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高效液相色谱法检测酱油中羟脯氨酸的含量研究
酱油是人们日常生活中必备的调味品之一,在酱油当中,具有羟脯氨酸的成分,在检测酱油中羟脯氨酸含量的实验中,可应用高效液相色谱法。利用乙醇提取样品,衍生试剂采用2,4-二硝基氟苯,采用360 nm的波长,采用5μm 4.6 mm×250 mm的色谱柱。通过相应的实验操作,获得酱油当中羟脯氨酸的含量数据。
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小鼠血吸虫感染后肝脏羟脯氨酸含量测定方法的实验研究
机体胶原蛋白的主要特征性成份之一为羟脯氨酸,它占胶原蛋白氨基酸总量的13%,因此测定肝脏组织的羟脯氨酸含量,是反映肝脏纤维化程度的直接指标.但传统的测定方法有待进一步完善,在此作者进行了部分改进.
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Ala-Gln和BCAA对创伤大鼠静脉营养支持作用的实验研究
目的观察富含丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)和支链氨基酸(BCAA)的氨基酸注射液对创伤大鼠的静脉营养支持效果.方法Wistar大鼠40只,行创伤和中心静脉插管后,随机分为无氮组、正常饲料组、对照组和实验组.测定饲料摄入量、体重、氮平衡、血浆蛋白和氨基酸含量、外周血淋巴细胞转化率、伤口埋植海绵中羟脯氨酸含量、皮肤抗张力强度和小肠粘膜蛋白质及核酸.结果无氮组动物营养状况欠佳,各项指标均较差.实验组动物的血浆谷氨酰胺(Gln)、BCAA含量,外周血淋巴细胞转化率,伤口皮肤抗张力强度和羟脯氨酸含量都显著高于对照组和正常饲料组(P<0.05);实验组和正常饲料组动物第8天氮平衡,小肠粘膜核酸和蛋白质明显高于对照组(P<0.05).结论Gln和BCAA有助于改善创伤后机体的营养及代谢状况,增强免疫功能,促进小肠粘膜细胞增殖.
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大黄多糖对糖尿病大鼠皮肤创面愈合的影响
糖尿病状态下皮肤愈合困难,皮肤溃疡及创面迁延不愈严重影响患者生活质量。本研究链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,糖尿病大鼠成模2周后手术制作背部创面模型。糖尿病大鼠创面给予生理盐水即糖尿病组,糖尿病大鼠创面敷药大黄多糖组即大黄多糖组,糖尿病大鼠创面敷大黄多糖及SB431542(转化生长因子受体抑制剂)即大黄多糖-SB431542组,另取正常大鼠制作背部创面模型给予生理盐水为对照组。2周后检测创面面积,计算创面愈合率,试剂盒检测大鼠创面中羟脯氨酸( OHP)的含量,HE染色观测创面的肉芽组织生长情况,免疫组化染色结合Image J 软件检测TGFβ1表达。结果表明,与对照组相比,糖尿病组及大黄多糖-SB431542组创面愈合率降低较为明显,羟脯氨酸含量减少( P<0.01),大黄多糖组差异不显著(P>0.05)。对照组与大黄多糖组真皮层较厚,皮下胶原纤维含量丰富,而糖尿病组与大黄多糖-SB431542组真皮层较薄,胶原纤维含量亦较少。糖尿病组转化生长因子( TGFβ1)表达较对照组减少,大黄多糖组和大黄多糖-SB431542组的TGFβ1表达上调。结果表明,大黄多糖能诱导TGFβ1表达,这可能是大黄多糖促进糖尿病大鼠皮肤创面愈合的重要机制之一。
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γ-干扰素对大鼠二甲基亚硝胺肝纤维化肝脏胶原代谢的作用
