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The proprietary Chinese medicine preparation Kaiyu Granule is made of bupleurum, nutgrass ga-lingale rhizome, szechwan lovage rhizome, turmeric root tuber, white peony alba, cape jasmine fruit, fried semen ziziphi jujubae, and prepared liquorice root. It is a common recipe for the clinical treatment of depression in China. In this study, after 21 days of unpredictable stress exposure, Wistar rats exhibited similar behavioral changes to patients with depression. Moreover, G-protein-coupled inwardly rectifying K+channel 1 mRNA and protein expression were significantly reduced in rat hippocampal CA1 and CA3 regions. However, G-protein-coupled inwardly rectifying K+channel 1 mRNA, protein expression, and rat behavior were clearly better after administration of 12, 8, or 4 g/kg of Kaiyu Granule when depression model rats underwent stress. 12 g/kg of Kaiyu Granule had the most obvious effects on the increased expression of G-protein-coupled inwardly rectifying K+channel 1 mRNA and protein in rat hippocampal CA1 and CA3 regions. These results suggested that Kaiyu Granule improved depression by affecting G-protein-coupled inwardly fying K+channel 1 expression in the rat hippocampus.
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彗星荧光原位杂交技术在检测特定基因损伤与修复中的应用
彗星荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization in combination with the Comet assay,Comet-FISH)是彗星试验(Comet assay,又称单细胞凝胶电泳)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术的结合,是一种在单细胞水平上检测特定基因损伤和修复的有效方法[1].
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组织芯片在病理学的研究进展
组织芯片(tissue chip)又称组织微阵列(tissue micro-array),是将数十至上千个小组织整齐地排放在一张玻璃片上制成的组织切片[1].分为多组织切片(multi-tissue section,多可含60个直径2 mm的组织)和组织微阵列(多可含1 000个直径0.6 mm的组织).组织芯片的特点是:体积小,信息含量大,一次性实验即可获大量结果(high-throughout).组织芯片可用于组织中的DNA、RNA和蛋白质的定位分析和检测.象普通切片一样,可做苏木精-伊红(HE)染色、特殊染色、免疫组织化学、DNA/RNA原位杂交、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH).制成的组织芯片蜡块可做100~200张连续切片,这样用同一套组织芯片即可迅速地对数百种生物分子标记(如抗原、DNA和RNA)进行分析检测,因此组织芯片技术是建立疾病,特别是肿瘤的生物分子文库的强有力的工具,有广阔的应用前景[2].
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荧光原位杂交技术在毒理学研究中的应用进展
染色体异常一直是毒理学研究的热点.然而要准确地探测细胞内染色体在外源物作用后所发生的变化并非易事,荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术的问世成功地解决了上述难题,已成为研究染色体畸变的常用方法之一.目前毒理学已将该技术应用于检测外源物作用后染色体结构和数目的改变、确定微核的组成和来源、诱裂剂和非整倍体剂的鉴别、外源物危险度评定以及职业性暴露人群的生物学监测等方面的研究,并取得了一定的成果.为此,笔者就荧光原位杂交技术在毒理学研究中的应用作一综述.
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孕妇外周血中胎儿细胞的分选富集及其在无创伤性产前诊断中的应用
20世纪90年代以来,随着单克隆抗体技术、流式细胞计数技术以及聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术的发展,已使从孕妇外周血中分离、纯化胎儿细胞,并进行无创伤性产前诊断成为可能,但目前对这一问题还存在不少争论.我们复习了国内外有关文献,对这方面的进展综述如下.
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荧光原位杂交法诊断细菌及真菌进展
荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,简称FISH)技术是在20世纪80年代末在已有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传学技术.发展迅速,已被广泛应用于分子生物学、分子遗传学及临床医学等学科领域,进行基因诊断及疾病诊断,核酸序列测定等.研究显示荧光原位杂交可以在相当短的时间内对临床标本和阳性血培养直接鉴定.以下就荧光原位杂交法在细菌及真菌的检测鉴定方面作一综述.
