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冷冻消融治疗对胰腺癌患者细胞免疫功能影响的观察
目的:探讨胰腺癌患者冷冻消融治疗前后外周血T细胞亚群和NK细胞及TNF-α水平的变化及临床意义.方法:采用流式细胞术和ELISA法分别测定37例胰腺癌患者冷冻前后外周血T细胞亚群CD3、CD4、CD8和NK细胞及TNF-α有水平,并与健康对照组比较.结果:与对照组相比,患者术前的CD3、CD4、CD4/CD8及NK水平均明显降低,P＜0.05,TNF-a水平明显升高,P＜0.05;术后10 d CD3和CD4及TNF-α水平均无明显变化,P＞0.05,而CD4/CD8和NK水平均明显下降,P＜0.05；术后30 d所有指标的水平与对照组比较均差异无统计学意义,P＞0.05.与术前比较,患者术后10 d所有指标的水平差异均无统计学意义,P＞0.05；而术后30dCD4和NK水平均明显升高,P＜0.05,TNF-α水平显著下降,P＜0.05.患者性别与所有指标的水平均无关(P＞0.05),临床分期及肝转移与CD4、CD4/CD8、NK及TNF-α水平均相关,P＜0.05.结论:冷冻消融治疗可增强胰腺癌患者的细胞免疫功能,检测外周血CD4、CD4/CD8和NK及TNF-α水平的变化,有利于胰腺癌患者的疗效和预后评估.
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氧化苦参碱对荷瘤小鼠免疫功能的影响
目的研究氧化苦参碱(OMT)的抑瘤作用和免疫功能变化的关系.方法应用HEP-A-22肝癌小鼠模型进行免疫指标比较.结果显示OMT在近期内(15天)对荷瘤小鼠有明显抑瘤作用.结论氧化苦参碱可明显提高荷瘤小鼠免疫功能,并产生抑瘤效应.
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肺癌患者调节性T细胞与NK细胞活化受体NKG2D的相关性及其临床意义
目的 分析肺癌患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞及自然杀伤细胞(NK细胞)活化受体NKG2D的表达水平之间的关系,探讨其在肿瘤免疫逃逸机制中的作用及临床意义.方法 选择70例肺癌患者,均经病理确诊.采用流式细胞术(FCM)检测患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞、NK细胞及NKG2D表达水平,并以50名健康人为对照.结果 肺癌患者外周血中CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞比例较健康对照组明显升高[(8.4±4.1)％与(6.7±1.7)％],差异有统计学意义(t=3.09,P＜0.05)；肺癌组NK细胞比例与健康对照组比较[(15.6±8.3)％与(17.2±4.2)％],差异无统计学意义(t=-1.33,P＞0.05)；肺癌组NKG2D较健康对照组明显降低[(83.3±4.9)％与(87.4±2.9)％],差异有统计学意义(t=3.16,P＜ 0.05).CD+4 CDHi25 CDLo127调节性T细胞与NKG2D呈负相关性(r=-0.302,P＜0.05).结论 在肺癌患者外周血中调节性T细胞可能通过下调NKG2D,参与肿瘤免疫逃逸机制,二者可作为评估肺癌患者免疫功能状态及预后的参考指标.
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男子举重运动员大负荷力量训练期间淋巴细胞亚群的变化分析
目的:探讨T、B淋巴细胞激活态(HLA-DR+)、NK细胞总数(CD56+)及其激活态(CD16+)、单核细胞(CD14+)在男子举重运动员大负荷力量训练期间的变化规律及其免疫机能监控意义.方法:25名男子举重运动员按规定负荷完成连续5周大负荷力量训练,训练结构为2个大负荷循环中间间隔1个调整周.第1个大负荷循环由第1、2周构成,第3周为调整周,第2个大负荷循环由第4、5周构成,其中第4周冲击大负荷.于训练前及每周训练结束后测定运动员基础状态下血清CK、BUN以及外周血HLA-DR+、CD56+、CD16+、CD14+.结果:训练期间CK、BUN均显著升高,其中前期以CK升高为主,后期CK和BUN均显著升高.HLA-DR+在训练前期有所增加,后期显著下降.训练期间CD56+、CD16+总体上均显著增加;在训练负荷大的第4周,CD56+呈下降趋势(P=0.06),而同时CD16+呈增加趋势,CD16+/CD56+呈较明显增加趋势.大负荷训练期间CD14+显著增加,并与训练负荷增加一致.结论:大负荷力量训练可导致HLA-DR+及CD56+下降,HLA-DR+和CD56+在运动员免疫机能评定中具有一定的意义;大负荷训练导致CD14+增加,CD14+在运动员炎症反应程度及单核/巨噬系统功能的评定中具有一定的意义.