目的:探讨γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)影响肝脏胶原代谢的抗肝纤维化作用机制.方法:二甲基亚硝胺腹腔注射诱导大鼠肝纤维化模型,以IFN-γ5万U/只,im,bid,共4 wk.观察大鼠的体质量、肝脾重质量等一般情况.大鼠肝脏HE染色与丽春红胶原染色,分级分期观察肝组织的炎性坏死与胶原纤维沉积变化.检测大鼠血清肝功能与肝组织羟脯氨酸含量,分析肝组织间质型胶原酶(interstitialcollagenase,MMP-1)活性,检测肝组织I型前胶原[a1(1)]基因表达.结果:模型大鼠肝脏胶原纤维间隔形成,肝小叶与肝窦内胶原增生沉积明显;脾脏明显增大;血清ALT活性升高;肝组织羟脯氨酸含量上升,MMP-1活性轻度上升,I型前胶原基因表达明显增多.与模型对照组比较,γ-于扰素可显著降低模型大鼠肝组织羟脯氨酸含量(29.8±u.0μg@g-1,vs 44.7±14.2μg@g-1,P<O.05),减轻肝脏内胶原纤维增生沉积,降低血清ALT活性(478.4±156.4 nkat@L-1,vs 1055.2±l28.4 nkat@L-1,P<0.05),提高肝组织MMP-1活性(39.8±6.5 u,vs 32.O±2.8 U,P<0.05),降低I型前胶原基因表达(84.8±9.5%,vs 112.3±8.7%,P<0.05).结论:IFN-γ有良好的治疗二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化效果,其作用机制主要在于纠正纤维化肝脏异常胶原代谢,即抑制肝脏纤维过度增生,促进增生沉积的胶原降解.
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木犀草素降低CCl4诱导的大鼠肝纤维化
目的:研究黄酮类化合物木犀草素(1uteolin,Lu)治疗肝纤维化的作用.方法:30只Wistar大鼠随分成正常对照组,实验对照组和Lu实验组,实验对照组和Lu实验组给予8Wk CCl4和酒精饮料制备肝纤维化动物模型,Lu实验组从实验开始就用20mg.Kg-1.da-1 LU灌胃.实验结束后,进行病理学检测和测定肝组织羟脯氨酸含量,用Northem Blot检测Ⅰ型前胶原mRNA表达,并测定了肝组织MDA含量和基质金属蛋白酶(MMPs)的活性.结果:经Lu治疗后,肝脏纤维化程度降低,羟脯氨酸含量减少;同时观察到Lu使肝脏Ⅰ型前胶原mRNA表达降低(5.2±1.4 vs 3.8±1.1,P<0.05)和MDA含量显著减少(12.7±2.6 vs 8.2±2.0μmmol/g,P<0.05),但MMPs的活性没有改变.结论:Lu通过清除自由基,抑制胶原基因表达,在动物体内具有防治肝纤维化作用.
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二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化形成中门脉压力的动态变化
目的:探讨二甲基亚硝胺(DMN)肝纤维化大鼠门脉压力(Ppv)的动态变化及门脉高压形成的病理组织学基础.方法:DMN 4 wk12次腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型,分别于造模后1、2、4、6和8wk自肠系膜前静脉插管直接测定Ppv,获取肝组织光镜下观察病理学变化,Jamall法测定肝组织羟脯氨酸含量.结果:造模开始后不同时期大鼠Ppv(kPa),模型大鼠/正常大鼠如下:1 wk:1.48±0.11/1.17±0.12,P<0.05;2wk:1.48±0.42/1.01±0.03,P>0.05;4wk:1.97±0.19/0.90±0.01,P<0.01;6wk:1.65±0.23/0.80±0.08,P<0.01;8 wk:1.15±0.24/0.92±0.05,P>0.05.肝组织学观察,1wk时可见肝细胞肿胀,少量出血,窦壁细胞增生,肝窦充血,2wk时肝细胞肿胀、出血性坏死较重,有较粗的纤维间隔向肝小叶伸展.4wk时可见大面积出血性坏死,汇管区明显增宽,窦壁细胞增生显著,有大量的长梭形细胞附着,窦壁增厚,肝窦甚至扭曲、闭塞.6wk时窦壁细胞增生较4wk时减轻,8wk时肝窦组织结构趋向恢复正常,但6wk、8wk的纤维化仍较显著;模型大鼠的Ppv与肝组织Hyp含量无显著相关性(P>0.05).结论:门脉高压是DMN肝纤维化大鼠的显著特征之一,肝窦壁病理变化是该模型门脉高压形成的主要组织学基础.
