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微量显色酵母菌药敏试验方法初步应用
临床酵母菌目前已成为医院感染的主要菌群之一,体外药敏试验对于合理筛选抗真菌药物,发现耐药菌株等有重要意义[1].为此,我们参照文献[2]介绍一种"YeastOne微量稀释显色法酵母菌药敏试验"方法,并以美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的"M27-A"方法为参考,对其方法学特点作初步评价.
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产孢丝状真菌NCCLS药敏试验方法的应用
美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)于1997年推出了关于酵母菌的液体培养基稀释(多量法与微量法)抗真菌药敏试验方案M27-A,建立了被众多实验室认同的重复性好、准确性较高的标准化体外药敏试验方法。但由于丝状真菌本身的诸多特点如产孢条件难以控制、接种量难以精确量化、孵育时间长等,使其试验方法标准化具有一定难度。近年来NCCLS分会成员以M27-A的微量法为基础进行了多中心广泛深入研究[1,2],于1998年提出了《产孢丝状真菌的液基稀释抗真菌药敏试验参考方案》(M38-P)。该方案在提出了一些建设性意见的同时,重申了多量法与微量法的一致性。现将其方法简介如下。 一、材料和方法 1.抗真菌药物:测试用药物包括氟康唑(FCZ),5-氟胞啶(5-FC)、酮康唑(KCZ)、伊曲康唑(ICZ)和两性霉素B(AmB)。药物来源、贮备液的制备等同M-27方案[3]。 2.被检测的真菌:本方案主要针对常见侵袭性真菌感染的菌种:曲霉、镰刀霉、根霉,波氏假阿利什霉及申克孢子丝菌的菌丝相。不包括其他非产孢丝状真菌,也不适应于双相真菌的酵母相。 3.培养基:建议应用RPMI-1640培养基,配制方法要求同M27-A方案。 4.真菌接种液的制备:(1)为保证受试菌的纯度及活性,需在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上35℃培养7 d或35℃培养48~72 h后,转至25~28℃至7 d(镰刀菌)。(2)取1 ml无菌0.85%盐水加入培养7 d的培养皿中,用巴氏吸管轻轻抽吸,制备菌悬液(加入1滴吐温20将有利于曲霉的接种),将菌悬液吸至无菌试管中,静置3~5 min后,取上部匀质液体(含孢子或孢子囊孢子和菌丝片断),在振荡器上振荡15 s。(3)用分光光度计调整菌悬液浓度,波长530 nm,A值曲霉、申克孢子丝菌0.09~0.11,镰刀霉、波氏假阿利什霉及根霉0.15~0.17。(4)将上述菌悬液用RPMI-1640稀释50倍得2倍终浓度(0.4~5×104)的菌悬液备用。(5)为保证试验准确性应做菌落计数,取0.01 ml终浓度菌悬液接种于改良的沙氏萄葡糖琼脂培养基的平皿中(28~30℃),每天观察并计数肉眼可见的真菌菌落(尤其是对于镰刀菌),孵育时间为24 h以内(镰刀菌)至5 d(波氏霉)。 5.液体培养基的接种:在96孔板的1~10列孔中每孔加入0.1 ml的2倍终浓度的菌悬液。每次试验均应包括质控、参考菌株。 6.培养:35℃条件下(不要摇动)大多数菌需46~60 h判定低抑菌浓度(MIC)结果,根霉则需21~26 h,波氏假阿利什霉则需70~74h。
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浓度梯度法监测苛养菌对9种抗生素的耐药性
使用营养丰富的培养基和修改后的判断值,虽然纸片扩散法也可用于苛养菌的药物敏感试验;但是对于苛养菌,简易的纸片扩散法只能对常用抗生素作有限的分析.特别是近年来,美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)不再推荐用纸片扩散法测定阿莫西林/棒酸和氨苄青霉素/舒巴坦对流感嗜血杆菌的抗菌作用, 以及广谱头孢菌素对肺炎链球菌的抗菌作用, 其原因是纸片扩散法的结果会造成过多的解释错误.为此,我们选用了已逐渐被认可的浓度梯度法(Etest法)测定100株苛养对9种抗生素的低抑菌浓度(MIC),来监测它们对抗生素的耐药性,指导临床用药.
