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基于新一代测序的SNP单体型分析在先天性挛缩性蜘蛛样指症PGD中的应用
目的 探讨基于新一代测序(NGS)的单核苷酸多态性(SNP)单体型分析在先天性挛缩性蜘蛛样指症(CCA)种植前遗传学诊断中的有效性. 方法 对活检的滋养层细胞采用多重置换扩增(MDA)的方法扩增全基因组,应用基于NGS的SNP单体型分析和直接测序两种方法对MDA产物进行CCA的种植前遗传学诊断(PGD). 结果 应用MDA方法对活检的4枚囊胚的滋养层细胞成功地进行了全基因组扩增;通过基于NGS的SNP单体型分析发现,其中两枚是未感染CCA的囊胚,另两枚是感染CCA的囊胚;单体型分析结果与直接测序法结果一致.取卵5个月后患者移植一枚基因型正常的冷冻囊胚,于妊娠的第38周经剖宫产成功分娩一体重为2 850 9的健康婴儿. 结论 基于NGS的SNP单体型分析是单基因病的种植前遗传学诊断的有效筛查工具.
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不含钙镁离子操作液在胚胎种植前诊断中的应用
自1990年第1例经种植前遗传学诊断的婴儿成功分娩[l]以来,种植前遗传学诊断在遗传性疾病和染色体疾病诊断中得到越来越广泛的应用.然而种植前胚胎所能提供的遗传物质很少,如何在尽量不影响胚胎发育潜能的前提下,有效地获得足够的遗传物质用于诊断,是影响种植前遗传学诊断成功率的重要问题.人类胚胎活检多在6~10细胞期进行,此时部分卵裂球之间已有细胞间连接而给活检操作带来一定困难,本研究将不含钙镁离子的操作液应用于胚胎活检,观察其对活检结果及活检后胚胎继续发育的影响.
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辅助生殖技术的研究进展
自从首例试管婴儿诞生以来,体外受精(IVF)已成为治疗女性不孕症的重要方法,胞浆内单精子注射(ICSI)技术为男性不孕症的治疗开辟了一个新的领域,超促排卵方案药物的改进,胚胎培养技术的改进以及辅助孵化、囊胚培养等使妊娠率提高。种植前遗传学诊断(PGD)、核移植技术及转基因治疗的出现,预示将来会有快速发展。
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荧光原位杂交在胚胎种植前遗传学诊断中的应用
荧光原位杂交技术(FISH)因具有快速、灵敏、准确、特异性强等特点,在胚胎种植前遗传学诊断(PGD)中发挥重要作用。随辅助生殖技术、分子生物学等相关学科的进展,FISH技术得到不断改进,出现了多重杂交、快速杂交、原位PCR、光谱显像分析等衍生技术,使PGD更灵敏、有效。现就FISH技术在PGD中应用的国外状况做一综述。
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不育症的辅助生殖治疗
辅助生殖技术主要是人们对不育症治疗从依赖输卵管重建手术转向实验室技术,常见的是通过体外受精与胚胎移植(In vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)技术来帮助一些妊娠困难的夫妇生育;卵胞浆内单精子注射(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)受精技术主要用于严重的男性不育患者,更重要的是本受精方法不受精子浓度、活动度及形态等参数影响,对于无精症者还可以通过从睾丸或附睾穿刺取精子提供ICSI治疗;种植前遗传学诊断是在体外受精-胚胎移植的基础上结合显微操作技术、遗传学和分子生物学研究发展起来的新技术,是预防遗传性疾病的非常重要的措施.种植前遗传学诊断既避免了被动地妊娠遗传病患儿给夫妇带来的痛苦,又避免了产前诊断过程中可能致胎儿流产的风险,将是人类优生优育的重要途径.现将辅助生殖技术介绍如下.
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体外授精-胚胎移植病人手术前后的护理
体外授精-胚胎移植(in vitro fertilization embryo transfer,IVF-ET)俗称试管婴儿,就是使卵子和精子在实验室的条件下授精,经过培养形成胚胎,然后植入子宫腔的一种技术.包括人工授精、体外受精与胚胎移植、显微授精技术、胚胎种植前遗传学诊断及其他相关的助孕技术等[1].它是辅助生育技术的核心部分,也是现代医学发展中治疗不孕不育症的先进技术.护理工作贯穿于整个治疗过程的始终,其目的是在缓解不孕病人心理压力的同时,给予系统的专业性护理,使病人能积极配合治疗,从而提高IVF-ET手术的成功率.临床上IVF-ET术的主要方法包括超促排卵、取卵术和胚胎移植.超促排卵包括3个阶段:降调节、超促排卵和诱发卵细胞的后成熟[1],而取卵术是衔接超促排卵与体外授精培养的重要步骤,其目的是为了避免卵子被污染、丢失和缩短卵子在不利环境中的暴露时间[2].护理工作在整个治疗过程中起着举足轻重、不可替代的作用.现将对108例施行了体外授精-胚胎移植术的护理介绍如下.