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曲尼司特对急性心肌梗死大鼠胶原重构及左室功能的影响
本研究观测了大鼠急性心肌梗死(AMI)后非梗死区羟脯氨酸含量、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值和心功能的变化以及曲尼司特和贝那普利对它们的影响,旨在了解曲尼司特对AMI后心肌胶原重构和左室功能的影响.
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尿羟脯氨酸测定方法的质量控制
羟脯氨酸(4-羟基吡咯啶-2-羧酸)是组成人体胶原蛋白的一种特有的氨基酸。利用羟脯氨酸在胶原蛋白中含量高这一特点,通过对尿液中羟脯氨酸的排出量的测定,可了解体内胶原蛋白分解代谢情况,文献[1]报道,尿羟脯氨酸含量与儿童生长发育速度有关。1 试剂与方法1.1 原理:尿中与肽结合的羟脯氨酸,经酸水解后释出。用氯胺T(N-氯-对甲基苯磺酰胺钠)将羟脯氨酸氧化,使其形成含吡咯环的氧化物。再用过氯酸破坏多余的氯胺T,中止氧化过程。同时,使氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应,生成红色化合物进行比色定量。
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急性胰腺炎相关性肺损伤时基质金属蛋白酶-9的研究
急性胰腺炎(AP)是消化科常见危重症之一,重症急性胰腺炎(SAP)的死亡率达15%~25%,其中60%的死亡原因与急性胰腺炎相关性肺损伤(APALI)的病理过程密切相关[1].APALI胶原裂解和增加的胶原降解产物羟脯氨酸含量与肺结构改变和肺泡毛细血管渗透性密切相关,因为肺泡基底膜富含胶原Ⅳ,所以推测明胶酶可能参与了这一病理生理过程,这一推测由急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者支气管肺泡灌洗液的基质金属蛋白酶(MMP)相关研究所证实[2].本实验通过研究SAP大鼠肺MMP-9,对MMP-9与APALI的发病关系进行探讨.
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生肌愈疡膏治疗臁疮30例
目的:探讨中药生肌愈疡膏治疗臁疮的疗效与作用机理.方法:将2014年12月—2015年8月门诊或留医的60例臁疮患者(气虚血瘀型)随机分为观察组和对照组各30例,清创后分别外用生肌愈疡膏和白玉膏,并分别记录各患者第15天、30天、45天的溃疡面愈合率、羟脯氨酸含量及新生组织微血管密度,并记录两组临床疗效评分,同时严密监测病患的肝肾功能、血常规、心电图.结果:观察组临床疗效评分为132分,第15天、30天、45天的溃疡面愈合率、羟脯氨酸含量及新生组织微血管密度分别为42.8±7.1、19.25±0.35、76.4±21.8;64.4±12.8、21.39±1.13、103.3±35.8;87.6±7.6、34.94±1.18、178.3±87.3.对照组临床疗效评分为83分,第15天、30天、45天的溃疡面愈合率、羟脯氨酸含量及新生组织微血管密度分别为34.9±11.7、14.33±0.29、74.3±19.3;58.4±6.5、15.44±1.04、99.7±23.4;72.9±10.9、27.28±1.22、141.3±55.7.观察组与对照组各比较数据均有显著性差异(P<0.05).结论:生肌愈疡膏能更快改善溃疡面血液循环、促进局部毛细血管数目及肉芽组织生长.
