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应用多重逆转录聚合酶链反应技术检测石蜡包埋三种软组织肉瘤中融合基因的表达
目前,用于软组织肉瘤(soft tissue sarcoma,STS)染色体易位或其融合基因检测的技术方法很多[1],以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法为常用[2,3].然而对于一些形态学缺乏特征性排列结构的小圆细胞肿瘤,运用RT-PCR技术对不同融合基因逐一检测和排除,也存在检测程序繁琐、耗时、耗材等不足.针对此问题,我们设计了多重引物,应用多重RT-PCR技术检测石蜡包埋STS融合基因的表达,建立一套稳定高效、适合临床常规STS融合基因表达检测的分子诊断方法.
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血液学检验技术在血液肿瘤诊治中的应用及展望
血液学检验技术从早期经典的细胞形态学及细胞化学染色方法,到后来的组织病理学检验和免疫学分析,再到细胞遗传学及分子遗传学分析、分子生物学分析,进而对血液肿瘤的认识从细胞形态上升到遗传和基因水平,对血液肿瘤的类型也有了更准确和更细致的划分. 随着科学技术的发展,新的检测技术不断涌现,不同的检测技术适用于不同血液肿瘤的诊治,而多种技术联合检测也能够提高诊断血液肿瘤的准确性,为临床提供可靠的实验依据,对血液肿瘤患者的诊治和预后评估有着重要意义.
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非小细胞肺癌EML4-ALK融合基因检测的临床意义
近年来,靶向药物治疗成为肺癌治疗热点,越来越多的分子靶点的发现及靶向药物的研发给肺癌患者长期生存带来希望.2007年棘皮动物微管结合蛋白4(echinoderm microtubule-associated protein-like 4,EML4)与间变淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)融合基因EML4-ALK在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)临床价值中的发现[1],堪称NSCLC研究史上又一里程碑事件.
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三氧化二砷治疗骨髓纤维化一例
患者,男性,63岁,2010年1月因WBC、Plt升高来我院就诊,当时血常规示:WBC22.84×109/L,Hb99g/L,Plt 417×109/L,骨髓形态:骨髓增殖性肿瘤(MPN)可能大,有核细胞增生明显活跃,粒细胞系统占80.5%,其中原始粒细胞1%,早幼粒细胞1%,红细胞系统增生相对低下,仅占5.5%,粒红比14.64∶1,巨核细胞数全片>100个,可见小核、巨核,血小板大、成堆易见.JAK2突变基因检测阴性,染色体核型分析未见明显异常,融合基因检测:PML-RARa阴性,多重PCR未检测到常见的29种白血病融合基因转录本,血小板聚集功能降低(ADP和Risto诱导大聚集力分别是35.51%、33.58%).
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定量Bcr/ab1融合基因在慢性骨髓增殖性疾病中的表达及意义
慢性粒细胞白血病(CML)因染色体t(9,22),产生bcr/abl融合基因,其蛋白产物能激活酪氨酸激酶,抑制CML细胞凋亡.因而bcr/abl融合基因作为CML的标记基因,已用于CML的临床诊断和微小残留病变检测.真性红细胞增多症(PV),原发性血小板增多症(ET),慢性特发性骨髓纤维化(1MF)与CML同属慢性骨髓增殖性疾病(CMPD),具有重叠的临床特征,但自然病程和治疗方法不同,因此,有必要在各疾病间进行鉴别.我们对CMPD患者进行了bcr/abl融合基因检测,现将结果报告如下:
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急性髓细胞白血病MICM分型诊断结果分析(附6例报告)
目的:分析急性髓细胞白血病( AML)细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学分型( MICM分型)的诊断结果,探讨MICM分型在AML诊疗中的价值。方法 AML患者6例。按FAB分型标准,形态学诊断为M32例,M01例,M21例,急性淋巴细胞白血病(ALL)2例。对6例患者进行MICM分型。结果根据MICM分型, FAB分型为M2型者终诊断为AML伴inv(16),实为FAB分型中的M4型;FAB分型为M3型的2例终诊断为AML伴t(8;21),实为M2型;FAB分型为M0型者终诊断为AML伴t(15;17),实为M3型;FAB分型为ALL的2例终诊断为AML-MRC,分别属M1、M2型。4例患者经常规化疗后均达完全缓解,余2例疗效不佳。结论MICM分型相较FAB分型对伴有复杂核型或特征性核型改变的AML具有更高的诊断价值,有助于指导治疗。
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PML/RARa融合基因检测在早幼粒细胞白血病鉴别诊断中的意义
急性早幼粒细胞白血病(APL),具有特异性的染色体易位t(15:17)及PML/RARa融合基因.在细胞遗传学(MIC)分型的基础上,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测APL的PML/RARa融合基因的mRNA,可以用来诊断或鉴别诊断,同时也可以进行微量残留白血病细胞(MRLC)的检测.
