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血管生成素-2及其受体在子宫内膜异位症中的表达及临床意义
目的 观察血管生成素-2(Ang-2)与酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)在子宫内膜异位症(EMs)患者子宫内膜中的表达,探讨其在EMs的发生发展过程中的具体作用. 方法 选取本院2012年1月至2013年12月收治的70例EMs患者为研究组,选取同期70例非EMs患者为对照组,分别取材两组的内膜组织,应用免疫组织化学染色法测定Ang-2、Tie-2的表达状况. 结果 (1) Ang 2主要定位在细胞质中,主要表达于腺上皮细胞与血管内皮细胞,间质细胞中可见少量表达.Tie-2主要定位在腺上皮细胞胞浆中,少数定位在间质细胞与血管内皮细胞中.(2)研究组患者中Ang 2、Tie-2阳性表达率分别为75.7％和72.9％,显著高于对照组(分别为42.9％和38.6％)(P＜0.05).Ang-2在EMs患者增殖期的阳性表达率(67.5％)显著低于分泌期(86.7％) (P＜0.05);Tie-2在EMs患者增殖期的阳性表达率(87.5％)显著高于分泌期(53.3％)(P＜0.05). 结论 Ang-2、Tie-2在EMs患者内膜组织中均有较高表达,提示其参与EMs的发生发展.
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负压通过Ang/Tie-2信号通路促进糖尿病大鼠创面微血管成熟的实验研究
目的 探讨负压创面治疗(NPWT)糖尿病大鼠创面微血管的改变,进一步分析其潜在的分子机制.方法 将96只大鼠随机分为NPWT组、NPWT+Tie-2组、纱布组(Gauze组)、Gauze+Tie-2组.NPWT组、NPWT+Tie-2组创面选择合适尺寸的VSD敷料覆盖,Gauze组和Gauze+Tie-2组进行常规纱布换药.NPWT+Tie-2组及Gauze+Tie-2组大鼠腹腔注射Tie-2抑制剂50 mg/kg.于术后1、3、7、10d取创面肉芽组织行HE染色、免疫组化、mRNA及蛋白水平检测.结果 NPWT组中Ang-1的mRNA及蛋白表达水平在术后第1、3天显著低于其他3组(P＜0.05),术后第7、10天时呈增加趋势且其表达水平显著高于其他3组(P＜0.05).NPWT组中Ang-2的mRNA表达水平在术后第1、3天显著高于其他3组(P＜0.05),术后第7、10天时急剧下降且其表达水平显著低于其他3组(P＜0.05).结论 糖尿病创面愈合早期负压使Ang-2能够优先被Tie-2受体绑定并产生磷酸化作用,血管处于可塑和失稳定状态,促进微血管发芽;在创面愈合后期负压能够促使Ang-1和Tie-2受体优先绑定使激酶磷酸化过程提前出现,血管处于不可塑和稳定状态,创面微环境逐渐稳定并促进微血管成熟.因此,负压通过Ang/Tie-2信号通路促进糖尿病创面微血管成熟.
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尤瑞克林对脑缺血再灌注大鼠微血管新生的影响
目的 观察尤瑞克林对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血半暗带区域脑组织内微血管新生及血管生成素-1(Ang-1)及酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)表达的影响.方法 按照体重将大鼠随机分为3组:假手术组、模型组和实验组.采用线栓法制作大脑中动脉阻塞脑缺血再灌注模型.于再灌注后5 min,实验组静脉注射3.5×10-3PNAU·kg-1尤瑞克林1 mL·kg-1;假手术组和模型组正常喂养.于再灌注48 h后,断头取脑组织,用免疫组织荧光染色法检测缺血半暗带区域脑组织内微血管计数,用半定量RT-PCR法及免疫印迹法检测缺血半暗带区域脑组织内Ang-1与Tie-2的表达.结果 给药后,模型组与实验组脑组织中微血管计数分别为23.51 ±1.94,37.41±2.51;这2组的Ang-1 mRNA表达分别为0.22±0.01,0.31±0.02;这2组的Ang-1蛋白表达分别为0.26±0.02,0.41±0.03;这2组的Tie-2 mRNA表达分别为0.27±0.02,0.42±0.03;这2组的Tie-2蛋白表达分别为0.53±0.04,0.71±0.07.与模型组比较,各个指标差异均有统计学意义(均P ＜0.05).结论 尤瑞克林可促进大鼠脑缺血后微血管新生,其机制可能与上调Ang-1、Tie-2的表达有关.
