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印迹基因H19和Igf2在子宫内膜异位症患者子宫内膜组织中的异常表达及其意义
目的 研究印迹基因H19和Igf2在子宫内膜异位症(内异症)患者子宫内膜的表达及临床意义. 方法 选择2011年1月至2012年8月至北京大学深圳医院生殖中心行试管助孕并已行宫腹腔镜检查的患者,其中证实为内异症的患者31例作为实验组,因男方因素不孕、女方因素完全正常的妇女33例作为对照组,收集分泌中期子宫内膜组织,采用实时定量聚合酶链反应方法(RT-PCR)测定两组子宫内膜组织H19和Igf2 mRNA表达水平. 结果 H19和Igf2 mRNA在内异症患者子宫内膜组织中的平均表达量分别为49.909±46.970和8.747±5.451,在对照组中的平均表达量分别为19.728士23.990和0.513土0.973,H19和Igf2在内异症患者与正常女性子宫内膜组织中的表达差异均具有统计学意义(P=0.006和0.00). 结论 印迹基因H19和Igf2可能与内异症性不孕有关.
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人先天性神经管畸形胎盘印迹基因甲基化状态的研究
目的:研究不同孕周神经管畸形(NTD)胎儿孕妇胎盘中印迹基因H19,PEG10和IGF2基因启动子区的甲基化状态,分析其与NTD的关系.方法:应用MethyLight方法实时定量检测不同孕周28例NTD患儿孕母胎盘和28例正常对照乳母胎盘中印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区的甲基化状态.结果:印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区在胎盘中普遍发生甲基化,而且在NTD患儿孕母胎盘中,H19,PEG10和IGF2中甲基化率略高于正常乳母胎盘组,但无统计学差异.将样品按照不同孕周分组后,IGF2基因启动子区甲基化水平在31～36周NTD胎儿乳母胎盘中显著高于正常胎儿乳母胎盘(P＜0.05).结论:印迹基因H19,PEG10和IGF2启动子区在所检测的NTD患儿孕妇的胎盘中总体甲基化水平与正常胎儿乳母胎盘无差异.但在妊娠31～ 36周时,NTD胎儿乳母胎盘中IGF2启动子甲基化水平显著高于正常胎儿乳母胎盘,提示印迹基因IGF2的甲基化状态可能与NTD的发生有关.
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不明原因不孕症患者子宫内膜印迹基因H19表达异常
探讨H19基因表达变化在不孕症发病中的作用.应用PCR、RT-PCR以及RsaI酶切位点多态性观察H19特殊等位基因表达,检测不明原因不孕症子宫内膜中的印迹状态.结果显示,25例正常窗口期杂合子子宫内膜中H19皆表达单等位基因,而38例不明原因不孕症患者窗口期子宫内膜中杂合子全部表达双等位基因,提示H19印迹丢失可能与不明原因不孕症的发病有关.这为临床诊断和治疗不明原因不孕症提供了新思路.
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长链非编码RNA H19与肿瘤关系的研究进展
长链非编码RNA(LncRNA) H19与肿瘤关系密切.H19在肺癌、乳腺癌、胃癌中起促癌作用,在肝癌中则具有双向作用.H19的作用机制有组织特异性,各不相同,多与微小RNA、影响原癌基因表达、EMT形成及甲基化状态下IGF2的印迹状态等有关,是一种有价值的潜在肿瘤生物靶标.
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印迹基因H19在早孕绒毛组织中印迹状态的研究
目的 检测早孕绒毛组织中印迹基因H19印迹的状态,探讨其印迹状态与滋养细胞浸润能力之间的联系.方法 PCR-RFLP方法 检测93例正常早孕绒毛组织中H19的印迹状态.结果 在93例正常早孕绒毛组织中,有42例为杂合子,杂合子基因型中有11例为双等位基因的表达,其中所有双等位基因表达均在孕5～9周,而孕10～12周未发现有双等位基因的表达.结论 在早孕期间,H19基因在绒毛组织中存在双等位基因的表达,主要集中在孕10周前,提示H19基因在滋养细胞中可能存在有动态变化,并与滋养细胞的浸润能力的变化有一定的联系.
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印记基因IGF-2和H19的印记状态与异常出生体重的关系
近年来异常出生体重的发病机制成为研究热点,而决定胎儿生长的关键因素是胎盘的发育及胎盘供应营养的能力.有证据表明印记基因对胎盘的生长及转运功能有调节作用,控制营养供给[1],对胎儿生长发育很重要,其中胰岛素样生长因子-2(insulin-like growth factor-2,IGF-2)及其交互印记基凼H19对胎儿生长发育[2]和胎盘形成及功能有重要调节作用.本研究旨在探讨印记基因IGF-2和H19的印记丢失(loss of imprinting,LOI)与异常出生体重的关系.
