西双版纳州健康人群血清丙氨酸氨基转移酶参考区间调查

目的 建立西双版纳州健康人群血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)丙酮酸氧化酶法参考区间.方法 对3 167名健康者血清ALT活性在不同性别、不同年龄组间的分布进行统计分析.结果 ALT活性男性明显高于女性(P<0.001).ALT参考区间上限:男性为42 U/L ,女性为37 U/L.男性血清ALT活性在30～59岁组较高(其中40～49岁组高),＜20岁组低;ALT参考区间上限:<20岁为34 U/L,20～29岁为46 U/L,30～59岁为47 U/L,≥60 岁为39 U/L.女性≥40岁者血清ALT活性较高(其中50～59岁组高),≤29岁者较低;ALT参考区间上限:≤29岁为34 U/L,30～39岁为35 U/L,≥40岁为40 U/L.结论 ALT活性在不同性别、不同年龄组间有明显差异,各实验室应按不同性别、不同年龄建立本地区、本实验室血清ALT参考区间.

气质联用技术检测尿琥珀酰丙酮及其在酪氨酸血症诊断中的应用

目的 建立气相色谱质谱用技术(GC-MS)测定尿琥珀酰丙酮(SA)的方法,用于临床上鉴别诊断酪氨酸血症Ⅰ型患者.方法 尿SA先用盐酸羟胺进行污化反应,然后用乙酰乙酸2次萃取,双三甲基硅烷-三氟乙酰胺(BSTFA-TMCS)衍生化,衍生化后的SA用气相色谱质谱仪进行测定分析.质谱分析模式采用选择离子监测(SIM)模式进行检测,SA选择212/182 m/z,内标丙二酸选择233/248 m/z.分析该法的精确性、稳定性、样本回收率、残留分析和实测浓度与加入浓度之间的相关性.用该法检测肝肿大伴酪氨酸升高的13例患者.结果 SA批内变异系数(CV)为6.8%;批间CV为7.8%;回收率为94.0%～102.0%;前处理CV为12.4%;残留分析<1%.在5～120 mg/mL之间,实测浓度与加入浓度之间的相关系数(r)为0.997.内标丙二酸回收率为95.0%～103.0%.确诊酪氨酸血症Ⅰ型患儿2例,尿SA浓度分别为26、54 mmol/mol肌酐.结论 GC-MS测定尿SA具有较高的回收率、精确性和准确性,为临床上鉴别诊断酪氨酸血症Ⅰ型提供了新的方法.

慢性重型乙型肝炎患者血清游离脂肪酸水平的变化及意义

目的 探讨慢性重型乙型肝炎(CSHB)患者血清游离脂肪酸(FFA)水平的变化及其临床意义.方法 测定120例CSHB患者、120例慢性乙型肝炎(CHB)患者治疗前后和30名健康对照者的血清FFA水平,并结合血清总胆红素(TBil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆固醇(TC)水平进行分析.结果 治疗前CSHB组和CHB组患者血清FFA水平分别为(1 638.6±96.4)mmol/L和(626.1±37.5)mmol/L,明显高于正常对照组[(223.1±26.4)mmol/L,P<0.01、P<0.05],CSHB组FFA水平高于CHB组(P<0.05);治疗3周后CSHB组和CHB组患者血清FFA水平分别为(548.1±46.3)mmol/L和(228.1±12.4)mmol/L,CSHB组FFA水平高于CHB组,CHB组FFA水平与正常对照组[ (220.4±16.4)mmol/L]比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 CSHB、CHB患者FFA水平均显著升高,与病情严重程度相关.治疗后FFA水平下降,提示检测血清FFA水平对CSHB的病情诊断和预后有一定的临床价值.

血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶对乳腺癌的辅助诊断意义

目的 探讨血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶(Tu M2-PK)检测对乳腺癌的诊断价值.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测82例乳腺癌患者、20例乳腺良性肿瘤患者及30名健康对照者血浆Tu M2-PK 水平,同时比较乳腺癌患者不同TNM分期血浆Tu M2-PK水平并进行统计学分析.结果 乳腺癌患者血浆Tu M2-PK水平高于乳腺良性肿瘤患者及健康对照组(P<0.05),乳腺良性肿瘤患者与健康对照组血浆Tu M2-PK水平差异无统计学意义. 不同TNM分期中,Ⅲ期乳腺癌患者血浆Tu M2-PK水平高于Ⅰ期(P<0.05), 而Ⅳ期Tu M2-PK水平则低于Ⅱ期与Ⅲ期 (P<0.05); 血浆Tu M2-PK检测乳腺癌的敏感性为65.85%,特异性为70.00%,阳性似然比为2.20,阴性似然比为0.49,阳性预测值为90.00%,阴性预测值为33.33%.结论 血浆Tu M2-PK对乳腺癌的辅助诊断有较高的临床价值,并对乳腺癌的临床分期、浸润转移的判断有一定的意义.

