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标记免疫分析技术进展
1959年Berson和Yalow报道放射免疫分析测定血浆胰岛素,由此开创了放射免疫分析(RIA)技术检测微量物质的新纪元,四十余年RIA已成为成熟的技术,在临床检测和科学研究中产生重要影响.我国自二十世纪六十年代起的三十余年,经历了几个发展阶段取得了瞩目的进展和广泛应用.近十余年,应用相关的放射免疫原理,以非同位素物质替代放射性核素标记抗原或抗体,相继出现了一些新的非同位素标记免疫分析技术如酶、化学发光、酶放大和荧光免疫分析等技术,与放射免疫分析技术一起统称为标记免疫分析技术.现就标记免疫分析技术的现状和发展作如下综述.
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弱阳离子磁珠联合MALDI-TOF MS技术检测肾盂尿路上皮癌血清差异蛋白
肾盂尿路上皮癌术前诊断困难,需要与肾盂里的凝血块和息肉等进行鉴别,而尿找瘤细胞等确诊阳性率较低[1].本研究利用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱技术(ma-trix assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)比较肾盂尿路上皮癌组和对照组的血清样本,寻找对于肾盂尿路上皮癌具有鉴别意义的血清差异蛋白峰,弥补尿找瘤细胞阳性率不高的缺点,提高肾盂尿路上皮癌的术前诊断率.
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人乳头瘤病毒的环介导等温扩增检测法
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是引起尖锐湿疣甚至癌变的病原体.PCR技术检测病毒DNA序列具有特异、敏感等特点,但对仪器设备及检测人员技术要求较高,不适合于基层医疗单位临床实验室的常规诊断方法.环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术针对靶基因6个区域设计4条特异引物,利用链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)在恒温条件下完成扩增,扩增效果可用凝胶电泳、比浊、染色等多种方法检测,具有反应时间短、肉眼可判断结果和不需要PCR仪等优点.国内外利用LAMP技术检测HPV的方法研究偶有报道[1-2],但针对HPV-6和HPV-11成功的方法研究未见文献报道.
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应用组织芯片技术检测抗体特异性和敏感性
免疫组织化学技术是病理诊断的重要辅助手段,正确选择抗体是有效实施这一技术的关键.只有充分掌握抗体的特异性和敏感性才能达到正确选择抗体的目的.通常这些只能来自产品说明书中有限的描述.我们将组织芯片技术应用于抗体特性的检测中,不仅克服了常规切片染色操作繁琐、耗费试剂、检测条件很难一致的困难,而且提高了检测的效率和准确性.现以CK20为例,介绍如下.
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运用微波原位杂交技术检测常规标本组织的基因表达
核酸原位杂交技术已广泛应用于组织和细胞的基因表达、定位及定量分析,以及病毒基因组表达的检测.但常规的原位杂交技术涉及多步骤处理,检测周期长,且石蜡包埋标本显示信号较弱.为了提高常规外检组织基因表达,缩短杂交时间,本文应用微波处理技术进行探索,取得了良好效果.
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由脑膜炎双球菌W135型引起的病例
以下几个国家在2001年向世界卫生组织(WHO)报告了由W135型脑膜炎双球菌引起的病例.大部分病例与跨国旅游或与到沙特阿拉伯的旅行者接触有关.布基纳法索:美国疾病控制与预防中心(CDC)通过实验室检验确诊了4例由脑膜炎双球菌W135型引起的病例,但目前还不清楚患者的旅行/接触史.法国巴斯德公司和预防医学联合会(AMP)的合作对脑膜炎的发病情况进行了流行病学调查,又由实验室确诊了10例由脑膜炎双球菌W135型引起的病例.标本来自2001年4月10~24日登记的病例.在所搜集的标本中,通过聚合酶链式(PCR)反应检测发现,W135型占有脑膜炎双球菌的37%.无病例与2001年的麦加朝圣有关(旅游或密切接触史).在同期培养出的4种菌株中,有3种是属于ET-37的W135、2a、P1-2、5.尼日尔:法国巴斯德公司和AMP的合作对脑膜炎的发病情况进行了流行病学调查,并经实验室确诊了10例由脑膜炎双球菌W135型引起的病例.标本来自2001年4月10~16日登记的病例.