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肝脏谷胱甘肽的高效液相色谱法测定
谷胱甘肽为一广泛存在于细胞内的小分子三肽化合物,其还原型(GSH)与氧化型(GSSG)在相关酶作用下可相互转换而构成细胞内重要的氧化还原缓冲对,在毒物代谢、拮抗脂质过氧化损伤过程中发挥重要作用,并参与维持蛋白质结构和功能、氨基酸转运、糖代谢、细胞信号传导调控等多种生理过程,是卫生毒理、职业临床、肿瘤、心脑再灌注损伤等研究中的重要参数[1],对化合物毒性评估、中毒机制的探讨可提供重要的信息 [2].高效液相色谱(HPLC)具有灵敏性高、专一性强等特点,可同时检测GSH、GSSG, 但国内未见采用,现介绍如下.
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气相色谱法同时检测4种有机物质
目的采用气相色谱法热导池检测器,利用它们的极性选择适当条件,分离和检测空气样品中.丁酮、甲基异丁酮、环己酮和甲苯4种.方法采用氮气作为载气,流量为55 ml/min,柱温为100℃,以保留时间进行定性,校准曲线法进行定量.结果该方法标准偏差为0.02,变异系数(CV)为、0.14%,丁酮、四基异丁酮、环己酮和甲苯的回收率分别为98.7%、103.7%、102.2%和100.5%.结论方法简便、快速,适用于劳动卫生监测.
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糖肾平对糖尿病小鼠基因表达的调控作用
中药药理研究是目前中药现代化研究的瓶颈之一.由于中药是群体化合物,相对西药复杂化,具有多效性、多途径、多靶点的特点,对其中不同成分功能效果的解读是一个极其浩大的工程,利用目前的研究手段无法解决这一问题.基因芯片具有高通量,同时检测成千上万个基因表达的水平,将其运用于中药药理的研究日益得到关注,本实验即利用该技术探讨中药糖肾平对糖尿病小鼠肝脏和肾脏两个重要代谢器官基因表达水平的调控情况及相关信息研究.
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和胃饮合剂中橙皮苷和厚朴酚的HPLC测定
和胃饮合剂由党参、白术、陈皮、厚朴等10味中药组成,补泄兼施,辛散消痞,益气健脾、和胃降逆,主治功能性消化不良,疗效显著.陈皮、厚朴为本方的主药,其活性成分为橙皮苷和厚朴酚.因此本实验参考文献报道[1,2]采用HPLC法建立了在同一色谱条件下同时检测和胃饮合剂中橙皮苷、厚朴酚的测定方法,方法简单易行、快捷、重现性好.
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麦加朝圣者回国后中东呼吸综合征冠状病毒的流行情况
中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)于2012年在阿拉伯半岛流行,造成超过800人感染。为了解麦加朝圣者返回各自国家后MERS-CoV感染的流行情况,有研究者进行了一项横断面调查研究。研究人员对839名返回加纳阿克拉的成人非洲麦加朝圣者进行了研究分析,主要指标包括:呼吸综合征症状以及MERS-CoV、鼻病毒(HRV)、呼吸道合胞病毒(RSV)和甲型流感病毒(FLU A)的感染情况。结果显示:共有651名研究对象(77.6%)有呼吸综合征症状,其中179人(21.3%)至少有除MERS-CoV以外的病毒感染检测呈阳性(有症状者中22.4%病毒感染检测呈阳性,无症状者中有17.6%病毒感染检测呈阳性)。尽管常见的呼吸道病毒在麦加朝圣者中检出率很高(HRV为16.8%、RSV为5.1%、FLU A为1.3%),但无一例检测出MERS-CoV。有16人(1.9%)检测出2种或以上的病毒,其中14人(1.7%)同时检测出RSV和HRV,2人(0.2%)同时检测出FLU A和HRV。研究人员据此得出结论:无论有无症状,麦加朝圣者呼吸道病毒感染的概率还是很高的,尽管此次研究并没有发现麦加朝圣者回国后出现MERS-CoV感染,但有必要对其进行密切跟踪。
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全脑缺血再灌注大鼠血液中血小板活化因子的变化
血小板活化因子(PAF)是目前发现的强的血小板聚集物,可能参与了脑缺血的病理过程[1].然而,由于血液中含有PAF乙酰水解酶,后者可使PAF迅速水解,使血中PAF难以捕捉,因此,我们用高效薄层层析法检测全脑缺血大鼠血液PAF,以了解PAF在脑缺血时的变化;同时检测血浆白细胞介素6(IL6)、白细胞介素8(IL8)水平,以探讨这些细胞因子的相互作用.
