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孤啡肽对创伤应激大鼠下丘脑组织中IL-1β mRNA水平的影响
孤啡肽(Orphanin FQ,OFQ)是1995年底新发现的神经肽,是阿片受体样受体的内源性配体.本室已往的研究结果表明侧脑室注射(icv)OFQ可阻断创伤应激介导的免疫抑制效应,本实验采用以单碱基突变模板作为内标的逆转录-聚合酶链式反应技术,观察icv OFQ对创伤应激大鼠下丘脑组织IL-1β mRNA水平的影响.
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慢性应激大鼠结肠黏膜NO含量变化的意义
目的:观察慢性应激大鼠结肠黏膜一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量变化,探讨NO在慢性应激肠黏膜损伤中的作用及意义.方法:采用慢性束缚应激模型.Wistar大鼠30只,随机分为对照组、应激组、应激+氨基胍组.应激组和应激+氨基胍组大鼠每天置于束缚笼内2 h.氨基胍组腹腔注射氨基胍150 me/kg,持续14 d处死动物.化学比色法测定肠黏膜组织NO、诱导型NO合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的含量,组织切片观察肠黏膜炎性细胞浸润情况,电镜观察结肠上皮细胞超微结构的变化.结果:应激组结肠黏膜中NO、iNOS含量高于对照组(N0:47.5±7.9 vs32.3±4.7 μmol/g,P<0.0l;iNOS 6.7±1.0vs 4.0±0.6 nkat/g,P<0.01),中性粒细胞、单核细胞数目增加(N:70±12 vs 30±6/mm2P<0.0l;M:52±9 vs26±8/mm2,P<0.01),并出现上皮细胞线粒体肿胀、细胞间紧密连接间隙加大等超微结构的变化氨基呱组结肠黏膜NO、iNOS含量低于应激组(N0:27.7±12.4vs47.8±7.9 μmol/g,P<0.05;iNOS3.8±0.8vs6.7±1.0 nkat/g,P<0.01),炎性细胞浸润及超微结构的变化较轻.结论:慢性应激大鼠结肠黏膜NO含量增加,可能参与了应激诱导的肠黏膜损伤.氨基胍对应激诱导的肠黏膜损伤起保护作用.
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颈交感神经干离断对应激大鼠ET-1及胃黏膜血流量的影响
目的:研究颈交感神经干离断对浸水大鼠胃黏膜血流量的影响.方法:30只♂SD大鼠随机分为3组(n=10)Ⅰ组为正常对照组,Ⅱ组为浸水对照组;Ⅲ组为颈交感神经干离断后浸水组.Ⅰ、Ⅱ组只将颈交感神经干暴露、分离,不离断;Ⅲ组离断颈交感神经干并将断端结扎.将Ⅱ、Ⅲ组大鼠垂直浸水(水温23±1℃)至剑突水平,6 h后取出,测定各组胃黏膜血流量(GMBF),评价黏膜损伤程度.放免法测定血浆及胃黏膜ET-1含量.结果:Ⅱ组胃黏膜见出血及糜烂.Ⅲ组黏膜损伤程度明显轻于Ⅱ组.Ⅲ组与Ⅱ组比较GMBF明显升高,二者分别为130.0±14.5;68.9±12.7(P<0.01).Ⅱ组和Ⅲ组的溃疡指数(UI)分别为50.1±12.3;26.6±9.4差异极显著(P<0.01),Ⅱ组和Ⅲ组的GMBF值与UI呈高度负相关,γ=-0.847,P<0.001.Ⅱ组大鼠的血浆及胃黏膜的ET-1值明显高于Ⅰ组,P<0.01;Ⅲ组的血浆ET-1值也明显高于Ⅰ组但与Ⅱ组比较明显减少,P<0.01.Ⅲ组大鼠的胃黏膜组织的ET-1值明显高于Ⅰ组,P<0.01,但与Ⅱ组比较无显著差异.结论:颈交感干离断可增加浸水应激大鼠胃黏膜血流量,对胃黏膜损伤有保护作用.血浆及胃黏膜ET-1参与了颈交感神经干离断对胃黏膜保护的作用.
