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孤啡肽对创伤应激大鼠下丘脑组织中IL-1β mRNA水平的影响
孤啡肽(Orphanin FQ,OFQ)是1995年底新发现的神经肽,是阿片受体样受体的内源性配体.本室已往的研究结果表明侧脑室注射(icv)OFQ可阻断创伤应激介导的免疫抑制效应,本实验采用以单碱基突变模板作为内标的逆转录-聚合酶链式反应技术,观察icv OFQ对创伤应激大鼠下丘脑组织IL-1β mRNA水平的影响.
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单核苷酸多态性及其检测方法
人类基因组测序计划的完成,标志着人类已步入后基因组时代[1],该时代以基因组中个体遗传差异的研究为重点.而个体遗传差异常见形式为单核苷酸多态性( SNP),正是这些SNP的变异造成人类在身材、体形、肤色、对疾病的易感性、疾病表型和对药物治疗反应等诸多方面或多或少的差异.在众多导致人类疾病的基因突变、病原亚型及耐药基因突变中,单碱基突变占相当大的比例,其检测方法的探索一直是基因诊断研究中的重要课题,特别对已知突变的检测,将是进行基础研究和临床基因诊断的重要手段之一[2].
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肿瘤坏死因子β1069位点基因多态性与胃癌易感性的相关性研究
目的:探讨江苏汉族人群肿瘤坏死因子β(tumor necrosis fac-tor β,TNFβ)1069位点等位基因多态性与胃癌的关系.方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法对168名健康人和45例胃癌患者TNFβ基因的单碱基突变多态性进行了分析.结果:胃癌患者的TNFβ★1/2等位基因频率(66.7%)较正常人(47.0%)明显升高(P=0.019<0.05).结论:TNFβ★1/2等位基因频率与胃癌易患性相关.
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建立PCR-高分辨熔解分析法检测急性髓系白血病IDH1基因突变
可溶性异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)基因在细胞氧化损伤反应中发挥着重要的调控作用[1].2008年Parsons等[2]首先报道胶质瘤患者中12%IDH1转录本第395位碱基由鸟嘌呤突变为腺嘌呤(c.395G→A),导致该酶精氨酸被组氨酸所替代(R132H).其后发现IDH1基因突变还可见于星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、急性髓系白血病(AML)、骨髓增生异常综合征、骨髓增殖性肿瘤等[3].高分辨率熔解(HRM)分析是近年来发展起来的一种新型的突变扫描和基因分型的遗传学分析方法.美国Idaho公司的LightScanner是以HRM技术为基础的分析仪,它采用新型饱和双链DNA结合饱和荧光染料LC Green,通过分析PCR扩增产物解链过程中熔解曲线的变化来检测单碱基突变、小片段插入或缺失[4],具有灵敏度高、特异性好、成本低廉、高通量检测的优点,已越来越多地被用于单核苷酸多态性分析(SNP)和基因突变扫描.
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微粒体甘油三酯转移蛋白基因多态性与2型糖尿病血脂紊乱的关系
微粒体甘油三酯转移蛋白(microsomal triglyceride transfer protein, MTP)是肝脏、小肠细胞合成和分泌含载脂蛋白B(apoB)的脂蛋白所必需的脂质转移蛋白,具有促进转运甘油三酯、胆固醇酯和磷脂酰胆碱的作用[1].该基因启动子区域内MTP -493位点上的单碱基突变能够影响血浆低密度脂蛋白(LDL)的水平[2],因此认为MTP启动子区域内的基因多态性与心血管疾病密切相关.本研究旨在了解2型糖尿病及正常人群中MTP基因多态性及此基因与2型糖尿病脂质代谢的关系.
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肽核酸芯片技术初探
目的研究解决以DNA为探针的寡核苷酸芯片特异性、重复性差等问题.方法用肽核酸(PNA)探针制备PNA芯片,以荧光标记的寡核苷酸(ODN)及HBV DNA的PCR产物为检测对象,探讨PNA芯片的杂交条件.用PNA芯片检测HBVDNA及单碱基突变,并与DNA芯片做一对比.结果PNA探针对单碱基突变的识别力比相应的DNA探针更强;用其检测HBV DNA,得到了与常规PCR试剂盒一致的检测结果.结论 PNA探针独特的结构决定了它在杂交中具有与靶DNA结合的稳定性高及特异性强等优点.
关键词: 肽核酸 芯片 单碱基突变 乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 -
隐性纯合LDLR基因突变发现与功能分析
家族性高胆固醇血症( familial hypercholesterolemia , FH)是一种常染色体显性单基因遗传性疾病。世界范围内FH杂合患者的发病率为1/500,纯合子患者症状严重,发病率为1/1000000。我们近诊断一位32岁女性FH伴早发冠状动脉粥样硬化性心脏病患者,血清总胆固醇含量12.99 mmol/L,其父母血脂水平正常。随后,我们应用高通量测序对患者及其母亲进行外显子组分析,测序数据首先与GRCh37数据库进行比对,将比对后检测到的同义突变、位于非编码区的突变以及数据库中已有的SNP筛除。根据其可能的遗传方式,按照常染色体隐性模式进一步筛选,发现148个插入/缺失突变,26个单碱基突变(包括1个无义突变和25个错义突变);对基因突变位点功能筛查和验证分析后,终发现了一个新的隐性纯合基因突变。该突变为LDLR基因第15个外显子的无义突变位点,该外显子编码O-糖链接结构域。研究中分别构建LDLR基因野生型及突变型表达质粒, Western blot结果显示,突变后的LDLR蛋白仍然可以正常表达,推测发生在O-糖链接结构域的突变可能影响LDLR蛋白在细胞膜上的正确定位,从而无法正常清除血浆中的LDL,终导致FH的发生。本次研究发现了一个新的位于LDLR基因中的隐性纯合突变,进一步丰富了LDLR基因的突变研究数据,也为FH的基因诊断提供更多的依据。
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应用PCR-RFLP技术检测人血小板抗原-1基因型
特异性血小板对偶抗原是由血小板膜糖蛋白(GP)基因发生单碱基突变,导致抗原决定簇上的一个氨基酸发生变异造成的.人血小板抗原-1(human platelet antigen-1,HPA-1)的对偶抗原HPA-1a和HPA-1b由一对等位基因控制,这对基因来自GPⅢa基因C12,548T错义突变[1].目前已经发展了多种检测单碱基突变的技术[2],均有材料来源不受限制的特点.我们选用PCR-RFLP技术测定了武汉地区180名无血缘关系的献血员HPA-1基因型.