毒蛇咬伤患者肝、肾功能与心肌酶谱的改变及其临床意义

目的 研究毒蛇咬伤患者肝、肾功能及心肌酶谱的改变及其临床意义.方法 对224例毒蛇咬伤患者根据中毒程度的不同分为轻、中、重度3组.以健康体检者为对照组进行肝、肾功能及心肌酶谱检测并进行比较.结果 轻型中毒组肝、肾功能指标与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),中型、重型中毒组均显著高于对照组(P<0.01).轻型、中型、重型中毒组心肌酶谱均显著高于对照组(P<0.01).结论 应对毒蛇咬伤患者进行肝、肾功能及心肌酶谱监测,以便及时指导临床进行抢救治疗.

妊娠高血压综合征孕妇血清尿酸水平分析

目的 探讨血清尿酸(UA)水平在妊娠高血压综合征(简称妊高征)病情监测中的临床价值.方法 测定98例妊高征患者及45名正常妊娠孕妇血清UA水平并作比较.结果 妊高征组血清UA水平明显高于正常妊娠组(P<0.01),轻、中和重度妊高征患者间血清UA水平差异有统计学意义(P<0.01),血清UA水平与妊高征的严重程度呈正比. 结论测定血清UA水平可以监测妊高征的严重程度.

海虾致敏个体过敏原的特异性探讨

目的 分析海虾的致敏蛋白,为海虾过敏原的纯化和标准化变应原疫苗的研制提供理论依据.方法 取常规方法制备的海虾肌肉提取物,经十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离后,用免疫印迹试验分析海虾过敏患者血清中抗体的特异性. 结果 SDS-PAGE结果显示,海虾肌肉粗提取物蛋白相对分子质量在10 000～70 000范围内.20例海虾过敏患者血清的免疫印迹试验表明,致不同患者过敏的海虾蛋白存在明显的差异性,但绝大多数患者均致敏的蛋白带的相对分子质量在30 000～40 000之间.结论 海虾肌肉相对分子质量为30 000～40 000的蛋白可作为制备海虾标准化变应原疫苗和检测试剂的材料.

相对分子质量透明质酸在脐静脉内皮细胞增殖及连接蛋白Ezrin磷酸化表达中的作用研究

目的 探讨高相对分子质量透明质酸(nHA)和低相对分子质量透明质酸(oHA)对脐静脉内皮细胞增殖能力及膜-细胞骨架连接蛋白埃兹(Ezrin)表达的影响.方法 分别用nHA和oHA处理人脐静脉内皮细胞,以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测透明质酸(HA)作用后细胞增殖能力;用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测HA对Ezrin mRNA和蛋白表达的影响.结果 与对照组相比,72 h后oHA(10 μg/mL)显著促进血管内皮细胞增殖(P<0.001),24 h后促进Ezrin基因的表达,48 h后促进Ezrin蛋白磷酸化表达.而nHA(200 μg/mL)则抑制血管内皮细胞的增殖(P<0.01)和Ezrin蛋白的表达磷酸化.结论 oHA能有效促进血管内皮的增殖并促进其胞内连接蛋白Ezrin的表达磷酸化,nHA则抑制内皮细胞的增殖和Ezrin蛋白的表达.

肝细胞癌患者血清VEGF和NO含量测定及其临床意义

目的 研究血管内皮生长因子(VEGF)和一氧化氮(NO)在肝细胞癌患者血清中的表达水平,并探讨其临床意义.方法 分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和分光光度法检测60例肝细胞癌、48例良性肝病患者和32名健康人血清中VEGF和NO的含量.结果 良性肝病患者血清中VEGF和NO含量与健康人比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而肝细胞癌患者血清VEGF和NO含量较良性肝病患者和健康人明显增高(P<0.01),且随着肝细胞癌门静脉癌栓形成、肿瘤体积增大以及临床分期愈晚而显著增高(P<0.01).血清VEGF与NO含量呈明显正相关(r=0.836,P<0.01). 结论 VEGF和NO可能与肝细胞癌的发生、发展密切相关,治疗前检测血清VEGF和NO表达水平可以作为判断肝细胞癌侵袭、生长及临床分期的有价值指标.