在所搜集的标本中,通过PCR技术检测发现,W135型占所有脑膜炎双球菌的40%.无病例与2001年的麦加朝圣有关(旅游或密切接触史).中非:报告了3例与麦加朝圣有关的病例,经实验室证实为脑膜炎双球菌W135型引起的.丹麦:报告了2例脑膜炎病例,其中1例与麦加朝圣者有密切接触,另1例的旅行史/接触史不清楚.实验室证实致病菌为脑膜炎双球菌W135型.法国:报告了6例与麦加朝圣者有密切接触的病例,实验室证实为脑膜炎双球菌W135型.挪威:报告了4例,其中2例与麦加朝圣者有接触,实验室证实为脑膜炎双球菌W135型引起的.沙特阿拉伯:2月9日~3月22日报告了109例脑膜炎病例,主要为沙特阿拉伯以外的朝圣者,包括35例死亡病例,实验室证实一半以上是由脑膜炎双球菌W135型引起的.新加坡:报告了4例脑膜炎病例,3例与麦加朝圣者有接触,1例曾到沙特阿拉伯旅游,其中1人死亡.2例发生在2001年1月,在到沙特阿拉伯朝圣开始之前.实验室证实为脑膜炎双球菌W135型引起的.英国:报告了41例脑膜炎病例,8例为朝圣归来者,死亡11人.已经实验室证实为脑膜炎双球菌W135型引起的.[WHO.Meningococcal disease,serogroup W135(update).WER,2001,76(28):213-214.刘纳摘译,訾维廉校]
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用双重式聚合酶链反应技术检测鼠疫菌的实验研究
近几年来,随着分子生物技术的迅猛发展,国内外学者对聚合酶链反应(PCR)用于鼠疫的检测十分关注.Hinnebusch等[1](1993)用Pla基因序列,以特异性片段为引物,建立了检测印鼠客蚤体内鼠疫菌的PCR方法.Hiroko氏等[2](1996)用多引物PCR,对鼠疫菌检测进行研究.本文采用双引物PCR法对云南自50年代起至今从现场不同来源的部分菌株进行了实验,建立起适于当前鼠疫快速诊断之方法.
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特异性等位基因PCR扩增技术检测家蝇击倒抗性相关钠通道的基因突变
城市家蝇(Musca domestica)的化学防制多以混配或复配拟除虫菊酯类杀虫剂为主,近10年来国内各城市均有家蝇对拟除虫菊酯产生抗药性的报道[1-5].昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性主要是击倒抗性(knockdown resistance,kdr),Farnham发现kdr在家蝇对拟除虫菊酯的抗性中具有重要作用.拟除虫菊酯的作用靶标主要是昆虫神经细胞膜上的钠离子通道[6,7],通过比较敏感、抗性及高抗性家蝇的部分及全部钠通道基因序列,发现para型钠通道Vssc1基因的L1014F(亮氨酸到苯丙氨酸)即CTT→TTT的突变和击倒抗性相关[8-10].
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靶向性磁共振造影剂在肿瘤分子影像学中的应用
分子影像学即应用影像学的方法直接或间接地监测和记录一些与生物化学、生物学、诊断学和治疗学相关的分子或细胞的分布与变化情况的科学.利用分子影像技术检测细胞表面受体的上调水平,能有效地监测疾病的进展并进行分期[1].在分子影像学的初阶段,常用具有放射性的抗体和短肽等分子探针,采用核医学成像技术如单光子发射计算机断层摄影术(SPECT)、正电子发射断层摄影术(PET)等进行成像.而MR分子成像技术具有分辨力高、可获得三维解剖结构和生理信息等优点,这些也正是核医学和光学成像技术的缺点.但MR的敏感性较低,常需要借助信号扩增系统提高其敏感性.
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聚合酶链反应技术检测非霍奇金淋巴瘤抗原受体基因重排的局限性
病理形态学和免疫组织化学有效标记,结合分子病理学的检测是当前临床病理诊断的发展趋势.近年来这种三结合的诊断模式已在淋巴瘤的病理诊断中得到应用.各类淋巴瘤的病理形态学特征是病理诊断的基石,免疫组织化学有助于正确的诊断及分类,仅靠这二者,恶性淋巴瘤的误诊率仍较高,采用分子病理学技术检测病理标本中淋巴瘤特征性的分子标记具有重要的参考价值.其中运用聚合酶链反应(PCR)技术检测IgH/TCR基因的重排是目前常用的淋巴瘤的分子病理学的方法之一.当检测的结果为单克隆时,一般认为是肿瘤性增生;结果为多克隆时则提示反应性增生.近年来随着研究的深入及资料积累的日益增多,这一分子病理学诊断方法在临床病理上的应用出现了一系列亟待解决的问题,如检测结果的假阳性和假阴性,以及双重重排和寡克隆的现象常有报道.深入探讨这方面的问题有助于将分子病理学方法在淋巴瘤临床病理诊断中广泛开展,并提高分子病理诊断检测的可信度.
