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特发性肺纤维化患者肺泡灌洗液及血清中前列腺素E2和白细胞介素12、13水平变化的意义
目的探讨特发性肺纤维化(IPF)患者肺泡灌洗液及血清中前列腺素E2(PGE2)和白细胞介素12、13(IL-12、IL-13)水平变化的意义.方法用放射免疫法及酶联免疫吸附法,检测30例IPF患者(IPF组)血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中PGE2和IL-12、IL-13的水平;健康非吸烟的自愿献血者30名,为血清对照组,检测其血清PGE2和IL-12、IL-13的水平;以胸痛为主诉进行BALF检查证实为健康者9名,作为BALF对照组,检测其BALF中PGE2和IL-12、IL-13的水平.结果 IPF组患者BALF中PGE2为(591±88)ng/L、IL-12为(1.34±0.25)ng/L、IL-13为(38±5) ng/L,对照组BALF中PGE2、IL-12、IL-13分别为(238±7)、(2.29±0.26)、(20±4)ng/L,两组相比差异有显著意义(P值均<0.01);血清IL-13水平的变化与BLAF一致,但IPF组患者血清PGE2为(235±13) ng/L、IL-12为(2.35±0.14) ng/L,与血清对照组相比差异无显著性(P>0.05).结论 IPF患者BALF中PGE2水平升高,可能与IL-13的增高和IL-12水平的下降有关,并在IPF的发生、发展中起重要的作用.肺纤维化患者PGE2水平增高主要发生在肺的局部,而并非全身性的.
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支气管哮喘患者T细胞受体δ链多态性研究
目的探讨γδ链T细胞在哮喘气道慢性炎症产生及延续机制中的作用。方法留取7例哮喘患者与7例对照者的外周血和支气管肺泡灌洗液(BALF),用免疫荧光染色和流式细胞分析技术检测γδ链T细胞的百分率,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和基因扫描法分析T细胞受体Vδ1~Vδ3亚族的相对取用频率及克隆增殖状态。结果哮喘患者BALF中γδ T细胞比例[(7.8±4.7)%]与对照组[(3.3±3.0)%]比较,差异有显著性(P<0.05);且V δ1 的相对取用频率[(44±13)%]与对照组[(19±5)%]比较,差异有显著性(P=0.002)。哮喘患者BALF中部分V δ基因亚家族呈单或寡克隆扩增,以Vδ1亚族尤其显著。结论对抗原发生特异性应答的γδ T细胞可能在启动和维持哮喘慢性气道炎症中发挥了较重要的作用
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特发性肺纤维化患者支气管肺泡灌洗液中白细胞介素13的水平及意义
目的探讨特发性肺纤维化(IPF)患者支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血中白细胞介素13(IL-13)水平的变化及其意义.方法选择17例IPF患者(IPF组)和8名无器质性肺疾病者(对照组).采用IL-13特异的酶联免疫吸附法测定(ELISA)法检测2组BALF和外周血中IL-13的水平,分析患者IL-13水平与其肺功能、血气之间的关系.结果 IPF组BALF和外周血中IL-13水平分别为(301±86)ng/L 、(178±36)ng/L;对照组分别为(103±24)ng/L、(55±15)ng/L,两者比较差异均有显著性(P<0.01).IPF组BALF中IL-13水平与BALF中性粒细胞数呈正相关(r= 0.786, P<0.01 ),与用力肺活量、一秒钟用力呼气容积、肺一氧化碳弥散量及动脉血氧分压均呈一定的等级负相关(r分别为-0.898、-0.878、-0.874、-0.890,P均<0.01).结论 IL-13可能在IPF的发病过程中起一定作用,并有可能作为判断病变进展情况的一项指标.
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肺泡蛋白沉积症患者痰液沉淀物的超微结构特点及其诊断价值
目的 探讨肺泡蛋白沉积症(PAP)患者痰液沉淀物(SD)的超微结构特点及其诊断价值.方法 选择同济大学附属上海市肺科医院和同济大学附属同济医院2000年1月至2009年12月间经肺活检和细胞学病理诊断的PAP患者7例(PAP组),其中男5例,女2例,中位年龄48岁(36~73岁);将SD和BALF离心沉淀物分别制作超薄切片,透射电镜比较观察.同期选取具有双肺浸润性病变(细菌性肺炎3例,COPD和浸润性肺结核各2例)患者7例(对照组),其中男4例,女3例,中位年龄49岁(39~68岁);每例SD制作超薄切片,与PAP组透射电镜观察结果比较分析.结果 PAP组7例患者中痰直接涂片淀粉酶消化后过碘酸雪夫染色未检出有诊断意义的细胞成分;BALF沉淀物石蜡包埋切片细胞学光镜观察,4例符合PAP.BALF透射电镜观察,肺泡上皮细胞内以及细胞外有大量同心圆状的板层小体,5例符合PAP诊断.SD的透射电镜观察,巨噬细胞胞质内有较多髓鞘样的吞噬体,肺泡上皮细胞内有较多的板层小体,细胞外有较多同心圆状的板层小体,细胞和板层小体明显退变,4例符合PAP诊断,SD和BALF比较在电镜诊断PAP上差异无统计学意义(x2=1.000,P >0.05).对照组7例中均未检出细胞外游离的嗜锇板层小体.结论 PAP患者SD和BALF样本中均可检出具有诊断意义的嗜锇板层小体,结合临床和影像学可以对PAP作出明确的诊断,尤其对于肺活检和肺泡灌洗有禁忌证的患者,是协助诊断PAP的一个重要方法.
