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乙型脑炎病毒毒力基因定位的研究进展
乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)属于黄病毒科(Flaviviridae),简称乙脑病毒.该病毒能引起人类的急性脑炎,致死率在20%左右,另有50%的患者会遗留神经系统方面的后遗症.乙脑病毒流行于亚洲及太平洋地区,有季节性的特点,一般蚊虫滋生的7、8、9月是其发病高峰期.每年在亚洲的乙脑病例有50 000例左右,其中致死的有上万人之多,是亚洲公共卫生的一个大问题[1],因而对乙型脑炎病毒功能与结构的研究,尤其是对影响其毒力的功能域的定位,多年以来都是研究的热点.
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ARID1A基因突变体的构建及其在肝癌细胞中的过表达鉴定
目的 构建人类染色体重塑复合物SWI/SNF(Switch/Sucrose NonFermentable)中重要组份ARID1A(A-T rich interaction domain)的突变过表达载体,并检测野生型ARID1A基因及突变型ARID1A基因在肝癌细胞株HepG2中的表达情况.方法 采用overlap PCR技术构建在野生型质粒pcDNA6-ARID1A基础上构建结构域缺失突变体pcDNA6-ARID1A/△ARID以及pcDNA6-ARID1A/△DUF3518;利用脂质体转染技术将野生型质粒以及构建的突变型质粒转染到肝癌细胞HepG2中进行过表达;通过Real-time PCR以及Western blot技术对野生型及突变型ARID1A在肝癌细胞中的表达情况进行鉴定.结果 经双酶切后SDS-PAGE分析以及测序验证,成功构建了真核表达载体pcDNA6-ARID1A的突变型质粒pcDNA6-ARID1A/△ARID以及pcDNA6-ARID1A/△ DUF3518;通过Real-time PCR以及Western blot的方法验证,ARID1A及ARID1 A/△ARID在肝癌细胞株HepG2中成功过表达,而ARID1A/△ DUF3518蛋白可能降解.结论 成功构建ARID1A功能域缺失型突变体,并在肝癌细胞株HepG2中稳定过表达ARID1A及ARID1A/△ARID;ARID1A/△ DUF3518蛋白的缺失暗示DUF3518结构域可能起着稳定蛋白结构的功能.
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乙型肝炎病毒DNA聚合酶蛋白中RNase H研究进展
乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒的一种,HBVDNA的长度为3.2kb,具有4个开放读码框架(ORF),分别编码HBV的表面抗原蛋白、核心/e抗原蛋白,X蛋白以及HBV DNA聚合酶(HBV DNA P)[1].HBV DNA P基因在ORF中长,并且与C、S、X基因区有重叠,其编码的P蛋白含有3个功能域和1个无意义的隔离片(spacer),目前对聚合酶及其所编码的各个功能区域蛋白质的功能的认识虽然还不是很清楚,但已经取得了一定的进展.
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乙型肝炎病毒DNA聚合酶末端蛋白研究进展
0引言乙型肝炎病毒(HBV)是嗜肝DNA病毒的一种,HBVDNA的长度为3.2kb,具有4个开放读码框架(ORF),分别编码HBV的表面抗原蛋白,核心/e抗原蛋白、X蛋白以及HBV DNA聚合酶(HBV DNA P)[1].HBV DNA P基因在ORF中长,并且与C、S、X基因区有重叠,其编码的P蛋白含有3个功能域和1个无意义的隔离片(spacer,SP),排列顺序为N-末端蛋白(TP),隔离片,RT/DNA聚合酶和RNase H.由于受到不能从病毒体直接纯化和在不同的系统中表达有活性酶的限制,目前对聚合酶及其所编码的各个功能区域蛋白质的功能的认识还不是很清楚.
