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显色原位杂交技术在乳腺癌HER-2/neu原癌基因检测上的应用及意义
对于检测常规甲醛固定的乳腺癌石蜡组织切片中HER-2/neu原癌基因的核苷酸序列技术方法而言,荧光原位杂交法(FISH)一直是公认比较敏感和经典的检测方法[1-3].而显色原位杂交法(chromogenic in situ hybridization,CISH)作为一种核酸原位分子杂交技术方法,也可用于常规甲醛固定的乳腺癌石蜡组织切片中的HER-2/neu原癌基因的检测[4,5].
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荧光原位杂交法检测双歧杆菌
细菌的分类鉴定按常规需通过细菌形态观察、菌壁成份分析和发酵产物的鉴定,以及遗传特征如DNA的G+C百分含量和DNA的同源性分析来完成.这些方法对于某些细菌尤其是那些目前尚无法培养的细菌鉴定并不理想.自从Delong等首次采用荧光素标记的寡核苷酸基因探针成功地对单个完整细胞进行分类鉴定以来,国外许多研究者对这种新方法作了各种尝试,从纯培养细菌到混合物中的细菌,原位荧光杂交法都获得了令人满意的效果.
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荧光原位杂交法分析先天性卵巢发育不全综合征患者标记染色体
先天性卵巢发育不全综合征(Turner综合征)是常见性染色体疾病,女性新生儿发病率0.2% ~0.4%,主要表现为身材矮小、生长发育迟缓、原发性闭经、性器官发育不良和缺乏第二性征等[1,2].细胞遗传学研究揭示,该病患者染色体核型种类很多,除经典的45,X核型外,近来发现染色体微小片段丢失形成的"标记染色体"(marker chromosome, mar)也较常见.我们用染色体荧光原位杂交(FISH)技术分析8例Turner综合征患者具有的mar来源.
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试论荧光原位杂交法检测TE RC基因在宫颈癌筛查中的应用
目的:分析荧光原位杂交法(FISH)检测人类端粒酶(TECR)基因应用于宫颈癌筛查的作用。方法选择我院收治的患宫颈癌的患者100例,所有患者经过阴道镜、细胞学、杂交捕获以及FISH TERC检查后确诊,研究细胞学与FISH TERC与组织学三者之间存在的联系,分析细胞学、FISH TERC与杂交捕获这三种筛查手段的优势与劣势,评价TERC在宫颈癌筛查中的可行性。结果在对比中发现,FISH TERC的敏感性与阴性预测值比杂交捕获检测值低,和细胞学基本一样,但是FISH TERC的特异性和阳性预检值与准确性比细胞学与杂交捕获明显要好,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 FISH TERC准确性较高,可以有效的应用与宫颈癌的筛查中,值得临床推广。
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荧光原位杂交法检测胃癌组织中Her-2/neu基因扩增及其预后意义
很多研究发现Her-2/neu蛋白表达与基因扩增的结果 并不完全一致,Her-2/neu基因扩增能更好地反应恶性肿瘤的生物学行为、监测预后[1].
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非小细胞肺癌组织EGFR基因扩增和突变的检测方法比较
目的 表皮生长因子受体(epidermal growth factor recptor,EGFR)基因是非小细胞肺癌(non-small cell lung carcer,NSCLC)治疗的药物靶点,其检测方法有多种,本研究利用荧光原位杂交法(fluorescence in situ hybridization,FISH)、PCR-荧光探针法及测序法分别检测NSCLC患者中EGFR基因的扩增和突变状态,对比3种检测方法的可靠性和临床实用性.方法 收集2008-01-01-2012-01-01山东大学附属千佛山医院行肺部手术的NSCLC患者242例,FISH法检测石蜡切片的EGFR基因扩增状态,PCR-荧光探针法及测序法检测EGFR基因的突变情况,对比分析3种方法所得结果的一致性及其与患者的临床病理学指标的关系.结果 FISH法检测结果显示,242例NSCLC患者中EGFR扩增阳性66例,扩增率为27.27%;测序法结果显示,85例标本存在EGFR基因突变,突变率为35.12%;PCR-荧光探针法结果显示,78例标本中存在EGFR基因的突变,突变率为32.23%.相关性分析结果显示,3种检测结果具有显著相关性,P值均<0.001.EGFR基因的扩增和突变状态均与患者的年龄无关,但女性、腺癌患者明显高于男性、非腺癌患者,P值均<0.001.结论 FISH、PCR-荧光探针法及测序法是检测NSCLC患者EGFR基因扩增和突变的可靠方法,3种方法的协同应用可以准确判断EGFR基因状态,指导EGFR个体化治疗方案的选择及患者预后的评估.