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电化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较
目前,临床实验室常规检测血清甲胎蛋白(AFP)多采用酶联免疫法.近年来,电化学发光免疫法以其敏感、快速、稳定等优点,在固相标记免疫测定技术上居领先地位[1].为进一步了解电化学发光免疫法的特点,本文应用电化学发光免疫法与酶联免疫法对比检测165份临床血清标本的AFP含量,对数据进行统计分析和比较,报告如下.一、材料和方法
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添加色彩凝固指示物检测凝血酶原时间试剂的应用
目前临床实验室凝血酶原时间(PT)常规测定,采用仪器和手工两种方法。手工法是中小实验室的常用方法,并且是所有凝血功能试验的参考方法。但传统的手工法凝固终点较难观察,使得结果不稳定,特别是技术不熟练者误差较大。徐元斌等报道了一种添加凝固指示物测定部分凝血活酶时间(APTT)的方法,我们采用这种添加凝固指示物的方法测定PT,取得了满意的结果,现报道如下。 一、材料 1. 试剂:国产凝血活酶试剂,国际敏感指标(ISI)1.39, 批号:9901018,南京军区福州总医院提供。IL公司凝血活酶试剂, ISI 1.41, 批号:8468210。IL公司质控血浆,批号:8268316;国产质控血浆,批号:9901018。色彩凝固指示物,批号:9901018,南京军区福州总医院提供。 2. 标本:健康者新鲜血浆30人份,临床送检病人新血浆60人份;口服华法令治疗病人新鲜血浆20人份。 二、方法 1. 用手工(倾斜试管)法测PT。添加色彩凝固指示物试剂操作如下:在塑料试管中加入血浆0.1 ml,置(37±1)℃水浴中预温2 min。加入已复溶20~30 min(按用量以每毫升复溶凝血活酶试剂添加色彩凝固指示物20 μl)并预温至37℃的凝血活酶试剂0.2 ml,混匀;同时立即开动秒表计时。试管仍置于水浴中,至约10 s时自水浴中取出,迅速拭去管外水珠,在白色背景下不断倾斜试管至90°,仔细观察,当见到纤维蛋白丝或颗粒形成时,立即停表,记录时间;每份标本检测双份,取平均值。 2. 选择国产定质值血浆和IL公司质控血浆,分别用进口和国产两种试剂,添加和不加色彩凝固指示物作10次测定,计算PT(s)的CV值,观察重复性。
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采用NCCLS M27-A方案微量法检测念珠菌对抗真菌药物的敏感性
为了解我国临床分离菌株对常用抗真菌药物的敏感性、观察氟康唑耐药株对伊曲康唑和酮康唑是否存在交叉耐药[1],本试验采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS) 1997年公布的M27-A方案的微量稀释法测定了6种常用抗真菌药物对80株念珠菌的MIC值。 一、材料与方法 1. 试验菌株:本试验所采用的菌株及其来源如下:受试菌株为80株念珠菌,包括:白念珠菌(Candida albicans) 47株(临床分离株40株、ATCC模式株2株和5株氟康唑耐药株)、近平滑念珠菌 (C. parapsilosis)9株(临床分离株7株、ATCC模式株1株和1株标准株)、热带念珠菌(C. tropicalis) 5株(均为临床株)、克柔念珠菌(C. krusei) 4株(临床分离株2株、ATCC模式株1株和1株标准株)、 光滑念珠菌(C. glabrata)5株(临床分离株4株、ATCC模式株1株)、乳酒念珠菌(C. keyfr) 4株(临床分离株3株、ATCC模式株1株)和季也蒙念珠菌(C. guiliermondii)2株(均为临床株)、葡萄牙念珠菌(C. lusitaniae)2株(1株临床株和1株ATCC模式株)、产朊念珠菌(C. utilis)2株(临床分离株1株、ATCC模式株1株)。其中模式株系北京医科大学真菌和真菌病研究中心保存株;标准株系日本千叶大学真菌医学研究中心(IFM)赠送;耐药株系比利时Janssen制药公司提供。
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肌酐酶法试剂盒在OLYMPUS自动生化分析仪的应用