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洛赛克加抗生素三联疗法根除HP前后慢性胃炎的胃固体排空
幽门螺杆菌(helicobacter pylori,HP)与功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)及胆汁反流性胃炎(bile reflux)的胃排空关系早有报道,但HP阳性慢性胃炎有否胃排空异常及根除HP前后胃排空有否变化目前尚无报道.本研究通过 13CO2-辛酸呼气试验法和硫化锝胶体核素法同时检测HP阳性的慢性胃炎HP根除前固体胃排空.用洛赛克、氟莱莫星、痢特灵三联根除治疗后用13CO2-辛酸呼气试验复查因体胃排空,探讨HP与胃排空的相关性,指导临床用药.
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日本2型糖尿病肾病不与醛糖还原酶基因上游的双核苷酸重复多态性相关而与红细胞醛糖还原酶浓度有关
已发现醛糖还原酶(ALR2)基因位于染色体7q35,其2.1 kb上游双核苷酸重复多态性与中国人2型糖尿病及高加索人1型糖尿病中糖尿病性视网膜病变及糖尿病肾病的早期发病相关.本研究在大样本日本2型糖尿病人中同时检测了作为ALR2组织表达标志的红细胞内ALR2的蛋白浓度和ALR2基因的双核苷酸重复多态性的基因型.
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凝集素FRIL体外维持造血干/祖细胞长期活存的机制初探
一种新发现的豆类凝集素FRIL(Flt3 receptor-interacting lectin)可以在离体条件下长期维持造血干/祖细胞的活存[1].FRIL与FL(Flt3 ligand)共用一个受体Flt3,在离体条件下,通过与FL的对照使用,培养28 d FRIL具有相对更高的维持造血干/祖细胞多潜能性的能力.同时检测了FRIL及FL作用过程中几个基因的表达情况,并对应它们的功能进行了分析.
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多种血小板特异性抗体联合检测在特发性血小板减少性紫癜诊断中的价值
特发性血小板减少性紫癜(ITP)是一类由体液和细胞免疫异常导致血小板破坏增多的疾病[1,2].血小板自身抗体对ITP的诊断及探讨ITP的发病机制具有重要意义.我们采用单克隆抗体(单抗)特异性俘获血小板抗原(MAIPA)技术并加以改进,同时检测了ITP患者5种血小板糖蛋白(GP)特异性抗体,评价其对ITP的诊断价值.
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同时检测WT1和mdr1基因多重荧光实时定量PCR标准品的构建
绝大多数急性白血病患者存在WT1基因异常高表达,其异常表达程度也与难治复发白血病有关,并可作为"泛白血病"标志检测指标监测微量残留病(MRD)[1-3].近有研究发现急性白血病mdr1和WT1基因表达水平有明显的相关性[4],但目前国内外研究一般是分别对WT1和mdr1基因进行单独检测,操作繁琐且不能准确了解同一标本两者的关系.多重荧光实时定量PCR是指在PCR体系中加入多个荧光基团,设计不同的引物在同一反应体系中同时对多个靶基因分子进行扩增,通过连续监测不同荧光信号强度的变化来实时监测不同待测基因的表达量,后通过标准曲线对不同未知起始模板进行定量分析的方法.