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博莱霉素致大鼠肺纤维化过程中纤溶酶原激活剂抑制物1活性变化的意义
近来,有学者注意到纤溶系统的功能异常可以导致特发性肺纤维化(IPF)的发生[1].本实验旨在观察博莱霉素致大鼠肺纤维化过程中,支气管肺泡灌洗液(BALF)内纤溶酶原激活剂抑制物1(PAI-1)活性的变化,及其在损伤肺组织中的动态表达状况,以探讨PAI-1与肺纤维化发生、发展的关系.
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肿瘤坏死因子α与血管内皮生长因子在烟雾暴露大鼠肺气肿模型中的动态变化
近年大量研究提示肿瘤坏死因子α(TNF-α)是导致慢性阻塞性肺疾病(COPD)慢性炎症损伤和肺实质毁损的关键细胞因子,而血管内皮生长因子(VEGF)是滋养肺泡组织所必需的抗损伤细胞因子.我们通过建立大鼠烟雾暴露肺气肿模型,动态观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α含量与肺组织中VEGF表达,以探讨TNF-α和VEGF失衡在肺气肿形成中的作用.
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单核细胞趋化蛋白1在熏香烟大鼠气道的表达及泼尼松对其的影响
研究显示吸烟者和慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者的支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺泡巨噬细胞(AM)数目显著升高,且COPD患者小气道病变和肺气肿的严重程度与肺组织的AM数量呈正相关[1,2].单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)作为一种重要的趋化因子,对单核巨噬细胞的募集和活化起着重要作用,但MCP-1在COPD中的作用目前尚不清楚.我们的研究目的为观察香烟致大鼠气道MCP-1水平的变化及泼尼松对其的影响.
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抗IgE抗体和腺苷对支气管哮喘患者肥大细胞激活的影响
肥大细胞只有激活才能在支气管哮喘(简称哮喘)发病过程中发挥作用,而组胺是肥大细胞激活后脱颗粒的主要标志物.据报道,细胞在缺氧或过度刺激等条件下代谢为腺苷[1].哮喘患者与非哮喘患者比较,其支气管肺泡灌洗液(BALF)中腺苷水平增高[2].我们的实验用腺苷、抗IgE抗体或两者联合应用对哮喘患者BALF中的肥大细胞进行体外激发,通过测定组胺水平来探讨哮喘患者对肥大细胞的激活特征.
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烟雾暴露对支气管哮喘豚鼠肺内P物质含量及其基因表达的影响
为探讨烟雾暴露对支气管哮喘(简称哮喘)豚鼠肺组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)、血液中P物质(SP)含量及其肺组织中SP基因表达的影响,我们对此进行了研究并探讨了烟雾暴露对SP的影响机制.
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支气管哮喘患者血清巨噬细胞炎症蛋白1α的变化
巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)是支气管哮喘气道炎症过程中嗜酸细胞(EOS) 、肥大细胞及肺泡巨噬细胞等释放的一种化学介质,为69个氨基酸组成的多肽,属趋化性细胞因子.有研究表明,哮喘患者支气管肺泡灌洗液中及儿童哮喘患者的鼻吸出物中MIP-1α浓度明显增加[1,2].为此,我们观察了哮喘患者血清MIP-1α的变化及与外周血EOS计数、气流阻塞的关系.对象与方法哮喘发作组42例,男21例,女21例,年龄16~67岁,平均年龄(40±12)岁,为2001年1月~4月本院门、急诊哮喘患者.诊断均符合中华医学会呼吸病学分会哮喘学组的诊断标准[3].受检前3个月未应用糖皮质激素,受检前8 h内未用β2激动剂.其中轻、中度发作28例,重度发作14例.均嘱吸入二丙酸倍氯米松(每日400~600 μg) 及按需吸入沙丁胺醇气雾剂;重度发作组患者静脉滴注甲基泼尼松龙(每日80~160 mg),治疗后5~7天复查.哮喘缓解组24例,男13例,女11例,年龄18~65岁.正常对照组:健康体检者28名,男、女各14名,平均年龄(38±10)岁.