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印记基因H19和SNRPN CpG位点甲基化状态与精液参数的关联研究
目的:分析印记基因H19和SNRPN印记控制区的各CpG位点甲基化状态与男性精液参数的关联.方法:选取2014年4至9月于空军总医院男科就诊的符合纳入排除标准的205例男性为研究对象,采用焦磷酸测序法定量分析H19和SNRPN基因的各CpG位点的甲基化状态,采用典型相关分析印记基因H19和SNRPN的各CpG位点的甲基化水平与精液参数两组变量的整体相关性.结果:H19基因的CpG2和CpG3甲基化水平与精子密度和精子活动力的相关性具统计学意义;SNRPN基因的CpG5、CpG6、CpG7甲基化水平与精子正常形态率的相关性具统计学意义.结论:印记基因H19和SNRPN印记控制区特定CpG位点甲基化状态与精液参数有关联.
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长链非编码RNA H19在肿瘤中的研究进展
长链非编码RNA(LncRNA) H19是早发现的长链非编码RNA分子之一,H19在机体生长发育、肿瘤发生、发展等多种生物学功能方面发挥巨大作用.随着研究的深入,人们发现H19在许多肿瘤中异常表达,其致瘤机制错综复杂,因此进一步明确与H19有关的特异性肿瘤谱以及分子机制是至关重要的.该文着重介绍H19的分子机制及在常见肿瘤中的差异表达,以期为肿瘤的预防、诊断和治疗提供新的策略,尤其在食管鳞状细胞癌的深入研究奠定基础.
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膀胱癌组织中IGF-2和H19的基因印迹状态及其临床意义
目的:探讨膀胱癌组织中胰岛素样生长因子2 (IGF-2)和H19印记缺失(LOI)以及其临床意义.方法:2004年1月～12月牡丹江医学院附属二院采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例膀胱癌组织及20例正常膀胱黏膜中IGF-2及H19的印记状态.结果:膀胱癌组织中IGF-2和H19的LOI(47.6%,26.3%)高于正常膀胱黏膜LOI(7.7%,0),(P<0.05).绪论:IGF-2和H19的LOI与膀胱癌发生有关.
关键词： 膀胱癌 胰岛素样生长因子-2 H19 印记缺失 -
非编码RNA H19在二苯甲酮-3抑制绒毛外滋养层细胞增殖中的作用
目的 研究二苯甲酮-3(benzophenone-3,BP-3)对绒毛外滋养层(HTR-8/Svneo)细胞的H19及miR-675 mRNA表达的影响,并探讨非编码RNA H19在BP-3抑制HTR-8/Svneo细胞增殖中的作用.方法 将处于对数生长期的HTR-8/Svneo细胞分别暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、0.01、0.1、l mg/L BP-3的培养基或转染试剂(脂质体2000和miR-675抑制剂或H19抑制剂)中培养24 h.采用Real-time PCR检测H19、miR-675 mRNA的表达水平;CCK-8法检测HTR-8/Svneo细胞的存活率.结果 与溶剂对照组相比,1 mg/L BP-3染毒组HTR-8/Svneo后H19及miR-675的表达水平均降低,差异均有统计学意义(P＜0.01);且随着BP-3染毒剂量的升高,HTR-8/Svneo细胞的H19及miR-675的表达水平均呈下降趋势.与抑制剂对照组相比,加入H19抑制剂后HTR-8/Svneo细胞的存活率和miR-675 mRNA的表达水平均降低;加入miR-675抑制剂后HTR-8/Svneo细胞的存活率均降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 H19通过miR-675在BP-3抑制HTR-8/Svneo细胞增殖中的发挥作用.
关键词： 二苯甲酮-3 HTR-8/Svneo细胞 H19 -
lncRNA H19对人非小细胞肺癌增殖及转移的影响
目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) H19对非小细胞肺癌细胞株A549和H1299的增殖及转移的影响.方法 用荧光定量聚合酶链反应法测定并对比A549、H1299和正常人支气管上皮细胞HBE中H19的表达量;用lipo3000转染技术将si-H19转染进细胞后,用CCK-8及EdU测定细胞增殖率,用Transwell法测定细胞转移能力.结果 和HBE细胞相比,H19在肺癌细胞株A549和H1299中表达量明显上调;CCK-8及EdU实验提示H19被抑制后,细胞增殖率较前下降;Transwell结果表明当H19下调时肺癌细胞的转移能力下降.结论 H19在人非小细胞肺癌细胞株A549及H1299中呈高表达,并调控了细胞的增殖及转移.