荧光定量逆转录聚合酶链反应检测婴幼儿粪便A组轮状病毒

目的 建立一种快速、准确、定量检测A组轮状病毒方法.方法 选择轮状病毒内壳蛋白基因作为A组轮状病毒的靶序列,设计合成引物和探针;与世界卫生组织(WHO)推荐的轮状病毒胶体金法平行检测,评价荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)的敏感性与重复性.收集腹泻患儿粪便样本246份,并对其进行检测分析. 结果采用荧光定量逆转录PCR检测A组轮状病毒的敏感性为1.0×101拷贝/μL;246份粪便样本中检出A组轮状病毒68例(27.64%);胶体金法检出A组轮状病毒抗原阳性48例(19.51%).结论 应用荧光定量逆转录PCR能够快速、准确检测A组轮状病毒,适合于大样本检测.

外阴阴道念珠菌感染与耐药性的研究

目的 了解女性外阴阴道的感染情况,研究临床分离的真菌种类及其对药物的敏感性.方法 对3 133例标本进行回顾性分析,并对其中的344例阳性标本的菌株用API真菌鉴定板条(API 20C AUX)鉴定,用Rosco纸片法对益康唑、克霉唑、氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、酮康唑、制霉菌素、两性霉素B进行药物敏感性试验.结果 3 133例临床标本共检出念株菌1 122株,阳性率为35.8%,阳性标本中白念珠菌占71.5%,克柔念珠菌占6.1%、光滑念珠菌占2.5%,其他念珠菌占19.9%.念珠菌对两性霉素B、制霉菌素和酮康唑的敏感性较高,分别为98.5%、97.1%、96.2%;对咪康唑、伊曲康唑、氟康唑的耐药率较高,分别为15.4%、19.5%、15.4%.结论 由于不同菌种对药物的敏感性不同,对感染的念珠菌进行菌种鉴定和药敏试验对临床治疗有重要意义.

靶向23SrRNA domain Ⅱ区的肽-多肽核酸抑制细菌生长的研究

目的 研究靶向23SrRNA domainⅡ区的肽-多肽核酸(PNA)(G1138)抑制细菌生长的效果.方法 用浊度分析观察肽-PNA(G1138)抑制大肠埃希菌DH5α的生长,用克隆形成单位进一步分析肽-PNA(G1138)抑菌效果.结果 肽-PNA(G1138)显示出剂量和序列特异性抑制细菌生长,但肽-PNA(G1138)的低抑菌浓度(MIC)明显高于四环素,抑制效果低于四环素,他们的MIC分别为10和4 μmol/L.结论 10 μmol/L 的肽-PNA(G1138) 能够抑制大肠埃希菌DH5α的生长,但与四环素和其他靶向23SrRNA domain V区的PNA比较起来抑菌效果不理想.筛选更有效的转运肽,提高肽-PNA(G1138)的抑菌效果,是以后研究中将要努力解决的问题.

一例碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的 研究1株碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500的耐药机制.方法 采用浓度梯度法(E-test)测定细菌的抗菌药物低抑菌浓度(MIC),采用接合实验、聚合酶链反应(PCR)、质粒抽提、探针杂交印迹试验(Southern blot)、等电聚焦电泳及耐药基因克隆测序分析细菌的耐药机制.结果 接合实验、质粒电泳和Southern blot结果显示耐药基因位于一个50 kb的可转移质粒上;等电聚焦电泳显示3条β-内酰胺酶条带,等电点(PI)分别为9.0、6.7(KPC-2)、5.4.PCR产物克隆分析比对为blaKPC-2型.结论 碳青霉烯类抗菌药物耐药的肺炎克雷伯菌A1500携带由质粒介导的KPC-2酶.

