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ARID1A基因突变体的构建及其在肝癌细胞中的过表达鉴定
目的 构建人类染色体重塑复合物SWI/SNF(Switch/Sucrose NonFermentable)中重要组份ARID1A(A-T rich interaction domain)的突变过表达载体,并检测野生型ARID1A基因及突变型ARID1A基因在肝癌细胞株HepG2中的表达情况.方法 采用overlap PCR技术构建在野生型质粒pcDNA6-ARID1A基础上构建结构域缺失突变体pcDNA6-ARID1A/△ARID以及pcDNA6-ARID1A/△DUF3518;利用脂质体转染技术将野生型质粒以及构建的突变型质粒转染到肝癌细胞HepG2中进行过表达;通过Real-time PCR以及Western blot技术对野生型及突变型ARID1A在肝癌细胞中的表达情况进行鉴定.结果 经双酶切后SDS-PAGE分析以及测序验证,成功构建了真核表达载体pcDNA6-ARID1A的突变型质粒pcDNA6-ARID1A/△ARID以及pcDNA6-ARID1A/△ DUF3518;通过Real-time PCR以及Western blot的方法验证,ARID1A及ARID1 A/△ARID在肝癌细胞株HepG2中成功过表达,而ARID1A/△ DUF3518蛋白可能降解.结论 成功构建ARID1A功能域缺失型突变体,并在肝癌细胞株HepG2中稳定过表达ARID1A及ARID1A/△ARID;ARID1A/△ DUF3518蛋白的缺失暗示DUF3518结构域可能起着稳定蛋白结构的功能.
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子宫内膜异位症恶变研究进展
子宫内膜异位症(EMs)是育龄妇女常见的疾病之一.该病有多种临床表现,近年来发病率占育龄妇女的15％,有明显升高的趋势.EMs虽然在组织学上属于良性病变,但却具有增生、浸润、转移及复发等恶性行为,并且有一定比例发生组织学改变,转变为癌瘤[1].1925年,Sampson首次报道恶性肿瘤与异位子宫内膜并存于同一病变,认为EMs可以发生恶变.目前研究认为,EMs的恶变率约为0.7％～1％,其中80％发生在卵巢,而直肠阴道隔、结肠等部位的病变较为罕见.
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ARID1a及性激素受体在子宫内膜增生病变组织中的表达及意义
目的 探讨ARID1a基因在子宫内膜增生病变组织中的表达及与性激素受体表达的相关性,为子宫内膜增生症的防治提供新的思路.方法 采用免疫组化SP(streptavidin peroxidase-biotin,SP)法,检测132例子宫内膜病变组织(单纯性增生40例,复杂性增生40例,不典型增生52例)及28例增殖期子宫内膜组织中ARID1a、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、雄激素受体(AR)的阳性表达率.结果 (1)在子宫内膜组织中,普遍存在ER、PR、AR受体的表达.ER、PR阳性表达率各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05);AR在不典型增生症组中表达率低,与其余各组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),增殖期内膜组、单纯性增生组、复杂性增生组各组间比较,差异无统计学意义(P>0.05).(2)ARID1a基因在子宫内膜腺上皮和间质细胞核中普遍表达,在不典型子宫内膜组织中表达丢失率为19.2%,与其余各组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);增殖期内膜组、单纯性增生组、复杂性增生组间,差异无统计学意义(P>0.05).(3)ARID1a基因的表达与ER、PR、AR之间无相关性.结论 雄激素及其受体与子宫内膜病变风险显著相关,ARID1a基因突变和表达缺失是子宫内膜增生恶变中的一个早期事件;对于雄激素受体阳性患者采用联合降低雄激素的治疗,将有可能成为子宫内膜增生症患者治疗的新思路.