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MYH7基因突变功能域与肥厚型心肌病临床表型关联研究
目的 明确是否MYH7突变所在功能域与肥厚型心肌病(HCM)患者的临床表型相关.方法 入选既往前瞻性HCM队列中基因检测发现携带MYH7基因突变的患者,根据基因型分为3组:仅携带1个MYH7头部或颈部功能域突变的患者、仅携带尾部功能域突变的患者和携带多个致病突变的MYH7阳性患者.比较3组患者间基线临床特征及临床结局的差异.结果 我们总计在110例HCM患者中发现86种突变,其中84种(97.7%)为错义突变,41种(47.7%)位于心脏β-肌球蛋白重链头部功能域,24种(27.9%)位于颈部,21种(24.4%)位于尾部功能域.在所有MYH7突变阳性患者中,23例(20.9%)患者携带MYH7复合突变或携带其他肌小节致病突变.三组患者在入组时其基线临床表现无显著差别.在平均5.3±3.8年随访期间,较只携带尾部功能域的患者,只携带MYH7头部或颈部功能域突变的患者发生心血管死亡的风险和发生全因死亡的风险均没有显著增加.但是携带多个致病突变的MYH7阳性患者发生心血管死亡风险(校正后HR 7.27,95% CI 1.68-31.36,P=0.008)和全因死亡风险(校正后HR 7.56,95% CI1.97-29.09,P=0.003)的风险较仅携带单个MYH7突变的患者显著增加.结论 MYH7基因突变所在结构域与HCM临床表现及预后没有显著相关性.携带多突变的MYH7突变阳性患者心血管死亡风险增加.
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结缔组织生长因子在椎间盘退行性病变过程中的机制研究
1结缔组织生长因子(CTGF)的结构域和功能:CCN 家族由6名成员组成,每个家族成员都包含4个保守的功能域。每个功能域能够独立性和合作性的发挥CCN 家族成员的整体功能。胰岛素样生长因子结合蛋白功能域和von Wille-brand 因子C(von Wille-brand factor C VWC)同时被绑定到聚集蛋白聚糖。VWC 域还结合骨形态发生蛋白和转化生长因子β,整合素和基质金属蛋白酶。
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Embelin对大肠癌细胞株SW480细胞增殖和肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体敏感性的影响
Embelin是从植物Embelia ribe中提取的具有抗肿瘤、抗炎等生物活性的化合物,可通过与X连锁凋亡抑制蛋白(X chromosome-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)蛋白BIR3功能域的结合阻止XIAP抑制caspase的活性[1].本研究首先观察embelin本身对大肠癌细胞株SW480增殖和凋亡的影响,并初步分析其作用机制.此外,embelin作为XIAP的拮抗剂和可能作用于多个分子靶点的植物提取物,研究其能否有效增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导SW480细胞的凋亡性死亡.
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尿酸对帕金森病患者不同认知功能域影响分析
帕金森病(Parkinson's disease,PD)认知功能损害近年来受到人们的关注,大约40%的PD患者会发展为痴呆,发生率高于健康人群6倍[1-2],但目前其确切发病机制还不清楚.有研究显示,氧化应激损伤在PD认知功能损害中起到重要作用.低血尿酸水平人群的PD发病率显著升高,高血尿酸水平人群的PD发病率显著降低,PD患者组尿酸水平低于健康对照组[3-4].
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极低密度脂蛋白受体与脂代谢研究进展
极低密度脂蛋白受体(very low density lipoprotein receptor,VLDLR)是一种细胞膜表面的蛋白质,它主要负责结合和内移含载脂蛋白E的脂蛋白,如极低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL),向肝外组织提供甘油三酯作为能量来源.早在20世纪80年代初期,同济医科大学冯宗忱等人就发现了VLDL可以被巨噬细胞摄取、降解,推测可能存在自身受体代谢途径,提出了"VLDLR假说".1992年,Takahashi等成功的克隆了兔的VLDLR,并且阐明了其氨基酸序列和功能域.1994年,Sakai等[1]成功的分离了人的VLDLR基因,分析了其结构和染色体定位.目前,随着人们对VLDLR的研究不停的深入,已经逐步认识到该受体对脂代谢紊乱,动脉粥样硬化,胰岛素抵抗方面有着重要的影响,并且开始运用分子生物学的技术挖掘它的治疗潜力.
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正常核型急性髓系白血病患者BAALC基因的表达和临床意义
BAALC(脑和急性髓系白血病·胞质)基因定位于染色体8q22.3,其DNA序列和表达在哺乳动物中高度保守,主要表达在神经外胚层来源的组织及造血前体细胞中,成熟的骨髓和外周血单个核细胞不表达,编码的蛋白不与任何已知的蛋白或功能域同源,其功能尚不清楚.
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BAG-1基因与肿瘤
BAG-1基因是BAG基因家族的重要成员,于1995年发现[1],可以通过其功能域与多种信号因子(如Bcl-2,热休克蛋白Hsp70和Hsc70,RAF-1激酶等)相互作用,目前已成为生命科学领域的研究热点.因此,深入研究BAG-1基因结构、功能及其分子调控机制,对揭示细胞生长调控机理及肿瘤发生机制和探索新的肿瘤治疗方法均具有重要意义[2].
