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PCR技术检测异常妊娠妇女的单纯疱疹病毒
近年来,单纯疱疹病毒(HSV)引起的生殖道感染有明显的升高,孕妇感染HSV后,可引起流产、死产等异常妊娠[1,2].我们采用PCR技术检测了48例流产病人的生殖道分泌物及胚胎组织标本的HSV-DNA,现将结果报告如下:
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应用荧光原位杂交技术检测小标记染色体患儿
标记染色体是指形态上可以辨认,但却又无法完全辨别其来源和特征的异常染色体,在新生儿中的发生率为0.06%~0.12%.
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应用PCR-RFLP技术检测人血小板抗原-1基因型
特异性血小板对偶抗原是由血小板膜糖蛋白(GP)基因发生单碱基突变,导致抗原决定簇上的一个氨基酸发生变异造成的.人血小板抗原-1(human platelet antigen-1,HPA-1)的对偶抗原HPA-1a和HPA-1b由一对等位基因控制,这对基因来自GPⅢa基因C12,548T错义突变[1].目前已经发展了多种检测单碱基突变的技术[2],均有材料来源不受限制的特点.我们选用PCR-RFLP技术测定了武汉地区180名无血缘关系的献血员HPA-1基因型.
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变性高效液相色谱基因扫描技术在人类疾病基因诊断中的应用
自1992年变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC)基因扫描技术建立以来,因其在筛查基因突变或单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism, SNP)位点方面具有准确、敏感、高通量、自动化的特点,巳经有800余篇研究论文或应用实例发表,而其中的700多篇是在近5年内问世,涉及370多个基因,由此发现或确认了许多致病基因突变或疾病相关基因SNP位点.DHPLC是一种准确、敏感、经济、实用的遗传变异筛查技术,可用于单碱基替换、小片段缺失和插入等多种基因序列突变的检测.DHPLC基因扫描技术可在生殖细胞和体细胞中筛查遗传变异.而像特定位点DNA甲基化状态异常等遗传功能改变,甚至多个特异基因突变的同步微序列测定,也可用在DHPLC基础上建立的方法来检测.我们对DHPLC基因扫描技术检测遗传变异的原理、流程、特点进行介绍,对DHPLC检测基因突变的准确性、敏感性、有效性、实用性,及其在临床基因诊断领域的验证和应用进行讨论.
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093.小混合核酸放大技术检测B型肝炎病毒比较化学发光免疫技术检测B型肝炎病毒表面抗原筛选的优势
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是重新考虑检测血小板捐献者中性粒细胞抗体的时候了
Reil等在2011年第1期Transfusion上发表的原创性研究论文,是一系列代表着在中心粒细胞免疫领域重大进展的界标性论文中的第3篇.第1篇为Reil等关于人类中性粒细胞抗原(human neutrophil antigen,HNA)-3系统的特征描述.第2篇为发现HNA-3a和HNA-3b源自胆碱转运子样蛋白2基因的单核苷酸多态性.这些该结果已被其他研究者所证实.而本文则重点描述采用序列特异性引物聚合酶链反应(sequence-specific primers polymerase chain reaction,SSP-PCR)技术检测HNA-3a和HNA-3b基因型及对大样本高加索人群HNA-3a和HNA-3b基因频率的研究,并评价了与妊娠有关的同种异体免疫风险.这3篇文章标志着对5个HNA系统:HNA-1,-2,-3,-4和-5特征研究的完成,这可能将导致对HNA基因分型和抗体检测方法学的改进.
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胎母出血评估指南
英国血液学标准委员会(BCSH)1999年首次发布了胎母出血(FMH)评估指南,本文对其进行了修订和扩展.2006年BCSH发布了抗D免疫球蛋白预防使用指南,继续建议做FMH检测.室间质量评价(EQA)活动表明,酸洗脱实验和流式细胞计数技术检测FMH的准确性得到了提高,但仍有错误发生,因此开展这些试验的实验室应有完善的质量保证系统.酸洗脱试验检测母亲血循环中的胎儿细胞,可能不能用于预防新生儿溶血病(HDN).指南中指出这些试验在什么情形下可能有效或无效.同样流式细胞计数试验检测少量D阳性细胞需要排除妊娠的背景,胎儿D阳性细胞会计数在内.