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咪喹莫特对支气管哮喘大鼠辅助性T淋巴细胞亚群的作用
支气管哮喘(简称哮喘)是气道的慢性炎症性疾病,其主要特征为嗜酸粒细胞(EOS)浸润引起的气道可逆性阻塞、气道高反应性(AHR).辅助性T淋巴细胞亚群Th1和Th2淋巴细胞通过所分泌的细胞因子相互调节,当Th2亚群占优势时,易发生AHR和气道EOS浸润[1].为此,我们研究了咪喹莫特对哮喘大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织中Th亚群的影响,探讨其抗炎作用的可能机制.
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卵蛋白致敏激发豚鼠肺组织基质金属蛋白酶9的表达
基质金属蛋白酶(MMPs)是一类结构高度同源的内肽酶的总称,它因含有金属离子(锌离子、钙离子)而得名.MMPs通过分解细胞外基质(包括胶原纤维、弹力纤维、各种糖蛋白及蛋白多糖),在组织重塑、细胞迁移、血管生成、伤口愈合、炎症等各种生理病理过程中发挥关键作用.近年来研究表明,MMPs在支气管哮喘患者气道炎症及组织重塑中发挥重要作用.许多研究者对支气管哮喘患者的诱导痰液、支气管肺泡灌洗液(BALF)、肺活检标本以及体外培养的巨噬细胞进行了MMPs检测分析,其MMP-9产生明显增高(MMP-9主要来源于嗜酸细胞、巨噬细胞和中性粒细胞),同时金属蛋白酶组织抑制剂TIMP-1亦明显增高;且MMP-9/TIMP-1比例出现失衡.在哮喘患者中MMP-9的过量表达与Ⅲ、V型胶原以及tenascin在基底膜的沉积显著相关,并与气流受限的程度、气道高反应性相关[1].我们的实验试图通过支气管哮喘豚鼠模型的建立,研究其肺组织MMP-9的表达及其动态变化,探讨其特异抑制剂对支气管哮喘的治疗价值.
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冬虫夏草对慢性阻塞性肺疾病大鼠Th1/Th2类细胞因子平衡的干预作用
迄今为止对慢性阻塞性肺疾病(COPD)仍无有效治疗药物供临床使用.我们通过人工培育的冬虫夏草菌粉喂养COPD大鼠,观察组织形态学、动物肺功能(气道阻力和肺顺应性)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素2(IL-2)、细胞介素IL-4含量等指标,探讨其防治COPD的作用及机制.
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支气管肺泡灌洗液腺苷脱氨酶检测对肺结核的诊断价值
对172例患者行支气管肺泡灌洗液(BALF)的腺苷脱氨酶(ADA)检测,以期为临床提供敏感、特异、快速的诊断方法.
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卡介苗多糖核酸对肺纤维化大鼠Th1/Th2的影响
在肺纤维化形成过程中存在辅助性Ⅰ型T细胞(Th1)和Ⅱ型T细胞(Th2)之间的失衡[1],我们通过测定肺纤维化大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)的含量和细胞分类,观察Th1/Th2在肺纤维化形成过程中的变化及探讨卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)有无调节Th1/Th2细胞因子失衡的作用.
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卡介菌多糖核酸对哮喘小鼠Th1/Th2类某些细胞因子分泌的影响
通过观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BLAF)中干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平来反映气道炎症的变化,并与地塞米松的疗效比较,探讨卡介菌多糖核酸对Th1/Th2反应的调节作用机制.
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肺癌患者支气管肺泡灌洗液中K-ras基因突变的检测及其临床意义
K-ras基因是与肺癌密切相关的原癌基因之一,目前国内外对它的研究主要局限于术后石蜡标本的回顾性研究.我们从肺癌患者支气管肺泡灌洗液 (BALF)中检测 K-ras基因点突变的情况,为肺癌的早期诊断及预后评价提供依据.材料与方法 1.材料:我们检测了100份标本,其中40份为组织标本,包括纤支镜活检组织及术后蜡块(表1);60份为灌洗液标本,来自我院1998~2000年住院及门诊接受支气管肺泡灌洗术(BAL)的患者,男37例,女23例,平均年龄(56±12)岁.60例患者中肺癌44例,均为周围型肺癌,其中40例终经纤维支气管镜(纤支镜)活检、手术或经皮肺穿刺等取得病理学确诊,另4例为临床诊断肺癌患者.有16例患者同时具有BALF及组织标本,其中鳞癌7例,腺癌3例,小细胞癌3例,肺泡细胞癌1例,炎症1例,结核1例.16例肺部良性疾病作为实验的阴性对照(表2).所有肺癌患者经胸部CT、腹部B超及同位素骨扫描等检查后,据1987年国际抗癌联盟(UICC)分期标准进行TNM分期:Ⅰ期5例,Ⅱ期8例,Ⅲa期24例,Ⅲb期20例,Ⅳ期 5例.依据病理标本明确细胞分化程度.
