一致,但长片段方法检测其余KIR基因的阳性率均低于短片段方法,其中短片段方法检测KIR3DL1、KIR2DS1、KIR2DS4、KIR3DS1基因阳性率均明显高于长片段方法(分别为94%vs.84%、40%vs.26%、94%vs.62%、38%vs.20%,均P<0.05),同时漏检和误检降低.结论 短片段扩增KIR基因的PCR-SSP分型法简单、易行、准确,具有良好的应用价值.
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NK细胞免疫球蛋白样受体与异基因造血干细胞移植的研究进展
NK细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptors,KIR)是主要表达于人NK细胞表面的受体,在所有人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)Ⅰ类分子所识别的NK细胞独特型受体中,免疫球蛋白样超家族受体KIR占主导地位.由于它的配体参与多种免疫反应,因此,KIR在机体抗感染免疫、肿瘤免疫和移植免疫中都发挥重要作用.
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HLA联合KIR配型选择供者成功移植治疗复发难治急性白血病并文献复习
目的：探求杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因配型在选择亲缘单倍体供者中的作用及进展期急性白血病挽救性移植的个性化预处理方案的选择。方法回顾性分析我科室1例进展期急性髓性白血病行单倍体造血干细胞移植的病例，对其单倍型供者的选择、个性化预处理方案、移植后预防复发及移植预处理毒性、急性移植物抗宿主病（GVHD）及白血病等情况，并对KIR 基因在供者选择中的作用及挽救性移植病例的个性化预处理方案选择的依据进行文献复习。结果随访1年，该患者获得完全植入，端串联重复序列（STR）-PCR验证为完全供者型，＋19 d白血病植活，＋38 d血小板脱离输注。无Ⅱ～Ⅳ度GVHD及广泛型慢性GVHD发生，白血病持续缓解，白血病残留MLL-PCR基因持续为0。结论对于进展期白血病接受单倍体造血干细胞移植作为挽救性移植，清肿瘤性个性化方案及选择KIR配型不合的单倍体供者值得探讨。
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NK细胞受体KIR在肾移植物排斥反应中的研究进展
器官移植的成功有赖于防止急性排斥反应的发生.细胞免疫和体液免疫两种机制参与移植排斥的理论已经成为共识,其中T细胞和B细胞分别作为介导排斥反应的细胞免疫和体液免疫的主要效应成分已经被广泛研究.NK细胞的自然杀伤功能在移植中的重要性随着对其实验研究成熟可行,也逐渐成为一个感兴趣的介导排斥反应物的研究领域,使学者们更加期望借此叮以解释和降低临床急性排斥的发生率.就NK细胞表面受休(immunoglobulin-like receptors)KIR和肾脏移植的研究进展,本文进行简要综述.