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精神分裂症基因研究的现状
精神分裂症患者约占住院精神疾病患者的80%。据1991年北京市16个区县精神分裂症流行学调查资料显示,总患病率为7.12‰[1],比1982年的5.69‰明显上升;其中有阳性家族史者约占10%~30%。国外学者关于精神分裂症遗传倾向的研究结果显示,双亲均患精神分裂症者的子女患病相对危险度为60%[2]。Moldin等[3]总结1920~1982年的有关精神分裂症家系及双生子的文献得出结果:在复发风险方面,同卵双生子>一级亲属>二级亲属>三级亲属;即使是在不同的家庭环境中教养的双生子,同卵双生子的患病一致性平均为46%,而异卵双生子的患病一致性仅为14%。由此可见,遗传因素在精神分裂症的病因中占很大比重。现就精神分裂症基因研究的现状综述于下。 一、染色体定位 自80年代以来,研究者不仅从受体、神经递质角度探索精神分裂症的发病机制,更趋向于寻找诊断方面的生物学标志,尤其是基因诊断及基因治疗技术。近年来,由于聚合酶链反应(PCR) 技术的应用,从分子生物学水平探索精神分裂症遗传学基础的研究受到重视。同时,在PCR 的基础上发展起多项检测基因突变的新技术,如序列特异性引物扩增(PCR/SSP)、PCR产物的限制性片段多态性分析(PCR/RFLP)、聚合酶链反应单链构象分析(PCR/SSCP)、核酸分子杂交(NAMH)等。 大量的临床及基础研究显示,精神分裂症属于非经典孟德尔遗传,可能是由几个中度效应基因遗传或多个轻度微效基因遗传。Kohler等[4]报道人脑中存在弱传导钙激活的钾通道蛋白家族(small-conductance calcium-activated potassium channels,SK),分别命名为SK1、SK2和SK3。Chandy等[5]发现SK3基因的编码区靠近氨基端存在2个三核苷酸(CAG)重复序列(编码多聚谷氨酰胺),其中第2 个CAG重复序列存在高度多态性;精神分裂症患者的CAG重复次数与对照组的差异有显著性。据此可推测,该蛋白内多聚谷氨酰胺长度的变化可能精细调节离子通道的功能,从而影响脑内神经元的功能而导致精神分裂症发病。Wittekindt等[6]和Navon等[7]同时应用体细胞杂交及荧光原位杂交法将SK3基因定位于1q21.3,且确认 2个CAG重复序列位于该基因的第一个外显子内。这与Chandy的结论相同。而在双相情感性精神障碍患者及正常对照者中未发现类似的SK3基因的CAG重复序列。
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胃癌组织HER-2基因的检测用于靶向治疗
目的 荧光原位杂交(FISH)法与免疫组织化学(IHC)染色法检测胃癌组织HER-2基因状态,用于靶向治疗.方法 应用FISH法检测77例IHC染色法CerbB-2蛋白表达为(2+)及(3+)的胃腺癌标本中HER-2基因扩增情况.结果 FISH结果,22例HER(3+)标本中,17例存在HER-2基因扩增,符合率77.3%:5例阴性病例中2例为多倍体,占40%.55例HER-2(2+)的病例中,9例(16.3%)存在HER-2基因扩增,46例阴性病例中19例为多倍体,占41.3%.结论 对于IHC筛查HER-2(3+)及HER-2(2+)拟行靶向治疗的病例明确HER2基因状态,需进一步行FISH检测,同时要考虑17号染色体多体的影响.