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血管生成素-2及其受体Tie-2在子宫内膜异位症中的表达
目的:探讨Ang -2及受体Tie -2在子宫内膜异位症(EMs)患者的在位内膜和异位内膜中的表达.方法:选取病理证实为EMs患者60例为研究组(异位内膜组、在位内膜组),选取同期因不孕症等行腹腔镜手术患者的子宫内膜组织36例为对照组.采用免疫组织化学染色方法检测Ang -2及受体Tie -2的表达.结果:①Ang -2主要表达于腺上皮细胞和血管内皮细胞,少数表达于间质细胞.Ang -2在EMs异位内膜、在位内膜的阳性表达率明显高于对照组(P＜0.05)；在位内膜同异位内膜间比较差异无显著性(P＞0.05)；EMs在位内膜组分泌期的阳性表达率高于增殖期(P＜0.05)；对照组增生期的阳性表达率高于分泌期(P＜0.05).Ang -2在EMs在位内膜组、正常对照组的表达均随月经呈周期性改变,差异均有显著性.②Tie -2主要表达于腺上皮细胞和血管内皮细胞,EMs组异位内膜和在位内膜Tie -2的表达明显高于对照组(P ＜0.05)；EMs患者异位及在位内膜比较差异无显著性(P＞0.05)；Tie-2在正常子宫内膜、EMs在位内膜中的表达具有周期性,均为增生期高于分泌期(P＜0.05).结论:EMs患者异位及在位内膜中血管生成活跃,导致异位病灶组织中的血管数增加.异位内膜和在位内膜可能具有组织同源性.分泌期内膜更易在盆腹腔等处种植生长,增生期血管生成更为活跃.
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Ang-1、Ang-2和Tie-2在尖锐湿疣组织中的表达
检测血管生成素及其受体在尖锐湿疣(CA)皮损和正常皮肤中的表达.采用免疫组化法对40例CA患者的皮损组织及30例正常对照者组织中的血管生成素-1(Ang-1)、血管生成素-2(Ang-2)、酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)进行检测.与正常组织相比,Ang-1在CA组织中表达无显著性差异(P＞0.05),Ang-2和Tie-2在CA组织中表达显著增加(P＜0.05).相关性分析Ang-1和Ang-2呈负相关(P＜0.05),Ang-2和Tie-2呈正相关(P＜0.05).Ang-2及其受体Tie-2,可能与CA组织中血管的新生密切相关.
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结直肠癌组织中 Ang-2、Tie-2 mRNA的表达及 K-ras基因突变的检测
目的：探讨结直肠癌组织中促血管生成素-2（Ang-2）及酪氨酸激酶受体-2（Tie-2）mRNA的表达及K-ras基因突变的意义。方法：采用实时荧光定量PCR法分析40例结直肠癌组织和10例正常结肠黏膜组织中Ang-2及Tie-2的表达，应用PCR-SSCP方法检测40例结直肠癌组织中K-ras基因突变情况。结果：结直肠癌组织中Ang-2和Tie-2 mRNA的表达量高于正常组织（t＝39．960、9．490，P＜0．05）。 K-ras基因突变率达42．5％（17/40），其中12密码子突变11例（64．7％），13密码子突变6例（35．3％）。浸润达肌层、有淋巴结转移和低未分化癌组织Ang-2 mRNA高表达率较高（χ2＝6．593、10．165、5．974，P均＜0．05），Dukes分期C和D期、浸润达肌层、有淋巴结转移和低未分化癌组织Tie-2 mRNA高表达率也较高（χ2＝4．365、8．864、8．087和9．086，P＜0．05）。 K-ras基因突变率在淋巴结转移的结直肠癌组织中高于无转移者（χ2＝6．320，P＜0．05），Dukes分期C、D期癌组织高于A、B期（χ2＝13．961，P＜0．05）。存在K-ras 基因突变的癌组织中Ang-2和Tie-2 mRNA表达水平高于无突变者（ t ＝4．056，7．518，P＜0．05）。结论：Ang-2、Tie-2的表达与结直肠癌的血管生成以及早期转移有关。 K-ras基因突变可作为评估结直肠癌转移和预后的分子生物学指标之一。
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血管生成素1/酪氨酸激酶受体2系统与门静脉高压大鼠食管壁新生血管形成的关系
目的 制备门静脉高压大鼠模型,探讨血管生成素1(Ang-1)/酪氨酸激酶受体2(Tie-2)系统在门静脉高压大鼠食管壁组织的表达及其与食管壁新生血管形成的关系.方法 将50只雄性SD大鼠按体质量随机分为实验组和对照组,其中实验组30只(门静脉部分结扎+左肾上腺静脉结扎法制备门静脉高压模型),对照组20只(仅游离门静脉和左肾上腺静脉,不结扎),术后2周取大鼠食管下段组织标本,应用免疫组织化学技术检测食管壁Ang-1、Tie-2的表达情况,并计数CD34标记的微血管密度(MVD),分析Ang-1、Tie-2表达水平与食管壁血管新生的关系.结果 共37只大鼠门静脉高压模型建立成功(其中实验组17只,对照组20只).实验组Ang-1、Tie-2表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).其中Ang-1的表达水平与MVD无明显相关性(r =0.39,P＞0.05),Tie-2的表达水平与MVD呈正相关(r=0.71,P＜0.05).结论 门静脉高压大鼠食管壁组织中Ang-1、Tie-2、表达水平及MVD明显增高,Ang-1/Tie-2系统可能与门静脉高压大鼠模型食管壁组织的新生血管形成有关.
