中国人群糖尿病足相关危险因素的Meta分析

目的：通过Meta分析探讨中国人群糖尿病足相关危险因素。方法计算机检索中国期刊全文数据库（CNKI）、维普中文科技期刊全文数据库（VIP）、Pubmed、EMbase、中国生物医学文献检索数据库（CBM）和万方科技期刊全文数据库等数据库，并手工检索相关文献，检索关于中国人群糖尿病足相关危险因素的病例-对照研究，检索时限均从建库至2013年12月。由两名评价者根据纳入、排除标准独立选择文献、提取资料、评价质量后采用RevMan5．0软件进行Meta分析，用固定效应模型或随机效应模型合并比值比（OR）值及95％可信区间（CI）分析各个相关危险因素，采用敏感性分析评估结果的稳定性，用漏斗图评估文献的发表偏倚。结果共纳入15篇文献，Meta分析结果显示影响糖尿病足发生的重要危险因素有年龄（OR＝7．51，95％CI：6．74～8．28）、病程（OR＝3．34，95％CI：2．96～3．72）、体重指数（BMI）（OR＝-0．53，95％CI：-0．80～-0．26）、收缩压（OR＝9．84，95％CI：8．08～11．60）、舒张压（OR＝1．03，95％CI：0．03～2．03）、空腹血糖（FPG）（OR＝1．48，95％CI：1．19～1．77）、餐后2 h血糖（2 hPG）（OR＝2．15，95％CI：1．71～2．59）、糖化血红蛋白（HbA1c）（OR＝1．46，95％CI：1．03～1．88）、血清总胆固醇（TC）（OR＝-0．31，95％CI：-0．42～-0．19）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）（OR＝-0．07，95％CI：-0．10～-0．03），差异均有统计学意义（P＜0．01）；而甘油三酯（TG）（OR＝-0．06，95％CI：-0．16～0．04）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）（OR＝-0．05，95％CI：-0．21～0．11）对糖尿病足的发病与否无明显影响（P＞0．05）。结论初步确定年龄、病程、BMI、收缩压、舒张压、FPG、2 hPG、HbA1c、TC、HDL-C是影响糖尿病足发生的重要危险因素，为临床上糖尿病足发生的早期防预提供依据。

动态监测血清乳酸脱氢酶水平在急性白血病中的临床意义研究

目的：通过动态监测急性白血病（AL）患者血清乳酸脱氢酶（LDH）水平，探讨LDH对AL患者病情监测和预后评估的临床意义。方法回顾分析初诊的1184例AL患者的2170例次LDH水平，评估患者LDH水平随疾病进程的变化趋势并探究其与AL的预后和疾病进展的关系，同时分析LDH与血细胞、骨髓白血病细胞比例、白血病融合基因和流式细胞术分型等相关辅助诊断指标的关系。结果 AL患者不同病程阶段的LDH水发平不同，其中初发组及复发组LDH水平明显高于缓解组及正常对照组（P＜0．05）。缓解组LDH水平有所减低，但仍高于正常对照组（P＜0．05）。急性淋巴细胞白血病（ALL）组 LDH 水平明显高于急性髓性白血病（AML）组（P＜0．05）。与其他AL诊断及预后相关指标比较，LDH与骨髓白血病细胞百分数、白血病相关融合基因、细胞免疫分型等都有相关性（P＜0．05）。结论不同病程阶段、不同亚型AL患者的血清LDH水平有差异，血清LDH水平可作为AL诊断、疾病进程及疗效评估的辅助指标。