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束缚应激免疫抑制蛋白单克隆抗体的研制
我室以前的研究发现,在束缚应激大鼠和小鼠血清中能产生1种抑制正常淋巴细胞转化的大分子蛋白质,相对分子质量为1.55×105和3.70×105,并且证明该蛋白的生成受中枢神经系统的调控[1].随后又发现应激大鼠外周淋巴组织(脾和淋巴结)匀浆提取物亦可抑制淋巴细胞转化,进一步的研究表明这种抑制物的生化特性和相对分子质量与血清中的应激免疫抑制蛋白相类似,并证明血中应激免疫抑制蛋白来源于外周淋巴组织[2].上述结果是我室首先发现并已在国内外报道.本文利用部分纯化的应激免疫抑制蛋白作抗原,制备出抗应激免疫抑制蛋白的单克隆抗体,并利用此单抗从另一侧面证实血清中应激免疫抑制蛋白与淋巴组织产生的抑制蛋白是同一物质.
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调肝方药对慢性束缚应激大鼠神经内分泌免疫功能的影响
七情致病理论及其防治是中医病因病机学中的一个重要内容,但目前相关研究较少,现代医学中的心理应激理论与中医七情学说在认识上存在着许多共同点,从应激角度出发,结合中医"怒伤肝"的理论,以束缚制动作为应激原,复制慢性激怒应激反应大鼠模型,并探讨调肝方药(TGFY)对应激大鼠神经内分泌免疫功能的影响。1 材料与方法1.1 主要试剂 细胞培养液RPMI-1640(Gibco产品),刀豆素A(ConA,Sigma产品),3H-TdR(中国科学院原子能研究所产品),莨菪葶(9.61μg,Sigma产品),辣根过氧化物酶(HRP,10μg,Sigma产品),十四酰佛波乙酸酯(PMA,100ng,Sigma产品)。125I-CRH、125I-ACTH、125I-CORT放免检测药盒(美国DPC产品)。1.2 大鼠应激模型制作及分组处理 雄性Wistar大鼠,体重250~300 g,分为正常对照组10只(正常饮食,不给任何刺激);慢性束缚应激组1O只(给予束缚刺激,正常饮食,不给中药治疗);调肝方药组10只(给予束缚刺激的同时灌胃调肝方药)。慢性束缚应激反应大鼠模型的制作取雄性Wistar大鼠20只,体重250~300 g,每2只一笼,每日给予黑暗和光照各12 h,20~22℃,同时给予每日1次成对双后肢的立式束缚,以引起明显的激怒应激反应(粗叫、站立对峙、扭打嘶咬),首次30min,以后隔日增加10min,共2 w。普通饲料,自由饮水。于实验第13天和第14天在动物清醒、安静状态下断头处死取材。1.3 药物组成剂量及给药方法 所用中药均由本校第一附属医院药房提供的纯正药材。调肝方药组成及剂量:柴胡15g、白芍15 g,香附10 g,山萸肉15 g,郁金10 g,枳壳10g。将上述药物制成100%水煎剂,每毫升含生药1 g,给予大鼠1 ml/100 g体重灌胃,每日2次,共2 w。对照组及应激组灌服等量生理盐水。
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慢性应激大鼠结肠黏膜形态学及黏蛋白的变化
慢性应激与胃肠道疾病关系密切,但其机制尚未完全阐明.随着社会竞争日趋激烈,应激相关疾病逐渐增多,精神因素在胃肠道疾病发生中的作用及机制受到越来越多的关注.新近研究表明:慢性应激能在一定程度上影响正常个体的肠黏膜屏障功能[1,2].而肠黏膜屏障的损伤是肠道疾病发生的一个始动环节,因此,进一步研究慢性应激状态学变化有助于揭示精神因素在肠道疾病发生中的作用及机制.