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促血管生成素-2和血管内皮生长因子在结直肠癌组织中的表达
目的 探讨促血管生成素-2(Ang-2)及血管内皮生长因子(VEGF)在结直肠癌组织及血液中的表达,研究其与肿瘤疾病分期的关系.方法 采用实时荧光定量PCR检测结直肠癌患者正常组织、癌旁组织及腺癌中Ang-2、Tie-2mRNA的表达,采用酶联免疫竞争法检测Ang-2及VEGF在正常组织、癌旁组织及腺癌和外周血中的表达.结果 癌组织Ang-2mRNA和Tie-2mRNA表达与正常组织有明显差异(P＜0.05),相关分析表明,2者表达存在着明显的相关(r=0.879,P=0.000).癌组织Ang-2和VEGF含量与正常组织有明显差异(P＜0.05),与癌旁组织有明显差异(P＜0.05).癌外周血液Ang-2含量与正常对照外周血有明显差异(P＜0.05),与癌肠系膜血无明显差异(P＞0.05).肿瘤组织中Ang-2和VEGF含量与疾病分期明显相关,肿瘤患者显著高于正常对照组(P＜0.05),Dukes'C期和D期显著高于A期和B期(P＜0.05).结论 在大肠腺癌组织中,Ang-2、Tie-2及VEGF的过度表达对肿瘤的血管生成和发展过程起着重要作用.
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Tie-2在人脐静脉内皮细胞中的表达及意义
目的 探讨酪氨酸激酶受体-2(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and epidemal growth factor homology domains,Tie-2)基因在人脐静脉内皮细胞株ECV304中的表达,为进一步研究Tie-2在肿瘤血管生成中的作用提供实验基础.方法 传代人脐静脉内皮细胞进行培养和形态学观察,采用免疫组化(SABC法、DAB显色)对人脐静脉内皮细胞株ECV304中的Tie-2基因的蛋白表达情况进行检测.结果 相差显微镜下,培养的活细胞具有单层"卵石样"排列的典型特征,SABC法检测到Tie-2蛋白在人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞膜、细胞浆和核膜中均呈深棕色颗粒.结论 Tie-2在ECV304细胞株中呈强阳性表达.
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人脐静脉内皮细胞的分离培养和鉴定及酪氨酸激酶受体-2在其中的表达
目的 分离和培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),对其进行鉴定,并探讨酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)基因在HUVECs中的表达情况.方法 用胰蛋白酶消化、分离HUVECs并对其进行培养,根据细胞生长特点、形态特征和Ⅷ因子免疫荧光组化技术对细胞进行鉴定.分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和SABC免疫细胞化学染色对HUVECs中Tie-2 mRNA和蛋白表达情况进行检测.结果 原代培养的HUVECs约于24 h完全贴壁,4～5 d后融合成单层铺路石样结构.Ⅷ因子免疫荧光组化法证实细胞是HUVECs.RT-PCR检测到HuVECs中Tie-2 mRNA条带明显,SABC免疫细胞组化法检测到Tie-2蛋白在HUVECs胞浆、核膜中旱强阳性表达,阳性率为85%以上.结论 胰蛋白酶灌流消化法可获得高纯度的HUVECs,Tie-2在HUVECs中旱强阳性表达.