肾功能损伤及血液透析患者血清胃蛋白酶原浓度的变化

目的：探讨肾功能损伤及维持性血液透析（简称血透）治疗患者血清胃蛋白酶原（PG）Ⅰ、PGⅡ浓度及PGⅠ/PGⅡ比值的变化，分析PGⅠ、PGⅡ浓度及PGⅠ/PGⅡ比值在肾功能损伤及血透治疗患者中作为胃疾病筛查指标的应用价值。方法根据肌酐清除率（Ccr）将94例未行血透治疗的肾功能损伤患者分为 Ccr≤30 mL/min组、30 mL/min＜Ccr＜60 mL/min组和Ccr≥60 mL/min组；另选取24例进行血透治疗的尿毒症患者（Ccr≤10 mL/min），以血透治疗前作为透析前组，血透治疗后作为透析后组。以26例肾功能正常的健康体检者作为正常对照组。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清PGⅠ和PGⅡ浓度，并计算PGⅠ/PGⅡ比值。采用肌氨酸氧化酶法测定血清肌酐（SCr），根据Cockcroft-Gault公式计算Ccr。结果3组不同Ccr水平的肾功能损伤患者血清PGⅠ浓度及PGⅠ/PGⅡ比值均明显高于正常对照组（P＜0．01），肾功能损伤患者3组间血清PGⅠ浓度及PGⅠ/PGⅡ比值差异均有统计学意义（P＜0．01），而且血清PGⅠ浓度及PGⅠ/PGⅡ比值与Ccr均呈明显负相关（r＝-0．844，P＜0．01；r＝-0．591，P＜0．01）。与透析前组比较，透析后组PGⅠ、PGⅡ浓度及PGⅠ/PGⅡ比值均无明显变化（P＞0．05）。结论肾功能降低的患者血清PGⅠ浓度及PGⅠ/PGⅡ比值均明显增高，降低了这些指标作为胃疾病筛查指标的诊断价值。

血栓弹力图监测低相对分子质量肝素的探讨

目的：尝试使用血栓弹力图（TEG）R时间来监测低相对分子质量肝素（LMWH）的临床用药。方法选取本院肾脏内科肾病综合症住院患者20例，患者首次用药和第二次用药后4 h均抽血进行TEG和抗Xa活性检测：TEG R时间及抗Xa活性的检测；TEG R时间与抗Xa活性的相关性分析；抗Xa活性与首次用药间的相关性分析；TEG R时间与首次用药的相关性分析；不同剂量用药间抗Xa活性的比较分析；不同剂量用药间TEG R时间的比较分析。结果 TEG R时间与抗Xa活性无相关性（P＝0．54，R＝-0．1449）；抗Xa活性与首次用药量无相关性（P＝0．26，R＝-0．2636）；TEG R时间与首次用药量间有显著相关性（P＜0．0001，R＝0．875）；2次用药间抗Xa活性存在差异（P＝0．0005，t ＝4．152）；2次用药间 TEG R时间存在显著差异（P＜0．0001，t ＝15．19）。结论 TEG R时间比抗Xa活性更能准确反映出患者的LMWH用药情况。

人外周血单个核细胞miR-UL112水平在HCMV感染中的诊断价值研究

目的：探讨单个核细胞中人巨细胞病毒（HCMV）微小 RNA（miR）-UL112-3p、miR-UL112-5p水平对HCMV潜伏和激发感染的诊断价值。方法选取非肿瘤患者92例[其中HCMV特异性CD8＋T淋巴细胞高水平组（简称CD8＋细胞高水平组）57例、HCMV特异性CD8＋T淋巴细胞低水平组（简称CD8＋细胞低水平组）35例]、肿瘤化疗患者30例，提取外周血单个核细胞，采用实时荧光定量-聚合酶链反应（PCR）检测HCMV DNA、miR-UL112-3p及miR-UL112-5p水平。采用受试者工作特征（ROC）曲线评价miR-UL112-3p和miR-UL112-5p水平对HCMV潜伏感染的诊断价值。结果肿瘤化疗组HCMV DNA、miR-UL112-3p及miR-UL112-5p水平明显高于非肿瘤组（P＜0．05）。非肿瘤组中CD8＋细胞高水平组HCMV DNA、miR-UL112-3p及miR-UL112-5p水平明显高于CD8＋细胞低水平组（P均＜0．01）；以CD8＋细胞低水平组miR-UL112-3p、miR-UL112-5p水平为标准，CD8＋细胞高水平组 miR-UL112-3p、miR-UL112-5p阳性率分别为59．65％、64．91％。分别以1．09、1．52作为 miR-UL112-3p和miR-UL112-5p诊断HCMV较高水平潜伏感染状态的Cut-off值，敏感性分别为59．65％、64．91％，特异性分别为97．1％、97．1％。以非肿瘤组miR-UL112-3p、miR-UL112-5p水平的 x珋＋s（即5．24、6．63）作为诊断HCMV激发感染的标准，肿瘤化疗组miR-UL112-3p、miR-UL112-5p阳性率分别为50．00％、73．33％。结论 miR-UL112-3 p及miR-UL112-5 p对HCMV潜伏和激发感染可能有一定的诊断价值。