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长链非编码RNA H19靶向Bcl-2的表达调控宫颈癌细胞侵袭转移行为的机制
目的 探讨长链非编码RNA(IncRNA)H19调控宫颈癌细胞的侵袭转移行为及其机制.方法 选择2016年7月—2017年1月手术切除并且经病理检查确诊为宫颈癌的组织50例,同时取癌旁正常组织50例.选择不同类型人宫颈癌细胞株.qPCR检测H19在宫颈癌组织和不同宫颈癌细胞株中的表达情况;分析H19表达与宫颈癌患者临床病理参数间的关系;免疫共沉淀实验检测H19与Bcl-2的相互作用.将宫颈癌细胞分为3组,空白对照组使用未经处理的宫颈癌细胞,阴性对照组使用空白慢病毒处理的宫颈癌细胞,H19-siRNA组使用H19-siRNA慢病毒处理的宫颈癌细胞.划痕愈合实验检测抑制H19后3组宫颈癌细胞迁移能力变化情况,Transwell侵袭实验检测抑制H19后3组宫颈癌细胞的侵袭行为变化情况;蛋白免疫印迹法检测3组lncRNA H19对E-钙黏蛋白(E-Cadherin)和Bcl-2蛋白的调控情况.结果 与正常宫颈组织相比,宫颈癌组织中H19的表达水平升高,且其表达水平与宫颈癌的病理分期及淋巴结转移情况有关(P<0.05).与其他宫颈癌细胞株相比,HeLa细胞中H19表达水平高(P<0.05),作为实验的细胞株.H19-siRNA组在36 h和72 h宫颈癌细胞迁移率低于空白对照组和阴性对照组,通过Matrigel基质胶的细胞数量少于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).H19-siRNA组Bcl-2表达水平低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),而3组E-Cadherin表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 H19能调控宫颈癌细胞Bcl-2的表达,抑制H19的表达后可以抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力.H19可以调控Bcl-2的表达影响宫颈癌细胞的生物学行为.
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IGF-2和H19与肿瘤关系的研究进展
近年来,表观遗传学成为生物医学研究领域的热点,尤其是基因印迹在人类遗传性疾病尤其是肿瘤发生发展中的作用正引起越来越多研究者的注意[1,2],这种表观遗传学现象正在逐渐成为国内外学者的研究重点.基因组印迹是一种导致父源性或者母源性等位基因表达的染色体修饰,由于其在新生命诞生时就已经形成,所以这种修饰很可能是一种癌前事件,尤其是胰岛素样生长因子-2(IGF-2)/H19这组印迹基因,两者的印迹缺失已经被认为是癌症发生的早期事件[3].因此对基因印迹的研究可能为癌症的早期诊断提供一些准确的生物学指标.
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H19介导miR-let-7的分子机制及其在妊娠期糖尿病中的作用研究
背景妊娠期糖尿病作为临床中常见的妊娠期合并症,其严重威胁产妇及胎儿的生命健康.H19作为一种印记基因,进一步分析其为妊娠期糖尿病靶向治疗工作的开展提供依据.目的 研究H19介导miR-let-7的分子机制及其在妊娠期糖尿病中的作用.方法 2017年1月-2018年1月于北京大学医学部购进50只SPF级小鼠,根据小鼠的血糖以及血脂水平等将其分为正常组(n=20)和高脂组(n=30).采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术分析正常组和高脂组小鼠H19、let-7、靶基因脂蛋白脂肪酶(LPL)以及肝脏胰岛素受体β(INSR-β)和胰岛素通路相关因子2(IRS-2)、胰岛素受体(INSR)的相对mRNA表达水平.同时于小鼠成肌细胞株中,分别通过细胞转染技术转染干扰RNA(siRNA),特异性敲除小鼠H19,以及转染反义链抑制剂ilet-7,特异性阻断let-7结合靶基因,共转染后分别在第3、6周时收获细胞,观察不同时间点H19、let-7以及靶基因LPL、INSR-β、IRS-2和INSR的相对mRNA表达水平.在人卵巢畸胎瘤细胞系PA-1中,分别通过细胞转染技术转染siRNA,特异性敲除人H19,以及转染反义链抑制剂ilet-7,特异性阻断let-7结合靶基因,共转染后分别在第3、6周时收获细胞,观察各组中H19、let-7以及靶基因LPL、INSR-β、IRS-2及INSR的相对mRNA表达水平.结果 高脂组小鼠H19、let-7及LPL mRNA表达水平高于正常组,INSR-β、IRS-2及INSR mRNA表达水平低于正常组(P<0.05).不同时间点小鼠成肌细胞株H19、let-7、LPL、INSR-β、IRS-2及INSR mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05).不同时间点人卵巢畸胎瘤细胞系PA-1 H19、let-7、LPL、INSR-β、IRS-2及INSR mRNA表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 H19在miR-let-7中发挥分子介导机制,且在妊娠期糖尿病的参与中发挥至关重要的作用,临床中应当加强对妊娠期孕妇的H19以及miR-let-7等相关指标的检测,实现对妊娠期糖尿病的早期预测.