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酪氨酸干预对应激大鼠血清皮质酮、促肾上腺皮质激素的影响
应激反应是一种多激素参与的复杂反应,其重点是肾上腺皮质激素[1].1936年加拿大病理生理学家H.Selye发表了第一篇关于应激的论文,报道在不同刺激因素,如感染、中毒、寒冷、高温及强烈精神刺激等作用下,机体出现以垂体-肾上腺轴(HPA)反应为中心的非特异性反应,而血清皮质酮(corticosterone,CORT)是经典的反应指标之一.
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丙戊酸钠对慢性应激大鼠p-CREB的影响
慢性应激可以损害大脑的认知功能,尤其对海马介导的记忆有明显的损害.有研究证实前额叶和海马磷酸化-环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)与学习记忆密切相关~([1]).丙戊酸钠(VPA)是一种经典的抗癫痫药物.近研究发现,VPA具有营养神经的作用~([2]),故本研究选用VPA对慢性应激大鼠进行干预,观察其能否改变慢性应激大鼠海马p-CREB的水平,进一步探讨应激对认知功能影响的作用机制及干预措施.
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螺旋藻对应激大鼠胃粘膜损伤的预防作用
目的:观察螺旋藻对水浸应激大鼠胃粘膜损伤的拮抗作用.方法:运用组织化学染色显示胃壁NOS分布,并测定光密度作半定量分析,用生化方法测定血浆以及胃壁MDA含量.结果:螺旋藻预处理组胃壁Ⅵb分布较实验对照组明显增多,血浆及胃壁MDA含量较对照组明显减少(P<0.05)、结论:螺旋藻对水应激大鼠胃粘膜损伤有明显的预防作用.
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三七总苷对应激大鼠胃黏膜褪黑素受体mRNA表达的影响
目的:观察三七总苷对应激大鼠胃黏膜组织中褪黑素受体(MR)表达以及含量的影响.方法:采用经典的水浸-束缚应激模型,总RNA提取产物应用RevertAid First Strand Cdna Synthesis Kit进行逆转录,PCR产物进行琼脂糖电泳,经KODAK 1D Image成像系统分析,以目的基因(MT1受体)与内参(GAPDH)光密度比值表示MT1受体Mrna的相对表达水平.结果:水浸-束缚应激6 h后,所有以MT1为引物的RT-PCR产物中,均可见大小为360bp的阳性条带;模型组MR的相对含量比正常组略低,三七总苷组、雷尼替丁组与正常组和模型组比较,MR的相对含量均升高(P<0.05或P<0.01).结论:应激大鼠胃黏膜中确实存在MT1受体Mrna的表达,三七总苷组通过上调MR表达而发挥胃黏膜保护作用,其机理可能是三七总苷促进褪黑素分泌或提高其与受体结合容量所表现的MR高表达.
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大鼠应激后接受肠内营养联合双歧杆菌黏附素干预的实验研究
目的:分析肠内营养联合双歧杆菌黏附素对应激大鼠的干预作用.方珐:SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、肠内营养组及联合治疗组各10只,建立创伤应激模型,接受不同营养支持后采用酶联免疫吸附法(ELISA)、免疫组化等方法测定大鼠血浆炎症因子、肠粘膜occludin蛋白表达、下丘脑TNF-α及CRF蛋白表达、下丘脑及结肠VIP含量等差异.结果:联合治疗组大鼠的血浆IL-6、IFN-γ水平低于肠内营养组大鼠,IL-10、IL-2水平高于肠内营养组大鼠(P<0.05);联合治疗组大鼠的肠粘膜occludin蛋白表达面积百分比大于肠内营养组大鼠(P<0.05);联合治疗组大鼠的下丘脑TNF-α及CRF蛋白表达量小于肠内营养组大鼠(P<0.05);联合治疗组大鼠的下丘脑及结肠VIP染色指数低于肠内营养组大鼠(P<0.05).结论:应激大鼠采用肠内营养联合双歧杆菌黏附素进行干预,可以降低全身炎症状态,优化下丘脑及结肠的应激相关因子蛋白表达,通过维持肠道局部及全身的稳态发挥治疗作用.