腺苷脱氨酶和癌胚抗原联合检测在结核性与恶性肿瘤胸腔积液鉴别诊断上的价值

目的：为鉴别结核性和恶性肿瘤胸腔积液提供一种比较快速及有实用价值的检测方法。方法采用速率法和化学发光法分别检测65例结核性胸腔积液患者和60例恶性肿瘤胸腔积液患者胸腔积液的腺苷脱氨酶（ADA）活性和癌胚抗原（CEA）含量。结果结核组及恶性肿瘤组胸腔积液ADA活性分别为（52．9±22．8） U/L和（13．8±5．7）U/L，二者比较差异有统计学意义（P＜0．01）。恶性肿瘤组胸腔积液CEA含量为（37．8±17．6）ng/mL，明显高于结核组[（7．9±2．8）ng/mL]（P＜0．01）。结论胸腔积液ADA与CEA对结核性和恶性肿瘤胸腔积液具有鉴别诊断价值。

荧光定量PCR检测南京地区孕晚期妇女生殖道B族链球菌的带菌情况

目的：了解南京地区孕晚期妇女生殖道中B族链球菌（GBS）的带菌情况。方法取本地区9073例妊娠34～37周孕妇生殖道分泌物，选取500名孕中期（20周～24周）的健康孕妇为对照组，采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测 GBS，并对检测结果进行分析。结果南京地区孕晚期妇女生殖道 GBS 总带菌率为4．17％，孕中期妇女总带菌率为5．20％，两组之间差异无统计学意义（P＞0．05）。孕晚期中30～34岁组妊娠妇女带菌率高（4．77％），与≤24岁组和≥40岁组比较，差异有统计学意义（P＜0．05），但与其他各年龄组比较差异均无统计学意义（P＞0．05）。结论南京地区晚孕期妇女GBS带菌率尚在健康人群带菌率的范围内，但也应加强检测；孕周对孕妇GBS带菌率的影响不大。

CYP2C9和 VKORC1基因多态性与华法林剂量关系的研究

目的：研究江苏徐州地区汉族人细胞色素 P450（CYP）2C9和维生素 K环氧化物还原酶复合体1（VKORC1）基因型与华法林剂量的关系，为华法林个体化给药方案提供建议。方法采用聚合酶链反应-连接酶检测反应（PCR-LDR）技术检测100名汉族健康受试者及200例临床使用华法林的患者CYP2 C9和VKORC1基因型。结果健康受试者CYP2C9基因型中91例为*1/*1型，9例为*1/*3型；VKORC1基因型中17例为GA型，83例为AA型。200例临床使用华法林的患者CYP2C9基因型检测有179例为*1/*1型，21例为*1/*3型，未发现*2突变；VKORC1（1639G＞A）基因型中168例为突变纯合子AA型，32例为杂合子GA型，未发现GG型；VKORC1（1639G＞A）基因AA型患者的华法林维持剂量为（2．59±0．83）mg/d，明显低于GA型[（4．51±0．79）mg/d]；CYP2C9基因*1/1*型华法林维持剂量为（3．01±1．12）mg/d，明显高于*1/*3型[（2．19±0．32）mg/d，P＜0．05]。结论 CYP2C9和VKORC1基因型的多变量个体化给药方案对临床提高华法林使用的安全性有潜在的意义。

临床分离的美罗培南和环丙沙星共同耐药的铜绿假单胞菌耐药机制的研究

目的：探讨临床分离的对美罗培南和环丙沙星均耐药的铜绿假单胞菌的耐药机制。方法收集经VITEK-2 Compact微生物分析系统检测为美罗培南和环丙沙星耐药的铜绿假单胞菌30株，琼脂稀释法复查小抑菌浓度（MIC）值。改良三维试验检测碳青霉烯酶，聚合酶链反应（PCR）扩增耐药基因，逆转录PCR 分析细菌外排系统表达情况。结果琼脂稀释法与VITEK-2 Compact微生物分析系统检测结果相同。所有菌株均未产碳青霉烯酶，PCR扩增测序未发现基因改变，逆转录PCR检测外排系统发现以mexX和mexC基因表达增加为主，其调控基因扩增测序发现4株mexC过度表达的调控基因nfxB Gly→Val（GGC→GTC），6株mexX过度表达的调控基因mexZ Val→Gly（CTG→CAG）。结论外排系统调控基因突变而引起的外排系统MexXY-OprM和MexCD-OprJ过度表达是引起美罗培南和环丙沙星耐药的主要原因。