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运动训练能够抑制异丙基肾上腺素诱导的心脏炎症反应
目的:明确运动训练能否抑制β-肾上腺素受体激动剂异丙基肾上腺素( isoprenaline,ISO)诱导的小鼠心脏炎症反应。方法:将成年C57雄性小鼠分为10组(n=6),分别为安静对照组、安静给ISO 1 h组、24 h组、3 d组和7 d组、跑步训练对照组、跑步训练给ISO 1 h组、24 h组、3 d组和7 d组。 ISO组均为给予ISO 5 mg/kg皮下注射,跑步训练组为应用小鼠跑步机训练6周,速度12 cm/s,时程90 min,每周运动5天。应用超声心动图、心重胫骨长度比、HE染色、天狼星红染色、免疫组织化学染色、ELISA和Western blot等方法,观察心脏中炎症因子表达水平及炎症反应的变化情况。结果:(1)小鼠呼吸代谢系统测得跑步状态下75%大氧耗量对应速度为12 cm/s,ISO对小鼠氧耗量没有影响。(2)跑步训练给ISO 1 h组及24 h组与安静给ISO 1 h组及24 h组相比,IL-18和IL-6蛋白含量均显著降低( P<0.05);跑步训练给ISO 3 d组与安静给ISO 3 d组相比IL-18和IL-16蛋白水平均明显降低的同时,IL-1β蛋白水平亦明显降低( P<0.01);跑步训练给ISO 7 d组与安静给ISO 7 d组相比, IL-18、IL-1β和IL-6蛋白水平均明显降低,而且TNF-α也明显降低(P<0.05)。(3)在给予ISO 24 h后,跑步训练组与安静组相比心脏TGF-β1蛋白水平即明显降低( P<0.01);跑步训练给ISO 3 d组与安静给ISO 3 d组相比,心脏切片免疫组化Mac-3染色显示巨噬细胞浸润面积明显减少(P<0.01),同时心脏TGF-β1蛋白水平明显降低(P<0.05)。(4)跑步训练给ISO 7 d组和安静给ISO 7 d组相比心脏纤维化面积明显减少(P<0.05),心脏组织中羟脯氨酸含量明显降低(P<0.01),I型胶原产生明显减少(P<0.05)。结论:运动训练能够抑制ISO诱导的小鼠心脏炎症反应。
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诱导型一氧化氮合酶活性变化对肺纤维化形成的影响
目的:以前的工作表明,在平阳霉素(BLMA5)诱导大鼠肺纤维化形成的早期(注BLMA5后7 d和14 d),肺内NO含量一过性升高,且与肺间质iNOS蛋白表达增强有关.在此基础上,本文应用iNOS特异性抑制剂氨基胍(aminoguanidine, AG),观察肺内iNOS活性受到抑制后,肺内NO含量的变化以及对肺纤维化形成的影响,进一步探讨iNOS合成的NO在肺纤维化形成中的作用.方法:SD大鼠24只,分为BLMA5+AG 14 d组、BLMA5+AG 30 d组、BLMA5+NS 14 d组和BLMA5+NS 30 d组.每组均为6只动物.分别在注平阳霉素的同时至14 d或至30 d,腹腔注射AG(20 mg/kg b.w)或等体积的生理盐水(NS),以注NS动物为对照,分别在注BLMA5 14 d和30 d时取材.结果:与BLMA5+NS14 d组大鼠比,BLMA5+AG 14 d组大鼠出肺血NO-3/NO-3含量的变化无明显差异(P>0.05);与BLMA5+NS30 d组大鼠比,BLMA5+AG 30 d组大鼠出肺血NO-2/NO-3含量的变化亦无明显差异(P>0.05);而BLMA5+AG 30 d组大鼠肺组织羟脯氨酸含量(43.9±3.6 mg/g, ±s下同)则明显低于BLMA5+NS 30 d组(57.3±4.2 mg/g)(P<0.01).结论:抑制肺内iNOS的活性,可阻止纤维早期NO的增多;并能在一定程度上减轻肺纤维化,说明内源性NO的增多具有促肺纤维化形成的作用.