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中药启膈散免疫调节作用的体外实验研究
目的:探讨启膈散抗肿瘤作用的机制,为启膈散治疗肿瘤提供客观依据.方法:将实验细胞分为启膈散组、刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组和空白对照组,ConA组及LPS组分别给予ConA、LPS 5μg/ml,空白对照组不给药,采用MTT法观察50.00、25.00、12.50、6.25、3.13、1.63、0.78 mg/ml启膈散水提取物对小鼠脾细胞体外增殖的促进作用,50.00、5.00、0.50 mg/ml时对小鼠脾细胞分泌IL-2的影响;50.00、5.00、0.50 mg/ml时对小鼠单核细胞分泌TNF-α的影响;50.00、5.00、0.50 mg/al时对NK细胞肿瘤细胞杀伤活性的影响.结果:启膈散显著刺激小鼠脾细胞增殖,且存在明显的量效关系:能显著提高小鼠脾细胞分泌IL-2的活性;促进小鼠单核细胞分泌TNF-α作用显著;可提高NK细胞对靶细胞的杀伤率.结论:启膈散的抗肿瘤活性可能与其免疫调节功能有关.
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桔梗根的水提取物对肿瘤侵润和转移的抑制作用
目的 通过研究桔梗根水提取物对肿瘤细胞的影响机制,探讨对肿瘤侵润和转移的抑制作用.方法 应用经改良的在Transwell细胞培养真空箱中进行的肿瘤细胞体外侵润分析法和实验性肺转移体内测定与自然杀伤细胞活性试验,进行统计学分析. 结果 桔梗根水提取物所含CK对侵润重建基底膜(基质胶)的B16-F10细胞有抑制作用.CK抑制B16-F10细胞侵润基质胶/纤维结合蛋白-包埋过滤膜的作用呈现浓度依赖方式.结论 CK在肿瘤细胞侵润方面的作用具有高侵润和转移能力,为改善肿瘤侵润和寻找转移治疗方法 提供了参考.
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NK细胞受体及其抗肿瘤疗法的新思路
NK细胞是重要的淋巴细胞亚群,是机体天然免疫的主要承担者.在肿瘤免疫、抗病毒感染及清除非己细胞中,NK细胞与CTL分别构成了第一道和第二道免疫杀伤防线.NK细胞来源于骨髓,主要存在于血液和淋巴样组织,由于其胞浆中含有大颗粒,故又称大颗粒淋巴细胞(large granular lymphocyte, LCL).
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子宫颈癌发生发展中HLA基因易感及NK细胞受体免疫应答的作用
目的：探究子宫颈癌发生发展中HLA基因易感及NK细胞受体免疫应答的作用。方法：本研究选取2013年1月至2014年1月于我院诊治，并经病理活检证实为子宫颈癌的患者200例作为观察组，同时，随机选取200例健康妇女为对照组。两组均在入院时取外周血2 ml，采集观察组的宫颈细胞样品用来进行细胞学观察和HPV的DNA探查，观察两组人员HPV感染率和HLA分型。结果：两组入组人员HPV感染阳性率分别为91％、16％，两组比较，差异具有统计学意义（ P＜0.05）。观察组患者HLA-KIR*1003、HLA-KIR*14、HLA-KIR*17、HLA-KIR*02、HLA-KIR*12的分布频率分别为41％、39％、35％、15％、53％，对照组分别为18％、15％、14％、52％、89％，两组比较差异均具有统计学意义（ P＜0.05），其中观察组患者HLA-KIR*1003、HLA-KIR*14、HLA-KIR*17分布频率明显高于对照组，HLA-KIR*02、HLA-KIR*12的分布频率明显低于对照组。结论：在子宫颈癌发生发展的过程中，存在HLA-KIR*1003、HLA-KIR*14、HLA-KIR*17等位基因易感，而HLA-KIR*02、HLA-KIR*12等位基因可减少宫颈癌的发生。
关键词： 子宫颈癌 人类白细胞抗原( HLA) NK 免疫应答 -
MicroRNA-150通过降低CD122的表达调控NK及NKT细胞的分化