上海地区健康成年人外周血T淋巴细胞亚群参考区间调查

目的：通过对上海地区333名健康成年人外周血T淋巴细胞亚群计数，调查正常人群T淋巴细胞亚群的参考区间，建立95％可信区间的参考区间，并分析和探讨其变化特点，为机体免疫状态的分析和临床诊疗提供参考。方法采用多参数三色免疫荧光标记外周血T淋巴细胞，使用BD FACSCalibur流式细胞仪检测并分析，获得T淋巴细胞亚群的百分比和绝对值。结果女性的CD3＋百分比、CD4＋/CD8＋比值、CD3＋CD4＋百分比和CD4＋CD45RA＋百分比分别为（72．6％±8．1％）、1．57（0．74～4．70）、（44．8％±8．0％）和（1．71％±6．3％），均高于男性分别为（70．9％±8．5％）、1．43（0．51～4．12）、（40．6％±9．3％）和（15．1％±6．8％）。男性的淋巴细胞绝对值计数、CD8＋CD28＋的绝对值计数分别为（2069．8±474．1）个/μL、（237．5±95．7）个/μL，均高于女性（1932．8±469．7）个/μL、（218．1±111．1）个/μL。T淋巴细胞亚群的百分比在不同年龄组之间随年龄增大而发生变化，年龄相差越大，差异越大，其中＞50岁组与其他组别比较差异有统计学意义。333名健康成年人外周血淋巴细胞绝对值计数为（1069．1～2935．6）个/μL，T淋巴细胞亚群百分比计数为：CD3＋细胞55．3％～87．6％， CD3＋CD4＋细胞25．2％～57．6％，CD3＋CD8＋细胞15．0％～42．1％，CD4＋CD25＋细胞2．5％～10．5％，CD4＋CD45RA＋细胞5．0％～27．2％，CD8＋CD28＋细胞4％～19．3％，CD4＋/CD8＋比值0．7～2．9。结论健康成年人T淋巴细胞亚群的百分比分布存在性别和年龄差异，由于这种差异不大，可以合并数据建立上海地区健康成年人外周血T淋巴细胞亚群的参考区间。

高敏C反应蛋白与载脂蛋白A-1、甘油三酯联合检测在心血管疾病中的应用

目的：研究高敏C反应蛋白（hs-CRP）与载脂蛋白A-1（apo A-1）、甘油三酯（TRi）联合检测在心血管疾病中的临床价值。方法选取近两年入住瑞金医院心内科患者1220例，同时测定hs - CRP、apo A-1和TRi值。结果患者组hs-CRP、apo A-1和TRi值测定与正常对照组比较明显升高（P＜0．05），且hs - CRP水平与apo A-1、TRi值结果存在明显一致性。结论 hs-CRP、apo A-1、TRi的联合检测可为心血管疾病患者临床治疗、观察预后等提供参考依据。

白念珠菌对唑类药物耐药机制中生物膜作用的研究进展

白念珠菌是人体常见的机会性致病真菌。唑类药物广泛应用于临床以对抗白念珠菌感染，但白念珠菌对唑类药物的耐药现象越来越严重，作为其耐药机制的一个方面，生物膜的作用备受关注。我们主要介绍生物膜相关的研究进展。

生化分析仪总蛋白试剂携带污染干扰镁测定的排除方法

全自动生化分析仪应用广泛，是目前临床检验必不可少生化检测仪器，但仪器的试剂探针携带污染影响检测结果的准确性。我们在镁离子的实际检测中发现总蛋白试剂常常干扰检查结果，为此将总蛋白程序由单试剂法改为双试剂法，有效的解决了对镁的试剂携带污染问题。

马耳他布鲁菌致小儿关节炎一例

布鲁菌病是由布鲁菌引起的人畜共患性传染病，又称地中海弛张热、马耳他热、波浪热或波状热，属自然疫源性疾病，主要以牛、羊、猪为传染源。人主要因接触病畜而感染［1］。布鲁菌病临床表现复杂，病情轻重不一，可侵犯全身多个系统，常表现为发热、乏力、多汗、关节痛、肝脾肿大等。该病一般在内蒙古等北方牧区流行，上海则极少发生布鲁菌感染。我们近期在一例临床表现为关节炎的小儿血液和骨髓标本中分离出一株马耳他布鲁菌。