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杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因在肝癌细胞免疫杀伤中的作用
目的：探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因在肝癌细胞免疫杀伤中的作用。方法外周血单个核细胞（PBMC）与肝癌细胞HepG2按不同效靶比共孵育，观察不同效靶比共孵育下PBMC中KIR基因家族的表达、γ干扰素（IFN-γ）分泌、肝癌细胞形态学改变及PBMC对肝癌细胞的杀伤情况。杀伤率比较采用单因素方差分析和LSD-t检验。结果与肝癌细胞共孵育12 h后PBMC活化性KIR基因表达开始增加，24 h后下降。抑制性KIR基因共孵育12 h后开始下降。辅助活化基因DAP12一直保持高表达水平。PBMC中IFN-γ的含量随着效靶比的升高而降低，12 h达到高峰。共孵育后不同效靶比组的肝癌细胞均表现为染色质浓缩，细胞核呈半球状或半月形状且边缘化的细胞比例增加，细胞停止旺盛分裂。效靶比1∶1组的相对杀伤率为（8±3）%，10∶1组为（14±4）%，50∶1组为（32±6）%，50∶1组明显高于1∶1组和10∶1组（LSD-t=5.97，4.61；P<0.05）。结论活化性KIR基因在肝癌细胞免疫杀伤中发挥重要作用。
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杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIR2DS4等位基因与疾病相关性的研究进展
杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)主要表达于自然杀伤(NK)细胞及某些 T 细胞表面，可调节 NK 细胞功能。K IR 编码基因具有高度多态性，可组成不同单倍型。其中 KIR2DS4具有多种等位基因，是单倍型 A 携带的唯一活化性KIR 基因，编码功能性 KIR2DS4受体，而当其在第5外显子丢失22 bp 碱基后即成为KIR1D 基因，编码无功能的可溶性受体 KIR1D。由于 KIR2DS4具有独特的基因特征、单倍型和群体分布特征，以及 KIR2DS4受体与配体的关系，使其在 KIR 与疾病相关性研究中尤为重要。笔者拟就近年来KIR2DS4等位基因与疾病相关性的研究进展进行综述。
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自然杀伤细胞表面杀伤免疫球蛋白样受体和CD57分子的表达及其功能
目的:通过研究自然杀伤细胞(natural killer cells,NK)表面表达杀伤免疫球蛋白样受体(killer immunologublin receptor,KIR,包括CD158a,CD158b,CD158e)及CD57分子的NK细胞亚群功能的异同,探讨具有不同功能状态的NK细胞亚群.方法:收集于北京大学血液病研究所行造血干细胞移植的健康供者10例,基于CD107a表达及细胞内因子干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的分泌,采用6色流式细胞学检测技术,检测不同NK细胞亚群NK细胞毒性及胞内细胞因子IFN-γ分泌功能的异同.结果:(1)表达CD57分子的NK细胞亚群占NK细胞的比例明显高于表达KIR分子的NK细胞亚群[(60.71%±5.71%)vs.(24.47%±3.95%),P<0.001)],进一步用KIR分子及CD57分子将NK细胞亚群区分为KIR+CD57-,KIR+CD57+,KIR-CD57+,KIR-CD57-四群NK细胞亚群,KIR-CD57+ (43.03%±5.70%)及KIR-CD57- (32.45%±5.50%)所占比例相近(P=0.189),占NK比例高,其次为KIR+CD57+(17.67%±3.39%)及KIR+CD57-(6.69%±0.95%);(2)进一步功能试验提示:表达CD57分子的NK细胞亚群与表达KIR分子的NK细胞亚群的杀伤活性及细胞因子IFN-γ分泌能力相近,二者差异无统计学意义,但明显低于CD56bri NK细胞(P=0.046,P=0.035),但与CD56dimNK细胞亚群杀伤活性及IFN-γ分泌能力相近;无论从NK亚群杀伤活性还是从NK亚群IFN-γ分泌活性排列,KIR-CD57-细胞高(46.22%±9.24%和23.41%±5.82%),其杀伤活性与细胞因子分泌功能与CD56briNK细胞亚群相近(49.60%±9.26%和30.67%±8.0%),其次依次为KIR+CD57-细胞,KIR-CD57+细胞和KIR+CD57+细胞,后二者功能上差异无统计学意义.结论:CD57分子及KIR受体均与NK细胞功能密切相关,提示KIR-CD57-为早期NK细胞,CD57阳性细胞可能为终末分化NK细胞,而KIR+CD57-细胞为中间型NK细胞.
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异基因造血干细胞移植中异源反应性NK细胞作用机制的研究
异基因造血干细胞移植中天然杀伤细胞(NK)表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)-配体不相合可以产生异源反应性NK细胞,单倍体相合及无关供者造血干细胞移植中KIR不相合有利于改善预后,HLA相合同胞供者造血干细胞移植中活化型及抑制型KIR相互作用,共同影响预后.