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胰岛素生长因子-1与其受体的相互作用
胰岛素生长因子1(IGF-1)由70个氨基酸组成,其初级结构从N端到C端可以分为B、C、A、D 4段或称4个功能域.
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解聚素-金属蛋白酶家族剪切活化作用及其研究
解聚素-金属蛋白酶 (a disintegrin and metalloprotease,ADAM)又名MDC(Metalloprotease Disintegrin Cysteine-rich),是近年来发现的一类具有多个功能区的细胞膜表面糖蛋白家族,大约由800多个氨基酸残基组成.典型的ADAM蛋白其蛋白序列含保守的具有多个特征性的功能域,从N肽基端到C肽基端依次为信号肽区域、前调控区域、金属蛋白酶区域、解聚素区域、富半胱氨酸区域、上皮生长因子区域、跨膜区域和胞内区的细胞表面糖蛋白区域[1].
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肉毒毒素B不同功能表位肽疫苗联合免疫的协同保护作用
肉毒毒素疫苗是防治肉毒中毒发生的重要预防制剂.前期研究发现,针对不同功能表位的中和保护抗体的联合应用具有协同作用.据此推测不同功能表位的多肽疫苗联合免疫也有协同保护作用.为证实该设想,我们结合结构生物学的结果,确立了分别针对BoNT/B上不同功能域的功能表位肽的序列P1(轻链底物结合域)P2(重链蛋白受体结合域)和P3(神经节苷脂结合域),并以此为疫苗,在小鼠体内证明了不同功能表位肽疫苗的联合免疫能够将多肽疫苗的免疫保护效果提高125倍.结果表明,不同功能表位肽疫苗的联合免疫具有显著的协同抵抗BoNT/B攻击的作用.
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去整合素金属蛋白酶家族与肿瘤的关系的研究进展
去整合素金属蛋白酶家族(a disintegrin and metalloproteinase,ADAMs)为Ⅰ型跨膜蛋白(含锌蛋白酶总家族),也称为金属蛋白酶解聚素(metalloproteinase-like,disintegrin-like,cysteine-rich,MDC),是一类锚定于细胞膜表面的糖蛋白家族,可以促进肿瘤的增殖、侵袭及转移[1].目前发现的ADAM已超过30种[2].1 ADAM家族的结构特征该家族成员通常由800~1200个氨基酸组成,含有多个结构域,分别是N末端信号域、前导域、类金属蛋白酶功能域、去整合素功能域、半胱氨酸富集域、类表皮生长因子功能域、锚定于细胞膜上的跨膜域和C端的胞质尾区[3].
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BNP的临床应用价值
B型钠尿肽(Brain natriuretic peptide,BNP,又称脑钠素)是继心钠素(ANP)后利钠肽系统的又一成员,由于它首先是由日本学者Sudoh等于1988年从猪脑分离出来的因而得名[1],而实际上它主要来源于心室.BNP是一个由32个氨基酸残基构成的多肽类神经激素,分子量为3500.其氨基端第7位和第23位氨基酸残基(均为半胱氨酸)通过二硫键形成一个环型结构,此即为BNP的功能域.BNP通过此构象与其相应的受体结合,在诸多病理生理过程中发挥作用.
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驱动蛋白分子Kif18A各功能域细胞定位的研究
目的 探讨人驱动蛋白分子Kif18A的各功能域在真核细胞中的定位.方法 构建驱动蛋白分子Kif18A野生型及各功能域(马达区、杆状区、尾区和马达区含部分杆状区)的绿色荧光蛋白表达质粒,分别转染人乳腺癌细胞MCF7,运用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹法验证各蛋白的表达,免疫荧光染色法分别对细胞进行微管蛋白和DNA染色,荧光显微镜下观察各绿色荧光融合蛋白的具体亚细胞定位.结果 有丝分裂间期,Kif18A蛋白分子的马达区绿色荧光沿微管分布,尾区在细胞核和微管上均有分布,杆状区则散在分布在胞质中;有丝分裂末期,Kif18A的马达区仍沿微管分布,而马达区含部分杆状区主要集中在中体部位.结论 Kif18A蛋白分子的马达区和尾区与微管共定位;尾区含核定位序列;马达区和杆状区共同作用才能使该蛋白在有丝分裂末期定位于中体.
