首页 > 文献资料
-
以双氯酚酸为探针采用高效液相色谱法快速测定CYP450 2C9的酶活性
目的 建立一种快速、高效的以双氯酚酸作为探针药物评价细胞色素P450 2C9(CYP2C9)酶活性的高效液相色谱.紫外检测方法.方法 色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18 柱(50mm×4.6mm 1.D.,5μm);流动相为乙腈(含0.01%七氟丁酸)-水(含0.01%七氟丁酸)(65:35,V/V),流速2.0mL/min;检测波长为280nm.双氯酚酸与人CYP2C9酶在37℃温孵适当时间后,加入100μL乙腈-冰乙酸(94:6,V/V)终止反应,10 000g离心后取上清液进样分析测定.结果 4'-羟基双氯酚酸的保留时间为1.35min,线性范围为1.00～200μmol·L-1(r:0.999 9),低定量限为1.00 μmol·L-1,回收率为99.5%～100.8%;双氯酚酸的保留时间为2.25min,线性范围为1.00-200μmol·L-1(r=0.999 9),低定量限为1.00μmol·L-1,回收率为99.3%-101.1%.两者的日内、日间RSD均<15%,温孵体系中的其他内源性物质不干扰测定.结论 该方法快速、稳定、灵敏度高,适合体外双氯酚酸及其代谢物4'-羟基双氯酚酸的测定,可应用于体外CYP2C9酶活性的评价及酶动力学的研究.
关键词： RP-HPLC 双氯酚酸 4'-羟基双氯酚酸 细胞色素P450 2C9 -
基于细胞色素P450 2C9的基因多态性研究丹参组分对氟伐他汀代谢影响及其机制
目的 探讨丹参的6种组分(丹参素、原儿茶酸、丹酚酸B、隐丹参酮、二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA)对人肝微粒体代谢氟伐他汀的影响,并基于细胞色素P450 2C9(CYP2C9)*1,*2,*3基因多态性,研究隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ对氟伐他汀代谢的影响.方法 构建肝微粒/不同基因型重组酶孵育体系.用HPLC检测氟伐他汀浓度,通过软件求算酶动力学参数以及半数抑制浓度(IC50)和抑制常数(Ki)值,比较不同突变位点CYP2C9代谢氟伐他汀的能力及丹参组分对其的影响.结果 人肝微粒体实验显示:在隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ 10μmol·L-1时,其对氟伐他汀代谢的剩余酶活性分别为30.24％和14.52％,显示出了明显的抑制作用,然而其他丹参组分则没有显示出抑制作用.CYP2C9重组酶实验:CYP2C9*1,*2,*3代谢氟伐他汀的米氏常数(Km)分别为(1.56±0.21),(1.79±0.25)和(2.32±0.43)μmol·L-,大反应速率(Vmax)分别为(41.75±1.67),(26.55±1.08)和(12.85±0.79) pmol·min-1·mg-1,内在清除率(CLint)分别为26.71,14.86和5.53.μL·min-1·mg-1,显示CYP2C9*1的代谢活性强于*2,*3;隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ对CYP2C9*1,*2,*3代谢氟伐他汀的IC50值分别是(1.74±0.41),(2.64 ±0.81),(3.17±0.32)μmol·L-1和(0.19±0.09),(0.56±0.16),(1.52±0.34)μmol·L-1,CYP2C9*1的IC50和K值与*3比较,差异均有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论 CYP2C9* 2(430 C ＞T)和*3(1075A＞ C)突变可影响其代谢活性.隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ能明显抑制CYP2C9代谢氟伐他汀,且其对不同突变CYP2C9代谢氟伐他汀的抑制能力是有差别的.
关键词： 丹参组分 氟伐他汀 细胞色素P450 2C9 基因多态性 代谢 -
细胞色素P4502C9基因多态性对格列美脲药代动力学影响的Meta分析
目的 用Meta分析评价细胞色素P450 2C9(CYP2C9)基因多态性对格列美脲的药代动力学的影响.方法 用计算机检索PubMed、EMbase、CochraneLibrary、Web of Science、中国知网和万方数据库,收集有关CYP2C9基因多态性与格列美脲药代动力学关系的研究,提取血药浓度-时间曲线下面积(AUC)、峰浓度(Cmax)、清除率(CL/F)和半衰期(t1/2)等药代动力学参数,用RevMan5.3软件对纳入的研究进行Meta分析.结果 终共纳入3篇文献进行Meta分析,共70例病例.CYP2C9*1*3突变型与CYP2C9*1*1野生型相比,AUC[463.19(275.28,651.11)]和Cmax[43.02(1.86,84.17)]差异均有统计学意义(均P＜0.05),但CL/F[-1.42(-3.10,0.25)]和t1/2[2.91(-4.69,10.52)]差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 CYP2C9*3基因多态性对格列美脲的药代动力学存在影响,CYP2C9*1*3突变型人群的格列美脲突变型人群格列美脲的系统暴露参数AUC、Cmax均增大、CL/F减小,代谢减慢,对临床用药的安全性和有效性有一定的借鉴意义.