目的：探讨microRNA-150缺失对调节性T细胞（ Treg）、γδT细胞、NK及NKT细胞产生、发育和自稳的影响。方法：采用microRNA-150基因敲除小鼠；Real-time PCR检测microRNA-150的表达；流式细胞术检测小鼠胸腺和脾脏Treg、γδT细胞、NK及NKT细胞数量变化；采用Annexin V染色法检测细胞凋亡；5-溴脱氧尿嘧啶核苷（Brdu）掺入法检测细胞增殖。结果：microRNA-150缺失对小鼠Treg 和γδT细胞的产生和发育不发挥明显作用，但导致NK和胸腺NKT细胞数量显著降低，而且，microRNA-150缺失导致小鼠NK及NKT细胞中CD122的表达显著降低，细胞发育受阻，凋亡增加，同时NK细胞的增殖能力也显著降低。结论：microRNA-150调控小鼠NK和NKT细胞的发育和自稳，CD122可能在以上调控过程中发挥重要作用。
关键词： MicroRNA-150 CD122 NK NKT细胞 -
IL-12及IL-12P40对NK抗肿瘤功能的免疫调节
目的通过对正常人及肿瘤患者血清中IL-12以及IL-12P40含量的检测,观察其分子对NK细胞抗肿瘤细胞细胞毒效应的影响,探讨IL-12、IL-12P40分子在NK细胞抗肿瘤功能上的免疫调节作用.方法ELISA酶联免疫法检测IL-12、IL-12P40分泌水平以及MTT释放法检测NK细胞毒活性.结果①肿瘤患者外周血PBMC中CD3+、CD56+细胞阳性率低于对照组(P＜0.05).②肿瘤患者NK细胞对NK敏感细胞K562以及NK不敏感细胞Raji和Ddaudi的杀伤活性均低于正常对照组(P＜0.05).③正常人外周血NK细胞经含肿瘤患者血清培养后,NK细胞杀伤活性明显下降(P＜0.05).④在肿瘤患者血清中,IL-12分泌水平为143.31±0.93pg/ml,高于对照组84.97±3.7pg/ml(P＜0.05);IL-12P40含量为224.90±0.7pg/ml,高于对照组32.56±0.7pg/ml(P＜0.05).⑤正常人NK细胞经不同浓度(1μg/ml、5μg/ml以及10μg/ml)IL-12诱导后,在5μg/ml、10μ/ml浓度NK细胞杀伤率均高于对照组;在肿瘤患者中,仅高剂量(10g/ml)IL-12组的杀伤率高于对照组.⑥这种诱导增高的NK细胞杀伤率可被外源性IL-12P40的加入而下调.结论肿瘤患者血清中IL-12P40含量的增高可能与肿瘤密切相关的NK细胞功能下降有关.
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mIL-21基因治疗小鼠肿瘤及其机制的初步研究
建立小鼠Sp2/0皮下肿瘤模型,以我们构建并鉴定过的真核表达质粒pcDNA3.1/mIL-21在瘤体内直接注射,考察mIL-21基因治疗对小鼠Sp2/0肿瘤的疗效.结果显示pcDNA3.1/mIL-21质粒治疗对小鼠皮下Sp2/0肿瘤有一定的生长抑制作用,CTL和NK细胞毒活性明显增强,IFN-γ分泌升高显著,但抗体无明显升高.表明mIL-21基因治疗的抗肿瘤效应,可能和细胞免疫功能增强有关.
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肺癌组织中NK、CTL、TIDC的浸润与预后的关系
目的 探讨自然杀伤细胞(NK)、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)及肿瘤浸润树突状细胞(TIDC)在肺癌组织中的浸润程度及对患者生存与预后的影响.方法 将CD56作为NK的标记物、CD8作为CTL的标记物和S-100作为TIDC的标记物,应用免疫组化法检测肿瘤组织中NK、CTL及TIDC细胞的分布和浸润情况.结果 100例肺癌中,NK无~轻度浸润的有68例,5年生存率为31%,明显浸润的32例,5年生存率为43%;CTL无~轻度浸润的有59例,5年生存率为29%,明显浸润的41例,5年生存率为40%;TIDC无~轻度浸润的有61例,5年生存率为24%;TIDC明显浸润的有39例,5年生存率为44%;NK、CTL及TIDC同时明显浸润的有17例,5年生存率为58%,无~轻度浸润的28例,5年生存率为29%,经Log-rank检验,NK、CTL及TIDC明显浸润组和无~轻度浸润组两者的5年生存率之间差异有显著性(P=0.00).结论 肺癌组织中NK、CTL及TIDC明显浸润组的预后和生存时间明显好于轻度浸润组,其机制与机体细胞免疫有关.