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博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织中AAT/SO2的变化
目的:观察博莱霉素( BLM)致肺纤维化时肺组织中内源性的气体信号分子二氧化硫( SO2)生成及催化产生SO2的关键酶是天冬氨酸氨基转移酶( AAT)-1、-2表达的变化。方法:将36只健康雄性Wistar大鼠(体重170~200 g)随机分为对照组和BLM组。采用一次性气管内滴注BLM-A5(5 mg/kg)的方法复制大鼠肺纤维化动物模型,对照组大鼠气管内滴注等体积无热原生理盐水。两组大鼠分别于气管内滴注后7 d、14 d、28 d处死动物。光镜下观察肺组织纤维化( Masson染色)的程度;采用生化法测定肺组织中胶原蛋白、SO2含量及AAT活性;Western blot法检测肺组织中AAT蛋白表达的变化。结果:BLM可引起肺组织炎症反应和肺纤维化,肺组织中羟脯氨酸含量呈时间依赖性地增高。与对照组相比,BLM组肺组织中AAT mRNA表达减少、酶的活性降低,同时肺组织中SO2含量下降。结论:AAT/SO2下调可能参与了BLM致肺纤维化的发生。
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温阳药对实验性肝纤维化的作用及机理探讨
目的:观察温阳药改善大鼠肝纤维化的作用并对其机理作初步探讨.方法:制备大鼠肝纤维化模型,予温阳药进行治疗,并观察其治疗前后血流动力学、肝组织病理形态及羟脯氨酸含量等的变化.结果:治疗组肝脏肠系膜血流量及肠系膜微血管血流速度均明显高于对照组(P<0.01或P<0.05),肝组织纤维化程度及羟脯胺酸含量则明显低于对照组(P<0.01).结论:温阳药能通过改善肝脏及胃肠道的微循环来改善肝细胞功能,从而改善肝纤维化程度.
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黄芪对心肌血管紧张素和羟脯氨酸含量的影响
本文探讨了急性心肌梗死后心肌局部血管紧张素Ⅱ和羟脯氨酸含量的变化,观察黄芪的治疗作用.实验采用兔制备心肌梗死模型,黄芪组自术后第2 d腹腔注射黄芪2 ml~3 ml,2次/d,共3周.于术后第6周处死动物,采集标本,检测梗死区、游离壁及正常兔心肌血管紧张素Ⅱ和羟脯氨酸含量.结果显示心肌梗死后心肌局部血管紧张素Ⅱ含量显著增加(P<0.01),梗死区羟脯氨酸含量显著增加(P<0.01),游离壁羟脯氨酸含量略有增加(P>0.05);经黄芪治疗后心肌血管紧张素Ⅱ含量明显下降(P<0.01),梗死区羟脯氨酸含量略有下降(P>0.05).以上结果提示黄芪有一定的治疗作用,可能对心肌梗死后的胶原损伤、左室重构起保护作用.
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可吸收性明胶海绵的质量研究及控制
目的:对可吸收性明胶海绵产品质量进行研究和控制.方法:采用凯氏定氮法测定明胶海绵的蛋白含量、氯胺T法测定羟脯氨酸含量、变色酸钠法测定甲醛残留量,采用中国药典2010版方法测定干燥失重、硫酸盐灰分、重金属、铬含量等性能,同时还对产品的酸碱度、可消化性实验方法进行阐述.结果:进口及国产共5批可吸收性明胶海绵样品中,1~4#样品明胶海绵中蛋白含量按干燥品计,均大于95%;羟脯氨酸含量按干燥品计均大于12%;2~5#样品单包装样品中甲醛残留量高约为160 μg;1#、3#、4#样品干燥失重的测定结果约为15%;硫酸盐灰分不大于2.0%;重金属不大于30 mg·kg-1;水浸提液的pH测定结果均在4.0~5.5之间;铬含量不大于2 mg·kg-1;液体吸收量不少于自身重量的35倍;同一实验条件下1 ~4#样品可消化性实验表明,国产产品的消化时间明显高于进口产品,且均一性不如进口产品.结论:本文所采用及建立的质量研究方法,可较全面地评价可吸收性明胶海绵的质量,从而对其质量进行有效控制.