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肿瘤坏死因子α与血管内皮生长因子在烟雾暴露大鼠肺气肿模型中的动态变化
近年大量研究提示肿瘤坏死因子α(TNF-α)是导致慢性阻塞性肺疾病(COPD)慢性炎症损伤和肺实质毁损的关键细胞因子,而血管内皮生长因子(VEGF)是滋养肺泡组织所必需的抗损伤细胞因子.我们通过建立大鼠烟雾暴露肺气肿模型,动态观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α含量与肺组织中VEGF表达,以探讨TNF-α和VEGF失衡在肺气肿形成中的作用.
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维甲酸及维生素A对大鼠肺气肿的早期干预作用
近年来维生素A及其主要活性产物维甲酸(RA)对肺气肿的修复作用越来越受到人们的重视.但它们对实验性肺气肿的逆转作用尚存在争议[1].为进一步明确维生素A及RA对实验性肺气肿是否有早期干预作用,本组研究通过气管内滴入弹性蛋白酶法复制大鼠肺气肿模型,观察RA及维生素A的干预对肺气肿形成的影响,并对其机制进行初步探讨.
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木瓜蛋白酶致大鼠肺气肿中碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达
碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种具有促进细胞生长增殖作用的多肽类生长因子,在维持机体的生长发育及促进多种组织的损伤修复中起着十分重要的作用。我们通过对木瓜蛋白酶(Papain)致大鼠肺气肿模型肺组织和肺泡巨噬细胞bFGF mRNA表达的研究,来探讨其在肺气肿形成过程中与肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原增长的关系。 材料与方法(1)肺气肿动物模型的制备与分组:健康Wistar大鼠42只,体重200~250 g,雌雄不拘(由同济医科大学实验动物中心提供),随机分为肺气肿模型1,3,5,7,15,30天组和正常对照组,每组6只。以2%戊巴比妥钠(50 mg/kg)腹腔注射麻醉动物后,实验组气管内注射8%木瓜蛋白酶(美国Sigma公司)0.05 ml/100 g,对照组以同样方法注入相应量的生理盐水。(2)组织细胞标本制作:以2%戊巴比妥钠(50 mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠后,行气管插管,向肺内灌注生理盐水,每次5~10 ml,共8次,回收支气管肺泡灌洗液,离心,弃上清,同法用RPMI1640(美国Gibco产品)培养液洗涤细胞1次,用含10%新生小牛血清(Gibco产品)的RPMI1640调细胞浓度至1×106/ml,加入铺有盖玻片的6孔培养板中,置37℃,5% CO2培养箱(Hera Cell德国产)培养24 h后,肺泡巨噬细胞贴壁,取出长有细胞的盖玻片,用4%多聚甲醛固定20~30 min,再用酒精梯度脱水后,置-70℃冰箱保存备用。灌洗肺后取下双肺,向肺内注入4%多聚甲醛,直至肺膨胀边缘变锐、胸膜展平,结扎气管,浸泡于4%多聚甲醛中固定10 h。取左下肺叶常规石蜡包埋、切片、HE染色。(3)免疫组织化学染色:用即用型链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(Strept Avidin-Biotin-enzyme Complex,SABC)免疫组织化学染色试剂盒和兔抗鼠collagen Ⅰ及collagen Ⅲ多克隆抗体及DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)进行免疫组织化学染色。(4)bFGFmRNA原位杂交:用bFGF寡核苷酸探针和敏感加强型原位杂交检测试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)对组织细胞标本原位杂交。
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应用序惯性二氧化硫、木瓜蛋白酶吸入法建立大鼠实验性肺气肿模型的研究
我们采用序惯性二氧化硫(SO2)、木瓜蛋白酶(PAE)吸入介导复制大鼠肺气肿模型,观察该病病因、发病机制[1].材料与方法 SD大鼠74只(浙江省立同德医院实验动物室),雌雄各半,体重(180±20) g.
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CD8+调节性T细胞在慢性阻塞性肺疾病中的研究进展
慢性阻塞性肺病( Chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种可预防和可治疗的常见疾病,以持续存在的气流受限为特征,气流受限呈进行性发展,伴有气道和肺对有害气体或颗粒所致的慢性炎症反应增加[1]。目前有多种机制参与COPD的形成,如促炎-抗炎失衡、氧化-抗氧化失衡、蛋白酶-抗蛋白酶失衡和自主神经系统功能失衡等[2-5],其中促炎-抗炎失衡是导致COPD迁延不愈的重要原因。这种慢性炎症累及局部和全身[6],受累的抗原至少有三种可能来源:①微生物;②香烟烟雾成分及其衍生物;③自身抗原,包括来自细胞外基质降解产物的新生抗原[7,8]。近年越来越多的证据倾向于第三种可能:COPD患者和小鼠肺气肿模型的肺组织存在B细胞、CD4+和CD8+T细胞的寡克隆现象[9-11],表明自身免疫反应可能参与了COPD的发展;另有研究显示α1-抗胰蛋白酶不仅抑制蛋白酶,而且通过阻止细胞凋亡和调节炎症反应来缓解COPD的病程进展[4];研究人员还在稳定期COPD 患者外周血中发现异常水平的抗核抗体( ANA )和抗组织抗体(AT),并且AT与肺功能受损有关[12]。以上证据都支持COPD是一种自身免疫性疾病的假说。
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肺叶切除作为一种肺减容术方法的可行性
目的探讨肺叶切除作为一种肺减容术方法的可行性.方法20只狗分为两组,分别用木瓜蛋白酶建立一种以广泛肺气肿改变为特征的动物模型(均质型)和一种以右上叶肺气肿改变为主的动物模型(异质型),模型建立成功后均行右上肺叶切除,通过检测基础值、肺气肿后和术后12周的肺功能,比较两种模型在肺气肿后和术后12周的肺功能改变.结果肺气肿后的肺总量(TLC)两组均为基础值的120%~125%,两组术后12周的肺总量均较肺气肿后明显下降(P<0.05),术后12周两组间的差异有显著性(P<0.05);两组肺气肿后的功能残气量(FRC)明显高于基础值和术后12周(P<0.05);两种类型的3个时期的残气量(RV)差异有显著性(P<0.05),术后12周的RV虽比肺气肿后有回落,但仍未能恢复到基础值水平;术后12周第1秒用力呼气量占用力肺活量的百分比(FEV1%)异质型优于均质型(P<0.05);两种类型的压力容量(P-V)曲线均显示肺气肿后曲线较基础值曲线向左上方移位,术后12周又重回基础值曲线附近,其差异有显著性(P<0.05).均质型组的围术期病死率为9.1%,异质型组为0.结论异质型肺气肿术后的肺功能改善优于均质型,且病死率较低,因此,如肺气肿病变或其他病变(如肺癌)集中于1个肺叶,使该肺叶失去大部分肺功能时,可考虑肺叶切除作为一种肺减容术方法.