ROCHE URYSIS-2400和AIKELAI AX-4030尿液干化学分析仪检测一致性的比较

目的：比较ROCHE URYSIS-2400尿液干化学分析仪（简称URYSIS-2400）和AIKELAI AX-4030尿液干化学分析仪（简称AX-4030）的检测结果的一致性。方法分别用URYSIS-2400和AX-4030平行测定500例尿液常规标本，比较检测结果的阳性检出率和符合率。随机选取250例使用尿沉渣显微镜复核尿红细胞（ERY）和白细胞（LEU）。通过添加实验评估 URYSIS-2400、AX-4030抗维生素 C 干扰的能力。结果2台仪器比重（SG）差异百分率均值＜1％，其余9项干化学检测项目一般符合率都＞90％。URYSIS-2400和AX-4030 ERY项目与尿沉渣显微镜计数的符合率分别为82．4％、84．4％，LEU分别为76．0％和83．2％。URYSIS-2400、AX-4030葡萄糖（GLU）和ERY项目添加维生素C浓度达50 mg/dL时不受干扰。结论 URYSIS-2400和AX-4030检测结果一致性良好，但尿液干化学分析仪只是筛检仪器，还应结合显微镜尿沉渣计数复核的结果以满足临床需要。

采用Origin软件计算DXI 800发光仪的四参数logistic定标数据

目的：采用Origin软件拟合DXI 800发光仪的四参数logistic定标数据，比较其与DXI 800计算的数据差异，探讨采用Origin软件计算DXI 800未知数据的可能性。方法选择睾酮、总甲状腺素、雌二醇、肌钙蛋白I、促甲状腺激素、癌胚抗原和孕酮的定标数据，采用Origin软件拟合四参数logistic计算结果，与DXI 800发光仪计算的结果比较。结果采用 Origin 软件计算的结果与 DXI 800计算的结果基本一致，平均偏倚介于-0．85％～1．68％之间。结论可以采用Origin软件计算DXI 800发光仪的未知结果。

荧光定量PCR测定HBV DNA室内质控方法的探讨

目的：探讨实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）测定乙型肝炎病毒核酸（HBV DNA）的室内质控方法。方法统计上海地区PCR实验室HBV DNA常规条件下前20次室内质控数据的不精密度（CV），以测出的均值（x珋±s）绘制质控图，分别采用13s/22s的多规则质控方法和Levey-Jennings单规则质控方法，判断前20次室内质控数据CV分别为≥10％、5％～＜10％和1％～＜5％范围内A、B和C 3家实验室的室内质控数据，分别分析其失控检出能力。结果分别采用13s/22s多规则和Levey-Jennings单规则质控方法。当HBV DNA室内质控品低、高两个浓度分别为5×104和5×106 IU/mL时，CV为14．96％和12．15％的A实验室均未正确检出失控数据；CV为6．49％和5．00％的B实验室检出2个随机误差引起的失控数据；其CV为4．36％和2．43的C实验室，采用13s/22s多规则质控方法检出3个系统误差引起的失控数据，采用单规则质控方法未检出失控。结论 PCR检测HBV DNA当实验室前20次室内质控数据CV≥10％时，无论采用单规则还是多规则质控方法均不能正确检出失控；实验室应设定自己实验室低要求的CV，并采用多规则质控方法，以提高系统误差的失控检出率。

上海市18家医学实验室认可现场评审中不符合项汇总分析

目的：通过对上海市18家医院实验室在ISO15189实验室认可现场评审中不符合项的汇总分析，提出不符合项规范纠正方法和路径，为其他医学实验室提供参考和借鉴。方法收集18家医学实验室ISO15189现场评审不符合项，按分布条款进行筛选、整理和分析，并按照不符合描述、原因分析、纠正措施、纠正实施、纠正验证5个方面重新编写，提出对共性问题的纠正方法。结果共收集18家医学实验室297个不符合项，其中管理部分76项，占25．6％，技术部分221项，占74．4％；检验程序的质量保证共61项，占20．5％（61/297），有6类47种表现形式。结论通过对不符合项的汇总分析和重新整理，理清了各种不符合项的原因，对医学实验室质量改进和实验室认可起到了很好的借鉴参考作用。