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临床分子生物学检验实习的带教体会
随着医学科学的进步,临床对疾病的诊断和鉴别诊断越来越离不开检验医学,而传统的检验医学技术已不能满足临床的需要,分子生物学检验已成为检验医学重要的组成部分,并发挥着越来越重要的作用。分子生物学检验以聚合酶链反应(polymerase chain reaction ,PCR)技术为核心,广泛地运用于临床,如感染性疾病的诊断、白血病融合基因检测、单核苷酸多态性检测、遗传突变以及胎儿血型检测等[1-2]。PCR技术具有高敏感性和高特异性的优点,但其操作步骤较为繁琐,任何一个环节的疏忽都可能对结果造成严重的影响,因此,检验专业实习生应接受系统、严格的训练,并能对实验过程中出现的各种结果进行分析。这对检验专业学生的理论知识及实践技能提出了更高的要求。笔者通过近年来对临床分子生物学检验实习生的带教工作,总结了以下几点带教体会。
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EVI-1融合基因阳性的急性髓系白血病伴β-地中海贫血基因携带1例报告及相关文献复习
患者、女性、76岁、退休教师。患者因反复胸痛10余年,频繁发作并加重1 w于2014年7月11日入院拟行冠状动脉造影,PCI治疗。患者自诉20年前有贫血史,10年前因高血压并反复胸痛,经武汉某三甲医院诊断高血压病、冠状动脉粥样硬化性心脏病,规律口服非洛地平缓释片、速效救心丸、拜阿司匹林、阿托伐他汀等药物治疗。无吸烟及饮酒史。患者近三年来单位组织体检资料:多次血常规检查WBC 15.00~25.00×109/L RBC 6.2~7.5×1012/L,HB 110~120 g/L, MCV 55~60 fl,PLT 550~750×109/L。白细胞分类以中性粒细胞为主。父母非近亲结婚,已病故,死因不详。患者兄妹四人,其妹为β-地中海贫血基因携带者,20年前死于急性白血病。其余2例非β-地中海贫血基因携带者,身体健康。患者女儿为β-地中海贫血基因阳性携带者。入院后查体:T:36.0益,P 90次/min,R 20次/min,BP 150/60 mmHg,精神较差,中度贫血貌,皮肤巩膜无黄染,全身浅表淋巴结无肿大,胸骨无压痛及叩击痛,心肺听诊无异常,肝脾肋下未及,双下肢轻度可凹性水肿。辅助检查:血常规:WBC:13.55×109/L,RBC:4.29×1012/L,HB 73 g/L,MCV:56.20 fl,MCH 17.10pg,N 26.80%,L 70.40%,PLT:785×109/L。生化检查:肝肾功能,电解质,血糖血脂,心肌酶谱等正常范围。乙肝表面抗原阴性,丙肝抗体阴性。心脏及腹部彩超提示:主动脉瓣退行性病变,左房增大。脂肪肝、脾脏不大,腹膜后未见肿大淋巴结及异常包块。胸片提示:慢性支气管炎疾患,主动脉迂曲增宽。外周血细胞形态:淤有核细胞以淋巴细胞为主,占74%,其中幼淋巴细胞占22%,原始细胞1%。于红细胞体积偏小,部分浅区扩大。盂血小板多见,丛状分布为主,少数异常血小板(圆形及大型、长形等)。榆未见其他异常细胞。地中海贫血基因检测:未见α-地中海贫血基因缺失及突变,β-地中海贫血基因突变:27/28突变检测阳性。异常血红蛋白电泳阴性。骨髓穿刺检查出现干抽。取外周血送血液肿瘤免疫分型检查:所检测抗原:HLA -DR,CD2,CD3,CD5,CD7,CD8,CD10,CD11b,CD13, CD14,CD15,CD19,CD20,CD22,CD33,CD34,CD38,CD56, CD64,CD71,CD117,CD123,MPO,cCD79a,cCD3,TDT,CD45,印象:在CD45/SSC点图上设门分析,原始细胞分布区域可见异常细胞群体,约占有核细胞的41.5%,主要表达HLA-DR, CD5,CD13,CD33,CD34,CD38,CD117,CD123。提示:急性髓系白细胞(AML)。请综合鉴别AML-M2等亚型。外周血白血病常见31种融合基因检测:EVI-1基因阳性。JAK2/V617F融合基因检测阴性。外周血染色体检查:17号染色体等臂。综合诊断:急性髓系白血病伴血小板增多症,AML-M1/inv(3), inv (17),β-地中海贫血基因携带,高血压病3级(很高危组),冠状动脉粥样硬化性心脏病,心功能郁级。治疗:患者及家属放弃行冠状动脉造影介入治疗,拒行化疗,行控制血压(非洛地平缓释片)、扩张冠脉循环(硝酸异山梨酯缓释片、麝香保心丸),抗血小板聚集(拜阿司匹林片,硫酸氯比格雷),调脂,输血,口服羟基脲,吸氧及对症支持治疗,胸痛缓解出院,后多次因贫血加重诱发心绞痛发作住院行输血及对症治疗,出院随访患者于2015年1月18日因突发心肌梗塞猝死。