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用图像分析减少整体原位杂交技术中的假阳性结果
整体原位杂交技术(Whole-mount in situ hybridization)已被应用于对生物基因表达的研究上[1~5],它可以比较直观全面地看到基因的表达部位,为研究该基因的功能提供线索,而不用象切片杂交需将结果迭加分析进行三维重建.此外,该技术还可以在单个细胞水平定位表达,甚至可观察到亚细胞结构的分布[6,7].因此该技术已成为研究新基因表达的有力手段.在整体原位杂交技术中,图像判读是结果的关键部分,如何减少结果中的假阳性和假阴性已成为一个重要问题.在此,我们通过UTHSCSA ImageTool v3.0软件对图像进行处理,可有效减少结果中的假阳性.
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食管癌中表皮生长因子受体基因扩增的研究
表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因定位于7 p12,长110kb,25个外显子[1].EGFR基因过度表达初表现在鳞状细胞癌细胞系A431中,以后在不同恶性肿瘤中发现EGFR具有高比例的过度表达,其重要原因之一是基因扩增[2,3].为探讨EGFR基因扩增与食管癌发生的相关性和意义,我们应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术,检测食管癌组织中EGFR基因扩增状态.
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FISH技术在肿瘤分子诊断中的应用
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是20世纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术.因其具有快速、安全、灵敏度高及探针可长期保存等优点,目前已广泛应用于细胞遗传学、肿瘤生物学和产前诊断等领域,尤其在肿瘤筛查、早期诊断及指导临床用药方面具有很好的应用价值.
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累及皮肤的套细胞淋巴瘤一例
患者男,53岁,躯干四肢紫红色结节、斑块半月,眶周肿胀4d.体检:全身多处浅表淋巴结肿大,脾肿大.血钙3.12 mmol/L,LDH 853 U/L,血免疫固定电泳示单克隆免疫球蛋白IgM阳性(K链型),正电子发射断层显像/X线计算机体层成像检查示全身多处淋巴结肿大,咽后壁肿块,脾脏大.颈部皮肤结节组织病理检查示皮下脂肪组织内大量异形淋巴样细胞弥漫浸润,体积中等偏大,核圆形,核仁较明显,核分裂易见.免疫组化标记示异形细胞L26、CD79a、Bcl-2、细胞周期蛋白D1均阳性,多发性骨髓瘤原癌基因1部分阳性,Ki-67阳性率>80%,CD5、CD21、CD23、CD38、CD3、CD10、Bcl-6、CD45RO、末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)、髓过氧化物酶(MPO)、CD30、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、CD117、CD34均阴性.荧光原位杂交检测示t( 11;14)CCND1/IGH融合基因阳性.诊断:伴皮肤和眶周受累的套细胞淋巴瘤(母细胞变异型)合并高钙血症.治疗:给予利妥昔单抗注射液联合环磷酰胺、长春新碱、多柔比星、地塞米松,交替以大剂量甲氨蝶呤及阿糖胞苷静脉注射,第3天血钙降至正常,第6天病情得到迅速控制,皮损及眶周肿胀明显消退,但随访治疗1个月后,患者终死于严重肺部感染.
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荧光原位杂交用于快速产前诊断
细胞遗传学分析是目前产前诊断的标准方法 [1],通常首选中期羊膜腔穿刺羊水细胞培养.但该诊断的取材时间受限,培养时间长(7~10d),效率低,技术较难掌握[2].近年来建立的荧光原位杂交(Fluorescent in situ hybridization,FISH)技术,其应用于未培养的羊水间期细胞,大大提高了诊断效率,只需48h即可给出诊断结果 ,现将笔者初步经验介绍如下.