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无关供者造血干细胞移植中活化型KIR的作用
目的 探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)在无关供者中的分布及对无关供者造血干细胞移植预后的影响.方法 采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)分型技术检测HLA及KIR基因型.检测了30例无关供者中KIR的基因型分布、30例无关供者造血干细胞移植供受者对KIR及HLA基因型,并对15例接受HLA相合、非去除T细胞无关供者造血干细胞移植(HSCT)的恶性血液病患者病例资料进行回顾性分析.结果 检测的30例HLA相合无关供者造血干细胞移植中,24例患者KIR2DLI不合,2例KIR2DL2/2DL3不合,12例KIR3DL1不合,共计28例患者KIR不合.无关供者造血干细胞移植中,5个活化型KIR阳性组生存时间明显延长.结论 绝大多数无关供者携带与无关供者造血干细胞移植关系密切的三组KIR,无关供者造血干细胞移植中5个活化型KIR阳性组生存时间明显延长.
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妊娠高血压疾病与HLA-G，KIR相关性的分析
目的：检测妊娠高血压疾患者者外周血KIRs水平和胎盘组织HLA-G的表达情况，进一步探讨KIRs在妊娠高血压疾病发病中的免疫机制。方法用20例妊娠高血压疾病和20例正常妊娠产妇（对照组）采用免疫组化技术检测胎盘组织HLA-G阳性率，酶联免疫吸附实验（ELISA)检测外周血血清KIRs水平，对比分析各指标及其与妊娠高血压疾病的关系。结果（1）母体血清KIRs含量与妊娠高血压疾病相关，并且随着妊娠高血压病情的加重母体血清KIRs含量增加；（2）孕妇胎盘组织中的HLA-G表达阳性率及表达强度与妊娠高血压疾病相关，并且妊高症组表达阳性率和表达强度随病情加重而降低；（3）母体血清KIRs含量与胎盘组织中的HLA-G表达阳性率及表达强度相关。结论外周血清KIRs可以反映妊娠高血压综合征病情，胎盘HLA-G的表达降低与妊娠高血压疾病严重程度密切相关。
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吉林地区朝鲜族KIR基因多态性的研究
目的 分析吉林地区朝鲜族人群自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体( KIR)基因的多态性及基因型和单倍型特点,并与吉林地区汉族人群KIR基因多态性进行比较.方法 采用PCR-SSP法检测中华造血干细胞库吉林分库中随机选择的吉林地区160名朝鲜族和214名汉族人的KIR基因,并分析其基因型和单倍型.结果 框架基因KIR3DL2、KIR3DL3、KIR2DL4存在于所有被检测者中,其基因频率均为100％.KIR2DL1、2DL3、3DL1、3DP1 *003、2DP1基因频率较高,而2DL2、2DS2、2DS3、3DP1 *001/002/004基因频率较低.全部样本中共检测出39种基因型和16种单倍型,其中以AJ和AF基因型常见,频率分别为18.1％、19.4％和31.8％、19.6％,以单倍型2常见,频率分别为41.8％(n=127)和51.2％(n=216),两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 吉林地区朝鲜族和汉族人群KIR基因分布具有一些共同特征,但也表现出本民族独特的KIR基因多态性特征.