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胃癌中Her-2/neu过表达与基因扩增及其意义
Her-2/neu基因编码的相对分子质量185 000的蛋白质(P185)能加速细胞运动,促进癌细胞转移.已证实有Her-2/neu基因扩增的乳腺癌患者(约占乳腺癌患者25%)手术后易复发,生存期短并对常用的化疗药物如环磷酰胺、5-氟尿嘧啶等不敏感[1,2].本项研究的目的是通过双色荧光原位杂交(dual color fluorescence in situ hybridization,FISH)技术和免疫组织化学技术检测各类型胃癌细胞中Her-2/neu基因数量及蛋白表达并探讨其临床意义.
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原位杂交检测腋淋巴结阴性的乳腺癌组织nm23 mRNA表达及其意义
我们应用Digoxigenin(DIG)标记非放射性原位杂交技术检测nm23 在96例腋淋巴结阴性(ANN)及48例腋淋巴结阳性(ANP)乳腺癌中的表达并分析其意义.
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碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达与微血管密度和胃癌的发展及预后
我们应用原位分子杂交和免疫组织化学技术检测人胃癌组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达和微血管密度(MVD),分析bFGF与MVD及其与胃癌各临床病理指标和预后的关系.
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细胞周期蛋白依赖性激酶CDC2在不同级别胶质瘤和瘤细胞系中的表达
细胞周期蛋白依赖性激酶CDC2属于ser/thr蛋白激酶家族,在细胞周期G2至M期起关卡作用,无论是细胞进入还是走出增殖周期都与它的表达有关.文献报道,CDC2过度表达可使细胞周期进程紊乱,导致许多组织形成肿瘤.我们应用组织芯片和免疫组织化学技术检测了CDC2在人脑胶质瘤组织及其相关起源细胞中的表达,以探讨CDC2的表达与胶质瘤发生、发展的关系.
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应用多重逆转录聚合酶链反应技术检测石蜡包埋三种软组织肉瘤中融合基因的表达
目前,用于软组织肉瘤(soft tissue sarcoma,STS)染色体易位或其融合基因检测的技术方法很多[1],以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法为常用[2,3].然而对于一些形态学缺乏特征性排列结构的小圆细胞肿瘤,运用RT-PCR技术对不同融合基因逐一检测和排除,也存在检测程序繁琐、耗时、耗材等不足.针对此问题,我们设计了多重引物,应用多重RT-PCR技术检测石蜡包埋STS融合基因的表达,建立一套稳定高效、适合临床常规STS融合基因表达检测的分子诊断方法.
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HER2-CdTe/ZnSe核壳量子点荧光探针的制备及其识别性能
近年来量子点(QDs)荧光免疫组织化学(QDs-IHC)技术引起了人们的关注[1-5].有学者利用QDs-IHC技术检测乳腺癌组织中的HER2状态,发现其检测灵敏度高于免疫组织化学,尤其能准确判断2+的样本,这对乳腺癌患者的治疗非常有意义[6-7].QDs是一种由Ⅱ~Ⅵ族或Ⅲ~Ⅴ族元素组成的大小在1~100 nm之间稳定的微小晶粒,其电子和空穴被量子限域,连续能带变成具有分子特性的分立能级结构,受激后可发射荧光[8].
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cDNA微阵列技术检测子宫体恶性肿瘤组织中基因的表达变化
子宫内膜癌被分为子宫内膜样腺癌、浆液性乳头状腺癌、黏液腺癌、透明细胞癌,但各种类型在病理形态上相互重叠;同时,病理分型相同的肿瘤患者其对治疗的反应和预后各不相同[1].
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丁型肝炎病毒感染树肝组织中Fas和ICE表达的初步研究
我们采用免疫组化技术检测感染丁型肝炎病毒(HDV)树肝组织中HDAg、Fas和ICE表达,并应用免疫组化双重染色分析病毒抗原、Fas和ICE表达之间的关系。1 材料和方法1.1 标本来源 30份感染HDV
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干扰素序贯或联合拉米夫定治疗慢性乙型肝炎疗效的基因诊断指标
我们采用PCR-微流芯片技术检测HBV基因型、HBVYMDD、HBV DNA含量来判断抗病毒的疗效,报道如下.
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首发精神分裂症患者血液中HERV pol基因的检测
为了检测首发精神分裂症患者体内,人内源性逆转录病毒(HERV)的激活状况,分析比较HERV pol基因阳性和阴性首发精神分裂症患者的临床表现,我们用RT-PCR技术检测首发精神分裂症患者血液中HERV pol基因序列的表达状况.