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胚胎种植前遗传学诊断的应用
胚胎种植前遗传学诊断(preimplantation genetic diagno-sis,PGD)是辅助生殖技术领域中的新兴技术,用于对着床前胚胎进行基因诊断.主要是指对体外受精(in vitro fertiliza-tion,IVF)的胚胎,待其发育到4~8细胞期,显微操作下行卵裂球细胞活检[1,2],取出一个细胞,或者直接取受精前后的极体[3],对它们行聚合酶链反应(polymerase chain reac-tion,PCR)或荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)等基因分析,进行快速遗传学诊断,选择无遗传学疾患的胚胎植入宫腔,从而获得正常胎儿的诊断方法.这样就可以把疾病控制在胚胎发育的早阶段,避免了妊娠建立后再做产前诊断时孕妇可能面临人工流产所带来的生理和心理的痛苦,这无疑是遗传病基因诊断领域中的又一次变革,可以说PGD技术代表了当今生殖医学临床尖端水平.
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Endogenous beta retroviruses (enJSRV) are highly homologous with Jaagsiekte sheep retrovirus (exJSRV),this exogenous retrovirus is the aetiological agent of ovine pulmonary adenocarcinoma (OPA).The aim of this study was to clarify the function of enJSRV and the immunological mechanisms of its corresponding antibody,that is undetectable in JSRV-infected ovine serum.The expression of enJSRV envelope protein and Hyal-2 mRNA in immune organs and lungs of ovine fetuses and lambs were analyzed by Real-Time reverse transcription PCR and In Situ Hybridization using specific probes.In Situ Hybridization results indicated that the enJSRV envelope protein and Hyal-2 mRNA were expressed in thymus,spleen,mesenteric lymph nodes and lungs at different times,while no positive signals were detected in the negative controls.On the other hand,results from Real-Time reverse transcription PCR analysis showed that in 130d fetuses and 3d newborn lambs the enJSRV mRNA levels were much higher in organs associated with the immune system than that in lungs,especially in the thymus and spleen,but levels of Hyal-2 mRNA expression was not significantly different in all collected tissue.These results provided evidence from an immunology point of view to understand why the circulating antibodies against exJSRV are undetectable in JSRV-infected ovine,and will help to unravel the pathogenesis of JSRV-infected ovine.
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荧光原位杂交技术(FISH)在泌尿系统肿瘤领域的应用
一、荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术概述1969年,Gall和Pardue等首次将同位素探针用于原位杂交实验,获得成功.1987年,染色体原位抑制杂交法的创建,使FISH技术得以迅速发展.随后,Cremer等用生物素和汞或氨基乙酰荧光素等非放射性物质标记探针,创立了双色FISH技术.1990年,Nederlof等用3种荧光素成功探测出了3种以上的靶位DNA序列,从而宣告了多色FISH技术的问世.
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NMP22联合FISH 技术在血尿患者膀胱癌筛查中的应用
膀胱癌是泌尿系常见的恶性肿瘤,目前膀胱癌的诊断主要以膀胱镜和尿脱落细胞学检查为主。本研究主要探讨核基质蛋白22(nuclear matrix protein 22,NMP22)联合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测在血尿患者膀胱癌筛查中的应用价值。
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荧光原位杂交技术在尿路上皮肿瘤中的临床应用研究
尿路上皮癌是我国常见的泌尿系统恶性肿瘤,发生在肾盂、输尿管、膀胱等尿路上皮覆盖部位,以膀胱癌为多见,常表现的临床症状为无痛性肉眼血尿。尿脱落细胞学检查为泌尿系肿瘤的传统检查方法之一,荧光原位杂交(fluo-rescence in situ hybridization,FISH)是近年来新兴的细胞分子学技术,可以从基因层面检查出肿瘤病变,本研究通过比较血尿患者的尿液 FISH 检查与尿脱落细胞学检查诊断尿路上皮癌的特异性和敏感性,探讨其在血尿患者尿路上皮癌筛查研究中的临床价值。
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胃癌HER-1表达与血管新生意义的临床病理学研究
