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非编码RNA H19在二苯甲酮-3抑制绒毛外滋养层细胞增殖中的作用
目的 研究二苯甲酮-3(benzophenone-3,BP-3)对绒毛外滋养层(HTR-8/Svneo)细胞的H19及miR-675 mRNA表达的影响,并探讨非编码RNA H19在BP-3抑制HTR-8/Svneo细胞增殖中的作用.方法 将处于对数生长期的HTR-8/Svneo细胞分别暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、0.01、0.1、l mg/L BP-3的培养基或转染试剂(脂质体2000和miR-675抑制剂或H19抑制剂)中培养24 h.采用Real-time PCR检测H19、miR-675 mRNA的表达水平;CCK-8法检测HTR-8/Svneo细胞的存活率.结果 与溶剂对照组相比,1 mg/L BP-3染毒组HTR-8/Svneo后H19及miR-675的表达水平均降低,差异均有统计学意义(P＜0.01);且随着BP-3染毒剂量的升高,HTR-8/Svneo细胞的H19及miR-675的表达水平均呈下降趋势.与抑制剂对照组相比,加入H19抑制剂后HTR-8/Svneo细胞的存活率和miR-675 mRNA的表达水平均降低;加入miR-675抑制剂后HTR-8/Svneo细胞的存活率均降低,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 H19通过miR-675在BP-3抑制HTR-8/Svneo细胞增殖中的发挥作用.
关键词： 二苯甲酮-3 HTR-8/Svneo细胞 H19 -
二苯甲酮-3对绒毛外滋养层细胞的增殖及miR-17-92基因簇表达的影响
目的 研究二苯甲酮-3(benzophenone-3,BP-3)对绒毛外滋养层(HTR-8/Svneo)细胞的增殖及miR-17-92基因簇表达的影响.方法 将HTR-8/Svneo细胞分别暴露于含终浓度0(溶剂对照)、0.01、0.1、1 mg/L BP-3的培养基中培养24 h.采用CCK-8法检测细胞活性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Real-time PCR方法检测细胞miR-17-92基因簇的表达水平.结果 与溶剂对照组相比,l mg/L BP-3染毒组HTR-8/Svneo细胞的存活率和miR-17 、miR-19amRNA的表达水平均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);而各剂量BP-3染毒组HTR-8/Svneo细胞的凋亡率及mi R-18a、miR-19b、miR-20a、miR-92a mRNA的表达水平均无明显变化.且随着BP-3染毒剂量的升高,HTR-8/Svneo细胞的存活率呈下降趋势,凋亡率呈上升趋势.与抑制剂对照组相比,抑制miR-17和miR-19a表达后HTR-8/Svneo细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 BP-3可通过抑制miR-17-92簇中miR-17、miR-19a的表达,抑制HTR-8/Svneo细胞增殖.
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白细胞介素25促进早孕期母-胎界面滋养细胞的增殖
探索人早孕绒毛组织和滋养细胞中白细胞介素25 (interleukin 25,IL-25)及其受体的表达,以及IL-25对滋养细胞的促增殖作用.免疫组织化学法检测IL-25在正常早孕期绒毛组织的表达;流式细胞术检测IL-25及其受体在正常妊娠和自然流产绒毛组织的滋养细胞中的表达;CCK-8实验分析重组IL-25(rhIL-25)及其中和性抗体对人绒毛膜滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞活力的影响.结果显示IL-25在正常绒毛组织滋养细胞中呈阳性表达,自然流产患者绒毛滋养细胞的IL 25及其受体的表达均低于正常妊娠(P＜0.001);重组IL-25处理后,HTR-8/SVneo细胞活力以时间依赖和剂量依赖方式显著增强(P＜0.001或P＜0.000 1);相反,IL-25中和性抗体明显抑制其细胞活力(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001).结果表明人早孕母-胎界面滋养细胞表达IL-25,以自分泌方式促进自身增殖,IL-25异常低表达可能参与反复自然流产的发病机制.
关键词： IL-25 滋养细胞 HTR-8/Svneo细胞 细胞活力 自然流产 -
四次跨膜蛋白CD81促进人绒毛外滋养细胞失巢凋亡的初步研究
目的:探讨四次跨膜蛋白CD81表达对人妊娠早期绒毛外滋养细胞失巢凋亡的作用.方法:构建CD81的高表达质粒(pCS2-CD81),将pCS2-CD81或CD81特异的小干扰RNA(siCD81)瞬时转染至人妊娠早期绒毛外滋养细胞(HTR-8/SVneo细胞),同时转染pCS2-EV或siRNA control作为对照组.实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和Western blot法检测pCS2-CD81及siCD81在HTR-8/SVneo细胞中的表达效率.采用聚甲基丙烯酸2-羧乙基酯(poly-HEMA)包被的培养皿模拟细胞悬浮培养的环境,采用Annexin V/PI双染法分别检测CD81对正常贴壁生长及悬浮培养的HTR-8/SVneo细胞凋亡的影响.结果:成功构建CD81的高表达质粒(pCS2-CD81).与转染pCS2-EV比较,瞬时转染pCS2-CD81的HTR-8/SVneo细胞高表达CD81蛋白(P＜0.05)；与转染siRNA control比较,siCD81有效抑制HTR-8/SVneo细胞的内源性CD81表达(P＜0.05).过表达CD81或抑制内源性CD81表达对HTR-8/SVneo细胞的普通凋亡无显著影响,但过表达CD81可显著促进HTR-8/SVneo细胞的失巢凋亡(P＜0.05),抑制内源性CD81表达能减少HTR-8/SVneo细胞的失巢凋亡达15.5％(P＜0.05).结论:四次跨膜蛋白CD81促进人妊娠早期绒毛外滋养细胞的失巢凋亡.