甲胎蛋白-增强型绿色荧光蛋白重组体的构建表达及其测量特性分析

目的：构建增强型绿色荧光蛋白（eGFP）标记的甲胎蛋白（AFP）的融合蛋白，并对其稳定性和测量特性进行分析。方法从pcDNA3．0质粒中扩增eGFP序列，插入质粒PET28a，构建eGFP表达质粒PET28a-eGFP。根据美国国立生物技术信息中心（NCBI）数据库中的AFP编码序列，应用序列合成方法合成AFP编码序列，并加入连接eGFP的铰链序列，与eGFP序列链接，构建表达质粒PET28a-eGFP-AFP。分别表达和纯化重组蛋白eGFP和eGFP-AFP，分析重组蛋白的荧光特性及稳定性。结果成功构建和纯化重组蛋白eGFP和eGFP-AFP，荧光光谱分析显示其激发和发射光谱一致。佳激发波长和发射波长分别为450和509 nm，且荧光可以稳定12个月。表达的eGFP-AFP 蛋白可以与常规测定 AFP 的免疫试剂发生反应。结论构建表达的重组蛋白eGFP-AFP的荧光特性与eGFP蛋白一致，没有光谱特性变化，并可与常规AFP测定试剂发生反应，为研究eGFP标记的AFP用于校准品和质控品的研究奠定基础。

五味子对鲍曼不动杆菌体外杀菌和抑菌作用的研究

目的：研究中药五味子对头孢哌酮-舒巴坦耐药和非耐药的鲍曼不动杆菌的杀菌和抑菌作用。方法制备五味子浸液，采用等倍稀释法进行体外抑菌和杀菌试验，分别测定五味子药液对头孢哌酮-舒巴坦耐药和非耐药的鲍曼不动杆菌低抑菌浓度（MIC）和低杀菌浓度（MBC）。结果五味子对头孢哌酮-舒巴坦耐药和非耐药的鲍曼不动杆菌的MIC50分别为15．6和7．8 mg/mL，在此药物浓度处，对头孢哌酮-舒巴坦非耐药的鲍曼不动杆菌的抑菌率均高于耐药的菌株（χ2＝4．26、3．98，P均＜0．05）；当药物浓度达到31．3 mg/mL时对二者的抑菌率均为100％；五味子对头孢哌酮-舒巴坦耐药和非耐药的鲍曼不动杆菌的MBC50均为31．3 mg/mL，杀菌率差异无统计学意义（χ2＝0．74，P＞0．05）。结论五味子在体外对头孢哌酮-舒巴坦耐药和非耐药的鲍曼不动杆菌均有一定的杀菌和抑菌作用，对头孢哌酮-舒巴坦耐药的菌株MIC略高，可尝试用于临床鲍曼不动杆菌感染的治疗。

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两例EDTA依赖性假性血小板减少应用阿米卡星无效探讨

目的：探讨2例乙二胺四乙酸（EDTA）依赖性假性血小板减少应用阿米卡星无效的机制。方法对2例EDTA依赖性假性血小板减少症患者的EDTA-K2抗凝血，在不同时间段分别加入阿米卡星，在血液分析仪检测，血涂片检查。结果该2名患者，加或不加阿米卡星，其血小板数均会随着时间的延长逐渐增加，其特征性的直方图也会随着时间的延长而消失，加入阿米卡星会获得更可靠的结果。结论阿米卡星并不能立即解离2例患者聚集的血小板，但随着时间延长，血小板缓慢解离，至4h达到相对稳定。1 h内加入阿米卡星较为理想，相对普通EDTA抗凝可有效加速其解离过程，获得理想结果。

一例血色病患者及其家系铁代谢调节基因的突变分析

目的：对1名临床诊断怀疑为原发性血色病的患者及家属进行血色病相关基因检测。方法记录患者临床资料，采集患者及家属外周血，检测血清铁（SI）、总铁结合力（TIBC）、铁蛋白（SF）和转铁蛋白饱和度（TS）；提取血液基因组DNA，采用聚合酶链反应（PCR）扩增铁代谢调节基因HFE、HJV、HAMP、TFR2、SLC40A1的外显子、内含子剪切序列及5′、3′端非翻译区域（UTR），琼脂糖凝胶电泳、纯化后，双向直接测序检测突变位点。结果患者SF、SI、TS明显升高。TFR2 exon2中出现c．224C＞T杂合突变（p．Ala75Val错义突变），exon5中出现c．714C＞G杂合突变（p．Ile238Met错义突变）；SLC40A1 exon6中出现c．663T＞C纯合突变（p．Val221 Val同义突变）。HFE、HAMP、HJV未检测到突变。家属成员中未见上述TFR2突变，皆存在SLC40A1 V221 V突变。结论 TFR2 A75V和I238M突变可能是该名血色病患者发病的遗传基础，其机制有待于进一步研究。