一种检测细菌性阴道病方法的建立及临床评价

目的 评估一种国内自主建立利用唾液酸酶检测细菌性阴道病(BV)方法的临床应用价值.方法 比色法探索研发试剂与酶标准品的佳反应条件,包括底物溶液的pH值和反应的适温度及时间.采用研发试剂、BV BLUE、临床现用国产试剂盒对临床标本进行检测,判断研发试剂的临床应用价值.结果 研发试剂在pH值6.0～6.2、37 ℃ 10 min时与酶标准品达到佳反应,与BV BLUE相比,检出限相同时研发试剂底物用量仅为BV BLUE的1/2.78.临床实验中,研发试剂与BV BLUE对BV的检测效果差异无统计学意义(P=1.000,Kappa=0.905),符合率为96%.而国产试剂盒与BV BLUE对BV的检测效果差异有统计学意义(P=0.000, Kappa =0.362),符合率为65%.结论 研发试剂可以达到与BV BLUE相同的检出效果,其快速、方便、可信度高且成本较低,优于国内类似产品,更有利于在临床推广和使用.

病原菌分子分型方法研究进展

在公共卫生领域和医院感染评价分析时,常常进行特定地区食品污染、医院感染和局部流行病学调查,这就需要采用分辨率高、快速简便的分型技术.传统的分型技术主要根据病原菌的外在生理、生化特征等表型,而随着分子生物学的快速发展,已经开发出了多种简便易行的分子分型技术.

弓形虫感染实验室诊断的技术进展

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是1908年由法国学者Nicolle和Manceaux在突尼斯的巴斯德研究所工作时从饲养的刚地梳趾鼠单核细胞中首次发现,属专性细胞内寄生原虫,人是弓形虫的中间宿主.人类弓形虫感染率很高,我国人群的感染率因地区和调查方法的不同,一般为0.3%~47.3%[1],李伟等[2]发现孕妇弓形虫IgM抗体阳性率达3.6%,随着获得性免疫缺陷综合征的感染率增加和宠物的饲养,此感染率近年有增长趋势.

肾脏疾病患者的尿液三项检查仪器法和手工法的一致性分析

目的 探讨尿液分析仪和手工法检测肾脏疾病患者尿标本3项结果的一致性.方法 用CLINITEK 50全自动尿液分析仪检测113例尿标本,并与显微镜尿沉渣红细胞、白细胞结果及磺基水杨酸法检测尿蛋白结果比较.结果 仪器法和手工法检测尿红细胞、尿白细胞及尿蛋白的结果一致性均达中等水平,红细胞:Kappa=0.462 7,白细胞Kappa=0.499 8,尿蛋白Kappa=0.477 1.结论 2种方法一致性不够理想,但各有其优点,仪器法不能替代手工镜检法.

对Sysmex XS-800i五分类血液分析仪结果的应用评价

目的 对Sysmex XS-800i(简称XS-800i)五分类血液分析仪检测末梢血结果进行评价.方法 首先对XS-800i的各项检测参数精密度、携带污染率、线性、准确性等进行评价;着重对XS-800i白细胞(WBC)五分类结果的精密度、准确性及其对异常形态血细胞的检出敏感性及特异性等进行评价. 结果 XS- 800i各项检测参数准确性、重复性、线性范围、携带污染率等指标均符合要求.仪器WBC五分类结果与人工显微镜分类结果的相关系数(r)分别为中性粒细胞(NE)0.914、淋巴细胞(LY)0.893、单核细胞(MO)0.791、嗜酸性粒细胞(EO)0.812、嗜碱性粒细胞(BA)0.621,对异常形态血细胞的检出敏感性为100.0%,特异性为72.5%.结论 XS-800i操作简便,采血量少,适用于儿科患儿的末梢血五分类检测.

2 612例阴道分泌物检测及其临床意义探讨

目的 了解妇科阴道疾病的病原体检出率及分布,为临床预防和治疗提供参考.方法 对2 612例门诊妇科患者阴道分泌物进行白带常规检查和革兰染色镜检.结果 2 612例标本中,清洁度Ⅰ～Ⅱ度1 128例、Ⅲ～Ⅳ度1 484例,不同清洁度中病原体的检出率差异有统计学意义(P<0.01).检出念珠菌472例,滴虫118例,线索细胞626例,三者比较差异有统计学意义(P<0.01).绝经期妇女线索细胞检出率明显高于未绝经期妇女(P<0.01),而念珠菌的检出率则相反(P<0.01),滴虫的检出率无明显差异.结论 在白带常规检查中,即使清洁度正常时也要注意查找病原菌.线索细胞在不同清洁度、不同年龄中均有较高的检出率,应加强该项目的 检测.