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耐多药肺结核患者外周血中淋巴细胞比例变化分析
目的 探讨耐多药(MDR)肺结核患者外周血中淋巴细胞亚群的表达及其临床意义.方法 采取92例健康体检者(HC)、96例非耐药初治肺结核(DS-TB)患者及38例耐多药结核病(MDR-TB)患者2 mL EDTA抗凝外周静脉血,经抗体标记后,采用FACSCalibur流式细胞仪检测淋巴细胞亚群,对三组数据进行对比分析.结果 DS肺结核组、MDR肺结核组及对照组之间的CD+4T淋巴细胞和B淋巴细胞的表达率比较,差异无统计学意义(P>0.05).CD+3T淋巴细胞的表达在MDR肺结核组中出现了下降(P<0.05),而DS肺结核组没有变化.CD+8T淋巴细胞的表达在DS肺结核组中要显著高于健康组和MDR肺结核组(P<0.05),健康组和MDR肺结核之间没有差异(P>0.05).DS肺结核组和MDR肺结核组中CD+4CD25H/CD3调节性T细胞的表达都明显高于健康对照组(P<0.001),差异具有统计学意义.但是DS肺结核组和MDR肺结核组之间的表达没有差异(P>0.05).NK细胞的表达在DS肺结核组中要显著低于健康组和MDR肺结核(P<0.05),健康组和MDR肺结核之间没有差异(P>0.05).单核细胞的表达水平分析发现,DS肺结核组和MDR肺结核组的表达显著高于健康组(P<0.001),而DS肺结核组和MDR肺结核组之间的表达没有差异(P>0.05).结论 机体在感染了结核杆菌后,体内的天然免疫应答和特异性免疫应答功能会发生改变.本研究发现DS肺结核组和MDR肺结核组之间的免疫功能存在一些差异.了解DS肺结核组和MDR肺结核组之间的免疫功能差异,能够为我们阐明其相关的免疫发病机制,从而为进行免疫干预,以及结核病的治疗提供重要的理论依据.
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HLA-E siRNA沉默肝癌细胞HLA-E基因的表达
目的 针对HLA-E mRNA靶序列不同位点,设计合成多个siRNA链,定量分析其对HLA-E(+)肝癌BEL-7402细胞的基因沉默效率,筛选佳抑制效果的siRNA.方法 用IFN-γ(5×10~5 IU·L~(-1))诱导BEL-7402细胞表达HLA-E基因,经流式细胞技术纯化后作为靶细胞.设计并合成3条HLA-E siRNA链(A、B、C),将各siRNA(0.1 mmol·L~(-1))经脂质体Lipofectamin 2000转染至靶细胞.采用细胞免疫荧光、流式细胞技术、Western杂交、实时PCR等定量方法,比较48h后各 siRNA的基因沉默效果,并观察HLA-E基因沉默对NK肿瘤细胞杀伤的影响.结果 与空白对照、非特异组相比,3组(A、B、C组) HLA-E siRNA均明显抑制细胞HLA-E抗原、蛋白产物、mRNA、细胞表面HLA-E分子的表达(P<0.01),B、C组抑制效果接近90%,高于A组(P<0.01).A、B、C组NK肿瘤杀伤率升高(P<0.01),而B、C组肿瘤杀伤效果高于A组(P<0.01).结论 经筛选的HLA-E siRNA能特异、高效沉默肝癌细胞HLA-E基因表达,可能抑制其非经典HLA-Ⅰ途径免疫逃避,为肝癌"基因-免疫"治疗提供新的治疗策略.
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原发性肝癌辨证分型与免疫指标相关性的研究
我们已对原发性肝癌(PLC)辨证分型及病机传变规律作过报道,其对临床诊疗的指导意义不言而喻,但既往的研究仅对临床医学“望、闻、问、切”及“望、触、叩、听”的表述延续和在此基础上的统计分析,尚缺乏客观性指标佐证.基于恶性肿瘤是免疫抑制或缺陷性疾病,故我们对PLC的免疫功能进行测定,以揭示其与辨证分型的相关性及病机传变规律的内在实质.
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石斛合剂对衰老大鼠的丙二醛、超氧化物歧化酶、过氧化脂质及免疫功能的影响研究
目的:观察石斛合剂对衰老大鼠的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化脂质(LPO)及免疫功能的影响.方法:采用D-半乳糖腹腔注射制备衰老大鼠模型,随机分为5组,正常对照组、衰老模型对照组和衰老模型石斛合剂治疗组(该组分为3组,荆量分别为0.06 g· kg-1、0.2g· kg-1、0.6 g· kg-1)进行对比研究.结果:与正常组及其相应的对照组比较,石斛合剂能降低衰老大鼠的MDA浓度,提高SOD活性,降低LPO活性,增加外周白细胞数和促进T淋巴细胞增殖和提高自然杀伤细胞(NK)活性(P＜0.05).结论:石斛合剂具有一定的抗衰老和增强免疫功能的作用.