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线性扩增介导的PCR方法用于检测慢病毒载体在白血病细胞基因组中插入位点的可行性
目前,病毒载体基因转导技术是基因治疗中为成熟的生物学方法,其中逆转录病毒载体,因其具有可直接整合于宿主细胞基因组并能够长期稳定表达的特点而成为临床基因治疗的核心技术,分析病毒载体在宿主染色体中插入位点的常用方法包括Southern blot、RT-PCR等,这些方法均需要足量含高拷贝数已整合有病毒载体的样本DNA以获取有用的序列信息,且受到靶序列的大小、位置及构象的限制,故其灵敏度较差.目前可用于同时检测低拷贝数、多处未知DNA插入位点旁序列的精确灵敏的方法是线性扩增介导的PCR(linear amplification-mediated PCR,LAM-PCR)法[1,2],我们探讨了该技术用于分析检测慢病毒载体(lentiviral vector)在人白血病细胞基因组中插入位点旁序列的可行性.
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基因芯片法诊断地中海贫血
ThalaChipTM是一种基于DNA芯片技术识别中国地区已知地中海贫血(珠蛋白合成障碍性贫血,地贫)基因型的新技术,专为快速检测α和β珠蛋白基因中的DNA缺失和突变而设计的,能够同时检测中国地区常见的-α3.7、-α4.2和-SEA 三种α地贫[1],以及21种β珠蛋白基因点突变[2],覆盖率达到β地贫的98%.我们对经初筛确诊或可疑地贫患者的血液标本首先用传统的PCR技术或PCR联合反向点杂交技术(PCR/RDB)作基因检测,再与基因芯片技术检测结果进行比较,用DNA直接测序法鉴定差异结果.
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测定妊娠期、流产后期妇女及男子精浆中滋养层β1-糖蛋白
滋养层β1-糖蛋白(TBG)是胎盘胎儿部分及滋养细胞肿瘤标志物.为研究TBG诊断妊娠及其并发症的可行性,896例年龄18~35岁,妊娠3~20周妇女纳入研究,其中生理妊娠(PP)200例,先兆妊娠发育停止(TPI)534例,妊娠终止后54例,人工流产后78例,药物流产30例.同时检测90例26~45岁男子精浆(有病理改变者50例,无病理改变者40例)TBG浓度.
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大肠癌ras癌基因、p53抑癌基因突变与临床研究
大肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发生发展是一个多基因多阶段的变化过程.其中癌基因突变激活及抑癌基因失活起重要作用.近年研究表明,K-ras癌基因激活和p53抑癌基因突变或缺失与大肠癌的发生及发展密切相关.本文以聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析法同时检测了大肠癌K-ras、p53基因突变,旨在探讨两者间的相关性及其与大肠癌患者临床、病理特征的关系,从分子生物学水平探讨大肠癌的发病机制.
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组织多肽特异抗原测定对乳腺癌诊断及治疗监测的应用
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,提高对乳腺癌的诊断符合率是增加病人治愈率的重要手段.组织多肽特异抗原(TPS)是目前用于乳腺癌诊断的一种新型的肿瘤血清标志物.该方法是对血清中的人体细胞角质蛋白18可溶性的片断M3表型进行测定[1].为观察该试验对乳腺癌的诊断作用,我们对部分住院病人血清TPS进行了检测,同时检测糖类抗原15-3(CA15-3),以研究其对乳腺癌诊断的应用价值.
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CTn-I、Mb 及 CK-MB同时检测对判定溶栓再通的价值
以往AMI后溶栓再通的生化判定指标主要借助血清心肌酶的动态检测[1],但是心肌酶的峰值监测时间长,尚需在很长时间内连续多次检测,给临床带来很多困难.测定血清CTn-I、Mb及CK-MB作为诊断AMI后溶栓再通的指标,不但缩短时间,提高检测敏感度、准确度,且具有较高的特异性.