关键词: 胃腺癌 人类表皮生长因子受体2 免疫组织化学染色法 荧光原位杂交法 -
BCR-ABL融合基因检测方法的进展
BCR-ABL融合基因可编码产生BCR-ABL融合蛋白,是慢性粒细胞白血病的特征性标志,对慢性粒细胞白血病的诊断、治疗具有重要意义.目前临床有多种方法可对其进行检测,主要有细胞遗传学、荧光原位杂交、聚合酶链式反应、Western Blot印迹法、流式免疫磁珠(CBA)等检测方法.这些检测方法有的费时费力,有的需要专门的实验设备等,故在临床应用中受限.随着对BCR-ABL融合基因检测技术的发展,CBA法对BCR-ABL融合蛋白的检测具有其特有的优越性而得到越来越多的应用.
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呼吸道A群链球菌快速检测方法探讨
A群链球菌(GAS)是引起咽炎的常见病原菌,约15%~30%儿童咽痛由GAS所致,为早期诊断由GAS所引起的上呼吸道感染,本研究使用免疫层析法(ICA)、荧光原位杂交法(FISH)、培养法检测了390份标本,并进行了比较分析,现报道如下.
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快速鉴定血培养中金黄色葡萄球菌的两种方法的比较
金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌是血培养中的常见病原菌,血浆凝固酶实验(TCT)是鉴别葡萄球菌的重要实验之一,荧光原位杂交法(FISH)目前也成了一种细菌鉴定的快速方法.本文采用临床分离的235株葡萄球菌,以传统的培养生化鉴定方法作为金标准,评价两种快速鉴定血培养中葡萄球菌的方法.
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荧光原位杂交法诊断细菌及真菌进展
荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,简称FISH)技术是在20世纪80年代末在已有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传学技术.发展迅速,已被广泛应用于分子生物学、分子遗传学及临床医学等学科领域,进行基因诊断及疾病诊断,核酸序列测定等.研究显示荧光原位杂交可以在相当短的时间内对临床标本和阳性血培养直接鉴定.以下就荧光原位杂交法在细菌及真菌的检测鉴定方面作一综述.
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精子染色体异常手动和自动化评分:定性与定量比较
众所周知,精子二体性水平和不育水平(以及其他因素)相关.在辅助生殖方面,将非整倍性无限延续给接受ICSI的不育男性后代的风险已经成为一个热门话题,但是,在临床实践上进行精子二体性筛查依然存在许多障碍.其中一个主要障碍就是操作者用于分析有(充分)统计意义的细胞数量所用的时间.而将自动化"点计数"软硬件组合引入就有望解决这一问题.在本项初步的有效性研究中,我们用手动方法和市售的点计数器对10名病人进行分析,结果表明两种方法在对精子二体性评分时显著相关,但是在对二倍体精子评分时不相关.对这种不相关有可能的解释是将两个紧密相连的精子头计为单个二倍体细胞.这一结果连同后续的类似研究将有助于为个体诊所提供成本效益分析,帮助他们决定是否需要进行精子非整倍性筛查,是否要将其作为评估需要接受ICSI治疗病人精子的常规工具.
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无培养羊水细胞染色体荧光原位杂交法初探
荧光原位杂交法(FISH)是一种快速、准确的染色体测定方法.为了引进FISH技术用于产前诊断,我们抽取了中期妊娠引产妇女的羊水标本,用FISH法对无培养羊水细胞间期的性染色体进行了检测.材料与方法一、标本来源:16例中期妊娠引产病例,年龄19~30岁,平均年龄25岁.孕周17~31周,平均22孕周.全部病例无心、肝、肺、肾及内分泌疾病史,采用雷凡诺尔羊膜腔内注射引产术,在注入雷凡诺尔前先抽取羊水,若抽出羊水为血性或黄绿色(胎粪污染),则此病例被排除.16例全部抽取羊水5ml,色澄清淡黄色,送实验室处理.