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不同条件下NK细胞在小鼠黑色素瘤内的浸润
目的 比较DC及IL-2,IL-15维持NK细胞体内活性的作用效果. 方法 DAPI标记的NK细胞输入负瘤小鼠体内,同时分别给予DC、IL-2及IL-15,不同时间取肿瘤组织,荧光显微镜及电镜观察;MTT法测NK杀伤活性. 结果 DC可增强NK杀伤活性,NK/DC为1:1时NK细胞杀伤活性强于NK/DC为10:1时(P＜0.05).肿瘤组织内NK分布呈时间及剂量相关性,DC组NK浸润数量多于IL-2组及IL-15组,但无明显差异(P＞0.05).结论 24小时内DC可维持并促进NK细胞活性,无需依赖外源性细胞因子.NK与DC的相互作用与剂量相关.
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病心胶囊对实验性柯萨奇B3病毒性心肌炎NK细胞活性和干扰素效价的影响
目的:探讨病心胶囊对柯萨奇B3病毒性心肌炎小鼠NK细胞活性和干扰素效价的影响.方法:复制柯萨奇B3小鼠病毒性心肌炎模型,以黄芪注射液为对照,监测各组小鼠NK细胞活性和干扰素效价的变化.结果:病理对照组小鼠脾脏NK细胞活性较正常对照组第7天下降51.3%,第14天下降38.1%,第21天下降37.5%(P均＜0.01),在不同时间段,3种浓度的病心胶囊及黄芪注射液均使下降的NK细胞活性升高(P＜0.05).病毒具有诱生干扰素的能力,第7,14天,病理对照组小鼠干扰素效价明显高于正常对照组(P＜0.01),第21天此作用不明显.在不同时间段3种浓度的病心胶囊及黄芪注射液均能增强诱生干扰素的能力(P＜0.05).结论:本研究结果显示病毒性心肌炎小鼠免疫功能失控,包括脾NK细胞活性的下降,干扰素(IFN)效价的低下,3种浓度的病心胶囊均能不同程度地拮抗这种免疫失控的状态,使之恢复于正常水平,对照药物黄芪注射液也有上述作用.
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252例SARS患者T淋巴细胞亚群动态改变与病情变化的相关性分析
目的研究SARS患者T淋巴细胞亚群的动态变化规律,探索SARS特异性早期诊断的指标,寻找SARS的病情发展的预警指标,为研究SARS发病机制提供依据.方法收集我院SARS确诊病人252例患者的抗凝血,用特异性荧光抗体标记,通过FACS流式细胞仪检测CD4, CD3, CD8, NK, CD4/CD8.每3～5d复查1次;比较不同病情及病程不同阶段时,上述指标的变化及相关关系.结果所有的SARS患者在病程的第1,2周,均有CD4, CD3, CD8,下降,在第2周时降至低,尤其以CD4下降明显,在第3周开始回升.重型患者CD4, CD3, CD8的变化规律与轻型相同,但下降程度更严重,持续时间更长.CD4+淋巴细胞计数在轻型患者病程第一周为515±444/μl,第二周421±350/μl,第3周为600±389/μl,各周间差异均有显著性(P＜0.05),第4周为773±456/μl,恢复至正常水平.在重型患者的病程第一周为312±158/μl,第二周255±187/μl,(P＞0.05),在第三周回升为435±343/μl,第4周539±394/μl,仍未恢复至正常.NK细胞在发病期间亦有所下降,但其水平波动不大.CD4/CD8在整个发病过程中变化不大,基本在正常水平.结论 CD4,CD3,CD8等淋巴细胞亚群减少是早期诊断的敏感指标,也是病情加重的预警指标.
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NK细胞与人类获得性免疫缺陷病毒感染关系的研究进展
HIV感染已成为全世界严重的公共卫生问题,并日益得到人们的关注.近年来,人们发现HIV感染及其疾病进展与机体细胞免疫功能有关,尤其是在天然免疫中占重要组成部分的自然杀伤细胞.了解自然杀伤细胞在HIV感染中发挥的作用,为更好地了解HIV感染机制奠定了基础.本文就NK细胞的生物学功能以及其在HIV感染中的作用上作一简要综述.