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国内PCR技术检测疟原虫的研究概况
聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)1985年由Mullis[1]发明以来,在生物医学领域内得到了广泛应用.对于寄生虫的检测,国内外报道甚多,已成为衡量其它诊断手段的金标准(Gold standard)[2].本文仅对近年来国内用PCR技术检测疟原虫的研究情况,作一综述.
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围手术期肺癌患者血浆特异蛋白质的筛选
肺癌作为威胁全世界人类健康的重大疾病,其死亡率高达13%,且呈逐渐上升趋势[1].虽然在常见肿瘤标志物中肺癌标志物多,其中包括蛋白质、内分泌物质、酶、肽类和各种抗原物质,但总的来说均缺乏特异性,只能作为观察病情变化的参考指标[2].我们应用表面加强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测肺癌及对照组血浆标本,以期寻找高表达的差异蛋白质.
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多普勒超声心动图对左室舒张功能不全的评价
心血管系统疾病易导致左室舒张功能减退,随年龄增长,正常人亦可能出现左室舒张功能减退,本文用多普勒技术检测二尖瓣口的血流频谱,并进行回顾分析,对各种致病因素进行了分析.
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1245例微粒子酶免化学发光分析技术检测乙肝两对半的结果分析
乙型肝炎是当今流行广泛、危害严重的病毒性肝炎之一[1][2].乙型肝炎血清学标记物检查仍作为目前临床诊断、治疗、分析和判断乙肝病毒感染者病程及传染性的重要依据之一,过去人们采用ELISA法检测乙肝两对半的模式分析已见报道[3][4][5].
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1334例临床可疑性病患者病原体检测结果分析
近年来,性传播疾病(STD)发病率上升,其有效治疗有赖于病原体的快速、准确诊断。涂片镜检法快速,但灵敏度、特异性差;淋病奈瑟氏菌(NG)、沙眼衣原体(CT)和解脲支原体(UU)培养条件要求高,耗时较长,且不易培养成功;分子生物学技术已广泛用于病原体感染的快速、敏感的检测。本文对近5年本院1334例门诊病人采用PCR技术检测常见性传播疾病病原体,……
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通用PCR技术检测临床标本中病原菌的污染及防护
鉴定病原微生物的传统方法是实验室分离培养、生物化学、形态学和血清学试验,都需要微生物生长,而且它们已明显限制了对细菌多样性的认识,并在许多情况下不能实行。
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Bio Vue血型分析技术及其临床应用
在日益重视输血安全的今天,准确进行ABO及Rh血型鉴定在临床上显得尤为重要.寻找一种既安全准确又简捷适用的血型分析方法是保障输血安全的重要手段.我院引进美国强生BioVue血型分析技术检测已逾2300人次,现将此技术及应用介绍如下.1材料与方法1.1 BioVue系统(美国强生公司生产),包括专用梯度离心机、专用工作架、加样枪等.1.2 BioVue血型分析卡,包括ABO/Rh(D)正反定型卡、Rh及K分型卡两种.一卡6柱,柱中都含有牛蛋白的大分子量增强剂的缓冲液,一人一卡.各卡所含抗血清如表1所示.
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增殖细胞核抗原、p53、p21ras及EGFR蛋白在人脑胶质瘤中的表达及意义
本文应用免疫组化技术检测102例手术切除人脑胶质瘤组织标本中增殖细胞核抗原(PCNA)P53、p21ras及EGFR蛋白的表达,现报告如下.1 材料与方法1.1 组织标本:收集本院1990~1997年手术切除脑胶质瘤标本102例,经10%甲醛溶液固定,石蜡包埋,连续切片,HB染色并经病理诊断证实胶质瘤无疑(按WHO脑瘤分类).另取14例正常脑组织为对照.