血流感染分子诊断的研究进展

血流感染是一种严重的全身感染性疾病，血培养仍是目前诊断细菌性血流感染的金标准，但仅有30％～40％的血流感染可通过培养发现致病菌。分子生物学方法可通过分析患者血液标本中病原微生物的核酸成分，快速提供准确的细菌、真菌或病毒感染信息，甚至提供常见病原菌的耐药基因检测结果。目前，应用于临床实验室血流感染检测的分子生物学技术主要包括核酸杂交技术、核酸扩增及DNA序列分析、基因芯片和质谱检测技术等。对常见致病菌、分枝杆菌、苛养菌、少见病原菌等使用多种检测技术联合应用进行快速鉴定及耐药分析，可以在较短时间内为临床提供可靠的诊断结果，提示临床合理用药，提高血流感染患者的存活率。

关注分子技术在临床微生物检验中的应用

本期“微生物分子诊断专题”精心组织了6篇文章，包括1篇综述和5篇专著。内容主要围绕临床常见的细菌、真菌和分枝杆菌感染等的诊断、治疗（耐药）、预防和控制问题，重点介绍了分子生物学技术在临床微生物标本的直接检测、基因分型、耐药基因研究、抗原制备及血清学诊断等方面的应用研究。血流感染是一种严重的全身感染性疾病，但血培养存在检验周期长、阳性率低等问题，应用分子生物学技术能够对血流感染中的常见或少见病原菌、分枝杆菌、苛养菌等进行快速鉴定及耐药分析，可以缩短检验周期。艰难梭菌是一种重要的医院感染病原菌，引起抗菌药物相关性腹泻，GeneXpert实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）能够直接检测粪便标本中的艰难梭菌，具有快速、操作简便等优点。光滑念珠菌可引起血流感染等多种感染，且耐药性强，是医院感染中常见的侵袭性真菌，微卫星多态性分析法简便快速，分辨力高于多位点序列分析（MLST），可作为临床实验室光滑念珠菌基因分型方法。近年来白念珠菌对唑类抗真菌药的耐药性有增高趋势。“白念珠菌对唑类耐药的机制和生物膜相关基因的表达”一文提示ERG11基因的过度表达为白念珠菌对唑类耐药的重要机制。菌丝细胞壁蛋白HWP1基因的高表达与白念珠菌生物膜形成相关。肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药的主要机制是产生质粒介导的2型肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC-2），“同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌质粒blaKPC-2基因”一文建立的λred同源重组法能可靠敲除其质粒上的blaKPC-2，为进一步研究blaKPC-2在肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物耐药中所起的作用奠定基础。“结核分枝杆菌rdESA7-6抗原在耻垢分枝杆菌中的制备及其血清学诊断研究”一文研究制备的结核分枝杆菌融合蛋白-6用于结核病血清学检测具有较好的敏感性和特异性，可用于结核病患者的血清学诊断。

白念珠菌唑类耐药和生物膜相关基因的表达

目的：研究白念珠菌临床分离株唑类耐药和生物膜形成相关基因的表达。方法收集上海市公共卫生临床中心2006至2011年92例感染性疾病患者[病毒性肝炎、结核、获得性免疫缺陷综合征（AIDS）]血液、无菌部位和黏膜分离鉴定的白念珠菌104株，选用ATB FUNGUS3检测抗菌药物（氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑）的低抑菌浓度（MIC），采用半定量逆转录聚合酶链反应（PCR）分析唑类敏感、浓度依赖性敏感（S-DD）和耐药菌株之间药物外排泵基因CDR1、CDR2、MDR1和药物靶酶基因ERG11表达的差异，同时通过甲基四氮盐（XTT）代谢试验筛选强生物膜形成能力菌株（HBFs），研究其与弱生物膜形成能力菌株（LBFs）相关基因ALS3和HWP1表达的差异。结果104株白念珠菌中共检测出16株至少对1种唑类药物耐药，6株至少对1种唑类药物S-DD。药物靶酶基因ERG11在耐药株、S-DD株和敏感菌之间比较，差异有统计学意义（P＝0．0078），且耐药株、S-DD株分别与敏感菌比较，差异有统计学意义（P＜0．05），然而CDR1、CDR2和MDR1表达量在3种菌株间无明显差异。生物膜形成能力试验显示16株菌生物膜形成能力增强，其HWP1表达量与LBFs比较差异有统计学意义（P＝0．0079），ALS3表达量差异无统计学意义。结论 ERG11基因的过度表达为白念珠菌唑类耐药的重要机制。菌丝细胞壁蛋白HWP1基因的高表达与白念珠菌生物膜形成增强相关。