临床实验室肌酐测定方法从早的全血肌酐碱性苦味酸法(Jaffe)到血清肌酐苦味酸比色法[1],又发展为同一原理的速率法[2]。我们对Jaffe氏反应原理的肌酐速率法和肌酐酶法在OLYMPUS-AU600 自动生化分析仪上的测定结果做了分析比较。 一、材料和方法 1.试剂:(1)上海长征康仁医学科学有限公司生产的肌酐酶法试剂盒,批号 D80315及苦味酸速率法试剂盒,批号:60110。(2)肌酐标准液浓度为440 μmol/L,由长征康仁公司生产批号:35940。血清标本:来源于内蒙古医学院第一附院患者。 仪器:日本OLYMPUS-AU600型全自动生化分析仪。 2.肌酐酶法(PATE):波长 340 nm,温度37℃,双试剂,样品:试剂1∶试剂2为20∶200∶40。启动试剂3 min后加入,反应时间3.9 min到6.3 min,读取吸光度变化。肌酐苦味酸速率法(FIXED),波长520 nm,温度37℃,单试剂,样品:试剂为20∶200。反应时间,54 s至126 s,读取吸光度变化。标准type 4点定标,浓度分别为110、220、330、440 μmol/L,公式:X=AY2+BY+C。 二、结果 1.线性试验:将高值肌酐血清(H)与正常混合血清(L)按下表比例混合测定血清肌酐,测定结果见表1。
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酶标仪性能评价与鉴定的基本方法及其初步应用
近年来,酶标仪在临床实验室中的应用越来越普及[1],而国内外有关其性能评价与鉴定方法的报道尚不多见;为了保证酶标仪检测结果的准确性和可靠性,我们对不同厂家及型号的仪器经过系统论证,初步建立了一套酶标仪性能评价指标与鉴定的方法,同时应用该法对美国Bio-Rad 550型酶标仪进行了评价,结果满意,现将评价方法和应用结果报告如下:
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用萘啶酸预测大肠埃希菌gyrA基因突变的探讨
近年来,大肠埃希菌对环丙沙星的耐药率上升明显,其对喹诺酮类药物耐药性的产生主要与染色体gyrA基因突变有关[1],而它的突变过程是渐进的,即首先发生单基因位点突变,此时菌株对环丙沙星仅表现为敏感性下降.如在药物继续作用下,则极易发生双基因或多基因位点突变[2],表现为高度耐药.如能检出单基因位点突变菌株对防止大肠埃希菌演变成耐药菌有重要临床意义.目前检测gyrA基因突变均采用分子生物学方法,如聚合酶链反应(PCR)、基因测序等,无法作为常规方法.为此,我们用萘啶酸预测gyrA基因突变进行了探讨,现报告如下.一、材料与方法1.菌株:从病房和门诊病人送检标本分离63株临床菌株,其中对萘啶酸、环丙沙星均敏感24株;萘啶酸耐药、环丙沙星敏感或低水平耐药17株;萘啶酸、环丙沙星均耐药22株.1株标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922,萘啶酸、环丙沙星均敏感.2.药敏采用纸片扩散(K-B)法:药敏纸片、M-H培养基均为OXOID产品.药敏结果按美国临床实验室标准化委员会1999年标准判断.3.基因检测:PCR扩增,喹诺酮类耐药决定区(QRDR)引物按文献[3],引物1为5′-GAGGAAGAGCTGAAGAGCTCCT-3′,引物2为5′-CCGGTACGGTAAGCTTCTTCAA-3′,由中国军事医学科学院合成;Hinf
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上海地区人巨细胞病毒核酸检测的室间质量评价分析
人巨细胞病毒( human cytomegalovirus,HCMV)是属于疱疹病毒β亚科的线状双链DNA病毒,在人群中的感染相当普遍。对免疫功能正常者,HCMV感染常呈潜伏感染而无明显临床症状,但对于免疫力低下(如婴幼儿)或者免疫受抑制者(如器官移植等),通常会造成严重损伤乃至死亡[1-2]。快速准确的诊断早期HCMV感染并进行抗病毒治疗监测,是有效预防和降低HCMV疾病发生率和死亡率的关键。实时荧光定量PCR(real-time PCR)具有特异性强、灵敏度高、定量准确等优点,特别适用于机体HCMV病毒载量动态变化的监测,目前已广泛用于临床HCMV感染性疾病的检测中[3-6]。但近国外多中心研究表明实验室间HCMV核酸检测结果存在显著差异,这在很大程度上影响了real-time PCR在HCMV DNA检测中的临床应用[7-9]。本研究拟选用HCMV质控品( AD169)作为室间质评样本,首次用于上海地区临床实验室HCMV DNA室间质量评价中,以期评估临床实验室检测结果的一致性,终促进HCMV核酸检测质量的提高。
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国产乙型肝炎人免疫球蛋白在HBsAg中和确认试验中的应用价值
HBsAg是诊断和治疗HBV感染者及判断其传染性的重要依据.目前,我国临床实验室多采用ELISA检测HBsAg,而从标本采集到检验操作的各环节诸多因素都可导致ELISA 出现假阳性[1-3].由于国内少见ELISA的HBsAg确认试剂盒供应,至今少有实验室在日常工作中做HBsAg确认试验.HBsAg中和确认试验通常以HBsAb封闭抗原决定簇来确认HBsAg检测的特异性.