目的:本研究通过检测人表皮生长因子受体-2(Her-2)在胃癌及癌旁正常胃组织中的表达,分析其与临床病理特征、血管生成以及术后早期复发的关系,旨在探讨胃癌中Her-2表达的临床意义,为胃癌患者术后制定有效的治疗方案提供理论和临床基础。方法:回顾性分析我科室2012年3月至2013年7月期间行手术切除的原发胃癌组织398例及相应的癌旁正常组织363例,应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)结合荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH),对比肿瘤组织及癌旁正常组织的HER-2阳性表达率,同时分析HER-2表达与临床病理特征、血管生成以及术后早期复发的关系。采用SPSS19.0统计软件来分析相关数据。结果:1)检测胃癌组织中HER-2的阳性表达率为14.07%(56/398),显著高于癌旁非肿瘤组织0%(0/363)(P<0.05,χ2=55.13);2)Lauren分型、肿瘤部位、脉管浸润情况、TNM分期、有无淋巴结转移与HER-2阳性表达相关(P<0.05),而年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、生长方式与HER-2表达无相关性(P>0.05)。T分期中,T4期的HER-2表达率高于(T1+T2+T3)期,但未体现显著性统计学差异(P=0.07,χ2=3.23);3)56例Her-2阳性表达组的MVD值为58.63±19.97,342例Her-2阴性表达组的MVD值为49.04±19.25,具有显著性统计学差异(P=0.00, t=3.39),经Spearman等级相关性分析,两组间呈正相关(P=0.00, r=4.33)。4)早期复发率方面,HER-2阳性表达组1年、1.5年复发率分别为16.00%、38.00%,高于HER-2阴性表达组的8.81%、25.53%,均未体现统计学差异(P=0.11,χ2=2.54;P=0.065,χ2=3.41)。结论:1)HER-2在胃癌组织中存在着过度表达,HER-2的过度表达与胃癌患者的Lauren分型、肿瘤部位、脉管浸润情况、TNM分期、有无淋巴结转移呈相关性,而与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、生长方式无关。2)HER-2的过度表达与肿瘤新生血管生成呈正相关。3)HER-2的过度表达与术后的早期复发可能存在相关性,需待进一步的随访观察。
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AIM: To study the expression of c-jun in brain stem following moderate lateral fluid percussion brain injury in rats, and to observe the temporal patterns of its expressions following percussion.METHODS: Male Sprague-Dawley rats were divided into normal control, sham operation control and injury groups. The rats of injury group subjected to moderate lateral fluid percussion injury (0.2 mPa), and then were subdivided into 5 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 8 h and 12 h groups according to the time elapsed after injury. The expression of c-jun was studied by immunohistochemistry and in situ hybridization. RESULTS: After percussion for 15 min, Jun positive neurons increased in brain stem progressively, and peaked at 12h. At 5min after percussion, the induction of c-jun mRNA was increased, and remained elevated up to 1h-2h after brain injury. CONCLUSION: The induction and expression of the c-jun in brain stem after fluid percussion brain injury were increased rapidly and lasted for a long time.
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采用探针D13S319和D13S25检测多发性骨髓瘤13q14缺失
多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)是以骨髓中克隆性浆细胞恶性增殖和异常积聚为特征的肿瘤.核型异常是MM主要的预后因素之一,13q14缺失是常见的一种染色体异常[1,2].间期荧光原位杂交(interphase fluorescence in situ hybridization,I-FISH)技术的应用不受细胞分裂相的影响,高纯度细胞分离技术之一的磁珠分选系统(magnetic activated cell sorting,MACS)富积了骨髓瘤细胞,因而二者结合大大提高了MM核型异常的检出率.我们应用该两项技术,采用位于13q14的序列特异性DNA探针D13S319和D13S25,对42例初治MM患者的13q14缺失进行了检测分析.
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细胞遗传学及荧光原位杂交分析46,X,idic(X)一例
X染色体为双着丝粒的病例较少见.美国<医学索引>(MEDLINE)自1977年以来共报道了82例双着丝粒X染色体的病例.我们通过应用细胞遗传学及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分析一例46,X,idic(X),并复习文献报道中的82个病例,探讨双着丝粒X染色体的形成原因、临床特点、FISH应用价值及随访价值.