关键词： 格列美脲 细胞色素P450 2C9 基因多态性 药代动力学 Meta分析 -
细胞色素P450 2C9酶活性测定探针的分析
P450 2C9是人体中重要的药物代谢酶.P450 2C9基因编码区的多态性造成氨基酸序列的变化,主要包括P450 2C9*2和P450 2C9*3两种突变体,变异纯合子对P450 2C9底物的代谢能力明显降低.目前常用的P450 2C9的探药包括甲苯磺丁脲、华法令和洛沙坦等,各种探药在检测方法、不良反应和灵敏度方面各有优缺点.
关键词： 细胞色素P450 2C9 甲苯磺丁脲 华法令 洛沙坦 -
CYP2C9和VKORC1基因多态性对华法林稳定剂量的影响
目的 探讨细胞色素P450 2C9基因(CYP2C9) 和维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1基因(VKORC1)多态性及年龄、性别、体重指数对中国汉族人群华法林稳定剂量的影响.方法 收集山西地区口服华法林抗凝患者病理组179例,健康对照组150例,采用扩增阻滞突变体系-聚合酶链式反应技术(ARMS-PCR)检测CYP2C9*3(1075A>C)、VKORC1-1639G>A基因多态性,并比较不同基因型间华法林稳定剂量以及年龄、性别和体重指数对华法林稳定剂量的影响.结果 病例组检出CYP2C9*3(1075A>C) AA、AC、CC型分别为158例(88.3%)、19例(10.6%)、2例(1.1%),AC+CC型华法林稳定剂量(2.35±1.13)mg/d明显低于AA型(2.92±1.11)mg/d(P<0.05).VKORC1-1639G＞A GG、GA、AA型分别为0例、22例(12.3%)、157例(87.7%),AA型华法林稳定剂量(2.72±1.00)mg/d明显低于GA型(3.84±1.46)mg/d(P<0.05).非遗传因素中年龄与华法林日均稳定剂量呈负相关(r=-0.186,P<0.05).性别及体重指数与华法林日均稳定剂量无明显相关(P＞0.05).结论 年龄及CYP2C9*3(1075A>C)和VKORC1-1639G＞A基因多态性对华法林日均稳定剂量有影响,临床医生可以参考这些变量指导患者个体化华法林的使用,对临床提高华法林的安全使用具有潜在的意义.
-
关于细胞色素P450 2C9多态性的研究进展
细胞色素P450酶系是人肝细胞微粒体中主要的药物代谢酶。随着药物遗传学和分子遗传学的深入发展，弄清细胞色素P450酶系与人体内药物代谢的关系已成为必要。本文就细胞色素P450 2C9的遗传多态性及其与药物代谢的关系作一综述。
关键词： 细胞色素P450 2C9 多态性 药物代谢 -
CYP2C9和 VKORC1基因多态性与华法林剂量关系的研究
目的：研究江苏徐州地区汉族人细胞色素 P450（CYP）2C9和维生素 K环氧化物还原酶复合体1（VKORC1）基因型与华法林剂量的关系，为华法林个体化给药方案提供建议。方法采用聚合酶链反应-连接酶检测反应（PCR-LDR）技术检测100名汉族健康受试者及200例临床使用华法林的患者CYP2 C9和VKORC1基因型。结果健康受试者CYP2C9基因型中91例为*1/*1型，9例为*1/*3型；VKORC1基因型中17例为GA型，83例为AA型。200例临床使用华法林的患者CYP2C9基因型检测有179例为*1/*1型，21例为*1/*3型，未发现*2突变；VKORC1（1639G＞A）基因型中168例为突变纯合子AA型，32例为杂合子GA型，未发现GG型；VKORC1（1639G＞A）基因AA型患者的华法林维持剂量为（2．59±0．83）mg/d，明显低于GA型[（4．51±0．79）mg/d]；CYP2C9基因*1/1*型华法林维持剂量为（3．01±1．12）mg/d，明显高于*1/*3型[（2．19±0．32）mg/d，P＜0．05]。结论 CYP2C9和VKORC1基因型的多变量个体化给药方案对临床提高华法林使用的安全性有潜在的意义。
-
细胞色素P4502C9基因多态性与华法林稳定剂量的相关性
目的 探讨细胞色素P450 2C9基因(CYP2C9)多态性位点1075A＞C与个体间华法林稳定剂量差异的关系.方法 用实时荧光PCR结合熔解曲线分析的方法,对323例已获得华法林稳定剂量患者的CYP2C9 1075A＞C位点进行分型；比较不同基因型患者的华法林稳定剂量的差异.结果 323例患者中,CYP2C9基因型*1/*1(AA)、*1/*3(AC)和*3/*3(CC)分别有294例、28例和1例,各占91.02％、8.67％和0.31％,等位基因*1(1075A)和*3(1075C)的频率分别为95.36％和4.64％.在CYP2C9的3种基因型中,*1/*1基因型组华法林剂量(3.07±1.12)mg/d显著高于*1/*3基因型组(1.71±0.53) mg/d(F22.555,P＜O.01),*3/*3基因型患者的剂量低,仅为0.625 mg/d.结论 CYP2C9基因多态性是影响个体间华法林用量差异的一个主要遗传因素,对患者的CYP2C9 1075A＞C位点进行分型,可作为华法林个体化用药的一个重要依据.