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木瓜蛋白酶致大鼠肺气肿中碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达
碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种具有促进细胞生长增殖作用的多肽类生长因子,在维持机体的生长发育及促进多种组织的损伤修复中起着十分重要的作用。我们通过对木瓜蛋白酶(Papain)致大鼠肺气肿模型肺组织和肺泡巨噬细胞bFGF mRNA表达的研究,来探讨其在肺气肿形成过程中与肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原增长的关系。 材料与方法(1)肺气肿动物模型的制备与分组:健康Wistar大鼠42只,体重200~250 g,雌雄不拘(由同济医科大学实验动物中心提供),随机分为肺气肿模型1,3,5,7,15,30天组和正常对照组,每组6只。以2%戊巴比妥钠(50 mg/kg)腹腔注射麻醉动物后,实验组气管内注射8%木瓜蛋白酶(美国Sigma公司)0.05 ml/100 g,对照组以同样方法注入相应量的生理盐水。(2)组织细胞标本制作:以2%戊巴比妥钠(50 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠后,行气管插管,向肺内灌注生理盐水,每次5~10 ml,共8次,回收支气管肺泡灌洗液,离心,弃上清,同法用RPMI1640(美国Gibco产品)培养液洗涤细胞1次,用含10%新生小牛血清(Gibco产品)的RPMI1640调细胞浓度至1×106/ml,加入铺有盖玻片的6孔培养板中,置37℃,5% CO2培养箱(Hera Cell德国产)培养24 h后,肺泡巨噬细胞贴壁,取出长有细胞的盖玻片,用4%多聚甲醛固定20~30 min,再用酒精梯度脱水后,置-70℃冰箱保存备用。灌洗肺后取下双肺,向肺内注入4%多聚甲醛,直至肺膨胀边缘变锐、胸膜展平,结扎气管,浸泡于4%多聚甲醛中固定10 h。取左下肺叶常规石蜡包埋、切片、HE染色。(3)免疫组织化学染色:用即用型链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(Strept Avidin-Biotin-enzyme Complex,SABC)免疫组织化学染色试剂盒和兔抗鼠collagen Ⅰ及collagen Ⅲ多克隆抗体及DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)进行免疫组织化学染色。(4)bFGFmRNA原位杂交:用bFGF寡核苷酸探针和敏感加强型原位杂交检测试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)对组织细胞标本原位杂交。
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N-单甲基左旋精氨酸对急性肺损伤兔血清白细胞介素8的影响
白细胞介素8(IL-8)是急性肺损伤(ALI)发病中重要的炎性介质,一氧化氮(NO)对脓毒性IL-8释放具有调节作用,但还有争议.我们通过兔内毒素(LPS)ALI模型观察N-单甲基左旋精氨酸(L-NMMA)对ALI兔血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-8含量和肺组织病理改变的影响,探讨L-NMMA 对ALI及NO对 IL-8产生和释放的作用.材料与方法健康新西兰大白兔24只,雌雄不拘,体重1.5~2.5 kg,随机分为3组,每组8只.(1)对照组(C组),静注生理盐水15 ml;(2)LPS致伤组(LPS组),静注大肠杆菌内毒素O55B5(美国Sigma公司)0.7 mg/kg+生理盐水15 ml;(3)L-NMMA干预组(L-NMMA组),静注大肠杆菌内毒素O55B5 0.7 mg/kg+生理盐水5 ml后,立即缓慢静注L-NMMA(美国Sigma公司)5 mg/kg+生理盐水10 ml.各组动物于用药前0 min及后30、60、120 min分别取血1 ml,加入10%依地酸二钠30 μl,抑肽酶400 IU,于4℃离心(3 000 r/min)15 min,上清于-20℃保存待测IL-8,并于120 min处死动物,以4℃生理盐水9 ml行右肺支气管肺泡灌洗,共3次,回收液于4℃离心(3 000 r/min)15 min,上清-20℃保存待测IL-8;同时取小块左下肺组织作病理切片行HE染色光镜检查.
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共刺激信号与支气管哮喘γδT细胞活化关系的研究
我们之前的研究表明[1,2],γδ T细胞在哮喘支气管肺泡灌洗液(BALF)中明显活化;γδ T细胞可能存在Th1/Th2模式,并表现为Th2样优势应答.为进一步阐明γδ T细胞活化的细胞和分子机制,我们探讨了单核/巨噬细胞(Mon/Mφ)与γδ T细胞间共刺激分子B7∶CD28/CTLA-4( )的改变.材料与方法 2~3月龄雄性Wistar大鼠20只,体重(200±50)g.随机分正常组和哮喘组,每组各10只.哮喘模型的建立、鉴定及标本的收集和处理按方法[1].