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临床实验室胸腔积液标本的分析前质量控制影响因素探讨
胸腔积液标本的生化分析是临床胸腔积液患者诊断中不可或缺的一项指标,而从样品收集到分析过程之间的标准化,即分析前质量控制对保证检测结果质量至关重要.目前常用的胸腔积液生化检测项目包括总蛋白(total protein,TP)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)、葡萄糖(glucose,GLU)、腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)、胆固醇(total chlesterol,TC)、三酰甘油(triglycerides,TG)等.本研究假定在标本的采集与运送等条件适宜的情况下,评估分析前过程的不同储存温度及储存时间对胸腔积液标本常用检测项目测定结果稳定性的影响,从而探讨分析前质量控制的潜在影响因素,为进一步做好分析前质控及临床应用提供参考.
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急性白血病实验室诊断分型程序
急性白血病(AL)的诊断除依据临床症状、体征与血象外,骨髓细胞形态学分类是确诊AL的主要依据之一.急性白血病因分型不同,采用的治疗方案不同,疗效和预后也不同.因此,正确诊断分型非常重要.在日常工作中,急性白血病的诊断分型常因骨髓取材、制片或经验不足而造成漏检,也可能由于染色、形态学鉴别能力或未按程序进行而致误诊,从而引发医疗纠纷.在"举证倒置"情况下,应做到程序明确,证据充足.为了进一步提高急性白血病的实验室诊断水平,减少医患之间的矛盾,我们参照国际血液学标准化委员会(ICSH)[1]、英国血液学标准制定委员会(BCSH)[2]及欧州白血病免疫分型研究组(EGIL)推荐的方法,结合我国国情,提出适合基层临床实验室急性白血病诊断分型程序.
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临床实验室危急值报告制度的建立
危急值( critical values)是指一旦出现这样的检验结果,就需要将其立刻报告给临床医师,以便其立刻采取相应的治疗措施;否则将会因为错过佳的治疗时机而使患者的生命安全受到威胁[1].但是,仍有很多临床实验室在实际操作中存在一定困惑.本文将从危急值项目选择、界限设置、及时性等方面进行阐述,以期为我国临床实验室提供一些建议.
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参考区间研究现状概述
临床实验室的作用是通过必要的实验过程为就诊者疾病的诊断、治疗、预后和筛查提供信息.要发挥以上作用,检测结果就需要一个参考区间作为评价标准,任何缺乏参考区间的检测结果都是没有临床意义的,因此分析物的参考区间无论对临床医师、患者还是检验人员都至关重要.现将参考区间的研究现状做一介绍.
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临床实验室全自动化系统检验流水线的建立与应用
全实验室自动化(total laboratory automation,TLA)又称全程自动化(front to end automation) 是将临床实验室中各种独立的自动化仪器以特殊的物流传送设备串联起来,在信息流的主导控制下,构成流水线作业的组合,形成大规模的全实验室常规检验过程的自动化,国内也有称临床实验室自动化检验流水线[1,2].
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临床检验实验室自动化流水线的应用
全实验室自动化是将临床实验室中各种独立的自动化仪器以特殊的物流传送设备串联起来,在信息流的主导控制下,构成流水线作业的组合,形成大规模的全实验室常规检验过程的自动化[1],国内也有称临床实验室自动化检验流水线,本院引进实验室生化免疫流水线,配置为样本前处理单元(样本进样平台、离心、揭盖);全自动免疫化学发光分析仪2台;全自动生化分析仪3台;样本存放平台;轨道及轨道连接器5台.通过近三年的使用,我们对自动化流水的价值有了全新的认识.
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临床实验室危急值的建立与应用
临床实验室的职能就是准确、迅速、及时地为临床医生提供具有诊断意义的检验信息和数据,因此,异常检验结果的处理及"危急值"的建立就显得尤为重要.所谓检验"危急值"也被称为"panic value"[1],即当这种检验结果出现时,这说明患者可能正处于危险的边缘状态,此时如果临床医生能及时得到检验信息,迅速给予患者有效的干预措施或治疗,就可能挽救患者生命,否则就有可能出现严重后果,失去佳抢救机会.所以,"panic value"是表示危及生命的检验结果,故把这种检验数据称为危急值(critical value).这种"危急值"制度的建立是<医疗事故处理条例>举证中的重要部分,也是临床实验室认可的重要条件之一.
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临床实验室获得性感染
临床实验室工作者处理的是具有潜在感染性的患者标本,这使他们处于实验室获得性感染(LAI)的危险中.LAI指由实验室工作导致的感染,它可以发生在实验室工作者,也可以发生在暴露于实验室环境的其他人.
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白族老年人血细胞分析参数的调查研究
血细胞分析是医学检验的基础,是临床实验室常用的检验指标,它在疾病的诊断、治疗及疗效观察中具有重要的作用.近年来以静脉血为标本的自动血细胞分析仪的普及,极大地提高了血细胞检测的水平,但临床医师分析检验报告仍普遍引用手工法末梢血的正常参考值,由于采血部位和检测方法的不同导致血细胞检测结果存在着差异.