关键词: 人驱动蛋白分子Kif18A 功能域 人乳腺癌细胞MCF7 细胞定位 -
成人型多囊肾白勺诊断与治疗
先天性多囊肾是一种遗传性疾病,常可以分为常染色体显性遗传多囊肾即成人型多囊肾和常染色体隐性遗传多囊肾即婴儿型多囊肾。婴儿型多囊肾患者常早期夭折。成人型多囊肾早期无任何症状,大都至40岁以后才出现症状。现就成人型多囊肾的病因、诊断和治疗情况综述如下。1 成人型多囊肾的病因 随着分子遗传学的发展,成人型多囊肾的病因研究有了突破性进展,研究表明,成人型多囊肾的基因定位于16 p 13,它与血红蛋白(Hb)的α链基因、磷酸羟乙酸磷酸酶(PGP)基因、羟酰谷胱甘肽水解酶(HAGH)基因以及在α基因3′端的高变区重复顺序紧密连锁。它们在16号染色体短臂上的排列顺序是:染色体端粒-Hb α-3′HVR APKD/PGP/HAGH-着丝粒[1]。其转录本全长14 148 bp,有46个外显子,跨越52kb长度的基因组DNA。这种基因蛋白即polycystin,是一种糖蛋白,具有多个转膜功能域和一个细胞质内C端尾,N端细胞外区域由多于2 500个氨基酸组成,其中包括富含亮氨酸的重复区、C型凝集区、16个免疫球蛋白样重复区和4个与Ⅲ型的纤连蛋白有关的功能域,它是一个完整的细胞膜蛋白,与细胞和细胞、细胞和基质之间的相互作用及形态发生有关[2]。 Germino的研究[3]还表明,上皮细胞生长的异常调节可能导致了多囊肾的发生。单个异常基因激发了一连串的基因异常表达,使肾小管上皮细胞分化停止于某一特殊的状态,既未达到分化终了(成为正常上皮细胞而发挥吸收功能),也未达到完全的反分化(失去上皮形态而导致实体肿瘤形成),而是形成紧密的单层上皮,并分泌液体使囊肿充盈并增大。
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抗前列腺特异抗原/抗CD3双特异性单链抗体四聚体的制备
本实验旨在构建人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因和抗前列腺特异抗原/抗CD3双特异性单链抗体的基础之上[1],进一步制备该双特异性单链抗体的四聚体.
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NF-кB激活的信号传导机制研究进展
1986年,Baltimore.D在成熟B细胞核提取物中发现一种与免疫球蛋白к轻链基因的增强子中特定DNA位点结合的蛋白,命名为核转录因子( NF-кB). NF-кB初被认为是淋巴特异性的,后来发现其广泛存在于各种细胞中. NF-кB能被多种因素激活,包括细胞因子TNFα、IL-1,细菌脂多糖,T细胞白血病病毒表达的Tax蛋白(HTLV-1),佛波脂,紫外线等等.激活的NF-кB参与调节免疫、炎症反应,粘附分子的表达,生长控制以及细胞凋亡的过程.本文就NF-кB激活的信号传导机制的研究进展作一综述.1 NF-кB/Rel蛋白及其IкB抑制蛋白到目前为止,在哺乳动物细胞中发现5种NF-кB/Rel家族成员:RelA(p65),RelB,C-Rel,NF-кB(p50),NF-KB2(p52).它们都拥有与Rel基因(原癌基因)的编码产物相似的Rel同源区.Rel同源区大约由300个氨基酸组成,内含DNA结合功能域、二聚体化功能域及核定位信号(NLS).RelA(P65)、RelB、C-Rel,除Rel同源区外,尚有一个或多个转录活性区域.NF-кB是由亚单位p50和p65组成的异源二聚体,p50与DNA直接结合,p65具有转录活性.静息状态下,NF-кB和抑制性蛋白IкB结合滞留于细胞浆中,在一定刺激作用下NF-кB释放进入细胞核激活靶基因.目前发现的NF-кB抑制蛋白有IкBα、IкBβ、IкB(p105)、IкBσ(P100)、IкBε及Bcl-3,构成IкB蛋白家族.IкB蛋白的共同特点是存在多个紧密相邻的由33个氨基酸组成的重复序列,称为锚蛋白基序(ankrin