关键词： 四次跨膜蛋白CD81 HTR-8/Svneo细胞 失巢凋亡 -
miR-181a-5p对胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo浸润和迁移的影响及作用机制
目的 探讨miR-181a-5p对胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo浸润和迁移能力的影响及其潜在的作用机制.方法 在HTR-8/SVneo细胞中,采用Transwell实验检测过表达miR-181a-5p后浸润和迁移能力的变化情况,通过qRT-PCR验证miR-181a-5p的过表达情况,并通过明胶酶谱实验检测过表达miR-181a-5p后MMP-2和MMP-9的表达情况.结果 转染miR-181a-5p类似物的HTR-8/SVneo细胞中,发生浸润的细胞数目是对照组的(0.45±0.10)倍,迁移的细胞数目是对照组的(0.58±0.16)倍(均P<0.01);实验组MMP-9蛋白表达量(271.29±0.11)低于对照组(1481.00±0.16),差异有统计学意义(P<0.01);实验组MMP-2蛋白表达量(555.70±0.09)与对照组(596.50±0.13)相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 miR-181a-5p可能通过降调HTR-8/SVneo细胞中MMP-9的分泌而抑制其浸润和迁移能力.
关键词： miR-181a-5p 基质金属蛋白酶9 HTR-8/Svneo细胞 浸润 迁移 -
FABP7在小鼠胎盘组织及人滋养层细胞HTR-8/Svneo中的表达
目的 探讨FABP7在正常妊娠小鼠胎盘组织及HTR-8/Svneo细胞中的表达.方法 用Realtime-PCR及原位杂交的方法检测Fabp7 mRNA在妊娠小鼠7.5～10.5 d和14.5、18.5 d子宫和胎盘组织中的表达,用冰冻切片免疫荧光的方法检测FABP7蛋白的表达.培养HTR-8/Svneo细胞系,用细胞免疫荧光方法检测FABP7蛋白表达.17β-雌二醇(E2)、孕酮(P4)和E2+P4分别处理小鼠6h和24h后,用Realtime-PCR的方法检测小鼠子宫组织中Fabp7 mRNA的表达.结果 Fabp7 mRNA在妊娠小鼠7.5～10.5 d子宫及胎盘组织中均有表达,FABP7蛋白在妊娠小鼠子宫组织蜕膜化细胞及胎盘部位滋养层巨细胞核中有表达;在HTR-8/Svneo细胞中可以检测到mRNA和细胞核中蛋白的表达.P4和E2+P4联合处理6h及24 h后,nbp7mRNA在小鼠子宫组织中的表达上调(P＜0.05),而E2处理6h后Fabp7 mRNA表达变化不明显,但24 h后其表达上调(P＜0.05).结论 FABP7在妊娠小鼠子宫蜕膜化细胞、滋养层巨细胞及HTR-8/Svneo细胞中有表达,说明其参与胎盘发育过程,与妊娠的维持有关,且在子宫中的表达量受E2、P4激素的调节.
关键词： FABP7 子宫 HTR-8/Svneo细胞 胎盘 -
β淀粉样蛋白1-42对滋养细胞迁移和侵袭的影响
目的 探讨β淀粉样蛋白1-42对人滋养细胞系HTR-8/SVneo迁移和侵袭能力的影响.方法采用HTR-8/SVneo细胞系,实验分为对照组、Aβ1-42组及Aβ1-42+抗Aβ1-42抗体组.Transwell迁移及侵袭试验检测细胞迁移及侵袭能力;Western blot检测蛋白表达水平.结果Aβ1-42(10μmol/L)处理细胞后,细胞活力显著降低,细胞迁移及侵袭能力减弱,N-cadherin、vimentin蛋白表达水平下调,细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9表达水平及活性均显著下降;同时给予1:750稀释抗Aβ1-42抗体处理后,细胞迁移及侵袭能力,N-cadherin、vimentin蛋白表达水平,MMP-2、MMP-9表达水平及活性均显著上升.结论Aβ1-42抑制滋养细胞迁移、侵袭的能力,可能导致子宫螺旋动脉血管重铸障碍.
关键词： β淀粉样蛋白 子痫前期 HTR-8/Svneo细胞 细胞迁移 细胞侵袭 -
CCL2通过抑制白细胞介素-24表达增强人绒毛膜滋养细胞株的细胞活力
目的 探讨白细胞介素-24(interleukin-24,IL-24)对人滋养细胞活力的调节作用.方法 免疫组织化学法检测IL-24及其受体(IL-20R1、IL-20R2和IL-22R1)在正常早孕期绒毛组织的表达;In-cell Western法分析重组胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和趋化因子CCL2对人绒毛膜滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞中IL-24表达的影响;MTT法分析重组IL-24和CCL2对HTR-8/SVneo细胞活力的影响.结果 IL-24及其受体均在正常早孕期绒毛组织滋养细胞中强阳性表达.与对照组相比,重组CCL2体外刺激后HTR-8/SVneo细胞IL-24表达水平显著下降(P＜0.001).重组IL-24处理后,HTR-8/SVneo细胞活力显著降低(P＜0.05或P＜0.001);相反,IL-24中和性抗体明显促进其细胞活力(P＜0.05或P＜0.01),重组CCL2(100 ng/mL)可体外增强HTR-8/SVneo细胞活力(P＜0.01),但这一作用可被重组IL-24所抑制.结论 CCL2通过抑制IL-24分泌增强人滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞的体外活力,从而可能利于囊胚植入和胎盘发育.