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宫颈癌组织中胰岛素样生长因子-Ⅱ和H19印记缺失与人乳头瘤病毒感染的初步研究
目的 探讨人宫颈癌组织中胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)和H19印记缺失(LOI)与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系.方法 2004-01-2004-12西安交通大学医学院第一附属医院采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例宫颈癌组织及20例正常宫颈组织中ICF-Ⅱ及H19的印记状态;聚合酶链反应(PCR)检查宫颈癌和对照组HPV16,18感染情况.结果 宫颈癌组织中IGF-Ⅱ和H19的LOI(47.6%,26.3%)高于正常宫颈组织LOI(7.7%,0)(P＜0.05).在IGF-Ⅱ和H19的LOI肿瘤中,HPV感染率分别为80.0%和100.0%,高于宫颈癌的总体感染率和对照组的感染率(分别为65.0%和5.0%)(P＜0.05).结论 IGF-Ⅱ和H19的LOI与宫颈癌发生有关.IGF-Ⅱ和H19的LOI可能与HPV感染有关.
关键词： 宫颈肿瘤 胰岛素样生长因子-Ⅱ H19 印记缺失 -
过期流产组织中胰岛素样生长因子-2与H19印记基因的表达
目的 探讨胚胎绒毛组织中胰岛素样生长因子-2(IGF-Ⅱ)和H19印记基因表达与过期流产的关系.方法 应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术测定正常早孕女性38例(对照组)和41例过期流产患者(实验组)胚胎绒毛组织中IGF-Ⅱ和H19印记基因的表达水平,并进行对比分析.结果 实验组胚胎绒毛组织中IGF-ⅡmRNA的表达显著低于对照组(t=8.662,P＜0.05);H19 mRNA的表达显著高于对照组(t=12.706,P＜0.05).结论 胚胎绒毛组织中IGF-Ⅱ、H19印记基因的异常表达可影响胚胎的正常发育,可能是导致过期流产发生的原因之一,可为过期流产的基因诊断提供新的切入点.
关键词： 过期流产 胰岛素样生长因子-2 H19 印记基因 -
长链非编码H19靶向调节miR-107通过Notch通路对肺癌的侵袭迁移的影响
目的:探讨长链非编码H19靶向调节miR-107通过Notch通路对肺癌的侵袭迁移的影响情况.方法:qPCR检测肺癌和癌旁组织、不同肺癌细胞中H19的表达情况;Transwell侵袭实验检测沉默H19后肺癌细胞侵袭能力的变化;划痕实验检测沉默H19后肺癌细胞迁移能力的变化;双荧光素酶报告基因检测H19与miR-107的相互作用;qPCR检测肺癌和癌旁组织、不同肺癌细胞中miR-107的表达情况;Transwell侵袭实验检测沉默H19后miR-107对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测沉默H19后miR-107肺癌细胞迁移能力的影响;裸鼠皮下成瘤检测沉默H19后miR-107对肺癌成瘤大小以及体积的影响.Western blot检测沉默H19后Notch通路蛋白的表达情况.结果:与癌旁组织相比,肺癌组织中H19表达明显增高;肺癌细胞A549中H19表达水平高;沉默H19可以抑制肺癌细胞侵袭和迁移能力;H19能与miR-107的3′UTR特异性结合;与癌旁组织相比,肺癌组织中miR-107表达明显降低;沉默H19后,抑制miR-107可以促进肺癌细胞侵袭和迁移能力;与H19-siRNA组相比,H19-siRNA+miR-107-inhibitor组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显增大.沉默H19后Notch通路蛋白表达情况相应下调.结论:H19在肺癌发生发展过程中起重要作用,H19可以靶向调节miR-107通过Notch信号通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移能力.