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种植前遗传学诊断/筛查周期的临床资料分析
目的 通过回顾性分析种植前遗传学诊断/筛查(PGD/PGS)治疗周期的资料,旨在总结PGD/PGS治疗过程中的特点及规律,为临床提供参考.方法 收集行PGD/ PGS助孕的283对夫妇的309个治疗周期信息,分析病因构成、治疗过程、妊娠结局及新生儿情况.结果 283对夫妇中,因染色体异常行PGD治疗的比例高,共223例,占 78. 8%;比较应用荧光原位杂交(FISH)、微阵列比较基因组杂交技术(array-CGH)和二代测序技术(NGS)这3种方法的临床资料,结果显示array-CGH组的胚胎活检成功率高于另外两组,差异有统计学意义(P<0. 05);FISH组的正常胚胎率高于array-CGH和NGS组,但胚胎种植率低于这两组,差异均有统计学意义(P<0.05);FISH组临床妊娠率低于NGS组,差异有统计学意义(P<0. 05);不同病因行PGD/PGS临床妊娠率比较,差异均无统计学意义;通过PGD/PGS技术出生子代无出生缺陷,且FISH与array-CGH诊断方法比较,新生儿情况均差异无统计学意义.结论 PGD/PGS技术是治疗遗传病高危患者生育问题的有效措施;FISH、array-CGH和 NGS这3种诊断法均是有效的胚胎诊断方法,但array-CGH法和NGS法的诊断效率较FISH高.
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胚胎种植前遗传学诊断的应用
胚胎种植前遗传学诊断(preimplantation genetic diagno-sis,PGD)是辅助生殖技术领域中的新兴技术,用于对着床前胚胎进行基因诊断.主要是指对体外受精(in vitro fertiliza-tion,IVF)的胚胎,待其发育到4~8细胞期,显微操作下行卵裂球细胞活检[1,2],取出一个细胞,或者直接取受精前后的极体[3],对它们行聚合酶链反应(polymerase chain reac-tion,PCR)或荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)等基因分析,进行快速遗传学诊断,选择无遗传学疾患的胚胎植入宫腔,从而获得正常胎儿的诊断方法.这样就可以把疾病控制在胚胎发育的早阶段,避免了妊娠建立后再做产前诊断时孕妇可能面临人工流产所带来的生理和心理的痛苦,这无疑是遗传病基因诊断领域中的又一次变革,可以说PGD技术代表了当今生殖医学临床尖端水平.
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辅助生育技术新进展
辅助生育技术(Assisted Reproductive Technology,ART)又称助孕技术,是近代医学发展中治疗不育症的高新技术.以体外受精与胚胎移植(In Vitro Fertilization and Transfer,IVF-ET)为代表的辅助生育技术经历20年的发展,无论对不育症的治疗范围还是在人类生殖生理学、胚胎发生学、遗传优生学、生物工程学方面的应用已有长足的进步,而且涉及心理、伦理和法律等多门学科.在经典的IVF-ET技术方法基础上,随着IVF技术的发展,以及对有关知识领域的新认识,人们已经尝试应用一些其它医学助孕技术,主要有配子输卵管内移植(Gamete Intrafallopin Transfer,GIFT),合子输卵管内移植(Zygote Intrafallopin Transfer,ZIFT),冷冻胚胎,精、卵、胚胎赠送,显微操作技术等新技术[1~5].如果说1978年Steptoe和Edwards所创造的常规的IVF-ET是第一代试管婴儿技术的话,1992年Patermo的单精子卵泡浆内注射(Intracytoplasmic Sperm Injection,ICSI)可称为是第二代,而种植前遗传学诊断(Preimplantation genetic diagnosis,PGD)应该是第三代.现将有关内容综述如下.
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辅助生殖技术与子代神经系统疾病的相关性研究回顾
辅助生殖技术是目前治疗不孕症的主要手段之一.由于辅助生殖技术涉及对卵泡发育、精卵结合、胚胎形成、转运、种植过程的人为干预,自1978年首例试管婴儿诞生以来,其安全性,尤其是对子代健康的影响一直受到人们的关注.神经系统疾病是常见的出生缺陷之一.由于神经系统疾病通常影响儿童的精神、情绪、智力、运动、语言等关键能力,且神经系统的损伤往往不可修复,因此婴幼儿一旦罹患神经系统疾病对家庭和社会来说无疑是巨大的打击与负担.该文就辅助生殖技术与几种常见的子代神经系统疾病如智力低下、脑瘫、癫痫的关系进行了综述,并对辅助生殖技术对子代神经系统的安全性进行评价,从而进一步指导临床不孕症的治疗及围产期的母儿监护.