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完整家系中KIR单体型对父母亲缘供者单倍体造血干细胞移植预后的影响
目的：研究不同杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）单体型对父母亲缘供者单倍体造血干细胞移植（HSCT）预后的影响。方法采用PCR-序列特异性引物（PCR-SSP）法对156例恶性血液病患者及其父母双方共计468例样本进行了KIR基因分型，并分析了供者624份KIR单体型特征，其中92例患者接受了亲缘单体型HSCT。结果共检出21种KIR单体型，1种为A单体型，其余20种为B单体型，72.92%（455/624）的个体存在A单体型，而常见的B单体型为B1、B2和B3，比例分别为10.26%（64/624）、5.77%（36/624）和4.48%（28/624）。在AML/MDS患者中KIR基因型不合组移植后总体生存（OS）和无病生存（RFS）率明显好于KIR基因型相合组（OS率为88.2%对42.9%，P=0.015；RFS率为88.2%对35.7%，P=0.007），而对急性淋巴细胞白血病/非霍奇金淋巴瘤患者的移植无明显影响（OS率为76.0%对75.0%，P=0.727；RFS率为68.0%对65.0%，P=0.866）。在所有移植患者中，当供者KIR基因型为AA或AB1/AB2时，移植后OS和RFS率明显低于供者为其他Bx基因型（OS率为53.3%对96.0%，P=0.017；RFS率为53.3%对92.0%，P=0.019）；供者KIR基因型AA组移植后疾病复发风险高于Bx组（25.0%对5.0%，P=0.009），而AB1/AB2组移植相关死亡率（TRM）高于AA组及其他Bx组（P=0.012）；当供者存在着丝粒端基序（Cen）-A/B时，移植后OS和RFS率好于供者Cen-A/A组（OS率为94.7%对68.5%，P=0.036；RFS率为89.5%对64.4%，P=0.045）。结论在急性髓系白血病/骨髓增生异常综合征患者移植时首选KIR基因型不合的供者，在所有白血病中供者存在Cen-B是移植后生存的有利因素，并尽量排除AA或AB1/AB2型而选择其他Bx基因型供者，将有利于改善亲缘单倍体HSCT移植预后。
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特发性血小板减少性紫癜患者外周血T细胞的杀伤细胞免疫球蛋白样受体表达研究
杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer Ig-like receptors,KIR)是近年发现的细胞表面糖蛋白受体,除表达于NK细胞外还表达于部分T细胞,主要为CD8~+ 细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)~[1].
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NK细胞受体及其抗肿瘤疗法的新思路
NK细胞是重要的淋巴细胞亚群,是机体天然免疫的主要承担者.在肿瘤免疫、抗病毒感染及清除非己细胞中,NK细胞与CTL分别构成了第一道和第二道免疫杀伤防线.NK细胞来源于骨髓,主要存在于血液和淋巴样组织,由于其胞浆中含有大颗粒,故又称大颗粒淋巴细胞(large granular lymphocyte, LCL).
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天然免疫自然杀伤细胞在糖尿病发病及发生发展中的研究进展
糖尿病是全世界许多国家的常见病和多发病,而其发病机制迄今尚未明确.虽然越来越多的证据显示免疫机制在其发病及发展的过程中起着重要作用,但是仍未形成统一的理论.长期以来,天然免疫可能因为其"显而易见性"而没有得到应有的重视.近年的研究表明,天然免疫本身存在精细的病原识别和信号转导机制,是激活适应性免疫的前提和基础.目前已经有大量数据表明自然杀伤(NK)细胞数目及活化状态与糖尿病相关,并且在糖尿病的发生发展中发生了许多特异性的变化.本文就NK细胞数目及其受体与糖尿病关系的研究进展作如下简要概述.
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杀伤细胞免疫球蛋白样受体
NK细胞表面的受体有杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immnoglobulin-like receptor,KIR)、C型凝集素受体和自然细胞毒性受体.KIR属于Ⅰ型跨膜糖蛋白家族成员,表达在NK细胞和少数T细胞的表面.KIR在功能上有抑制型和活化型两种,它们可与靶细胞膜上的MHC-Ⅰ类分子结合传导抑制性或激活性信号,使NK细胞在肿瘤免疫和抗感染免疫等方面发挥重要作用.本文就KIR的结构、功能及其基因做一综述.