原始自然杀伤细胞白血病一例及其实验室诊断

目的 提高对原始自然杀伤(NK)细胞白血病实验室诊断的认识.方法 报道1例原始NK细胞白血病,并就其实验室诊断进行讨论及文献复习.结果 原始NK细胞白血病临床表现、形态学、免疫学表型有其特殊表现,实验室检查对其诊断具有重要意义.结论 原始NK细胞白血病是一种临床少见血液系统肿瘤,其诊断需将临床表现与实验室检查结合起来.

一例少动鞘氨醇单胞菌引起菌血症的报道

少动鞘氨醇单胞菌是革兰阴性非发酵菌,属鞘氨醇单胞菌属,有12个种,只有少动和类少动鞘氨醇单胞菌被认为是有重要临床意义的.由于在环境中广泛分布,在很多临床标本如血液、脑脊液、腹水、尿液、泌尿生殖道分泌物、创面以及医院环境监测标本中可以分离到.本研究对该菌引起的菌血症作一报道.

医院感染肠球菌的分布及耐药性分析

肠球菌为条件致病菌,主要引起泌尿道、生殖道、腹腔手术后的感染.由于免疫抑制剂的广泛应用以及抗菌药物的不合理使用,近几年肠球菌的感染率逐渐增高.肠球菌的耐药机制比较复杂,不仅对多种抗菌药物呈固有耐药,而且易产生获得性耐药,导致临床治疗困难.为了解金华市人民医院肠球菌的分布及耐药情况,我们对2005至2007年分离的肠球菌进行回顾性调查和统计分析,为临床抗感染治疗提供参考依据.

特种蛋白室内质控品制备及应用评价

目的 自制特种蛋白室内质控品并对其应用进行评价.方法 选择符合条件的正常人及患者血清、尿液经过灭活、离心、稀释等处理后定值、分装和保存,从质控效果和稳定性两方面进行评估.结果 自制特种蛋白室内质控品方法简便.经8个月室内质控效果和稳定性与仪器原厂质控品比较,差异无统计学意义.结论 自制特种蛋白室内质控品可用于特种蛋白检测的常规室内质控.

乙型肝炎病毒感染与肝病患者血浆同型半胱氨酸之间的关系

同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是人体内蛋氨酸代谢的中间产物,与体内一碳单位代谢有着密切关系.Hcy在心、脑血管疾病中的作用已得到肯定,但在肝脏疾病中的作用尚不明确.以往的研究中发现肝癌患者血浆总Hcy(t-Hcy)明显高于健康对照组[1].

实时荧光定量PCR测定食管癌VEGF-C和VEGFR-3基因表达

目的 建立测定血管内皮生长因子-C(VEGF-C) mRNA和血管内皮生长因子受体-3 (VEGFR-3) mRNA的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),探讨其在食管癌组织及其癌旁组织中的表达水平.方法 分别以自行构建和克隆的pMD18-VEGF-C和pMD18-VEGFR-3质粒作为定量模板,用循环阈值(Ct)定量起始的模板,在荧光TaqMan方法的基础上建立了测定VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的实时FQ-RT-PCR,并分别测定了40例食管癌组织及其癌旁组织中VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的表达水平.结果 VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA测定的线性范围均为103~108拷贝/μg总RNA;VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA高、低值的批内、批间变异系数(CV)在7.07%～12.49%之间.VEGF-C mRNA主要表达在癌组织中,而VEGFR-3 mRNA在癌组织与癌旁组织中表达无差异;VEGF-C mRNA与VEGFR-3 mRNA在癌组织与癌旁组织中表达存在相关性;24例淋巴结转移食管癌患者癌组织及其癌旁组织VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA水平与16例无淋巴结转移食管癌患者癌组织及其癌旁组织存在显著差异,提示有淋巴结转移的食管癌组织及其癌旁组织VEGF-C和VEGFR-3基因表达水平上调.VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的表达水平与食管癌临床病理分期有密切关系.结论 我们建立的测定VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的实时FQ-RT-PCR灵敏、稳定、重现性好,可供VEGF-C、VEGFR-3基因表达的临床检测和研究.VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA基因表达水平可作为食管癌淋巴结转移的预测指标,亦可作为分子水平上判定食管癌临床分期的辅助指标之一.

免疫散射比浊法测定免疫球蛋白的分析性能验证与评价

我们参考美国临床实验室标准化研究所(CLSI)文件及相关文献并结合实际工作,探讨了DADE Behring Nephe-lometerⅡ(BNⅡ)散射比浊法检测免疫球蛋白的方法学性能验证方案和评价方法,现以IgG为例报道如下.

2009年"检验医学新技术"(国家级)继续教育试题(部分)