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PEG沉淀结合碱裂解法提取DNA可消除肝素对PCR检测结果的影响
乙型肝炎病毒(HBV)感染的判断主要依赖于血清特异性抗原抗体和HBV DNA定量的检测.其中外周血中HBV DNA定量是病毒复制直接和可靠的标志,对乙肝治疗效果的评价和预后也有重要的参考价值.临床上常采取全血或血浆作为检测标本,由于抗凝血液标本中可能存在着抑制PCR的因子,因此在进行PCR前需纯化血液标本中的核酸.通常认为用于PCR的全血标本通常首选乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝,不能使用肝素抗凝[1],认为肝素是Taq酶的强抑制剂,而且在其后的核酸提取步骤中很难去除[2],一些试剂厂家也明确规定"不可用肝素抗凝"[3];而我们在现实工作中经常会遇到一些血样"因误"采用了肝素抗凝容器,致使标本被退回重新采样,给实验室人员及患者带来了不便.本研究通过上述两种抗凝方法处理全血标本,采用浓缩裂解法提取DNA,观察常用肝素浓度抗凝血对实时荧光定量PCR技术检测HBV DNA的结果是否有影响.
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DSI 905电解质分析仪常见故障处理
DSI 905电解质分析仪是上海迅达公司推出利用离子选择电极技术检测电解质仪器中的一种,可对血清、血浆和全血中的钾(K+)、钠(Na+)、氯(Cl-)、离子钙(iCa2+)、pH进行测定,并通过内置微机换算出标准离子钙(nCa2+)。该分析仪24 h开机,自动进行定标、校正,可满足急诊的需要,我院于1997年引进该分析仪,经三年多的使用,认为该分析仪具有操作简单、易保养、标本用量少等特点,对常见故障处理积累了一些经验,现报道如下。1 进液量不足进液量不足包括标本进液量不足和清洗/定标液在自动清洗后不能完全浸泡电极腔,可通过仪器清晰可见的测量腔观察到。进液量不足可使标本不能达到电极测量腔,从而影响检测结果;或造成电极腔干燥,电极损坏。造成进液量不足主要是由于泵管变形、裂隙、进样管蛋白堆积,进样针位置改变,电极腔干燥致清洗液结晶阻塞等原因,可通过更换泵管,用随机所附硬塑料丝疏通、调整进样针位置,蒸馏水加压冲洗,用去蛋白酶液去蛋白处理即可排除。
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微柱凝集技术检测血小板抗体
血小板输注无效(refractoriness to platelet transfusion,RPT)是长期困扰临床的棘手问题.RPT的产生有两种因素,即免疫性因素和非免疫性因素,反复输血者中约有30%~50%可能产生抗血小板抗体.检测血小板抗体的方法主要有固相红细胞黏附试验、双抗体夹心固相酶联免疫法、血小板单克隆抗体固定实验等.本文采用微柱凝集技术检测血小板抗体,方法简便,结果可靠,报告如下.
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荧光素和地高辛标记探针在聚合酶链反应-微孔板杂交检测TTV DNA中应用比较
目前聚合酶链反应(PCR)扩增产物常规检测采用琼脂糖凝胶电泳法,其敏感度、特异性均不能满足临床要求.对PCR产物进行限制性内切酶酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)分析、变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE或PCR-SS-CP)及PCR产物直接测序,虽可特异性检测PCR产物,但因操作繁杂,且需特殊试剂和仪器,无法在临床普遍开展.刊用特异性探针与扩增产物杂交,引用微孔板杂交酶呈色技术,由于其特异性和敏感度高而被应用于临床.我们采用荧光素和地高辛分别标记探针,建立荧光素-抗荧光素、地高辛-抗地高辛酶偶联系统微孔板杂交酶呈色技术检测TTV DNA的方法,并对其检测效果进行了比较.
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排除PCR检测结核杆菌假阳性的实验探讨
用PCR技术检测痰中结核杆菌,有时会引起假阳性,如样品污染、试剂污染及扩增产物交叉污染引起的假阳性,可以采取各种措施而加以排除.但临床上由其它肺部疾病所引起的结核杆菌假阳性有时难以排除,本文就这一问题加以研究.