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人类白细胞抗原单倍体不合造血干细胞移植后自然杀伤性细胞和T淋巴细胞杀伤抑制性受体表达的研究
目的研究人类白细胞抗原(HLA)单倍体不合的造血干细胞移植后自然杀伤性细胞(NK细胞)和T淋巴细胞杀伤抑制性受体重建的规律.方法2004-04～2004-12对北京大学血液病研究所借助三色和四色荧光标记技术,用流式细胞仪对应用该所GIAC方案(即G:粒细胞集落刺激因子+Ⅰ:强免疫抑制+A:抗胸腺细胞球蛋白+C:外周血与骨髓联合)进行HLA单倍体不合造血干细胞移植的24例患者(移植前、移植后+30、+60、+90、+120、+180 d)及其供者外周血NK细胞及T细胞上杀伤免疫球蛋白类受体(KIR),包括CD158a(KIR2DL1)、CD158b(KIR2DL2)、CD158e(KIR3DL1)和Lecrin样受体(CD94/NKG2A)的表达进行了测定.结果根据移植后NK细胞上受体重建规律不同可以分为两组:第1组在移植后+30 d,与供者表达水平相比,病人受体表达明显升高(CD94,P=0.013;CD94:NKG2A,P＜0.0001;CD158e,P=0.063),随后逐渐下降,至+180 d时重建为供者水平(CD158e、CD94)或仍明显高于供者水平(CD94:NKG2A、P=0.001);第2组在移植后+30 d,与供者表达水平相比,病人受体表达明显降低(CD158a,P=0.016;CD158b,P＜0.003),随后逐渐升高,至正常供者水平.移植后患者外周血T淋巴细胞上杀伤抑制性受体的表达规律与NK细胞第1组相近,在+30和(或)60d时,所有KIR及CD94:NKG2A的表达均明显高于正常供者水平,其后逐渐下降,+180 d时降至正常供者水平(CD158a、CD158a/CD158b及CD158e)或仍明显高于供者水平(CD94/NKG2A,CD158b).结论移植后NK细胞上KIR受体的低表达及CD94:NKG2A的高表达可能是移植后早期NK细胞杀伤功能低下的主要影响因素;而移植后T细胞上KIR及CD94:NKG2A的高表达可能有利于移植后的移植物抗宿主疾病(GVHD)及移植物抗白血病(GVL)效应分离.
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073 HLA-G分子表达调控及其功能研究进展
HLA-G分子是一种非经典HLA-Ⅰ类抗原,相对于经典的Ⅰ类抗原,它的组织分布非常局限,具有有限的多态性.它的表达调控与经典Ⅰ类抗原存在着很大的差异,HLA-G基因内经典Ⅰ类基因反式活化的3个主要元件增强子A、ISRE和SXY均发生变异,导致NF-κB、IRF1、CⅡTA介导的反式激活途径对HLA-G基因不能发挥作用.早在母胎界面发现存在HLA-G分子表达,它可以与NK细胞和CTL表面相应的杀伤细胞抑制性受体(KIR)结合,从而抑制它们的杀伤作用,这可能是母胎耐受的重要机制.近来的研究表明HLA-G分子还可表达于少数类型肿瘤细胞、一些受到感染的细胞和一些正常细胞.它的表达调控及其可能的功能是近来的研究热点.
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032 KIR研究进展
NK细胞能够识别"自己"和"非已"的特性,主要通过其表面的激活性受体和抑制性受体来执行.杀伤细胞免疫球蛋白样受体是表达在NK细胞和部分T细胞的表面的一类受体,本文拟从KIR的基因结构、多态性、KIR与MHCⅠ类分子的相互作用、胞内信号传导及其功能等方面作一综述.
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HLA/KIR基因系统与HCV感染的相关性研究进展
丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染导致的世界范围的感染性疾病,我国是高流行地区.多项研究表明:人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)以及其特异配体-杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptors,KIR)类型与HCV感染结局相关.HLA、KIR各自的多态性使得受体KIR与配体HLA的结合更为复杂化,二者结合的强弱以及KIR抑制性和激活性受体之间的平衡关系,直接影响了机体对HCV感染的免疫能力.该文将从HLA/KIR基因系统与HCV易感性,HLA/KIR基因系统与HCV自体清除的相关性以及它们在HCV感染进程中的作用三个方面来进行综述.