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尿微量蛋白与尿NAG联合诊断糖尿病患者肾脏早期损害
为探讨早期诊断糖尿病患者肾脏损伤的方法。我们收集2000年3-5月诊断为糖尿病的患者65例,对照组38例。1 检测项目及方法取任意中断尿3ml,离心后取上清液,采用ELISA法检测尿微量白蛋白(mALB)、尿转铁蛋白(TRF)和尿β2微球蛋白(β2-MG),终点法检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG)和尿肌酐。2 结果正常对照组尿TR/Cr为(0.108±0.068)mg/mmol,mALB/Cr为(1.69±0.76)mg/mmol,β2-MG/Cr为(15.6±7.56)μg/mmol,NAG/Cr为(12.66±5.35)U/g。尿蛋白定性阴性的糖尿病患者尿TRF/Cr、mALB/Cr、β2-MG/Cr及NAG/Cr较正常对照组增高(P<0.01)。尿蛋白定性阳性的糖尿病患者的TRF/Cr、mALB/Cr、β2-MG/Cr及NAG/Cr值较阴性组显著增高(P<0.01)。TRF与mALB之间r=0.62,t=5.05,P<0.05;TRF与β2-MG之间r=0.54,t=4.25,P<0.05;TRF与NAG之间r=0.56,t=4.65,P<0.05;mALB与NAG之间r=0.57,t=4.56,P<0.05;NAG与β2-MG之间r=0.66,t=4.86,P<0.05;TRF、mALB、β2-MG及NAG四者呈正相关。单项及双项检测TRF、mALB、β2-MG或NAG低于四项指标同时检测的阳性率,四项指标联合检测在糖尿病中阳性率可达92.3%。3 讨论66.7%的糖尿病患者在尿蛋白定性阴性时尿中β2-MG和NAG水平已较对照组增高,提示在糖尿病肾损伤早期发生肾小管损伤,尿蛋白定性阴性的糖尿病患者,尿TRF、mALB、β2-MG及NAG单项检测低于四项指标同时检测的阳性率,两项联合检测阳性率提高不显著,而将TRF、mALB、β2-MG及NAG四项联合检测在糖尿病中阳性率可达92.3%,较单项及双项检测提高显著。故联合检测尿TRF、mALB、β2-MG和NAG是诊断肾脏早期损害灵敏、可靠及作为监测预后的实验室指标,且方法简便、快速,采样方便、无创伤性。
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幽门螺杆菌感染三种检测方法的初步评价
选择1997年7月-1999年6月收治的276例慢性胃病患者,采用胃粘膜组织的病理切片染色(Warthin-starry,W-S)和快速尿素酶试检(Hput)以及唾液的HP-PCR法三种方法同时检测幽门螺杆菌(HP),并进行比较.三种方法检出率分别为52.2%,67.4%,76.1%.HP-PCR与W-S和GPUT相比有极显著性差异(P<0,01).与胃粘膜HPUT.W-S染色比较,HP-PCR方法灵敏度高(84.2%),特异度稍低(66.7%).因此,对有上消化道症状而不愿耐受,镜检查的患者,可应用唾液PCR检测;亦可用于大规模的HP流行病学调查;口腔内存在HP,可成为胃内HP根治后再感染的原因之一;人有可能是HP的传染源,HP经口与口途径传播:因此,唾液HP-PCR的检测更有意义.
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采血对血凝检测结果的影响
在生理条件下血液是-流动的液体,处于凝血和抗凝的动态平衡,如这一平衡破坏血液将会在血管内凝固。为了解血液所处的凝固状态,即纤维蛋白原、凝血因子的含量和活性水平.设计了一系列检测血液凝固状态的实验。血液所处的凝固状态依靠实验数据来评价,实验数据是观察血液凝固状态的唯一依据,检测的科学性与准确性至关重要。如何控制采血对血凝结果的影响还未见有报道。为防止由于采血对结果造成误差,我们对同一患者标本加入不同比例的抗凝剂,利用同一实验仪器同时检测,观察检测结果的变化。