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荧光原位杂交法用于孕妇生殖道B群链球菌的快速筛查
B群链球菌(group B streptococcus,GBS)是新生儿严重感染性疾病致病菌之一.上世纪90年代以来,在发达国家,GBS感染是围生儿间接死因的第一位.而发展中国家,GBS的感染正在上升.
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荧光原位杂交技术快速鉴定深部组织的病原菌感染
深部组织的病原菌感染会引起严重的临床症状,对于深部组织病原菌的快速检测鉴定有非常重要的临床意义.常规实验室主要依靠非特异性的革兰染色和耗时较长的培养法.分子生物学方法如荧光原位杂交技术为感染诊断可提供更快更特异的服务[1].将荧光原位杂交技术用于深部组织的病原菌感染诊断有两个优点:1.可确认标本中有无病原菌.2.无须培养,能直接对标本中的病原菌进行快速鉴定.这里我们报告3例临床病例.荧光原位杂交法的方法见[2].
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荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究
目的 比较桂林市荧光原位杂交法(FISH)和免疫组织化学法(IHC)检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体(HER-2)基因扩增及其蛋白表达情况的一致性,探讨FISH与IHC检测乳腺癌HER-2基因状态的临床意义.方法 应用IHC和FISH对50例乳腺癌患者HER-2蛋白表达、基因扩增情况及17号染色体倍体性进行检测,分析IHC与FISH检测HER-2基因状态的差异以及HER-2蛋白状态与17号染色体倍体性的相天性.结果 FISH与IHC结果 总的符合率为82.0%,两者之间存在较好的一致性(kappa=0.640),FISH检测IHC结果 为3+、2+和0/1+者的符合率分别为92.9%、70.0%和80.8%;IHC3+及2+者出现17号染色体多体性的几率比IHC0/1+者高(P<0.05).结论 FISH可以准确和稳定地检测乳腺癌组织中HER-2的基因状态及17号染色体倍体性;FISH检测IHC3+者符合率较高,FSH与IHC的差异主要在于IHC2+和IHC0/+组,IHC仅作为检测HER-2基因状态的初筛方法 ,而IHC结果 为2+或0/1+者的HER-2基因状态必须应用FISH进一步确定.
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荧光原位杂交法和免疫组织化学法检测乳腺癌HER2基因状态比较
HER编码相对分子量185KD的跨膜癌基因蛋白P185,该蛋白与HER家族成员及其配体之间相互作用,通过细胞间的信号传导,调节细胞生长、生存、分化和增殖[1].
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荧光原位杂交法在膀胱尿路上皮癌诊断中的应用
目的:探讨荧光原位杂交法(FISH)在膀胱尿路上皮癌诊断中的应用.方法:选取20例非尿路上皮癌和40例膀胱尿路上皮癌的人群尿液作常规尿脱落细胞学检查和FISH检测.结果:FISH技术的敏感性为82.5%,显著高于常规尿脱落细胞学的敏感性25.0%(P<0.05);FISH技术和常规脱落尿细胞学检查的特异性均为100%,两者在特异性方面差异无统计学意义(P>0.05).结论:荧光原位杂交法在膀胱尿路上皮癌诊断中的特异性与常规尿脱落细胞学检查一致,但其敏感性显著高于常规尿脱落细胞学检查,所以,FISH技术更有望成为膀胱尿路上皮癌无创性的诊断和检测手段.
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尿液脱落细胞HER-2/neu基因扩增/17号染色体多倍体在尿路上皮癌诊治中的意义
我们采用荧光原位杂交法(FJSH)检测了尿液脱落细胞HER-2/neu基因扩增与17号染色体的数量变化,探讨了其在尿路上皮癌诊治中的意义.