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长链非编码RNA H9靶向miR-4调控卵巢癌细胞的迁移和侵袭行为
目的:探讨长链非编码RNA H19靶向miR-141调控卵巢癌细胞的迁移和侵袭行为及其机制.方法:qPCR检测H19和miR-141在卵巢癌组织中的表达情况及H19在不同卵巢癌细胞株中的表达;分析H19和卵巢癌患者的临床病理资料之间的关联;双荧光素酶报告基因检测H19与miR-141之间的相互作用;划痕愈合实验和Transwell侵袭实验检测抑制H19后卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力的变化情况,qPCR检测H19和miR-141之间的相互调控的关系;Western blot检测抑制H19后ZEB1蛋白的表达情况.结果:与正常卵巢组织相比,H19在卵巢癌组织中表达上调,miR-141在卵巢癌中的表达水平下调,与其他卵巢癌细胞株相比,ES-2细胞中H19表达高;H19的表达与卵巢癌的病理分期相关以及淋巴结转移情况有关,随着分期越高,H19在卵巢癌组织中表达越高,淋巴结转移的患者中H19的表达也相对较高;双荧光素酶实验证实H19能与miR-141的3'UTR特异性结合,可以调控miR-141的表达与活性;抑制H19的表达后可以抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力;miR-141可以负反馈调节H19的表达,抑制H19和miR-141的表达后,ZEB1蛋白的表达水平受到相应的抑制.结论:H19调控miR-141的表达通过影响ZEB1蛋白的表达参与卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的调控.
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长链非编码RNA-H19在妇科恶性肿瘤细胞的糖代谢中的作用
目的:检测长链非编码RNA-H19在常见的妇科恶性肿瘤中的表达,并探讨其在肿瘤细胞糖代谢过程中发挥的可能作用.方法:以ARK2子宫内膜癌细胞株和OVCAR-3上皮性卵巢癌细胞株作为实验对象;利用脂质体转染技术,将特异性靶向小干扰RNA序列转染进细胞;利用TRIzol法提取样品的总RNA,并通过逆转录和实时定量PCR技术检测样品中目的基因的表达;利用荧光标记的非放射性2-NBDG评估肿瘤细胞的葡萄糖摄取能力;采用方差齐性检验和t检验进行统计学分析.结果:H19在ARK2和OVCAR-3细胞中的表达均较高.在ARK2和OVCAR-3细胞中,siH19抑制H19表达的效率分别为34.02％和30.30％.是否添加Insulin对于转染siCon的肿瘤细胞的糖摄取能力无明显影响,但是siH19转染后的ARK2和OVCAR-3细胞,在经Insulin处理后糖摄取能力均明显增强.结论:ARK2和OVCAR-3这两种细胞是研究H19在妇科恶性肿瘤中机制的较为理想的实验对象,ARK2和OVCAR-3细胞本身存在胰岛素抵抗,外源性抑制H19表达后,细胞的胰岛素抵抗有所改善,H19或成为我们改善妇科恶性肿瘤患者机体葡萄糖代谢的标记物.
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长链非编码RNA-H19促小细胞肺癌细胞株A549上皮-间质转化及侵袭
背景与目的：近年来研究发现长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)可能在肿瘤的发生、发展中发挥着重要作用，其中H19在膀胱癌、胃癌、肝细胞癌等多种肿瘤中呈现异常过表达，并且能够促进肿瘤增殖，增加肿瘤细胞迁移和侵袭能力等。但H19在非小细胞肺癌中的表达及功能尚不十分清楚。本研究拟观察H19对非小细胞肺癌细胞株A549增殖、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)及侵袭能力的影响。方法：在A549中通过转染质粒使H19过表达，通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8，CCK-8)检测H19过表达对A549细胞增殖能力的影响，通过Transwell检测其对A549细胞侵袭能力的影响，通过光学显微镜观察细胞的形态学变化，通过蛋白[质]印迹法(Western blot)检测EMT相关蛋白的变化，通过荧光素酶报告基因检测CDH1基因启动子活性的变化。结果：在A549中H19过表达后，细胞增殖能力有所增强(空白对照组D值为1.64±0.02，阴性对照组为1.59±0.04，过表达H19组为1.89±0.02，P<0.05)，细胞的侵袭转移能力增强[阴性对照组(30±6)个/视野，过表达H19组(110±7)个/视野，P<0.05)]，细胞发生伪足变长增多、细胞间隙增大等EMT特征的形态学变化，同时蛋白水平CDH1表达降低，而VIM及SNAI2的表达升高，伴有CDH1基因启动子活性下降60%以上(P<0.05)。结论：在非小细胞肺癌细胞株A549中H19过表达可诱使其发生EMT，并促进其增殖及侵袭能力。