关键词： 细胞色素P450 2C9 基因分型 实时荧光PCR 华法林 -
实时荧光定量PCR检测CYP2C9*3及VKORC1_C1173T基因多态性方法的建立
建立实时荧光定量PCR法检测人药物代谢基因CYP2C9*3及VKORC1_C1173T多态性,并确定适反应条件.该方法采用TaqMan-MGB(Minor groove binder,小沟结合物)探针技术,针对每个待检测位点设计特定的引物和探针,并优化引物、探针浓度;建立和优化反应体系,设计合理的PCR Enhancer组分;并对TaqMan-MGB探针特异性、敏感性和重复性进行评价,同时对部分实时荧光定量PCR产物样品进行测序验证.结果表明,TaqMan-MGB探针法对2个等位基因检测结果准确,检测方法特异性高;所构建方法线性关系良好(R2≥0.991),扩增效率为95.2％～109.9％,标准曲线斜率为-3 ～-3.5;检测灵敏度可达10拷贝/反应;随机样品TaqMan-MGB探针检测结果与测序结果一致.所建立用于基因多态性检测的TaqMan-MGB探针法具有简便、快速、准确、高效等特点,检测原理可用于各种SNP分型检测,具有广泛的应用前景.
-
SYBR Green I实时荧光PCR检测VTKORC1和CYP2C9基因型
目的 建立一种检测维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1)和细胞色素P450 2C9(CYP2C9)基因型的SYBR GreenI实时荧光PCR法.方法 提取134例心脏瓣膜置换术患者的外周血基因组DNA.针对VKORC11173C>T和CYP2C9 1075A>C两个单核苷酸多态性(SNP)位点,分别设计一套等位基因特异性引物.PCR反应体系中加入荧光染料SYBR Green I,样本经扩增后结合熔解曲线分析,确定每个样本的基因型.结果 VKORC1 1173C>T和CYP2C9 1075A>C两个SNP位点的不同基因型具有不同的熔解曲线峰型.134例患者中,VKORC1 1173C>T基因型TT、TC和CC分别有111例、21例和2例,各占82.8%、15.7%和1.5%;CYP2C9 1075A>C基因型*1/*1和*1/*3分别有121例和13例,各占90.3%和9.7%,未检出纯合子*3/*3基因型.结论 基于荧光染料SYBR Green I的实时荧光PCR分型方法操作简便、价格低廉、结果准确可靠,适于临床实验室对VKORC1 1173C>T和CYP2C9 1075A>C的基因分型.
-
CYP2C9基因多态性与磺酰脲类降糖药药代动力学药效学相关性的研究进展
磺酰脲类是目前临床上广泛使用的口服降糖药,在人体内通过具有基因多态性的CYP2C9酶代谢.不同基因型CYP2C9酶代谢活性的差异,是造成患者所需磺酰脲类口服降糖药剂量个体差异大的因素之一.本文综合国内外新报道,阐述了CYP2C9基因多态性与磺酰脲类口服降糖药药动学、药效学相关性的研究进展,为制定磺酰脲类降糖药的个体化用药方案提供参考.