微卫星多态性和多位点序列分析技术在光滑念珠菌基因分型中的应用评估

目的：评估微卫星多态性分析技术在临床光滑念珠菌基因分型中的作用。方法收集2011年1月至2012年12月仁济医院和东方医院临床分离的光滑念珠菌59株，采用多位点序列分析（MLST）和微卫星多态性分析技术进行基因分型，比较2种基因分型方法的结果和分辨力。结果59株光滑念珠菌经MLST分型得到6个序列型，其中ST-7型43株、ST-10型7株、ST-15型和ST-55型各3株、ST-3型2株、ST-43型1株，鉴别力指数（DP）为0．456；经微卫星多态性分析方法分为10型，其中A型25株、B型10株、C型8株、D型6株、E型3株、F型和G型各2株、H～J型各1株，DP为0．770。结论微卫星多态性分析方法简便、快速，分辨力高于MLST技术，可作为实验室基因分型的首选方法。

同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌质粒blaKPC-2基因

目的：建立敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的耐药基因的方法。方法聚合酶链反应（PCR）分别扩增试验菌株待敲除目的基因blaKPC-2的上下游片段及质粒pMQ300的潮霉素耐药基因片段，采用重叠延伸基因扩增（SOE-PCR）技术构建融合片段，以耐阿普霉素的λred质粒pKOBEG-Apr为介导，同源重组敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因。用含潮霉素和阿普霉素的LB培养基筛选重组子，用PCR和逆转录PCR扩增检测blaKPC-2基因、潮霉素耐药基因及药物敏感性验证重组子。结果不同多位点序列分析（MLST）型别的2株临床肺炎克雷伯菌耐药菌株的blaKPC-2基因得以敲除。结论λred同源重组法可以可靠敲除临床肺炎克雷伯菌耐药菌株质粒上的基因。

结核分枝杆菌rdES AT-6抗原在耻垢分枝杆菌中的制备及其血清学诊断研究

目的：构建结核分枝杆菌（MTB）融合基因2×esat-6原核表达载体，利用耻垢分枝杆菌诱导表达、纯化早期分泌抗原ESAT-6重组二聚体（rdESAT-6），Western blot分析其抗原性，并评估其在结核病患者中的血清学诊断价值。方法以DNA疫苗HG856A2为模板扩增2×esat-6基因，构建pMF41-2×esat-6原核表达载体，电转化耻垢分枝杆菌，诱导表达rdESAT-6蛋白，Western blot分析其抗原性。收集126例确诊的结核病患者和42名健康体检者的血清，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和结核斑点金免疫渗滤试验（TB-DOT）检测血清结核抗体，评估rdESAT-6在结核血清学诊断中的价值。结果成功构建了pMF41-2×esat-6重组质粒，以包涵体形式表达了rdESAT-6蛋白，纯化的蛋白纯度在95％以上，可与小鼠抗ESAT-6血清发生特异性反应。126例结核病患者血清检测结果表明，rdESAT-6蛋白在MTB 阳性组和阴性组患者血清学诊断的敏感性分别为79．75％（63/79）、61．70％（29/47），好于TB-DOT的62．03％（49/79）、44．68％（21/47）（P＜0．05）。2种方法对42名健康体检者血清诊断特异性均为95．24％（40/42）。结论 MTB的融合蛋白rdESAT-6用于结核病血清学检测具有较好的敏感性和特异性，可作为结核病血清学诊断的优选抗原。

GeneXpert实时荧光定量PCR快速检测艰难梭菌的临床评估

目的：对GeneXpert实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）在快速检测临床粪便标本中艰难梭菌的应用进行评估。方法采用双拭子蘸取临床未成形粪便标本，一支拭子用于GeneXpert实时荧光定量PCR检测艰难梭菌毒素基因tcdB，另一支用于常规厌氧菌培养检测；对GeneXpert实时荧光定量PCR检测结果与常规厌氧菌培养结果的一致性进行统计学分析，并计算GeneXpert实时荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值等参数。结果临床收集到141例未成形粪便标本，GeneXpert实时荧光定量PCR检出艰难梭菌毒素基因tcdB阳性42例，其中常规厌氧菌培养阳性34例，两者一致性较好（Kappa＝0．7750，P＜0．01），GeneXpert实时荧光定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为87．2％、92．2％、81．0％和94．9％。结论GeneXpert实时荧光定量PCR直接检测粪便标本中的艰难梭菌具有检测快速、操作简便等优点，有重要的临床应用价值。