关键词： 细胞色素P450 2C9 基因多态性 磺酰脲类 药动学 药效学 -
POR基因多态性与华法林维持剂量关系的研究
目的探讨POR基因多态性与华法林维持剂量的相关性。方法共纳入185例中国汉族人工心脏机械瓣膜置换术患者,采用 Sequenom MassARRAY? System 检测VKORC1及 POR 相关 SNPs,采用 PCR-RFLP 法检测CYP2C9*3基因型。采用 ANOVA 或 t检验考察目的 SNPs与患者华法林维持剂量的关系。结果在CYP2C9*1*1携带者中,POR rs17685 T等位基因携带者( TT型和CT型)华法林维持剂量明显高于 CC 型携带者(3．50±1．07) mg · d-1 vs (3．14±0．94) mg·d-1,P=0．03。在CYP2C9*1*1及VKORC1 rs9934438 GA/GG携带者中, POR rs17685 T等位基因携带者( TT型和CT型)的华法林维持剂量明显高于CC型携带者(4．76±0．90) mg·d-1 vs (4．08±1．03) mg· d-1,P=0．04。未发现POR rs2868177与华法林维持剂量存在相关性。结论在中国汉族人工心脏机械瓣膜置换术患者中,POR rs17685 T突变与华法林剂量上调相关,该基因型检测将有助于指导华法林的临床合理应用。
-
超高效液相串联质谱法快速测定CYP2 C9酶活性
目的：建立一种超高效液相串联三重四级杆质谱法快速测定CYP2C9体外酶学活性检测的新方法。方法：色谱柱为ACQUITY UPLC? BEH C18柱(100 mm ×2.1 mm,1.7μm)；流动相为乙腈-水(含0.1%甲酸和0.5%氨水)(40∶60),流速为0.2 ml·min-1,柱温30℃,内标为氯磺丙脲；质谱条件：电喷雾离子化源(ESI),正离子检测模式；用实验室制备的CYP2C91,2,3和13酶在37℃孵育甲苯磺丁脲后,加入800μl冰乙酸乙酯终止反应,10000 g离心后取有机层于氮吹仪下吹干并用200μl流动相复溶后上样。结果：4-羟基甲苯磺丁脲的保留时间为1.21 min,线性范围为0.05~5 ng·μl-1(r=0.9998),低定量限为0.01 ng·μl-1,回收率为99.3%~100.3%。4-羟基甲苯磺丁脲的日内、日间RSD均<5%,孵育体系中的其他内源性物质不干扰测定。CYP2C91,2,3和13孵育甲苯磺丁脲后结果显示突变体CYP2C92,3,13的体外酶学活性分别为野生型CYP2C91的47.3%,11%和0.3%。结论：该方法快速、稳定,该方法操作简便,适于CYP2C9的快速活性检测及抑制药等的相关性研究。
-
广东人群CYP2C9基因T269C位点多态性研究
目的研究广东人群CYP2C9基因T269C位点多态性.方法 PCR扩增跨越CYP2C9基因T269C位点的DNA片断,用MvaI酶切PCR产物,通过PAGE-银染判断基因型.结果在接受检测的158例健康广东人中,共检出2名CYP2C9 T269C位点杂合子个体,其余156人均为野生型纯合子个体.结论广东人群存在CYP2C9 269C即CYP2C9·13等位基因,其频率为0.006;中国人群和韩国人群CYP2C9·13等位基因频率差异无显著性.
关键词： 细胞色素P450 2C9 聚合酶链反应 限制性片断长度多态性 -
细胞色素P450 2C9基因多态性对药物代谢的影响
不同的人种和个体间存在细胞色素P450 2C9(CYP2C9)基因多态性,这些基因多态性的个体对药物的代谢有明显的差别.现就目前关于CYP2C9基因多态性的研究概况进行综述,分析CYP2C9基因多态性产生的分子基础,CYP2C9基因多态性对底物药物代谢的不同影响,阐明基因多态性的信息可作为用药剂量个体化的理论依据,从而指导临床药物的使用更加合理和科学.
关键词： 细胞色素P450 2C9 基因多态性 药物代谢 -
遗传因素对华法林维持剂量影响的研究现状
华法林是常应用的口服抗凝药物之一.许多研究已证实华法林维持剂量的个体差异与基因型密切相关,尤其是细胞色素P450 2C9 (CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合物1(VKORC1)的基因型对华法林的影响受到广泛认同;尽管还有其他很多基因型被报道与华法林剂量有关,但其具体影响结论不一.研究发现纳入基因信息和临床数据的剂量计算公式可预测华法林的维持剂量,由于目前已开展的临床试验结果不一,其实用性亦受到质疑.下一步研究需要更大样本量及多中心的研究,以期进一步阐释遗传与非遗传因素对华法林剂量的影响,同时对已构建的模型进行验证或构建新模型,提高对华法林个体差异的解释百分比.
